应用GFP质粒构建及转染技术探讨Syk(L)核移位机制

【目的】通过研究Syk(L)在乳腺癌细胞亚细胞器中的分布和移位机制,探讨Syk(L)抑制乳腺癌的可能性机制。【方法】采用细胞胞核、胞浆分离技术和Westernblot的方法,检测乳腺癌细胞系BT474中两种Syk蛋白异构体在细胞内的分布。构建绿色荧光蛋白(GFP)和Syk(L)核移位相关功能域融合蛋白质粒,转染入Cos7细胞内,荧光显微镜下观察融合蛋白在细胞内的分布。【结果】BT474细胞的细胞浆中可检测到Syk(S)和Syk(L)的表达,细胞核中只检测到Syk(L)的表达。在Cos7细胞中,GFP与Syk(L)的缺失域(deletiondomain,DEL域)融合蛋白均匀分布于细胞内,GFP与Syk(L)的IDB域融合蛋白聚集于细胞核中;将DEL域上的294K、300K、及305K突变域非碱性氨基酸后构建成GFP-IDB(L)-M,突变的融合蛋白则失去核聚集现象。【结论】在乳腺癌细胞中,Syk(L)可从细胞胞浆移位到细胞核内。Syk(L)的IDB域具有完整的核移位功能,能将融合的胞浆蛋白GFP转移到细胞核内;DEL域的碱性氨基酸具有核定位信号功能。Syk(L)在乳腺癌细胞中的抑癌功能与其核移位有关。     

5-脂氧酶/绿荧光蛋白转染评价PC12细胞损伤后5-脂氧酶核膜移位

目的：通过绿荧光蛋白（green fluorescence protein，GFP）／5-脂氧酶（5-lipoxygenase，5-LOX）稳定转染PC12细胞，以可视化方法观察5-LOX在不同损伤后的变化。方法：将带有5-LOX基因的pEGFP—C2质粒及pEGFP—C2质粒（对照），稳定转染至PC12细胞；在缺糖缺氧（oxygen—glucose deprivation，OGD）、H2O2和NMDA处理后，荧光显微镜下观察GFP／5-LOX在细胞内的定位；同时，以免疫细胞化学方法观察野生型5-LOX分布及其变化。结果：转染GFP／5-LOX的细胞内，GFP／5-LOX主要均匀表达于细胞核内；仅转染GFP的细胞GFP表达于胞核和胞浆。OGD和H2O2处理后，分别有50．6％和57．7％细胞的GFP／5-LOX移位到核膜；NMDA处理或仅转染GFP的细胞，未见核膜移位现象。野生型5-LOX分布在细胞核和细胞浆内，3种损伤处理均诱导核膜移位。结论：稳定转染GFP／5-LOX的PC12细胞，GFP／5-LOX主要分布在细胞核；不同损伤处理诱导的5-LOX核膜移位，有不同的特点。     

F10基因与绿色荧光蛋白融合载体的构建及亚细胞定位

目的：构建F10基因与绿色荧光蛋白的融合蛋白表达载体，进而观察F10基因编码蛋白在细胞内的定位情况。方法：运用RT—PCR技术从葡萄胎组织中分离F10基因的完整ORF，构建pEGFP-N2／F10和pEGFP—C2／F10的融合表达载体，以1Apofect AMINE2000为介导剂，将重组载体转染入人乳腺癌细胞MCF-7，并在荧光显微镜和共聚焦显微镜下观察表达的融合蛋白。结果：显微镜下观察到，GFP／F10融合蛋白呈不规则的颗粒状、环状分布于细胞核，或细胞浆，或者在核浆中均有分布，而且在细胞浆中主要分布在细胞器中。而对照的pEGFP蛋白均匀分布在整个细胞浆和细胞核。结论：F10蛋白在细胞的不同周期分布不同，或在细胞核，或在细胞胞浆中，或者在核浆中均有分布。     

RBM7在乳腺癌细胞BT474中的表达及其与P21的关系

目的：探索RNA结合蛋白7（RNA binding protein 7，RBM7）在人源性乳腺癌细胞BT474中的过表达及干扰后的表达改变，并研究其与P21之间的关系。方法：在人源性乳腺癌细胞BT474中分别转染RBM7过表达、干扰慢病毒（实验组）和相应对照慢病毒（对照组），从而构建稳定转染的细胞株，用qRT?PCR和Western blot实验分别验证转染后的RBM7的表达情况。用CCK?8实验、流式细胞周期实验分别评估RBM7表达改变后对乳腺癌细胞增殖能力和细胞周期分布的影响。通过qRT?PCR和Western blot实验观察BT474细胞中RBM7表达改变后对P21表达的影响。进一步通过RNA结合蛋白免疫共沉淀（RIP）实验来研究RBM7与P21之间的关系。结果：在乳腺癌细胞BT474中分别转染RBM7过表达、干扰慢病毒48 h后，通过荧光显微镜检测细胞的绿色荧光表达情况；经嘌呤霉素稳定筛选后，获得RBM7过表达及干扰的稳转细胞株。CCK?8和流式细胞周期实验显示，过表达RBM7后可促进乳腺癌细胞的增殖，而干扰RBM7后能抑制乳腺癌细胞的增殖。qRT?PCR和Western blot实验显示，过表达RBM7能下调P21的mRNA（P < 0.05）及蛋白的表达，干扰RBM7能上调P21的mRNA（P < 0.05）及蛋白的表达。RNA结合蛋白免疫共沉淀（RIP）实验显示，RBM7能直接结合P21的mRNA从而发挥其对P21的调节作用。结论：RBM7在人乳腺癌细胞BT474中通过结合P21的mRNA从而下调P21的表达。     

芸香诱导K562细胞凋亡时细胞色素C表达变化

【目的】研究芸香诱导白血病K562细胞凋亡过程中细胞色素C的表达。【方法】体外培养K562细胞,Hoechst33342/PI双荧光染色后,荧光显微镜下观察细胞核形态,分离细胞线粒体和胞浆,经SDS-PAGE电泳分离蛋白,Western Bloting检测线粒体、细胞浆细胞色素C表达。【结果】芸香浓度为2×10-5、4×10-5、8×10-5mol/L时,细胞生长受到显著抑制,并呈剂量依赖性;Hoechest33342/PI双荧光染色可观察到明显核固缩、凝集等细胞凋亡表现,Western Bloting检测4×10-5mol/L药物处理细胞后线粒体细胞色素C表达水平下调,细胞浆出现明显细胞色素C蛋白条带。【结论】芸香诱导白血病细胞发生凋亡,可能与线粒体途径有关。     

GFP-ICP0融合蛋白在巨噬细胞中的表达与定位

目的 构建GFP—ICP0融合蛋白真核表达载体pEGFP／ICP0，并在巨噬细胞中表达，为研究ICP0对巨噬细胞分泌活性的影响提供实验依据。方法 将ICP0片段亚克隆入载体pEGFP—Cl，构建GFP-ICP0融合蛋白真核表达载体。将质粒pEGFP／ICP0转染巨噬细胞，Western blot鉴定表达产物，荧光显微镜观察GFP—ICP0融合蛋白在细胞内的表达与定位。结果 成功构建了GFP—ICP0融合蛋白真核表达载体pEGFP／ICP0，GFP-ICP0融合蛋白在巨噬细胞中表达并定位于细胞核。结论 pEGFP／ICP0在巨噬细胞中即时高表达GFP-ICP0融合蛋白并定位于细胞核。     

长脾脏酪氨酸激酶对乳腺癌细胞中细胞周期蛋白D1、ID1、B-myb和Fra1基因表达的抑制作用

目的筛选乳腺癌中长脾脏酪氨酸激酶[Syk（L）]作为转录抑制因子下调的靶基因,探讨Syk（L）在乳腺癌中的抑癌机制。方法采用CLONTECH公司的Adeno-X^TM表达系统构建Syk的腺病毒载体,感染不表达Syk的乳腺癌细胞系MB231,以腺病毒LacZ作为对照,采用cDNA微阵列方法筛选Syk（L）、Syk（S）调节的基因ID1、Cyclin D1、Fral和B-myb的表达;并采用Northern杂交的方法验证cDNA微阵列结果。结果在乳腺癌细胞中,转录抑制因子Syk（L）可下调癌基因ID1、CyclinD1、Fral和B-myb的表达,Northern杂交证实了Syk（L）对它们的调节。结论抑癌基因Syk（L）通过特异性下调癌基因Cyclin D1、ID1、B—myb和Fral的表达抑制乳腺癌的发展。     

GFP-HPV18 E2及其突变体融合蛋白在真核细胞内的表达与定位

目的:研究HPV18 E2及其N端(TAD)、C端(DBD)与GFP融合蛋白在巨噬细胞(MΦ)内的表达与定位。方法:将真核表达载体pEGFP-C1/E2、pEGFP-C1/TAD和pEGFP-C1/DBD及pEGFP-C1分别转染MΦ,48h后用倒置荧光显微镜观察荧光情况,以确定GFP及融合蛋白的表达;以抗GFP抗体为一抗作Western blot检测相应蛋白质的表达。结果:在荧光显微镜下,4种质粒转染的细胞,pEGFP-C1组细胞内均有荧光;pEGFP-C1/E2组荧光主要在细胞核,但细胞浆也有;pEGFP-C1/DBD仅在细胞核有荧光,pEGFP-C1/TAD仅在细胞浆有荧光。Western blot检测到GFP-HPV18 E2及其突变体融合蛋白在细胞内的表达。结论:GFP-E2及其突变体融合蛋白均能在巨噬细胞内表达,且GFP-E2主要定位于细胞核,GFP-DBD定位于细胞核内,GFP-TAD定位于细胞浆。     

C端谷氨酰胺富含结构域调节TIAR的细胞内定位

目的阐明核糖核酸（RNA）结合蛋白T细胞内抗原相关蛋白（TIAR）的结构域与细胞内定位之间的关系。方法细胞免疫荧光检测SMCC-7721细胞内源性TIAR的细胞内分布，亚克隆构建TIAR全长及缺失体的增强型绿色荧光蛋白（EGFP）表达质粒，脂质体法瞬时转染SMCC-7721细胞，在荧光显微镜下观察融合蛋白在细胞内的荧光分布情况，免疫印迹检测融合蛋白的表达情况。结果细胞免疫荧光结果显示在SMCC-7721细胞中TIAR主要浓集于细胞核，细胞浆也有少量弥散分布。酶切鉴定及测序结果显示TIAR全长及缺失体的pEGFP-C3重组表达质粒构建成功。EGFP-TIAR^FL（TIAR全长）主要分布于细胞核；而EGFP-TIAR^RRM123（TIAR的N端3个RNA结合结构域）弥散分布于整个细胞；EGFP-TIAR^Q-rich（TIAR的C端谷胺酰胺富含结构域）浓集于细胞核，但浓集程度要比TIAR^FL-EGFP弱。免疫印迹证实过表达的TIAR全长及缺失体的EGFP融合蛋白分子量大小符合预期。结论我们的结果提示C端谷氨酸富含结构域参与TIAR细胞内定位的调节。     

s-lap/GFP融合蛋白在Hela细胞中的表达与定位

目的:观察s-lap/GFP融合蛋白在Hela细胞中的表达及定位。 方法：根据s-lap基因的编码区序列, 应用PCR技术突变其3′末端终止密码子, 并通过基因重组技术将其与GFP基因融合,构建s-lap/GFP重组质粒;采用脂质体转染法, 将s-lap/GFP融合基因转入Hela细胞中, 用荧光显微镜观察其表达。 结果:s-lap/GFP重组质粒序列测定的结果与预期设计完全一致。荧光显微镜显示, 在转染GFP基因的Hela细胞中,荧光呈网状均匀分布于细胞浆内,而细胞核内低表达;在转染s-lap/GFP融合基因的Hela细胞中,荧光均匀分布于整个细胞,尤其以细胞核内高表达。 结论：s-lap/GFP融合蛋白可在人Hela细胞中表达,并主要定位于细胞核。     

核转出蛋白对前列腺癌雄激素受体稳定性的调节

目的：探讨位于雄激素受体(androgen receptor, AR)配体结合域中具有出核转运信号肽的核转出蛋白(nuclear export signal of androgen receptor, NESAR)对前列腺癌雄激素受体蛋白表达和稳定性调节的机制。方法：绿色荧光蛋白(green fluorescent protein, GFP)融合蛋白表达载体pEGFP-AR(1-918aa),pEGFP-NESAR(743-817aa),pEGFP-NAR (1-665aa)和pEGFP-NAR-NESAR,及NESAR的赖氨酸突变体（赖氨酸K突变为精氨酸R）pEGFP-NESAR K776R,pEGFP-NESAR K807R和pEGFP-NESAR K776R/K807R,瞬时转染前列腺癌细胞PC3后,采用荧光显微镜、蛋白质免疫印迹和免疫沉淀,检测NESAR对雄激素受体稳定性的调节。结果：在荧光显微镜下,含NESAR的融合蛋白呈胞浆定位,荧光信号强度比不含NESAR的融合蛋白明显减弱,且含NESAR的融合蛋白表达水平显著低于不含NESAR的融合蛋白表达水平。在蛋白合成抑制剂放线菌酮处理下,GFP-NESAR和GFP-NAR-NESAR的半衰期小于6 h,而对照GFP和GFP-NAR的表达相对更稳定,半衰期大于24 h。融合蛋白GFP-NESAR在蛋白酶体抑制剂MG132的处理下,其蛋白表达显著增加,并呈现剂量依赖性,而MG132对GFP蛋白稳定性没有显著影响;在蛋白合成被抑制的情况下,MG132同样显著抑制了GFP-NESAR融合蛋白的降解,且蛋白表达呈剂量依赖性的增加。GFP免疫沉淀的结果显示,GFP-NESAR融合蛋白的泛素化水平明显高于GFP对照。赖氨酸位点K776和K807突变的NESAR的泛素化水平显著降低,且蛋白稳定性提高,赖氨酸位点K776和K807是介导NESAR发生泛素化的关键氨基酸残基。结论：核转出蛋白NESAR具有降解不稳定性,作为多聚泛素化修饰的识别信号,介导了其融合蛋白在前列腺癌细胞中通过泛素-蛋白酶体途径的降解。本研究为AR蛋白水平和/或活性的调控开辟一种新的研究思路,有助于对AR降解分子机制的了解和在前列腺癌产生去势抗性的过程中对AR靶向的密切调控。     

MMP-9的表达及微血管密度对乳腺癌远处转移的影响研究

目的 观察乳腺癌组织中MMP-9、p53的表达及微血管密度与患者腋淋巴结及远处肿瘤转移之间的关系，以探讨它们与乳腺癌生物学行为的关系及机制。方法 通过组织化学方法检测MMP-9、p53在肿瘤细胞中的表达，在显微镜下计算肿瘤组织中微血管密度值，观察其与患者腋淋巴结及远处肿瘤转移之间的关系。结果 MMP-9主要分布在胞浆，20例乳腺纤维腺瘤细胞均未表达MMP-9，乳腺癌细胞内随同侧腋淋巴结转移量的增多，MMP-9阳性级别增加，两者成正相关；p53主要表现为核阳性，20例乳腺纤维腺瘤细胞中18例未表达p53，随同侧腋淋巴结转移量的增多，p53表达级别增加，两者成正相关；随同侧腋淋巴结转移量的增多, 微血管密度明显增加，与对照组相比差异有显著性（P﹤0.05）。结论 肿瘤细胞中MMP-9、p53蛋白的高表达及MVD值可以作为评估患者腋淋巴结转移及其它部位远处转移的重要指标。 【关键词】p53蛋白； MMP-9；微血管密度；乳腺癌；肿瘤转移 【中图分类号】R737.9 【文献标识码】A     

新生大鼠心肌细胞内Ca2+的空间分布及调控的离体研究

目的 观察心肌细胞胞浆和核Ca^2 的空间分布和钙变化的形式。方法 以Fluo-4/AM荧乐指示剂负载培养的心肌细胞，应用激光共聚焦扫描显微镜观察心肌细胞的钙信号形式及胞浆和核内[Ca^2 ]i的变化。结果 心肌细胞核的荧光强度明显高于细胞浆，并存在小幅度的钙震荡，AngⅡ使钙震荡幅度增大，其作用可被NO所完全抑制。Ca^2 -ATPase抑制剂Thapsigargin(10^-6mol/L)、钙释放通道Ryanodine受体2激动剂咖啡因（5mmol/L）和大剂量L－型Ca^2 通道阻滞剂Vreapamil(500μmol/L）使心肌细胞胞浆内和核膜上出现钙闪烁现象。EGTA道德螯合心肌细胞内的游离Ca^2 ，继之螯合钙库Ca^2 ，最后仅显示心肌细胞核膜腔Ca^2 库影。L－型Ca^2 通道阻滞剂Verapamil引起心肌细胞自发的钙波传递消失，核和胞浆内荧光强度一过性升高后下降。结论 心肌细胞内存在钙闪烁、钙波以及钙震荡等多种钙信号形式，胞浆和核Ca^2 库对Ca^2 的摄取和释放在细胞功能的调节中起重要作用。     

激光共聚集显微镜检测大肠癌细胞株中Claudin-1的表达

目的 检测紧密连接蛋白Claudin-1在人类大肠癌细胞株中表达。方法 采用激光共聚集显微镜检测Claudin-1在3株不同转移潜能人类大肠癌细胞株中的表达。结果 Claudin-1在 SW1116（Dukes' type A期）为细胞膜、细胞浆表达;SW480（Dukes' type B期）以细胞浆表达为主;SW620（Dukes' type C期）细胞表达部位为细胞核、细胞浆表达。结论 Claudin-1 的表达部位随着大肠癌的进展出现异位,即Claudin-1由细胞表面膜转移至细胞浆和细胞核。 【关键词】 大肠癌; Claudin-1; 激光共聚集显微镜     

ERα通路代偿性激活在乳腺癌细胞的拉帕替尼获得性耐药中的作用

目的了解雌激素受体α(estrogen receptorα,ERα)通路代偿性激活在乳腺癌细胞BT474的拉帕替尼获得性耐药发生过程中的作用和可能机制。方法利用real-time PCR和蛋白质印迹检测BT474被拉帕替尼作用后人表皮生长因子受体2(HER2)通路和ERα通路活性的改变;利用拉帕替尼浓度递增、持续培养的方法建立乳腺癌细胞BT474的拉帕替尼获得性耐药细胞(rBT474)模型;采用流式细胞术检测拉帕替尼对rBT474细胞凋亡的影响,进一步以蛋白质印迹法分析BT474和rBT474在HER2通路和ER通路上的差别;应用MTT法检测rBT474在拉帕替尼和氟维司群作用下的生长情况;利用克隆形成实验观察双靶点治疗对预防拉帕替尼获得性耐药的可能性。结果 Real-time PCR和蛋白质印迹检测显示拉帕替尼抑制BT474细胞HER2磷酸化,同时诱导叉头蛋白3A(FOXO3a)和孕激素受体(PR)的表达升高;成功获得的耐药细胞株rBT474在含有5μmol/L拉帕替尼的培养液中仍可持续生长;蛋白质印迹结果显示,rBT474细胞与BT474细胞相比,其磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)通路受抑制,而促分裂素原活化蛋白激酶(MAPK)通路激活,ER通路的活化更加明显;MTT法检测结果显示,与单用拉帕替尼相比,联合使用拉帕替尼和氟维司群可抑制rBT474细胞活力(P<0.01);克隆形成实验结果表明,与二甲亚砜组、拉帕替尼组和氟维司群组相比,拉帕替尼和氟维司群联合用药组可抑制BT474细胞克隆形成(P<0.01),具有预防获得性耐药发生的可能。结论 ERα通路的代偿性激活可能是导致HER2(+)/ERα(+)的乳腺癌细胞对拉帕替尼产生获得性耐药的机制之一,而PI3K/AKT抑制和MAPK激活可能是ERα代偿激活的主要原因。     

细胞穿透肽核靶向运输蛋白表达载体的构建及其蛋白转导功能的研究

目的 构建基于细胞穿透肽靶向细胞核运输的蛋白表达载体，并研究其蛋白转导功能。方法 在带His标记的增强型绿色荧光蛋白（EGFP）表达载体pET14b—HE（pET14b-His-EGFP）基础上，利用点突变的方法构建依次含细胞穿透肽（CPP）、连接子、核定位信号（NLS）序列和EGFP的融合蛋白表达载体pET14b—HC（L）NE（pET14b—His—CPP—Linker-NLS—EGFP）；经酶切、测序鉴定载体构建正确后，将重组质粒转化BL21（DE3）宿主菌，经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷诱导表达后、用Ni^2＋亲和层析纯化得到融合蛋白：将融合蛋白透析、过滤除菌后加入培养的真核细胞中，荧光显微镜下观察并进行Western blot检测分析其在活细胞的蛋白转导功能。结果 酶切、测序证实载体构建成功，融合蛋白在大肠杆菌中可有效表达：蛋白转导实验可见融合蛋白可快速穿透细胞膜并进入细胞核，并且这种内化转导功能存在时间和剂量依赖效应。结论 成功构建了基于细胞穿透肽的蛋白表达运输载体，建立了可携带外源蛋白进入细胞浆及细胞核的运输系统，为研究蛋白或多肽的细胞内功能以及运输药物提供了一种经济有效的工具。     

pEGFP-N1-α-synuclein真核表达载体的构建

【目的】构建pEGFP-N1-α-synuclein真核表达载体,为研究帕金森病奠定基础。【方法】设计特异引物,PCR扩增α-synuclein cDNA并引入FLAG标签,克隆入pEGFP-N1质粒,对重组质粒进行酶切及测序,鉴定正确后转化Ecoh．DH5（大肠杆菌）,大量扩增重组质粒。试剂盒纯化重组质粒。用Lipofectamine^TM 2000将重组质粒转染2937细胞,Western blotting检测融合蛋白在细胞内的表达。【结果】pEGFP-N1-α-synuclein重组质粒构建成功,Westernblotting检测融合蛋白分子量为47kd,符合预期值。【结论】成功构建了人野生型α-synuclein与绿色荧光蛋白基因融合并加入FLAG标签的真核表达载体pEGFP-N1-α-svnuclein。     

丙泊酚通过靶向调控PI3K/AKT/mTOR信号通路体外抑制乳腺癌细胞生长

探讨丙泊酚通过PI3K/AKT/mTOR信号通路对乳腺癌细胞增殖、侵袭及凋亡的影响。方法 在体外,丙泊酚10 mg/mL分别与乳腺癌MCF-7和BT474细胞系共孵育分为对照组和丙泊酚组。PI3K过表达质粒经丙泊酚处理后转染MCF-7细胞分为对照组、丙泊酚+PI3K组、PI3K组,分别检测细胞的生存、侵袭及凋亡情况。Western blot检测PI3K/AKT/ mTOR信号通路相关蛋白表达水平。在体内构建MCF-7小鼠模型,免疫组化和TUNEL实验用于检测乳腺癌细胞的生长和凋亡情况。结果 丙泊酚显著抑制乳腺癌细胞的生长和侵袭能力（P＜0.05）。Western blot和细胞凋亡实验结果显示,丙泊酚通过降低Bcl-2和Bcl-w在乳腺癌细胞中的表达水平来诱导细胞凋亡（P＜0.05）。丙泊酚降低了乳腺癌细胞中磷酸肌醇3激酶(PI3K)、蛋白激酶B (AKT)和mTOR蛋白表达水平（P＜0.05）。对P13K进行过表达处理后显示,PI3K过表达逆转了丙泊酚对MCF-7细胞的生长和侵袭的抑制作用（P＜0.05）。体内实验表明,丙泊酚治疗明显抑制MCF-7小鼠模型中的肿瘤生长,促进了细胞凋亡（P＜0.05）。结论 丙泊酚通过PI3K/AKT/mTOR信号通路体外抑制乳腺癌细胞的生长和侵袭,促进细胞凋亡     

柚皮素对K562细胞的抑制作用与Caspase酶活性、PCNA蛋白表达的关系

目的本研究旨在探讨柚皮素对K562细胞的生长抑制作用与Caspase酶的活性及细胞增殖核抗原（PCNA）蛋白表达的关系。方法用50μmol／L，200μmol／L的柚皮素分别作用K562细胞后，Caspase分光光度计法检测细胞内Caspase-3和Csapase-9酶活性的改变：用细胞免疫化学的方法检测PCNA蛋白的表达。结果在柚皮素作用下，K562细胞内Caspase-3和Caspase-9活性增强（P〈0．05），PCNA的表达显著降低（P〈0．05）。结论柚皮素对K562细胞的抑制作用可能是通过细胞增值抑制和上调Caspase-9和Csapase-3活性诱导细胞凋亡而实现。     

AngⅡ对心肌细胞Kv4．2钾通道蛋白表达的影响及机制

【目的】体外培养新生大鼠心肌细胞,观察AngⅡ在诱导细胞肥厚过程中对Kv4．2蛋白表达的影响,及钙离子在其细胞内信号传导通路中的作用。【方法】AngⅡ心肌细胞肥大模型,用激光共聚焦显微镜检测AngⅡ对心肌细胞胞浆钙离子浓度的影响,用流式细胞仪检测AngⅡ诱导心肌细胞肥厚过程中细胞Kv4．2表达的变化。【结果】AngⅡ明显增加细胞的蛋白总量,诱导心肌细胞肥大,AngⅡ能增加心肌细胞胞浆钙离字浓度,下调Kv4.2编码的通道蛋白的表达含量。【结论】AngⅡ在诱导心肌细胞肥大过程中,可能通过细胞内钙离子以外的信号通路下调Ito通道蛋白Kv4．2。