华蟾素注射液对人肝癌HepG-2细胞增殖及凋亡的影响

[目的]探讨华蟾素注射液对人肝癌HepG-2细胞增殖及凋亡的影响。[方法]采用四甲基偶氮唑蓝还原法（MTT）观察华蟾素注射液对HepG-2细胞增殖的影响;采用倒置显微镜观察细胞形态学的变化;采用原位缺口末端标记法（TUNEL）及AnnexinV/PI双染色法检测细胞凋亡情况;采用逆转录—多聚酶链反应技术（RT-PCR）检测华蟾素注射液对HepG-2细胞TopoⅠ、TopoⅡmRNA水平表达的影响。[结果]华蟾素注射液对HepG-2细胞增殖具有抑制作用,其抑制效应具有时间和浓度依赖性;华蟾素注射液作用HepG-2细胞后可见凋亡形态学变化,部分细胞体积变小,染色质浓缩边集,呈时间和浓度依赖性（P〈0.05）;PT-PCR法检测表明华蟾素注射液抑制HepG-2细胞TopoⅠ、TopoⅡmRNA表达,表现浓度依赖性。[结论]华蟾素注射液能够抑制人肝癌HepG-2细胞增殖,诱导癌细胞凋亡,可能通过下调TopoⅠ、TopoⅡ表达实现的。     

银耳多糖抑制肝癌HepG-2细胞体外增殖机制的实验研究

[目的]探讨银耳多糖抑制肝癌HepG-2细胞体外增殖的作用机理。[方法]体外培养肝癌HepG-2细胞,分别用不同浓度的银耳多糖（0、5、10、20和40μmol／L）处理培养2d,采用MTT法测定各浓度银耳多糖对细胞增殖的抑制率：收集20μmol／L银耳多糖作用24h和48h后的HepG-2细胞和对照细胞．抽提DNA电泳检测：收集20μmol／L银耳多糖作用48h后的HepG-2细胞和对照细胞．抽提总RNA．半定量RT-PCR检测抗凋亡基因survivin的mRNA表达水平。[结果]银耳多糖对体外培养的肝癌HepG-2细胞的IC50值为10μg／ml,且随银耳多糖浓度不同其对细胞增殖的抑制率明显不同（P〈0．05）,最高抑制率可达77．5％。经银耳多糖作用后的细胞出现明显的DNA ladder现象。而银耳多糖干预组细胞的survivin转录水平显著低于对照组（P〈0．05）。[结论]银耳多糖对肝癌HepG-2细胞体外增殖具有抑制作用,并可通过下调survivin基因的转录而诱导HepG．2细胞凋亡。     

孕激素对人宫颈癌细胞株Hela细胞体外增殖、凋亡的影响

[目的]探讨孕激素对人宫颈癌细胞株Hela细胞体外增殖及凋亡的影响.[方法]体外培养Hela细胞,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法观察不同浓度孕酮对细胞增殖的作用,流式细胞仪及流式细胞仪间接免疫荧光技术检测其细胞周期、细胞凋亡率及细胞内bcl-2蛋白的表达,光、电镜观察其形态学和超微结构变化.[结果]当孕酮浓度为0.10μmol/L～10.00umol/L时,对细胞生长有明显的抑制作用(P＜0.01),并具有剂量依赖性.流式细胞仪分析,实验组G0/G1期上升,S期下降,凋亡率上升,细胞内bcl-2蛋白表达率明显降低(P＜0.01),并呈现剂量依赖性.倒置显微镜、光学显微镜和透射电子显微镜可观察到细胞增殖情况及凋亡的形态学改变.[结论]孕酮抑制宫颈癌Hela细胞增殖,并诱导其凋亡,同时可使抗凋亡基因bcl-2蛋白的表达下降.     

姜黄素下调mTOR诱导人肺癌A549细胞自噬的研究

[目的]研究姜黄素诱导人肺癌A549细胞自噬现象及与哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）的关系。[方法]采用CCK-8法检测姜黄素对A549细胞增殖的抑制作用;采用吖啶橙染色（AO）及转染GFP-LC3质粒荧光显微镜下观察姜黄素处理后A549细胞的自噬现象;采用Western blot法检测微管相关蛋白轻链Ⅱ（LC3Ⅱ）、微管相关蛋白轻链Ⅰ（LC3Ⅰ）、mTOR表达的变化。[结果]姜黄素对人肺癌A549细胞增殖有明显抑制作用,且成明显的剂量—时间依赖关系。AO染色结果显示,与对照组相比,姜黄素40μmol/L组及Rapa组细胞内酸性滤泡染成亮红色荧光比例增多;与姜黄素40μmol/L组相比,姜黄素40μmol/L＋自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤（3-MA）组及3-MA组亮红色荧光比例下降。细胞转染GFP-LC3后姜黄素40μmol/L组和Rapa组胞浆内点状的绿色荧光斑点明显;与姜黄素40μmol/L组相比,姜黄素40μmol/L＋3-MA组及3-MA组胞浆内点状的绿色荧光斑点明显比例有所下降。Western blot法检测结果显示,与对照组相比,姜黄素40μmol/L组作用24h后,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ表达显著升高（P〈0.05）,姜黄素40μmol/L＋3-MA组LC3Ⅱ/LC3-Ⅰ表达低于姜黄素40μmol/L组（P〈0.05）。姜黄素40μmol/L组mTOR表达显著下降（P〈0.01）,姜黄素40μmol/L＋3-MA组mTOR表达高于姜黄素40μmol/L组（P〈0.05）。[结论]姜黄素能够明显抑制A549细胞增殖并诱导A549细胞发生自噬,同时还能够明显抑制mTOR蛋白的表达水平,其机理可能与mTOR的信号通路有关。     

芦荟大黄素诱导胃癌细胞株MGC-803细胞凋亡药效学作用研究

目的:观察芦荟大黄素诱导人胃癌细胞株MGC-803凋亡药效作用研究.方法:用50、100、500、1000μmol/L浓度芦荟大黄素作用胃癌细胞株48h,倒置显微镜下观察细胞增殖情况;MTT法检测芦荟大黄素对细胞增殖的抑制作用;电镜观察、判定凋亡细胞;凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡.结果:倒置显微镜下,随着芦荟大黄素作用浓度升高,细胞增殖能力随之下降;MTT法亦检测到上述结果;当芦荟大黄素作用浓度是1000μmol/L时,可检测到明显的凋亡细胞.结论:高浓度的芦荟大黄素可诱导胃癌细胞株MGC-803细胞的凋亡.     

AA861 对胶质瘤U251细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨5-脂氧合酶抑制剂AA861对胶质瘤U251细胞增殖及凋亡的影响.方法:用含有不同浓度(25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L)AA861的培养液培养胶质瘤U251细胞,绘制细胞生长曲线;倒置相差显微镜观察细胞形态学变化;MTT法检测细胞抑制率;AO/EB荧光染色测定细胞凋亡率;Caspase-3活性检测试剂盒检测AA861干预后细胞内Caspase-3活性变化.结果:生长曲线及MTT法显示AA861对U251细胞增殖有明显的抑制作用,呈剂量和时间依赖效应;在倒置相差显微镜下,AA861诱导细胞发生凋亡形态学变化;AO/EB荧光染色显示细胞凋亡率在不同时间点及不同浓度下差异有统计学意义(P＜0.05),呈剂量和时间依赖效应;Caspase-3活性在不同时间点及不同浓度下差异有统计学意义(P＜0.05),呈剂量和时间依赖效应.结论:AA861能够抑制U251细胞的增殖,并通过Caspase-3途径诱导细胞凋亡.     

18β-甘草次酸诱导人乳腺癌细胞凋亡及其细胞内Ca2+水平的变化

背景与目的：18-甘草次酸是甘草的重要成分，近年来的研究发现18-甘草次酸具有抑制人淋巴细胞性白血病、肝癌和肺癌的细胞增殖。本研究探讨18-甘草次酸对人乳腺癌MCF-7细胞诱导凋亡的作用。目前研究已证实细胞内游离Ca^2＋浓度（[Ca^2＋]i）的动态变化在诱发细胞凋亡过程的多个环节中起重要作用，因此本研究也探讨由18-甘草次酸诱导的MCF-7细胞凋亡发生与[Ca^2＋]i变化的关系。方法：用50～250μmol／L浓度梯度的18B-甘草次酸处理MCF-7细胞24h，用MTT比色法测定细胞增殖能力。100μmol／L和150pomol／L188-甘草次酸处理细胞24h，用末端脱氧核苷酸转移酶介导dUTP末端标记法、Annexin V流式细胞仪法和单细胞凝胶电泳法检测凋亡细胞。150μmol／L 18β-甘草次酸处理细胞24h，用Fura-2荧光负载方法测定[Ca^2＋]i的变化。分别用100μmol／LBAPTA-AM和0．5mmol／LEGTA与150μmol／L 18β-甘草次酸联合处理MCF-7细胞24h，用单细胞凝胶电泳法检测凋亡细胞。结果：从100μmol／L 18β-甘草次酸浓度起对MCF-7细胞的增殖抑制率显著升高（P〈0．01和P〈0．05），呈剂量依赖性，半增殖抑制浓度（IC50）为234．33μmol／L。100μmol／L和150μmol／L 18β-甘草次酸使细胞凋亡率显著升高（P〈0．01和P〈0．05）；18B-甘草次酸处理组的[Ca^2＋]i也明显高于对照组（P〈0．05）。18β-甘草次酸与BAPTA-AM联合处理组和18 β-甘草次酸与EGTA联合处理组的凋亡率均明显低于单纯的150μmol／L 18β-甘草次酸处理组（P〈0．05和P〈0．01）。结论：18-甘草次酸具有抑制MCF-7细胞增殖和诱导其凋亡的作用，而18-甘草次酸诱导MCF-7细胞凋亡的作用在抑制该细胞增殖方面起主要作用。18-甘草次酸诱导MCF-7细胞凋亡依赖于细胞内Ca^2＋水平上捌，而细胞外Ca^2＋内流是导致细胞内Ca^2＋水平上调的原因之一。     

细胞内钙在内皮素-1促肺腺癌细胞SPC-A 1生长中的作用

目的：探讨细胞内钙离子（[Ca^2＋]i）在内皮素-1（endothelin-1,ET-1）促肺腺癌细胞SPC-A1生长中的作用及其机制。方法：采用RT-PCR法检测肺腺癌细胞SPC-A1中ET-1及内皮素受体（endothelinreceptor,ETR）的mRNA表达,蛋白印迹法检测SPC-A1细胞中ET-1及ETR的蛋白表达,MTT法检测细胞生长,Fura-2/AM荧光技术检测[Ca^2＋]i。结果：肺腺癌细胞SPC-A1上有ET-1及内皮素受体A（ETAR）及受体B（ETBR）的mRNA及蛋白表达;ET-1（10^-15～10^-8mol/L）具有促进SPC-A1细胞增殖作用,也促进其[Ca^2＋]i浓度升高,作用均呈浓度依赖性;ET-1（10^-10mol/L）促SPC-A1细胞增殖及[Ca^2＋]i浓度升高作用均可被ETAR拮抗剂BQ123（10^-7mol/L）阻断（P〈0.05）,但不受ETBR拮抗剂BQ788（10^-7mol/L）影响（P〉0.05）;去除细胞外Ca^2＋及电压依赖型Ca^2＋通道阻滞剂硝苯地平（1μmol/L）在阻断ET-1升高[Ca^2＋]i浓度作用的同时也抑制ET-1诱导的肺腺癌细胞增殖。结论：ET-1通过ETAR促SPC-A1细胞生长及增加[Ca^2＋]i,细胞外Ca^2＋通过电压依赖型钙离子通道开放内流是ET-1增加[Ca^2＋]i及促肺腺癌细胞SPC-A1增殖的主要机制。     

康莱特注射液对人胰腺癌细胞株PANC-1增殖和凋亡影响的实验研究

目的：通过康莱特注射液作用于人胰腺癌细胞株 PANC-1,观察其对 PANC-1细胞增殖和凋亡的影响,并进一步探讨其作用机制。方法倒置显微镜及电镜观察80μL·mL -1康莱特注射液作用 PANC-1细胞72 h 后细胞形态改变;采用 MTT 比色法检测不同浓度（10、20、40、60、80、100μL·mL -1）康莱特注射液对PANC-1细胞生长增殖抑制作用的影响;同时采用流式细胞术检测不同浓度（10、20、40、60、80、100μL·mL -1）康莱特注射液对 PANC-1细胞周期的影响。结果细胞形态学检查发现80μL·mL -1康莱特注射液处理 PANC-1细胞72 h 后细胞生长稀疏,细胞质透亮度下降,线粒体等细胞器功能障碍,细胞核功能上受到一定的抑制;不同浓度康莱特注射液作用于 PANC-1细胞株不同时段（24、48、72 h）后肿瘤细胞生长受到了一定的抑制且呈现时间和剂量依赖性;不同浓度康莱特注射液处理 PANC-1胰腺癌细胞72 h 后 PANC-1细胞周期均阻滞于 G2/ M 期,康莱特注射液可剂量依赖性的诱导 PANC-1细胞凋亡。结论康莱特注射液能够有效抑制人胰腺癌细胞株 PANC-1在体外的生长,其机制可能是通过抑制细胞增殖,促进肿瘤细胞的凋亡而实现,有望成为胰腺癌的有效治疗药物。     

三氧化二砷对恶性淋巴瘤细胞株凋亡的研究

目的 研究不同浓度的三氧化二砷对恶性淋巴瘤细胞株的影响。方法 采用细胞染色方法观察细胞凋亡的形态,原位末端标记法（TUNEL)检测凋亡细胞,流式细胞仪检测细胞的DNA含量的形态,原位末端标记法（TUNEL）检测凋亡细胞,流式细胞仪检测细胞的DNA含量和bcl－2蛋白的表达。结果 0．5μmol/L-2.0μmol/L三氧化二砷抑制B淋巴瘤细胞株Raji细胞生长,出现细胞凋亡的形态学改变,流式细胞仪检测Raji细胞亚C1期细胞明显增多,bcl－2蛋白的表达明显降低,呈现剂量时间依赖效应。0．5μmol／L－4．0μmol／L三氧化二砷对T淋巴瘤细胞株Jurkat细胞无明显作用。结论 三氧化二砷抑制恶性B淋巴瘤细胞生长和促进细胞凋亡的作用。     

Bcl-w对膀胱肿瘤细胞5637增殖、顺铂敏感性的影响

[目的]探讨过表达的Bcl-w蛋白对膀胱肿瘤细胞5637的增殖能力、顺铂敏感性的影响。[方法]采用质粒pcDNA3.1（＋）构建Bcl-w过表达载体,转染5637细胞后用Western blot验证过表达效果,用CCK-8、平板克隆形成实验、流式细胞仪检测pcDNA3.1-Bcl-w细胞和对照组细胞的增殖和生存曲线、克隆形成能力、细胞周期。[结果]成功构建pcDNA3.1-Bclw重组质粒并转染5637细胞。pcDNA3.1-Bcl-w细胞增殖曲线在24、48、72h均高于对照组（0.814±0.022 vs 0.727±0.017,P=0.006;1.259±0.017 vs 1.078±0.027,P=0.001;1.787±0.024 vs1.520±0.021,P〈0.001）,差异具有统计学意义;克隆形成能力高于对照组（60.67±6.03 vs48.67±6.11,P〈0.001）,差异具有统计学意义;处于G0/G1期的比例低于对照组（50.76%vs57.02%,P〈0.001）,差异具有统计学意义;在30、50、70、90、110μmol/L各浓度顺铂处理下生存曲线高于对照组[（83.8%±1.7%）vs（93.9%±1.2%）,P〈0.001;（59.5%±0.7%）vs（72.5%±1.9%）,P=0.028;（50.5%±2.2%）vs（57.2%±1.2%）,P=0.007;（37.2%±0.7%）vs（45.7%±1.4%）,P〈0.001;（29.1%±0.5%）vs（33.2%±0.6%）,P〈0.001],差异具有统计学意义。[结论]高表达的Bcl-w增强了膀胱癌细胞5637的增殖能力,削弱了肿瘤细胞对化疗药物顺铂的敏感性。     

醉茄素A对非小细胞肺癌A549细胞增殖、凋亡及PI3K／Akt信号通路的影响

目的 探讨醉茄素A（WFA） 对非小细胞肺癌（NSCLC）A549细胞增殖、凋亡及PI3K／Akt信号通路的影响。方法 采用0、2.5、5.0、10.0、20.0μmol／L WFA 处理A549细胞,采用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法检测上述浓度处理24、48、72和96h的细胞增殖抑制率,Hoechst染色和磷酯酰丝氨酸结合蛋白 异硫氢酸荧光素／碘化丙啶双染法（Annexin V-FITC／PI）检测各浓度组48h的细胞凋亡情况,流式细胞仪检测各浓度组48h的细胞周期分布情况,免疫印迹检测各浓度组48h凋亡相关基因（Bcl-2、Bax和Cleaved caspase-3）和PI3K／Akt信号通路重要蛋白Akt及其磷酸化形式p-Akt的蛋白水平。结果 WFA 可抑制细胞增殖,并呈剂量和时间依赖性（P＜0.05）;0、2.5、5.0、10.0、20.0μmol／L WFA作用48h后A549细胞的凋亡指数分别为2.75±0.64、4.61±1.36、9.75±2.78、12.92±3.42和18.68±4.31,组间差异有统计学意义（P＜0.05）。除2.5μmol／L外,其余浓度组的早、晚期凋亡率、凋亡促进基因（Bax和Cleaved caspase-3）水平及G0／G1期细胞比例均高于0μmol／L,凋亡抑制基因Bcl-2水平及S期和G2／M期细胞比例均低于0μmol／L（P＜0.05）; 2.5、5.0、10.0、20.0μmol／L的组间差异有统计学意义（P＜0.05）。随着浓度升高,p-Akt／Akt值呈降低趋势,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 WFA能够抑制A549细胞的增殖及凋亡,可能通过抑制PI3K／Akt通路激活实现。     

p21活化酶5预测骨肉瘤化疗敏感性的实验研究

目的 探讨骨肉瘤组织p21活化酶5（PAK5）表达与新辅助化疗敏感性的关系,从细胞水平验证PAK5是否参与调节骨肉瘤细胞化疗敏感性。方法 采用免疫组化法检测74例骨肉瘤患者活检组织中PAK5表达,分析PAK5表达与骨肉瘤临床病理特征的关系。设计合成siRNA-PAK5,分别转染进入Saos-2和MG63细胞,QPCR和Westtem blotting分别检测PAK5 mRNA和蛋白的表达情况。以不同浓度梯度的阿霉素（ADM 50、25、5、05 μmol／L）、甲氨蝶呤（MTX 50、5、1、0.5、0.05 μmol／L）分别处理Saos-2和MG63细胞,CCK-8法检测细胞增殖抑制率,计算转染siRNA-PAK5后骨肉瘤细胞半数抑制浓度（IC50）的差异。结果 74例骨肉瘤组织中PAK5阳性57例,阴性17例,PAK5表达与新辅助化疗后肿瘤坏死率及肺转移有关（P＜0.05）。QPCR检测转染组PAK5 mRNA分别水平下降为未转染组29％和31％;Western blotting结果显示转染组PAK5蛋白表达较未转染组下调49％和42％。转染siRNA-PAK5后,ADM作用Saos-2和MG63细胞的IC50分别由（8.35±0.07）μmol／L、（7.35±0.07）μmol／L降至（0.54±0.004）μmol／L、（0.50±0.002）μmol／L （P＜0.05）;MTX作用Saos-2和MG63细胞的IC50分别由（1.255±0.021）μmol／L、（1.05±0.014）μmol／L降至（0.606±0.01）μmol／L、（0.72±0.014）μmol／L （P＜0.05）。结论 骨肉瘤PAK5表达与患者新辅助化疗敏感性相关,抑制骨肉瘤细胞PAK5表达可提高化疗敏感性。     

吉西他滨诱导人肺癌细胞株SPC-A-1凋亡及对HMGA1基因表达的影响

[目的]探讨吉西他滨对人肺癌细胞株SPC-A-1增殖、凋亡及HMGA1基因表达的影响。[方法]采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法观察吉西他滨对人肺癌细胞株SPC-A—1增殖的抑制效应：利用DNA琼脂糖凝胶电泳法、细胞AO／EB荧光染色法及流式细胞术检测吉西他滨诱导肿瘤细胞凋亡的作用：采用逆转录一多聚酶链反应技术（RT-PCR）观察吉西他滨对人肺癌细胞株SPC-A-1凋亡相关基因HMGA1mRNA的影响。[结果]吉西他滨对人肺癌SPC-A-1细胞株增殖有抑制作用,其抑制效应具有时间和剂量依赖性;0．1μmol／L、1μmol／L和10μmol／L浓度吉西他滨处理细胞72h后,AO／EB荧光染色法计算细胞凋亡百分比分别是18．56％±1．04％、39．45％±0．83％、48．48％±0．85％（P〈0．05）;细胞经1μmol／L的吉西他滨处理72h后,DNA琼脂糖凝胶电泳法显示有特异性的DNA梯状条带;0．1μmol／L、1μmol／L和10μmol／L吉西他滨处理细胞72h后,凋亡率分别为20．65％±0．83％、38．53％±0．97％、51．48％±1．04％,对照组为5．19％±0．89％（P〈0．05）：随着吉西他滨浓度的增加．HM—GA1基因表达下调,各组与β-actin条带灰度比值分别为0．856±0．030、0．696±0．007、0．543±0．037,对照组为0．907±0．007（P〈0．05）。[结论]吉西他滨可抑制人肺癌SPC-A—1细胞株的生长,促进凋亡,可能的机制和下调HMGA1基因表达有关。     

地西他滨联合三氧化二砷对NB4细胞凋亡作用的研究

 目的　研究去甲基化制剂地西他滨（DAC）单用或联合三氧化二砷（As2O3）对NB4细胞凋亡的作用机制。方法　将不同浓度的DAC、As2O3以及两药联合作用于NB4细胞,不加药为对照组,采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞增殖抑制作用,流式细胞术检测细胞凋亡。结果　DAC与As2O3单药对NB4细胞的抑制作用呈浓度时间依赖性（DAC 1 μmol／L作用24、48、72 h的抑制率分别为12.18 %、22.72 %、35.54 %;DAC 2 μmol／L作用24、48、72 h的抑制率分别增高为22.14 %、31.18 %、45.21 %;As2O3 0.5 μmol／L作用24、48、72 h的抑制率分别21.09 %、32.43 %、44.93 %;As2O3 1.0 μmol／L作用24、48、72 h的抑制率分别增高为31.69 %、41.12 %及54.27 %）,两药联合抑制作用较单药明显（DAC 1 μmol／L+As2O3 0.5 μmol／L作目的　研究去甲基化制剂地西他滨（DAC）单用或联合三氧化二砷（As2O3）对NB4细胞凋亡的作用机制。方法　将不同浓度的DAC、As2O3以及两药联合作用于NB4细胞,不加药为对照组,采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞增殖抑制作用,流式细胞术检测细胞凋亡。结果　DAC与As2O3单药对NB4细胞的抑制作用呈浓度时间依赖性（DAC 1 μmol／L作用24、48、72 h的抑制率分别为12.18 %、22.72 %、35.54 %;DAC 2 μmol／L作用24、48、72 h的抑制率分别增高为22.14 %、31.18 %、45.21 %;As2O3 0.5 μmol／L作用24、48、72 h的抑制率分别21.09 %、32.43 %、44.93 %;As2O3 1.0 μmol／L作用24、48、72 h的抑制率分别增高为31.69 %、41.12 %及54.27 %）,两药联合抑制作用较单药明显（DAC 1 μmol／L+As2O3 0.5 μmol／L作用24、48、72 h抑制率分别为42.10 %、48.75 %、60.78 %）（P＜0.05）,各浓度组与对照组比较差异均有统计学意义（P值均＜0.05）;As2O3 1 μmol／L作用于NB4细胞株48 h可见5.8 %的细胞凋亡,联合组增高为17.3 %。结论　DAC能显著抑制NB4细胞的增殖并诱导其凋亡,DAC联合As2O3对NB4细胞增殖抑制及诱导凋亡有协同作用。用24、48、72 h抑制率分别为42.10 %、48.75 %、60.78 %）（P＜0.05）,各浓度组与对照组比较差异均有统计学意义（P值均＜0.05）;As2O3 1 μmol／L作用于NB4细胞株48 h可见5.8 %的细胞凋亡,联合组增高为17.3 %。结论　DAC能显著抑制NB4细胞的增殖并诱导其凋亡,DAC联合As2O3对NB4细胞增殖抑制及诱导凋亡有协同作用。     

Cu^2＋对MC3T3-E1细胞增殖分化影响及对OPG、MEPE表达的影响

目的观察Cu^2＋对小鼠成骨细胞（MC3T3-E1）增殖、分化以及OPG与MEPE表达。方法采用不同浓度1×10（-4～-6）mol/L Cu2＋作用于MC3T3-E1细胞,分别在24、48、72、96 h后采用MTT法检测Cu^2＋对细胞增殖的影响;ALP（碱性磷酸酶）试剂盒检测细胞培养液中ALP活性;RT-PCR方法检测1×10（-4～-6）mol/L Cu2＋作用下细胞中OPG和MEPE的mRNA表达水平,探讨MC3T3-E1细胞增殖分化的分子机制。结果作用48 h和96 h时,1×10-6mol/L Cu^2＋明显促进MC3T3-E1细胞增殖;作用24 h时,此浓度对细胞增殖无影响;作用72 h时,1×10-6mol/L Cu^2＋明显抑制细胞增殖;1×10-4mol/L、1×10-5mol/L的Cu2＋对MC3T3-E1细胞增殖无影响或抑制其增殖。ALP试剂盒检测1×10-6mol/LCu2＋在作用24 h时,对细胞分化无影响,其他时间均可促进细胞分化;1×10-4mol/L的Cu2＋抑制细胞分化,1×10-5mol/LCu2＋在作用96 h时,可显著促进MC3T3-E1细胞分化,其他时间对细胞分化无影响。琼脂糖凝胶电泳图片可见1×10（-4～-6）mol/LCu2＋作用于MC3T3-E1细胞48 h时,OPG和MEPEmRNA均有表达。实时荧光定量PCR结果表明,在Cu2＋浓度为1×10-6mol/L作用48 h时OPG与MEPEmRNA明显增加。结论作用48 h时,1×10-6mol/L Cu2＋可以促进MC3T3-E1细胞增殖和分化,其机制与OPG、MEPEmRNA相关。     

NVP-BEZ235对肝癌HepG2细胞增殖、凋亡及侵袭转移的影响

目的探讨PI3K／Akt／mTOR双靶点抑制剂NVP-BEZ235在体外对肝癌HepG2细胞增殖、凋亡及侵袭转移的影响。方法 采用0、0.01、0.1、1.0μmol／L NVP-BEZ235 处理HepG2细胞,四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法检测不同浓度NVP-BEZ235处理24、48、72和96h的增殖抑制率,流式细胞仪、Transwell侵袭实验、荧光定量PCR及免疫印迹检测不同浓度NVP-BEZ235处理48h后的细胞周期分布、穿膜细胞数及基质金属蛋白酶（MMP）-2的mRNA和蛋白水平。结果NVP-BEZ235可呈剂量和时间依赖的方式升高增殖抑制率（P＜0.05）;除0.01μmol／L处理24h的晚期凋亡率外,0.01、0.1、1.0μmol／L NVP-BEZ235处理24、48h的早、晚期凋亡率均高于0μmol／L（P＜0.05）;0.01、0.1、1.0μmol／L NVP-BEZ235处理48h的G0／G1期细胞比例高于0μmol／L,穿膜细胞数、MMP-2 mRNA和蛋白水平及S期和G2／M期细胞比例均低于0μmol／L（P＜0.05）,且各浓度间的差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论NVP-BEZ235可抑制肝癌HepG2细胞增殖及侵袭转移,促进其凋亡和阻滞细胞在G0／G1期并降低MMP-2表达。     

全氟辛酸对HK-2 细胞的毒性及对α-酮戊二酸盐受体1 表达的影响

目的： 研究全氟辛酸(perfluorooctanoic acid, PFOA)对HK-2细胞的毒性,及其对α-酮戊二酸盐受体1(oxoglutarate receptor 1,OXGR1)表达的影响。方法：采用MTT法检测不同浓度(0、0.1、1、10、100、1 000 μmol/L)PFOA对HK-2细胞增殖的影响。RT-PCR法检测0、100、300 μmol/L PFOA对HK-2细胞中OXGR1、琥珀酸盐受体1(succinate receptor 1,SUCNR1)、缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor 1α,HIF-1α)mRNA表达的影响。当PFOA为300或0 μmol/L时,采用MTT法检测不同浓度(0、1、10、100、1 000、10 000 μmol/L) OXGR1配基α-酮戊二酸钠(α-ketoglutarate sodium, AKG)对HK-2细胞增殖的影响。流式细胞术检测300 μmol/L PFOA和100 μmol/L AKG共同作用HK-2细胞48 h后细胞的凋亡情况。结果：在培养24 h条件下,PFOA达1 000 μmol/L时可表现出毒性作用(P<0.01)。在培养48或72 h条件下,PFOA≥100 μmol/L时表现出毒性作用(P<0.01)。RT-PCR结果显示,PFOA可上调HK-2细胞中OXGR1 mRNA表达(P<0.01),但对SUCNR1及HIF-1α mRNA表达无明显影响(P>0.05)。MTT及流式细胞术检测结果显示,AKG与PFOA可协同作用抑制HK-2细胞增殖(P<0.01)并诱导细胞凋亡(P<0.05)。 结论：PFOA对HK-2细胞具有增殖抑制作用,并可上调细胞OXGR1 mRNA表达;PFOA可诱发HK-2细胞凋亡;AKG可与PFOA产生协同作用,该协同作用可能与OXGR1有关。     

奥沙利铂联合多烯磷脂酰胆碱对胃癌细胞增殖影响研究

目的：观察奥沙利铂联合多烯磷脂酰胆碱对胃癌细胞增殖的影响。方法：不同浓度奥沙利铂（0．5、1、2、4、8和16μmol／L）和多烯磷脂酰胆碱（2、4、8、16、32、64和128μmol／L）分别作用于胃癌细胞sGc790124、48和72h,MTT法检测各组肿瘤细胞的生存率。根据公式求出奥沙利铂48h的半抑制浓度（IC50）,用略低于此浓度的奥沙利铂与不同浓度的多烯磷脂酰胆碱联合作用于胃癌细胞48h,MTT法检测细胞的生存率,计算2种药物联合的指数。结果：不同浓度的多烯磷脂酰胆碱对肿瘤细胞增殖产生了促进或者抑制作用,促进增殖或者抑制增殖作用与药物浓度具有明显相关性,F=373．769,P〈0．001;但与药物作用时间无明显统计相关,F=0．077,P=0．782。奥沙利铂抑制肿瘤增殖,这一作用也表现出明显的剂量=时间相关性,F-194．193,P〈0．001;F=12．428,P=0．001。联合作用组中,不同浓度的多烯磷脂酰胆碱与奥沙利铂联合较单药奥沙利铂相比,均对肿瘤细胞表现出现较高的抑制率,差异有统计学意义,F=297．889,P〈0．001;其中较低浓度多烯磷脂酰胆碱（2～8μmol／L）与奥沙利铂产生了协同抗肿瘤作用（Q〉1．15）,高浓度多烯磷脂酰胆碱（32～128／μmool／L）与奥沙利铂发现拮抗反应（Q〈0．85）。结论：奥沙利铂抑制肿瘤细胞增殖,低浓度的多烯磷脂酰胆碱促进肿瘤细胞增殖,高浓度的多烯磷脂酰胆碱抑制肿瘤细胞增殖。奥沙利铂与低浓度多烯磷脂酰胆碱产生了协同抗肿瘤作用,与高浓度多烯磷脂酰胆碱却产生了拮抗抗肿瘤作用。