从组织细胞免疫化学反应的分布分析抗人结肠癌单克隆抗体的选择

采用免疫荧光组织染色及酶标组织染色法作鼠源性3E_4抗人结肠癌单抗(1981年本室产)组织免疫化学反应定位,发现两法均显示3E_4单抗对结肠癌组织周膜、界膜、腔膜面及基底膜等部位均有明显的免疫     

结肠癌新的肿瘤抗原——促血液凝固癌抗原1的发现

癌特异性抗原——促血液凝固癌抗原(CCA1)是作者发现的可直接活化血液凝固第X因子的新丝氨酸蛋白酶。抗CCA-1抗体来自AI18(IgM)细胞培养上清液。抗CEA抗体为抗CEA抗体A5-B7。用免疫组化分析结肠癌原发灶100例、结肠癌肝转移灶7例、腺瘤内癌15例、腺瘤11例。结肠癌中Ⅰ期20例、Ⅱ期21例、Ⅲ期18例、Ⅳ期42例及Ⅴ例17例。并比较CCA-1与CEA在成人及胎儿正常组织分布。 CCA-1在癌肿区各期均呈79.2％～100％阳性,其整体阳性率为92％。中度阳性>75％。正常结肠组织均无CCA-1。CEA据病期不同呈94.1％～100％的阳性率,整体阳性率为98％,但其在72％的正常结肠组织为阳性。癌相邻区正常结肠粘膜可见CEA,但均无CCA-1。CCA-     

鼻咽癌单克隆抗体的免疫组化研究

采用间接免疫荧光法,检查5株单克隆抗体(下称单抗)与鼻咽癌组织和其他肿瘤组织的反应,并了解这些单抗所对应的抗原在肿瘤组织的定位及分布。结果表明,5株单抗均与鼻咽癌组织起反应,阳性率分别为H_3:78.38％,H_4:84.21％,H_5:91.43％,H_(12):67.57％,H_(13):70.27％,显示为膜荧光染色,在荧光表现形式上,鳞癌与腺癌不同。单抗与其他癌组织具有不同程度的交叉反应,而与肉瘤组织无反应。 另外,检查3株单抗(H_3,H_4、H_(12))与鼻咽癌病人及鼻咽部正常人的脱落细胞的免疫组化反应,发现均能与鼻咽癌病人的脱落癌细胞发生反应而不与正常的鼻咽部纤毛柱状上皮细胞和红细胞发生反应。     

胃肠癌单抗在大肠癌和息肉的抗原表达

胃癌和肠癌单抗联合检测大肠癌和息肉抗原表达尚未见报道。本文报告这方面的检测结果。材料与方法经病理证实的大肠癌66例,大肠息肉68例(病理分类见附表),正常结肠粘膜10例,采用切除或活检标本、石蜡切片。鼠抗人结肠癌单抗MC_3及MC_5,胃癌单抗MG_7,均     

抑制结肠癌细胞与肝窦内皮细胞黏附的功能性抗体的初步研究

目的:研制抑制结肠癌细胞与肝窦血管内皮细胞黏附的功能性单抗,鉴定该单抗识别的抗原分子.方法:以人肝窦内皮细胞(human liver sinusoidal endothelial cell, HLSEC)免疫BALB/c小鼠,将小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合,采用甲基纤维素选择培养液培养,制备抗HLSEC的单克隆抗体库.采用免疫荧光染色、黏附实验等方法筛选、鉴定能抑制结肠癌Ls174T细胞与肝窦内皮细胞黏附的功能性单克隆抗体.提取肝窦内皮细胞膜蛋白,采用Western blotting方法鉴定单抗识别的功能性抗原蛋白.结果:HLSEC免疫小鼠的脾细胞与SP2/0细胞融合后产生1 440个杂交瘤株,获得119株产生抗HLSEC抗体的阳性克隆,其中20株能显著抑制具有肝转移能力的结肠癌Ls174T细胞与HLSEC的黏附;其中15株为IgM型,3株为IgG型,2株测不到重链;其中1株抗黏附能力最强的单抗(黏附抑制率为51%)命名为12B6,该单抗在5～200 μg/ml范围内显著阻断HLSEC与Ls174T的黏附,且呈剂量依赖性;单抗12B6所识别的HLSEC抗原蛋白的相对分子质量为46 000.结论:建立了抗HLSEC单克隆抗体库,获得了20株具有抑制结肠癌细胞与肝窦血管内皮细胞黏附的功能性抗体,初步鉴定了一种可能参与结肠癌肝转移的黏附分子,为结肠癌的组织器官特异转移机制及靶向治疗的研究奠定了一定的基础.     

HPV与结肠癌临床病理相关性研究

为了解人乳头瘤病毒ＨＰＶ与结肠癌发生、发展的相关性。应用免疫组化ＳＰ法检测了５８例结肠癌，２９例结肠腺瘤，２８例正常结肠粘膜组织中ＨＰＶ壳蛋白抗原。结果在结肠癌中ＨＰＶ抗原阳性率为７４％，良性腺瘤为４８％，正常粘膜为２１％，３者之间阳性率有显著性差异（Ｐ＜０．０５）；ＨＰＶ与结肠癌的发生年龄、部位、大体及组织学分型无关，与转移、预后及临床分期有一定关系，但无显著性差异。ＨＰＶ感染与结肠癌的发生、发展密切相关     

抗肝癌干细胞功能性单克隆抗体的研制

摘 要? 目的：研制抗肝癌干细胞的功能性单克隆抗体,为肝癌干细胞的靶向治疗提供候选抗体药物。方法：从人肝癌组织中分离人肝癌干细胞样细胞（human liver cancer stem-like cells, hLCSLCs）,免疫BALB/c裸鼠,采用脾细胞融合法制备大容量单抗库。应用细胞免疫荧光、无血清成球培养、裸鼠皮下成瘤等方法筛选、鉴定特异识别肝癌干细胞的单克隆抗体。流式细胞仪分选hLCSLCs侧群细胞（hLCSLCs side population cells, hLCSLCs-SP）,无血清悬浮培养法和CCK-8法检测杂交瘤单抗对hLCSLC-SP自我更新和增殖能力的影响。结果：细胞融合后获得2 964株杂交瘤克隆,在能与hLCSLCs反应的237株克隆中,有116株单抗能与hLCSLCs的细胞膜结合,其中的33株杂交瘤单抗只与hLCSLC-SP反应（阳性率为2%~5%）、不与非hLCSLC-SP反应。该33株单抗中有6株能与CD133阳性细胞有不同比例的共染,并且与无血清悬浮培养的成球细胞呈阳性反应(阳性率为3%~26%),明显高于hLCSLCs-SP。裸鼠皮下接种1×104个15D2单抗阳性的hLCSLCs,成瘤率为100%。功能性筛选实验发现,6株单抗中的4株能显著抑制hLCSLC-SP的增殖和成球生长,其抑制率分别为24%~42%和13%~50%。结论：采用自建的大容量单克隆抗体库技术,筛选获得了4株特异性识别hLCSLC-SP的功能性单抗,为肝癌干细胞的抗体靶向治疗奠定了基础。     

A 激酶锚定蛋白4在结肠癌中的表达及临床意义

目的：探讨 A 激酶锚定蛋白4（AKAP4）在结肠癌组织中的表达以及与临床病理特征的关系。方法：收集结肠癌组织标本80例,正常结肠黏膜组织标本30例,采用免疫组织化学方法检测结肠癌组织及正常结肠黏膜中 AKAP4的表达情况,并对其进行临床病理特征分析。结果：AKAP4在结肠癌中阳性表达率为76.3%,而在正常结肠黏膜中不表达,差异具有统计学意义（P <0.05）。AKAP4在结肠癌中的表达在不同性别、不同年龄、不同病理分化程度及是否淋巴结转移的患者中差异无统计学意义（均 P >0.05）,但在不同临床分期间差异有统计学意义（P <0.05）。结论：AKAP4在结肠癌中过表达,并与肿瘤的临床分期相关,可能在结肠癌的发生过程中起到重要作用,有望成为结肠癌诊断治疗的新靶点。     

S100A4蛋白在结肠腺瘤和结肠癌中的表达

[目的]探讨S100A4蛋白在结肠腺瘤和结肠癌中的表达及其临床意义。[方法]用免疫组化法检测S100A4在15例正常肠黏膜、80例结肠腺瘤和60例结肠癌中的表达。[结果]S100A4蛋白在正常肠黏膜中无表达,在结肠腺瘤中阳性率为16.25%,在结肠癌中阳性率为56.67%。[结论]S100A4与结肠腺瘤和结肠癌的发生发展密切相关,是预测结肠肿瘤进展的有用指标。     

去泛素化酶USP9X在结肠癌组织中的表达及意义

目的:探讨去泛素化酶USP9X在结肠癌组织中的表达特点及对结肠癌细胞增殖的影响。方法:收集解放军中部战区总医院病理科存档的结肠癌组织标本和癌旁正常结肠组织标本76例,免疫组化法检测USP9X在不同性别、年龄患者的结肠癌组织、癌旁正常结肠组织中的表达情况。siRNA抑制人结肠癌HCT116细胞株USP9X的表达,MTT法检测HCT116细胞增殖能力。结果:76例结肠癌患者中,USP9X阳性表达53例,占69.7%。癌旁正常大肠组织中,USP9X阳性表达率19.7%。USP9X的表达与结肠癌淋巴结转移和浸润深度相关。siRNA抑制结肠癌HCT116细胞USP9X表达后,与空白对照组和阴性对照组比较,干扰组细胞增殖能力显著下降。结论:去泛素化酶USP9X在结肠癌组织中的表达高于癌旁正常结肠组织,并与肿瘤侵袭转移相关。特异性抑制USP9X基因的表达可抑制结肠癌细胞的增殖能力。     

抗人肝癌细胞单克隆抗体免疫组化及免疫电镜研究

本文用抗人肝癌细胞的单克隆抗体,采用ABC法,50例临床病理诊断为肝细胞肝癌及正常组织等的石蜡切片进行了免疫组化研究,发现该抗体染色在肝癌阳性率为88％(44/50例),而在全身绝大部份脏器的正常组织无交叉反应。这一结果表明,该抗体对肝癌组织具有一定的特异性。为证实此抗体定位的相应抗原部位,我们还通过免疫电镜包埋前和包埋后两种不同的染色方法,对5例临床手术切除的新鲜肝癌标本进行了超微结构定位观察。结果,此抗体主要定位于细胞膜性结构,包括细胞膜连接,线粒体膜和内质网膜。推测此抗体为肝癌细胞相关膜抗原的单克隆抗体。此抗原物质的发现,为肝癌诊断及研究展示了新的前景。     

肿瘤相关抗原LEA的表达及其在病理诊断中的意义

背景与目的：目前,大肠癌诊断的肿瘤标志物如CEA（carcinoembryonic antigen)等,对大肠癌患者的特异性不强,用于早期诊断价值不高,研究表明LEA（large external antigen)对大肠癌组织有极好的特异性,本研究应用抗LEA单抗ND－1和抗CEA单抗对大肠癌组织的对比,探讨LEA在大肠癌中的表达及其临床病理诊断意义。方法：采用免疫组织化学S－P法检测170例大肠癌组织和100例大肠非癌组织（41例大肠腺瘤,32例癌旁粘膜,27例正常粘膜）LEA与CEA的表达,结果：LEA在高、中、低分化腺癌组织中表达阳性率分别为100％,83．1％和51．8％,而CEA分别为93．8％,92．3％,和70．4％,LEA大肠腺瘤,癌旁粘膜和正常粘膜中表达阳性率分别为75．6％,53．1％和14．8％,而CEA分别为82．9％,62．5％和40．7％,LEA对高分化腺癌表现出更高的选择性（P＜0．01）,CEA单抗对高、中、低分化腺癌选择性相似（P＞0．05）,与CEA相比,LEA在非癌组织中表达的阳性率较低（P＜0．05）,LEA与CEA的表达除在正常为膜外均有显著的相关性,LEA与CEA在组织学上诊断大肠癌的灵敏度分别为84．1％和88．8％,而特异度分别为48％和35％,结论：LEA可能是一种与细胞分化,侵袭能力相关的肿瘤抗原,LEA可用于大肠癌恶性程度判断的参考指标,是具有临床实用价值的肿瘤生物标记物。     

双功能抗体介导结肠癌细胞杀伤效应的研究

目的：研究抗CD3/抗TNP双功能抗体与TNP化抗癌胚抗原（CEA）McAb结合。在裸鼠体内对结肠癌细胞的杀伤作用。方法：将抗癌胚抗原单抗TNP化。TNP化后的抗CEA单抗（TNP-CEA），抗CD3/抗TNP双功能抗体，人淋巴细胞及结肠癌细胞CL187接种裸鼠体内。计算肿瘤生长体积，观察成瘤率。结果：双功能抗体能够介导PBLs对CL187细胞的杀伤作用。结肠癌细胞CL187的成瘤能力受到抑制，成瘤率为0/4。结论：此双功能抗体在免疫治疗中具有潜在的应用价值。     

两株选择性抗人乳腺癌的单克隆抗体

著者用 MCF-7人乳腺癌细胞系免疫后的 BALB/C 小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞进行融合,经过筛选得到两株特异性不同的抗人乳腺癌单克隆抗体(简称单抗)杂交株,3B18和15A8。3B18杂交株分泌-IgG 抗体,该抗体识别 MCF-7细胞的胞质成份.免疫过氧化物酶染色结果表明,被检31例人乳腺癌标本中有27例显示3B18抗体染色阳性。在所有被检的标本中,该抗体几乎总是与低分化和浸润性导管癌发生反应,但与雌激素或孕酮     

GST-π在结肠癌组织中的表达及意义

目的：研究GST-π与结肠癌的耐药、生物学行为及诊断的关系。方法：应用免疫组化S-P法检测96例结肠癌、32例正常结肠粘膜、20例结肠腺瘤、30例畸形胎儿结肠粘膜组织中GST-π的表达。结果：83例结肠癌GST-π表达阳性，阳性率为86.46％。GST-π在结肠癌、畸形胎儿结肠粘膜的表达显著高于正常结肠粘膜及结肠腺瘤(P＜0.01)。结论：检则GST-π的表达可能用作结肠癌的诊断和监测化疗疗效的参考指标。     

大肠癌相关新基因ST13单克隆抗体的制备及生物学特性鉴定

目的 研制抗ST13蛋白单克隆抗体,建立检测方法,探讨ST13基因的生物学特性。方法 按淋巴细胞杂交瘤技术制备抗ST13蛋白单克隆抗体,并以亲和层析法纯化单抗,将此单抗作探针用Western-Blot和免疫组化检测标本。结果 获得3个抗ST13蛋白单抗的杂交瘤细胞株,杂交瘤细胞培养上清和腹水中单抗的ELISA效价为10^4-10^5。以ST13单抗作Wester-Blot和免疫组化证实该单抗具有高度特异性,可用于检测组织表达的ST13蛋白。结论 制备了具有高度特异性和高效价的抗ST13蛋白单抗;建立了Western-Blot及免疫组化检测组织表达的ST13蛋白的方法。     

BAG1和TIMP3在结肠癌中的表达及临床病理意义

[目的]探讨BAG1和TIMP3在结肠癌中的表达、两者相关性及临床病理意义。[方法]采用免疫组织化学SABC法检测80例结肠癌组织和20例正常结肠黏膜巾蛋白BAG1、TIMP3的表达。[结果]BAG1在结肠癌组织中阳性率（80％）显著高于正常组织的阳性率（10％）（P〈0.05）；TIMP3在结肠癌组织中的阳性率43.75％,而在正常黏膜组织的阳性率为60％（P〉0.05）。BAG1蛋白和TIMP3的表达与结肠癌分化程度、Duke’s分期、淋巴结转移及生存率密切相关（P〈0.05），与性别、年龄无关（P〉0.05）。蛋白BAGI与TIMP3表达无相关性（P〉0.051。[结论]蛋白BAG1高表达和TIMP3表达缺失对结肠癌的发生发展均起重要作用,两者表达水平与结肠癌的浸润转移及恶性程度有关。BAG1和TIMP3可作为预测结肠癌浸润转移潜能的新的生物学指标。     

应用蛋白质组学方法筛选结肠癌相关蛋白质

目的通过比较结肠癌组织与癌旁正常肠组织的差异表达蛋白谱,以期发现结肠癌癌变相关蛋白。方法将结肠癌组织与癌旁正常结肠组织蛋白进行双向凝胶电泳,选择在癌组织中高表达的50个点进行MALDI-TOF质谱分析和生物信息学分析。Western Blot和免疫组化方法验证蛋白的差异表达。结果建立了结肠癌及正常肠组织的双向凝胶电泳图谱,其中癌旁正常结肠组织和结肠癌组织电泳图谱中平均蛋白质点数分别为860±45和980±28;癌旁正常结肠组织和结肠癌组在IEF方向上的平均偏差分别为(0.487±0.11)mm和(0.654±0.11)mm,在SDS-PAGE方向上的平均偏差分别为(0.944±0.12)mm和(1.20±0.22)mm,结肠癌与癌旁正常结肠组织的差异表达蛋白质点数为72.00±12.34。选择在癌组织中高表达的50个点进行质谱分析和生物信息学查询,鉴定了其中有意义的25个点,包括谷胱苷肽S转移酶、肝脂肪酸结合蛋白、热休克蛋白27等。免疫组化方法检测结肠癌组织芯片中GST和HSP27的表达,结果显示,GST在结肠癌中表达的阳性率为73.7%,在正常肠黏膜中表达的阳性率为28.6%,差异有显著性(P<0.01);HSP27在结肠癌中表达的阳性率为73.7%,在正常肠黏膜中表达的阳性率为21.4%,差异有显著性(P<0.01)。结论蛋白质组学方法较好地显示结肠癌组织和癌旁正常组织的差异表达蛋白;其中在结肠癌组织中高表达蛋白HSP27和GST可能作为结肠癌诊断标志物。     

用单克隆抗体筛选小细胞肺癌相关抗原基因

用分子生物学技术克隆肿瘤相关抗原基因对认识肿瘤抗原本质、深入研究肿瘤抗原的结构和功能、研究肿瘤多肽疫苗有重要意义。我们已获得一组抗人小细胞肺癌单克隆抗体,并在体外证实该抗体所识别的抗原在靶细胞有较好的特异性和较高分布密度,是多肽性抗原决定簇。在此基础上,以抗体为探针,筛选小细胞肺癌基因库,目的在于寻找编码抗体所识别抗原的肿瘤相关基因。 λgt_(11)噬菌体为载体构建的人小细胞肺癌细胞株NCI—H_(128)cDNA文库的效价约1.3×10~6,可在大肠杆菌系统和β-半乳糖苷酶构成融合蛋白的形式,表达插入的外源蛋白。我们用抗NCI-H_(128)单抗2F_7和E_6混合作为控针。碘_(125)用Iodogen方法标记在纯化的抗小鼠抗体上。10~7的菌斑转移到NC膜,经放射自显影,从中筛选到5个阳性菌斑,经4轮克隆化后,阳性斑达100％,对其中N0.4克隆进一步研究。该克隆的溶源菌经     

结肠癌及其它胃肠道疾患时粪便CEA增高的检测及其膜结合特征的鉴定

血清CEA并非结肠癌的特异性标记物,许多其它肿瘤也可伴有血清CEA的升高,而大部分早期结肠癌患者的血清CEA却在正常范围,故可以认为血清CEA测定对于肠癌早期筛检价值不大。由于粪便中可能含有直接自肿瘤组织排泌的CEA,故测定粪CEA似乎更有意义。本文作者使用两种抗CEA单抗NCC-CO-411和NCC-CO-442建立夹心法RIA用于检测粪悬液中CEA含量。正常人粪CEA水平为O.04±0.03Iμg/ml(X±S,n=15),原发性结肠癌患者为0.46±0.51μg/ml(n=34),良性胃肠道疾病患者为0.17±0.19μg/ml(n=55),各组差异有显著性(P<0.001)。如确定0.26μg/ml为诊断临界值,此时原发性结肠癌阳性率为50％(12/24),且Dukes各期的阳性率相近。但肠癌患者经手术治疗后,粪CEA即降至正常水平。结肠癌术后复发者的阳性率也是50％,而所有粪CEA阳性者,肠道局部均有复发。胃癌及一些良性