ELISA在广西鼠疫监测中的应用评价

目的 了解酶联免疫吸附试验(ELISA)在鼠疫监测中的优势及特性,对其在鼠疫监测现场应用做出评价.方法 对2006年鼠疫监测收集的鼠脏器及血清(鼠、犬、人)分别检测鼠疫菌F1抗原及F1抗体.结果 分离培养、RIHA、胶体金、ELISA、PER法检测鼠脏器中F1抗原的检出率均为阴性;血清利用IHA、胶体金、酶标法检测鼠疫...     

广西西林鼠疫疫情发生及应对措施实施的研究

目的掌握动物鼠疫向人间传播规律,对鼠疫宿主动物(鼠类)、指示动物(犬类)进行日常监测,发现动物鼠疫早期活动迹象。方法采用间接血凝试验(IHA)、胶体金法检测动物血清中鼠疫F1抗体;病原学检测包括分离培养、反向间接血凝试验(RIHA)、胶体金检测动物脏器中鼠疫F1抗原。结果血清(鼠、人、犬)利用IHA法检测鼠疫F1抗体总阳性率为0.57%(1/175)、其中指示动物犬血清鼠疫F1抗体阳性率为2.1%(1/48)、而宿主动物鼠血清、人血清均为阴性;鼠脏器应用RIHA法、胶体金法检测鼠疫F1抗原阳性率分别为0.59%(1/168)、4.17%(7/168)、分离培养为阴性。结论广西西林县存在微弱的动物鼠疫流行。掌握指示动物、宿主动物阳性标本涉及的疫源地,能尽快对疫区进行有效的灭鼠灭蚤处理、切断鼠疫由动物向人间传播的途径、达到最终遏制鼠疫的目的 。     

浙江省2005年鼠疫病原和血清学检测结果分析

目的了解我省鼠疫历史流行区是否存在动物鼠疫的流行。方法在监测区内捕获活鼠并收集死鼠，活鼠采血用放免、血凝、酶标及胶体金方法检测鼠疫F1抗体；鼠脏器用压印法分离鼠疫菌，用多重引物PCR的方法检测鼠疫的基因片段。结果我省首次用间接血凝试验（微量法）从3份鼠血清中检出鼠疫F1抗体，用多重引物PCR的方法从3头鼠脏器中检出鼠疫菌caf 1基因片段。结论我省的部分鼠疫历史流行区存在动物鼠疫复燃的可能，要加强鼠疫的监控工作。     

基因和抗原检测技术在鼠疫监测中的应用与评价

目的 对鼠疫特异性基因和抗原检测新技术进行鼠疫监测现场的应用及评价。方法检测来自鼠疫自然疫源地的各类标本中鼠疫菌DNA和F1抗原,采用多重PCR、胶体金免疫技术和酶联免疫吸附试验,与鼠疫菌培养和反向间接血凝试验进行平行对照。结果 使用5种方法平行检测鼠类、蚤类标本1798份,共判定鼠疫标本132份,总阳性率为7．34%;与单纯鼠疫菌培养阳性相比（113份,阳性率为6．28%）,其中鼠疫菌培养与基因、抗原检测的总阳性率为7．34%,与单纯检菌阳性率比较检出率提高16．81%,符合率达到97．13%。结论 在鼠疫监测中增加基因与抗原联合检测,可以提高鼠疫的确诊率。     

西林县鼠疫流行的实验室检测结果分析

目的 用不同检测方法，探讨鼠疫情的快速诊断和鼠疫菌对不同抗菌药物的敏感性。方法 鼠脏器用1／20万龙胆紫胰酶消化液溶血琼脂培养基，溶血琼脂培养基进行鼠疫菌分离培养，用RIHA检测FI抗原，IHA测FI抗体。对菌株进行药物敏感试验。结果 从20只自死鼠分离出12株鼠疫菌，225只活鼠分离出2株鼠疫菌。15只死鼠RIHA阳性12份。7份死鼠同时进行RIHA和鼠疫菌分离培养，两种方法均为阳性，符合率100％。人血清检测247份，猫血清43份，狗血清80份，阳性分别为7份，5份，3份。鼠疫菌对26种抗菌药物中的22种敏感。结论 RIHA是动物间鼠疫最快速诊断方法，而IHA检测指示动物FI抗体是新疫点早期发现发现鼠疫疫情的线索之一。鼠疫菌对氟哌酸敏感优于其他抗菌药物。     

胶体金技术在鼠疫监测中的应用

目的 选择快速、敏感的鼠疫检测方法,为鼠疫防治提供科学依据.方法 胶体金免疫层析法(GICA)与鼠疫间接血凝(IHA)和反向血凝(RIHA)同步检测鼠疫抗体/抗原.结果 在四川省191份动物肝脾标本中,GICA检出阳性10份,RIHA阳性6份;检测动物血清标本417份,GICA与IHA均检出阳性13份.结论 GICA简便快速,适合现场鼠疫监测.     

双抗原夹心ELISA检测鼠疫F1抗体技术的应用

目的研究双抗原夹心酶联免疫吸附试验（DAgS—EusA）检测鼠疫F1抗体技术在鼠疫监测中的实用性。方法用DAgS—ELISA和间接血球凝集试验（IHA）微量法对比检测558份标本鼠疫F1抗体。结果IHA检测出阳性33份,DAgS—ELISA检出阳性31份,阳性符合率为90．91％,阴性符合率99．81％,总符合率99．28％,二者检出阳性率分别为5．91％和5．56％,差异无统计学意义（X^2=0．25,P=0．625）。2种方法测定27份鼠疫免疫血清均阳性,IHA微量法的敏感性高于DAgS—ELISA（t=3．023,P=0．006）。结论DAgS—ELISA检测鼠疫F1抗体敏感性低于IHA微量法,但特异性好,无前滞反应,可避免初筛漏检问题。     

血清学和病原学在鼠疫监测中的应用

目的比较对不同的检测材料测定鼠疫F1抗体、鼠疫F1抗原和病原学分离 ,探讨基层单位在鼠疫监测中 ,能早期发现鼠疫疫情的实验室检测方法。方法RIHA测定鼠疫F1抗原 ,IHA测定鼠疫F1抗体 ,在龙胆紫血液琼脂培养基中进行噬菌体裂解试验分离和鉴定鼠疫菌。结果人、犬、猫和鼠血清鼠疫F1抗体阳性率分别为5.3 %、6.3 %、20.7 %和0.67 % ;腺肿穿刺液和自毙鼠干尸或脏器鼠疫F1抗原阳性率为44.4 %和40 %、鼠疫杆菌阳性率为35.7%和14.4 % ;鼠体蚤和活鼠病原学分离的阳性率为0。结论RIHA能快速、准确发现鼠疫疫情 ,而犬、猫等指示动物的F1抗体监测比鼠血清F1抗体监测更省事和实用。     

广西鼠疫疫区指示动物血清流行病学调查

目的调查广西鼠疫疫区指示动物血清F1抗体阳性率，探讨鼠疫指示动物在鼠疫监测中的意义。方法采用间接血凝试验法，检测鼠疫指示动物和鼠类血清中鼠疫F1抗体。结果鼠疫指示动物（猫和狗）血清F1抗体阳性率为2．06％（10／486），鼠血清F1抗体阳性率为0．37％（1／272），两者差异有统计学意义（χ^2=4．18，P〈0．05）。结论鼠疫指示动物血清学监测对鼠疫防制具有非常重要的意义。     

鼠疫耶尔森菌caf1基因的克隆表达及其产物免疫学评价

目的 表达具有免疫学活性重组F1抗原(rF1),并以其构建检测鼠疫抗体胶体金试纸条.方法 将去掉信号肽编码序列的caf1基因片段与载体质粒pET32a(+)通过BamHI和Not I双酶切位点进行连接,将重组质粒[caf1-pET32a(+)]转化入BL21(DE3)中进行诱导表达,表达产物经亲和层析纯化,以纯化rF1及天然F1抗原制备双检测鼠疫抗体胶体金标试纸条,并对浙江省528份人血清标本进行检测.结果含caf1-pET32a(+)的BL21(DE3),经诱导产生相对分子质量(M_r)约为35.5×10~3的rF1融合蛋白;rF1融合蛋白检测鼠疫抗体的敏感性等同甚至超越天然F1抗原;在528份人血清标本的检测中,rF1与天然F1的符合率为97.9%(K=0.466),有较好一致性.结论 制备的rF1,具有良好免疫学活性,该rF1可替代天然F1抗原,用于鼠疫免疫学检测.     

不同鼠疫检测技术在河北省鼠疫监测中的应用研究

目的通过用鼠疫血凝试验、胶体金标记免疫层析(金标)和ELISA 3种方法检测啮齿动物血清,用金标、ELISA、PCR与鼠疫反向血凝试验和细菌分离检测啮齿动物脏器,评价其在鼠疫监测中的应用效果。方法用鼠疫血凝试验、金标和ELISA 3种方法检测啮齿动物血清;用金标、ELISA、PCR、鼠疫反向血凝试验和细菌分离检测啮齿动物脏器。结果鼠疫血凝试验、金标和ELISA 3种方法对啮齿动物血清的阳性检出率分别为0.32%、0.32%和1.26%。金标、ELISA、PCR、鼠疫反向血凝试验和细菌分离对啮齿动物脏器的阳性检出率分别为3.15%、0.70%、4.90%、0.70%和0.70%。结论金标、ELISA、PCR值得推广应用,非常适合基层和快速诊断应用。     

胶体金免疫层析法检测弓形虫循环抗原的研究

目的：建立一种简易快速、自测式胶体金免疫层析法（GICA）用于检测血清中弓形虫循环抗原（CAg）。方法：用胶体金颗粒标记弓形虫单克隆抗体，制成免疫层析测试条。血清中的弓形虫循环抗原与测试条上的金标记单克隆抗体结合后沿着硝酸纤维素膜移动，与膜上的固相抗体结合形成肉眼可见的红色线条。结果：用GICA与ELISA比较检测105份小鼠血清中循环抗原，两法符合率为95％（P〉0．05）。结论：GICA检测血清中的弓形虫循环抗原特异性强、灵敏度高、简便快速，无需特殊仪器设备，有广泛应用价值。     

不同方法检测宿主动物体内鼠疫菌F1抗原的应用

目的了解不同方法在鼠疫监测现场中的应用效果,掌握检测方法的可行性、可操作性及对鼠疫监测的影响因素,评价方法间的一致性,制订适于现场应用的有效监测机制。方法对广西隆林、西林县鼠疫监测点收集的鼠脏器同时进行分离培养、反向间接血凝试验(RIHA)、胶体金免疫层析试验(RGICA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)、聚合酶链反应(F1-Pla-PCR)。结果分离培养、RIHA、RGICA、ELISA、PCR检测鼠脏器中鼠疫菌F1抗原均为阴性,5种方法间一致性比较Kappa值等于0,呈轻度一致。结论新技术胶体金免疫层析试验、酶联免疫吸附试验、聚合酶链反应具有操作简便易学、特异、快速、敏感等特点,适宜在鼠疫监测现场中应用。     

2012年理塘县人间鼠疫疫情分析

目的通过对2012年四川理塘县人间鼠疫疫情综合处置分析,为今后有效预防和控制鼠疫疫情积累经验。方法依据《国家鼠疫控制应急预案》、《人间鼠疫疫区处理标准及原则（GB15978-1995）》、《鼠疫诊断标准（WS279-2008）》和《四川省鼠疫应急预案》,对鼠疫患者与接触者进行隔离管理,并对隔离区和现场进行相关卫生学处置,鼠疫细菌培养、鼠疫间接血凝试验（IHA）、鼠疫反向血凝试验（RIHA）和鼠疫胶体金免疫层析法（GICA）,按照卫生部行业标准-《鼠疫诊断标准（WS279-2008）》执行。结果细菌检测患者体材料15份、细菌阳性5份,确诊病例为腺型继发败血型鼠疫。自毙旱獭1份分离鼠疫菌1株;IHA检测接触者人体血清23份、结果阴性;RIHA检测病人体材料15份、阳性7份,滴度1∶80~40960不等;鼠疫胶体金免疫层析法（GICA）抗原检测病人体材料15份、阳性7份;旱獭检材1份RIHA和GICA抗原检测均阳性。结论鼠疫疫情发生后,根据鼠疫传播特点,因地制宜,控制传染源、切断传播途径、保护易感者等效防措施,防止了鼠疫疫情扩散;同时证实理塘县为喜马拉雅旱獭鼠疫自然疫源地。     

4种鼠疫F1抗原/抗体检测方法的初步评价

目的 客观评价血凝试验、胶体金试验、ELISA和PCR 4种检测方法的灵敏性.方法 对于血清学方法中的F1抗体检测,评价检出的全菌免疫兔抗血清最低稀释度;F1抗原检测,评价检出的最低浓度.对于分子生物学方法,评价同时检出fra基因和pla基因的模板最低浓度.结果 对于F1抗体检测,间接血凝试验检出的最低稀释度是1:64,胶体金试验是1:1000,ELISA是1:204 800.对于F1抗原检测,反向血凝试验检出的最低浓度是2 ng/ml,胶体金试验是50 ng/ml.fra、pla基因同时检出,模板的最低浓度是0.21 ng/μl.结论 在以抗体IgG为主的血清中,ELISA法对于F1抗体检测的灵敏性较高.反向间接血凝试验对于F1抗原检测的灵敏性较高.为减少误诊率,采用PCR诊断鼠疫菌要求最低模板浓度是0.21 ng/μl.     

2008年德格鼠疫自然疫源地实验检测结果分析

目的研究德格县喜马拉雅旱獭鼠疫自然疫源地情况。方法对2008年在德格县捕获的喜马拉雅旱獭等材料进行细菌分离培养、胶体金免疫层析法(GICA)与鼠疫间接血凝(IHA)和反向血凝(RIHA)。结果细菌培养检测自毙喜马拉雅旱獭26份,分离鼠疫菌9株;IHA检测旱獭血清79份、阳性3份,牧犬血清29份、阳性3份;RIHA检测组织悬液30份、阳性9份均为旱獭;GICA检测旱獭血清79份、阳性2份,牧犬血清29份、阳性9份,藏系绵羊血清32份、阳性8份;GICA抗原检测组织悬液30份,阳性11份(旱獭10份、家猫1份)。结论从德格县喜马拉雅旱獭分离出鼠疫菌,说明四川省德格县2008年正在发生动物鼠疫流行。     

河北省鼠疫自然疫源地人群血清鼠疫F1抗体流行病学调查

目的调查河北省鼠疫自然疫源地人群F1抗体的三间分布情况和维持机制。方法在河北省历史人间鼠疫发生地和动物间鼠疫活动疫源地的2个镇3个行政村采集居民血样196份作为调查对象，采集非疫区的居民血样100份作为对照组。同时进行常规的鼠疫间接血凝试验和鼠疫F1抗体胶体金试验。结果通过对历史疫区和动物间鼠疫流行活动疫源地的196份居民血清检测，阳性4份，阳性率为2．04％。间接血凝试验阳性4份，金标试验阳性3份；非疫区居民血清2种试验全部为阴性。经统计学检验，疫区居民鼠疫F1抗体阳性率和非疫区F1抗体阳性率差异有统计学意义（X^2=0．822，P〈0．05）。2种试验方法的阳性率无统计学意义。结论目前，在河北省鼠疫自然疫源地内尚存在一定比例的鼠疫F1抗体阳性人群，具体原因需做进一步的调查分析。     

巴塘县为四川省又一旱獭鼠疫疫源县

目的 了解四川省巴塘县是否存在鼠疫自然疫源地,为四川鼠疫防治工作提供依据.方法 2011年应用现场调查和实验室检测相结合对巴塘县进行调查研究.结果 在巴塘县采集相关动物标本,细菌检测动物材料31份,从1只自毙旱獭中分离鼠疫杆菌1株;鼠疫间接血凝试验(IHA)检测动物血清72份,其中旱獭血清20份、犬血清52份,从牧犬血清中检出阳性10份、阳性率19.23％,滴度为1∶160～40 960.结论 巴塘县为喜马拉雅旱獭鼠疫自然疫源地.