双抗体夹心ELISA检测循环抗原在血吸虫病控制流行地区应用的研究

对血吸虫病已控制流行地区1099名10岁以上的人群,应用抗血吸虫成虫抗原多克隆抗体(PcAb)为捕捉抗体,抗血吸虫虫卵抗原单克隆抗体(McAb)MG_2-HRP为覆盖抗体的双抗体夹心ELISA,检测血吸虫循环抗原(CAg),并以ELISA检测抗体(CAb)作平行对照.结果CAg和CAb的阳性检出率分别为4.55%和4.64%,两者的差异无显著意义(P>0.05).在50例CAg阳性者中,无血吸虫病治疗史者31例,而51例CAb阳性者中,无血吸虫病治疗史者仅6例.CAg和CAb联合检测能提高检出率.     

多克隆与单克隆抗体夹心ELISA法检测日本血吸虫病患者血清循环抗原

[目的 ]检测血吸虫病患者的循环抗原。 [方法 ]用多抗与单抗夹心 EL ISA法检测日本血吸虫病患者血清循环抗原。 [结果 ]用于检测 15 0例血吸虫病患者的循环抗原 ,其敏感性平均为 84.7% (72 .0 %～ 91.0 % ) ,40例正常人未出现假阳性反应 ,74例其他寄生虫感染者中 ,有 2例并殖吸虫病患者阳性 ,其余均未出现交叉反应。 [结论 ]多抗与单抗夹心 EL ISA法是一种较为理想的循环抗原检测方法。     

双抗体夹心酶联免疫吸附试验(S-ELISA)检测血吸虫病人循环抗原的研究

应用从重感染兔血清中提取的γ-球蛋白为捕捉抗体、以酶标单克隆抗体为结合物进行双抗体夹心酶联免疫吸附试验(S-ELISA),检测日本血吸虫病人循环抗原.结果:69例急性血吸虫病人血清的阳性率为80.6%一90.9%;110例慢性血吸虫病人血清的阳性率为88.2%;40例华支睾吸虫病人血清有1例出现阳性,交叉反应率为2.5%,50例健康人血清亦有1例出现阳性反应,假阳性率为2%.提示该法具有较高的敏感性、特异性,判断结果较客观,可应用于现场.     

双抗体夹心ELISA法检测广州管圆线虫循环抗原的研究

目的建立双抗体夹心ELISA法检测广州管圆线虫循环抗原(Cag)。方法采用两株抗广州管圆线虫成虫可溶性抗原单克隆抗体,应用双抗体夹心ELISA法检测广州管圆线虫CAg,并摸索该法的最佳实验条件。对感染大鼠、小鼠、疑似和确诊广州管圆线虫病病例血清进行检测,评价方法的敏感性;对日本血吸虫、肺吸虫、旋毛虫、囊虫病人血清进行交叉反应试验,评价方法的特异性。结果10μg/ml单抗包被,酶标记单抗1∶1 600稀释为最佳工作浓度。利用该法检测不同血清广州管圆线虫循环抗原的敏感性为84.2%~87.2%,特异性为100%。结论建立的双抗体夹心ELISA法检测广州管圆线虫循环抗原具有敏感性高、特异性强和经济、简便易行等优点。     

戊型肝炎病毒抗体双原夹心法ELISA的建立与初步应用

目的 建立抗戊型肝炎病毒（HEV）抗体检测的双抗原夹心ELISA（DS-ELISA），并应用于多种动物血清的检测。方法 将大肠杆菌表达的一段HEVORF2区重组抗原分别包被微孔板和进行辣根过氧化物醇（HRP）标记。利用5份阳性血清和40份阴性血清建立双抗原夹心ELISA；用400份义务献血员血清比较双抗原夹心ELISA与间接法IgG抗体ELISA的符合情况；用3只HEV感染猴系列血清比较双抗原夹心ELISA试剂和Genelabs公司HEVIgG试剂；用双抗原夹心ELISA试剂检测新疆地区的部分牛，绵羊，山羊，猪血清和上海地区的部分鸡血清中的HEV抗体。结果 建立了检测HEV抗体的双抗原夹心ELISA方法，对400份义务献血员血清的检测表明其与间接法IgG抗体ELISA试剂的符合情况良好，并且有更高的s/co比较；与Genelabs公司HEVIgG试剂的比较表明双抗原夹心ELISA试剂的检出更早，尤其是持续时间及强度明显优于Genelabs试剂；在所检测的各种动物中均发现了HEV抗体，其中猪抗体的阳性率最高，表明双抗原夹心ELISA试剂可同时用于不同动物的抗HEV抗体检测。结论 利用大肠杆菌表达的HEV重组抗原建立了双抗原夹心法ELISA，并可同时用于不同动物的抗HEV抗体检测。     

戊型肝炎病毒抗体双抗原夹心法ELISA的建立与初步应用

目的　建立抗戊型肝炎病毒 (HEV)抗体检测的双抗原夹心ELISA(DS -ELISA) ,并应用于多种动物血清的检测。方法　将大肠杆菌表达的一段HEVORF2区重组抗原分别包被微孔板和进行辣根过氧化物酶 (HRP)标记 ,利用 5份阳性血清和 4 0份阴性血清建立双抗原夹心ELISA ;用 4 0 0份义务献血员血清比较双抗原夹心ELISA与间接法IgG抗体ELISA的符合情况 ;用 3只HEV感染猴系列血清比较双抗原夹心ELISA试剂和Genelabs公司HEVIgG试剂 ;用双抗原夹心ELISA试剂检测新疆地区的部分牛、绵羊、山羊、猪血清和上海地区的部分鸡血清中的HEV抗体。结果　建立了检测HEV抗体的双抗原夹心ELISA方法 ,对 4 0 0份义务献血员血清的检测表明其与间接法IgG抗体ELISA试剂的符合情况良好 ,并且有更高的s/co比值 ;与Genelabs公司HEVIgG试剂的比较表明双抗原夹心ELISA试剂的检出更早 ,尤其是持续时间及强度明显优于Genelabs试剂 ;在所检测的各种动物中均发现了HEV抗体 ,其中猪抗体的阳性率最高 ,表明双抗原夹心ELISA试剂可同时用于不同动物的抗HEV抗体检测。结论　利用大肠杆菌表达的HEV重组抗原建立了双抗原夹心法ELISA ,并可同时用于不同动物的抗HEV抗体检测。     

应用单抗和多抗双抗体夹心—ELISA检测旋毛虫病人血清循环抗原

应用单抗双抗体夹心—ELISA和多抗双抗体夹心—ELISA检测旋毛虫病人血清循环抗原,其阳性率分别为67.7％(21/31)和72.2％(26/36),无显著件差异(P>0.05)。50例正常人两法皆为阴性。142例其它9种寄生虫病人中,两法除对20例囊虫病人中1例(5.0％)出现轻度交叉反应外均为阴性。对河南省新野县从事食品卫生人员调查,两法的阳性率分别为5.7％和5.9％,差异不显著。对两法循环抗原均呈阳性反应的14例进行了追踪观察,其中13例确诊为旋毛虫隐性感染。     

快速双抗体夹心ELISA检测囊虫病病人血清中循环抗原的研究

用常规双抗体夹心ELISA检测囊虫病病人血清中循环抗原(CAg),操作费时,血清和试剂用量较大,给临床工作带来一定困难。为此,我们在常规法的基础上研究改进,建立了快速双抗体夹心ELISA。材料和方法1　试验对象　120例囊虫病病人血清采自本教研室寄生虫病免疫诊断室和哈尔滨市寄生虫病防治院经活检或CT证实的囊虫病患者。40例肝吸虫病病人为粪检虫卵阳性者,17例弓形虫病病人为弓形虫抗体阳性者,其血清均采自本教研室。29例包虫病病人血清由新疆维吾尔族自治区流行病研究所提供,均经手术证实。75例正常人血清采自本校第二附属医院献血员。…     

两种血吸虫病免疫诊断试剂盒现场筛查效果的对比研究

目的评价胶体染料试纸条法(DDIA)和酶联免疫吸附试验(ELISA)两种试剂盒在血吸虫病现场防治中的筛查价值。方法受检对象采取整群抽样,按照单盲试验的原则,先同时进行DDIA和ELISA血清学检测,再对血清学阳性者采用粪便尼龙绢集卵孵化法(1送1检)进行病原学检查,配对比较两种试剂盒的筛查效果和效率。结果在11个流行村配对检测12881人,ELISA阳性912例,平均阳性率为7.08%(0.84%~21.50%);DDIA阳性707例,平均阳性率为5.49%(0.44%~17.83%),ELISA法显著高于DDIA法(χ2=27.698,P<0.01);两法双阳性383例,双阴性11645例,总符合率为93.38%,检出结果呈中度一致(kappa=0.438)。两种试剂盒在未控制地区筛出的阳性数差异无显著性(χ2=3.498,P=0.061),在已控制地区筛出的阳性数ELISA明显高于DDIA(χ2=33.393,P<0.01)。在血清学阳性的885例(ELISA)和615例(DDIA)中分别查出粪孵阳性病人25例和27例,用DDIA法筛查减少粪检270人,却多查出2例粪阳病人。DDIA和ELISA法每人每日完成检测样本数分别为473份和174份,DDIA法的检测工作效率是ELISA法的2.72倍。结论两种试剂盒均可用于血吸虫病现场筛查,但DDIA试剂盒的筛查效率优于ELISA试剂盒。     

测定小鼠细胞因子的双抗体夹心ELISA法的建立及应用研究

目的　建立敏感的测定小鼠IL - 5、IL - 4和IFN -γ水平的生物素 -链霉亲和素双抗体夹心ELISA法 ,并探讨该法在IL - 5转基因小鼠感染模型中的应用价值。方法　含大鼠抗小鼠IL - 4、IL - 5和IFN -γ单克隆抗体的杂交瘤细胞培养上清 ,经PM 10膜超滤、5 0 %饱和硫酸铵沉淀及ProteinG -Sepharose亲和层析纯化。应用活化生物素制剂对纯化的TR FK4、BVD6和AN18单克隆体抗体进行生物素化。用纯化的 2 μg/mlTRFK5、8μg/ml 11B11和 4 μg/mlR4 - 6A2分别作为测定小鼠IL - 5、IL - 4和IFN -γ的包被抗体 ,然后逐步加入样品、生物素化TRFK4 (1μg/ml)、BVD6 (2 μg/ml)和AN18(1μg/ml)、SA -HRPO和OPD ,硫酸终止反应后读取A490 值。结果　所建立的生物素 -链霉亲和素双抗体夹心ELISA法特异性和敏感性高 ,用于检测感染巴西日圆线虫感染的IL - 5转基因小鼠和非转基因小鼠的血清标本取得了较好的效果。结论　该ELISA方法对于测定小鼠细胞因子具有应用价值     

Detection of circulating antigen in serum of mice infected with Schistosoma japonicum by immunomagnetic bead ELISA based on IgY

We developed a novel immunomagnetic bead ELISA based on IgY (egg yolk immunoglobulin) for detection of circulating antigen (CA) in sera of mice infected with Schistosoma japonicum. The assay involved the use of chicken polyclonal antibodies IgY against soluble egg antigens (SEA) of S. japonicum as a capture antibody and anti-SEA mouse monoclonal antibody NP28-5B labeled horseradish peroxidase (HRP) as a detecting antibody. Two groups of BALB/c mice infected with S. japonicum cercariae were used: lightly infected mice (infected with 10 S. japonicum cercariae) and heavily infected mice (infected with 30 S. japonicum cercariae). The CA was detectable as early as 4 and 5 weeks after infection in the sera of heavily and lightly infected mice, respectively. The CA levels rose rapidly and reached a peak in 8 weeks after infection and then remained a plateau for at least another 6 weeks in both groups. Moreover, the effect of praziquantel on the CA levels was also investigated. The heavily infected mice were treated with praziquantel and the CA levels in sera increased dramatically in the first week post-treatment and then decreased to the control level by 6 weeks after treatment. The novel assay appears to be sensitive for detection of schistosomal antigenemia and valuable to judge the efficacy of chemotherapy in murine schistosomiasis.     

双抗原夹心ELISA法检测登革病毒感染患者血清中的EDⅢ抗体

目的 建立一种检测登革病毒(dengue virus, DENV)特异性抗体的双抗原夹心ELISA方法?方法 利用毕赤酵母系统表达4个血清型登革病毒包膜蛋白Ⅲ区(envelope protein domain Ⅲ, EDⅢ),并采用改良过碘酸钠法对EDⅢ蛋白标记辣根过氧化物酶(Horseradish peroxidase, HRP),建立一种可同时检测4个血清型登革病毒EDⅢ蛋白特异性抗体的双抗原夹心ELISA法?并对2014年广州珠江医院门诊和住院确诊的登革热患者血清标本进行检测,并与澳洲Panbio MAC ELISA检测的敏感性进行比较?结果 本研究成功建立了一种检测4个血清型登革病毒EDⅢ蛋白特异性抗体的双抗原夹心ELISA法,该方法能同时检测到4个血清型登革病毒EDⅢ蛋白免疫的小鼠血清和Ⅰ型登革病毒EDⅢ蛋白免疫的兔血清,而与烟曲霉AF-MP蛋白免疫的小鼠血清和兔血清均无交叉反应?对184份健康人血清标本检测全为阴性,而对168份确诊为登革病毒感染患者血清标本检测结果表明,两种诊断方法检测结果差异无统计学意义,P<0.001(57.1% vs 57.7%),联合NS1抗原检测方法,其敏感性提高到97.6%?结论 双抗原夹心ELISA法检测登革病毒EDⅢ特异性抗体具有高度的特异性,但如果能同时联合抗原检测可明显提高登革热的早期诊断率?     

抗白念珠菌IgY对白念珠菌生长及黏附的影响

目的观察抗白念珠菌IgY对白念珠菌生长及体外黏附上皮细胞的影响。方法在含有不同浓度IgY的沙氏液体培养基中加入白念珠菌,37C培养24h后,观察白念珠菌的生长现象;分离人口腔黏膜上皮细胞,用不同浓度IgY分别对上皮细胞和白念珠菌预处理后进行黏附抑制实验。结果加入IgY抗体后,白念珠菌的繁殖数量无明显变化,但生长过程中出现凝集现象,且随IgY浓度的升高而增加;口腔黏膜上皮细胞表面黏附的白念珠菌数目明显减少。结论IgY不影响白念珠菌的繁殖分裂,但可使其发生凝集,并能阻断其黏附上皮细胞,作用机制可能与IgY封闭白念珠菌的表面受体有关。     

Use of double McAb sandwich ELISA to detect circulating antigen of Toxoplasma in infected rabbits

This paper reports on the cumulative positive frequencies of circulating antigen (CAg) detected in the sera of rabbits infected with Toxoplasma by using double-McAb sandwich ELISA. The positive frequencies of rabbits with heavy and medium infection in the incubation period are 30.8% and 11.1%. Those with medium infection in acute, subacute and early chronic period are 86.1% and 76.7%, 43.3% and 32.0% with light infection. The positive rates of CAg in rabbits of medium and light infection rose progressively in acute period, but declined in subacute and early chronic period. Cross reaction with schistosomiasis and coccidiosis was all negative. This method of high specificity, sensitivity and duplication possesses certain value in the diagnosis of acute or active Toxoplasma infection and may be useful for the diagnosis in the early period.