我校分离和标记α-银环蛇毒素成功

我校防护医学教研室和369研究室同位素组,于今年一月至四月,用CM Sephadex G-50和Sephadex G-25成功地从银环蛇毒液中分离出纯α-银环蛇毒素,并标记出~(125)I-α-银环蛇毒素。经初步胆硷能受体试验证明,质量良好,接近国外同类产品水平。 ~(125)I或~3H标记的α-银环蛇毒是近代较理     

α-银环蛇毒素的分离提纯和碘标记

本文介绍了α-银环蛇毒素的分离提纯、碘标记和鉴定。用羧甲基葡聚糖C-50离子交换层析和葡聚糖G-25层析,从湖南银环蛇毒液中制备出纯α-银环蛇毒素。均质α-银环蛇毒素是用羧甲基纤维素CM-32重层析纯α-银环蛇毒素(第3峰)而获得。 用氯胶-T法进行125~I标记α-银环蛇毒素。经Sephadex G-25柱层析分离纯化,产品放射性比度为90～100Ci/mM,标记率40～50％,蛋白回收率40～60％,游离碘含量小于3％。用测定N-末端氨基酸,氨基酸成分,等电点和聚丙烯酰胺凝胶电泳进行纯α-银环蛇毒素的鉴定。以小白鼠毒性,神经肌肉阻断作用和结合胆硷能受体等测定α-银环蛇毒素的生物活性。     

作为转移生长因子α拮抗剂的天然成分

转移生长因子α(TGF_α)系一分子量力5600daltn的多肽,是以逆病毒转化小鼠细胞株分得的。它与血浆中一种特定的膜受体结合,此膜受体亦是表皮上长因子(EGF)的受体。TGF_α似乎可以刺激细胞生长并激发EGF产生相似的作用。尽管TGF_α的作用还不太明确,但它无疑在肿瘤转移和牛皮癣病中扮演了一个角色。对丁TGF_α的病生理作用的研究进展缓慢主要是由于缺乏一种能够阻断EGF/TGF_α受体结合及激活的拮抗剂。为了寻找一种天然成分中的拮抗剂,我们用抑制~(125)I标记的TGF_α与人表皮样瘤A431细     

重症肌无力患者血清抗乙酰胆碱受体抗体和抗突触前膜抗体的检测

应用β-银环蛇毒素(B-BGT)特异结合突触前膜和。α-银环蛇毒素(α-BGT)特异结合乙酰胆碱受体的包被检测板,以ABC-ELISA测定血清抗突触前膜抗体(PrMab)及抗乙酰胆碱受体抗体(AchRab)。共检测131份血清,其中正常人71例,非重症肌无力患者20例,重症肌无力患者40例。结果:①正常人全部阴性.②非重症肌无力患者中,只有一例两种抗体阳性。③40例重症肌无力中,33例抗体阳性,单一抗体阳性15例,两种抗体均阳性18例,PrMab阳性者24例(60%),AehRab阳性者27例(67.5%)。提示重症肌无力患者的抗乙酰胆碱受体抗体和抗突触前膜抗体检测,可作为一项免疫学诊断指标,有临床实用价值。     

AChR-α3亚基mRNA在人淋巴组织中的表达

①目的 探讨人淋巴组织中乙酰胆碱受体α3(AChR—α3)亚基mRNA的表达及副交感神经系统对免疫系统作用的物质基础。②方法 应用地高辛尾段标记寡核苷酸探针原位杂交技术(ISH)，对32例人淋巴组织冷冻切片中AChR—α3亚基mRNA进行定性检测。③结果 32例人淋巴组织中有19例AChR—α3亚基mRNA表达阳性，阳性率为59．38％；淋巴结和脾脏AChR-α3亚基mRNA阳性表达差异无统计学意义(P=0．268)。④结论 人的免疫细胞可自身合成并表达AChR—α3亚基；ACh通过与免疫活性细胞上的相应的AChR结合而参与免疫系统功能的调节。     

抗癌iRNA诱生干扰素抗癌细胞增殖效应

用抗癌免疫核糖核酸(iRNA)在人体内诱生IFN—α,并经提纯获得高活性IFN—α,用于癌细胞的抑制试验,并将IFN-α标记为~(125)I—IFN—α,检测癌细胞表面IFN—α受体。结果表明,提纯的IFN—α对胃癌7901细胞、Hep—2细胞、Hela细胞、L929等细胞于37℃4h孵育后,细胞膜上有~(125)I—IFN—α吸附,并与IFN—α有竞争性抑制,表现在cpm数值的增高或降低。     

N-乙酰胆碱受体的电镜定位方法

本文介绍了α-银环蛇毒素(α-Bungarotoxin简称α-BT)与辣根过氧化物酶(Horseradish Peroxidase简称HRP)结合物,对肌肉神经接头处N-乙酰胆碱受体的电镜定位方法。 取新鲜薄条肌肉,以浓度约为1×10~(-7)M的α-BT-HRP结合物进行培育,再与DAB-H_2O_2底物缓冲溶液反应。在光镜下有明显的棕红色阳性沉积物,构成泡状图象;电镜下观察突触的前、后膜上均可见电子致密度很深的N-Ach R与α-BT-HRP结合的沉积物。并对其特异性和可靠性进行了讨论。     

重症肌无力的发病机制与治疗措施

重症肌无力(MG)是一种神经肌接头传递功能障碍性疾病,临床以骨骼肌异常无力为特征,眼、面部肌肉受累最明显,病情变化波动性很大,无神经损伤体征,抗胆碱酯酶剂能迅速缓解症状。近年对MG发病机制的研究进展较快,目前认为MG的发病可能是由于患者血浆中的乙酰胆碱受体抗体(AChRab)与神经肌接头后膜上的乙酰胆碱受体(AChR)结合,使后膜上有效AChR数目下降,引起神经肌接头传递功能障碍而致。其机理可能为:AChRab在补体的介导下,使AChR受损;AChRab加速AChR的降解代谢、直接阻断乙酰胆碱(ACh)对AChR的作用,有     

用双抗体免疫沉淀法检测重症肌无力患者血清中乙酰胆碱受体抗体

本文报告用~(125)I-α-银环蛇毒素-烟碱型乙酰胆碱受体复合物,经双抗体免疫沉淀法检测我国重症肌无力患者(88例)、正常人(30例)及其它疾病患者(20例)血清中乙酰胆硷受体抗体。正常值为0～0.4pmol/ml。正常人和其它疾病患者两组抗体滴度无显著差异,而重症肌无力患者滴度大于正常值上限者占69.3％,与前两组比较相差均非常显     

受体相关蛋白对实验性自身免疫性重症肌无力大鼠乙酰胆碱受体的作用

目的：探讨受体相关蛋白(Bapesyn)对实验性自身免度性重症肌无力(EAMG)动物终板乙酰胆碱受体的作用。方法：用基因工程的方法制备提取pcDNA-Rapsyn，并将其注入动物肌肉左大腿外侧，右大腿相应部位注射相同剂量的空白质粒(Vector)以方波刺激使其进入细胞膜内，2w后用单克隆抗体35（mAb35)诱导出EAMG模型并进行症状评估,mAb3S诱导48h后取双大腿外侧肌，用放射免疫法检测AChR，并计算出AChR的损失率。结果：在EAMG模型中，被pcDNA-Rapsyn预处理的肌肉从AChR损失率明显低于未经处理的肌肉。结论：Bapsyn蛋白对EAMG模型的AChR有保护作用。     

IGF—Ⅰ受体对细胞生长和转化的作用

已知类胰岛素生长因子I(IGF～I)受体是由两个α亚基和两个β亚基构成四聚体蛋白质。α亚基位于细胞外,连接3个不同配体,IGF—I、IGF—I和胰岛素。跨膜的β亚基有引起酪氨酸激酶活性的催化位点。IGF—I受体与其配体结合后对正常细胞的发育,控制组织生长均起到较为重要的作用。     

21例银环蛇咬伤病人的急救观察和护理

银环蛇咬伤病人时 ,蛇毒即注入伤口 ,其蛇毒中主要含α和 β两种神经毒素 ,β神经毒素作用于轴突抑制 Ach释放 ,使 Ach不能释放到突触间隙与突触后膜上的胆碱受体结合 ,同时 α神经毒素与肌肉运动终板上的 Ach受体不可逆地牢固结合从而阻断神经与肌肉的传导作用引起肌肉麻痹 ,呼吸肌麻痹导致呼吸衰竭是其死亡的主要原因。银环蛇咬伤的病人来诊时医务人员应细致观察 ,及早作出诊断 ,迅速作出处理。我科 1998年 1月至 2 0 0 1年 5月共救治确诊为银环蛇咬伤病人 2 1例 ,现将护理体会总结如下。1　临床资料　　本组 2 1例 ,男 16例 ,女 5例。…     

大鼠脑加压素受体测定方法的建立

采用~(125)碘标记精氨酸加压素(~(125)I-AVP),建立了大鼠脑粗制膜上AVP受体的测定方法。结果表明,第一次冻融可使~(125)I-AVP与脑粗制膜上受体的结合率降低约35％,第二次冻融则降低约70％。用此方法测得大鼠脑粗制膜上AVP受体的最大结合容量Bmax为157.1±16.3fmol/mg蛋白,平衡解离常数Kd为0.25±0.04nmol/L。     

肌肉内神经源性聚集蛋白功能研究进展

聚集蛋白(agrin),最早因为能促进培养肌组织表面乙酰胆碱受体(AChR)的聚集而被发现,后从电鳐电器官的基底膜中分离出来.从结构上看,agrin是一种肝素硫酸酯类糖蛋白分子(heparan sulfate proteoglycan),相对分子质量大约为220×103.其N末端含有一个与K型蛋白酶抑制剂同源的序列区,介导了agrin与基底膜层粘连蛋白(laminin)的结合,而C端含有与相应受体作用的功能区,包括3个与laminin-α链的G区同源的序列和4个富含半胱氨酸残基的类表皮样生长因子(EGF)重复序列区,前者可能介导了agrin与α-肌营养不良蛋白聚糖(α-dystroglycan)的结合,并能促进细胞之间的黏附,而后者主要提供二硫键的结合位点.从第3个类EGF序列区到C末端之间相对分子质量长55×103的片段,主要与乙酰胆碱受体(AChR)簇集活性有关[1].     

肿瘤坏死因子受体研究近况

肿瘤坏死因子α(TNFα)是单核巨噬细胞系统产生的一种重要的细胞调节因子,具有多种生物学功能,与干扰素等一些细胞因子一样,发挥作用需要细胞表面高亲和性受体的介导。近几年国外为了探讨TNFα的作用机理,对TNF_α受体(TNFR)作了深入的研究,并取得进展,本文综述TNFR的研究近况。1 TNFR的存在形式和分布 1985年Baglioni等首先用~(125)I标记重组人TNF_α,以受体结合分析法证实细胞膜上存在TNFR,随后许多研究者测定了各种肿瘤细胞和正常细胞的TNFR,实验表明上皮细胞系肿瘤细胞(子宫颈癌、结     

鼻腔给予乙酰胆碱受体治疗实验性自身免疫性重症肌无力

实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)是由乙酰胆碱受体(AChR)加弗氏完全佐剂(CFA)免疫动物后制成的人类重症肌无力(MG)动物模型。业已证明EAMG和MG都是针对神经肌肉接头后膜烟碱型AChR的自身免疫性疾病,AChR抗体的产生受AChR特异性CD4~+T辅助细胞调节。 MG临床上至今尚无特异性治疗方法。     

益气化瘀方对腰神经根损伤大鼠神经细胞黏附分子的作用

目的:探讨益气化瘀方对大鼠神经再生修复过程中神经肌肉接头部神经细胞黏附分子(neuralcelladhesionmolecule,NCAM)的作用。方法:大鼠L5神经根损伤后,予以益气化瘀方分别治疗10、20和30d。采用免疫组织化学和激光共聚焦扫描显微镜技术,观察大鼠比目鱼肌神经肌肉接头部NCAM的分布变化。采用α金环蛇毒萤光结合剂显示乙酰胆碱受体(acetylcholinereceptor,AChR),NIH图像分析系统定量测定NCAM与AChR的重叠面积。结果:益气化瘀方组NCAM在神经肌肉接头部的聚集、出芽、延伸以及与AChR的重叠面积均明显优于模型组。结论:NCAM的表达与AChR的神经支配情况密切相关。益气化瘀方可促进神经的再生修复。     

白喉毒素与细胞膜蛋白

美《化学与工程》第57卷第10期第17页(1979年)报道:白喉致病微生物白喉棒状杆菌利用其多肽类毒素从宿主细胞摄取营养,并释放毒素至易感部位。毒素的一个亚单位在某些哺乳类动物细胞中抑制蛋白合成。毒素作用的首先问题是如何穿过细胞膜,释放抑制作用的亚单位。得克萨斯大学卫生中心的艾德斯(Leon Eidels)等人根据动物实验,认为白喉毒素的干扰作用是先找到一个膜受体,即豚鼠细胞膜上的特殊糖蛋白,然后跨在膜受体上。在体外实验中,毒素与特殊糖蛋     

正常人外周血淋巴细胞 IL—2受体免疫放射测定

采用~(125)I 标记小鼠抗人IL—2受体(P55)的抗Tac(CD_(25))单克隆抗体,成功地建立了人IL—2受体的免疫放射分析法,动态观察了人外周血淋巴细胞经PHA 刺激24、48和72h 后IL—2受体表达的时间曲线,通过Scatchard 作图分析表明~(125)I—抗Tac 单克隆抗体与PHA 活化的上述三个时间点的T 淋巴细胞的最大结合容量(B_(max))分别为43000位点/细胞、54000位点/细胞和61000位点/细胞。本研究为临床IL—2受体检测提供一种简便的免疫放射测定法。     

斑点免疫结合实验用于乙酰胆碱受体抗体的检测

0　引　　言抗乙酰胆碱受体抗体 (Ach R- Ab)为重症肌无力 (mgasthemia graris,MG)特异的自身抗体 ,对辅助临床诊断、疗效观察及研究 MG的发病机制有重要意义[1,2 ] 。我们在原 ELISA法的基础上 ,采用α-银环蛇毒素 (α- BGT)包被硝酸纤维素膜 (NC) ,建立了检测 Ach R- Ab的斑点免疫结合实验 (DIBA) ,对各类疾病患者进行了初步的临床观察 ,现报告如下。1　材料与方法1 .1　主要试剂与仪器　α- BGT由广西医科大学蛇毒研究所提供 ,辣根过氧化物酶 (HRP)和葡萄球菌A蛋白 (SPA) ,均购自上海生物制品研究所 ,其酶结合物采用改良过…