TGF-β/Smad信号通路与慢性移植性肾病的研究进展

慢性移植性肾病是导致肾移植失败的主要原因,其发病机制目前尚不清楚。TGF-β/Smad信号通路在慢性移植性肾病的形成和发展中发挥了重要作用,而Smad通路仍是目前所公认的介导TGF-β胞内反应的主要通路。本文将Smads在慢性移植性肾病中TGF-β/Smads信号转导通路的作用研究进展予以综述,旨在为开辟防治慢性移植性肾病的新途径提供理论和实验依据。     

Smad2,3,4,7蛋白在大鼠5/6肾切除肾衰模型中的定位和表达变化

目的　研究Smad2 ,3 ,4,7蛋白在 5 6肾切除模型中的定位和表达变化。方法　Wistar大鼠行 5 6肾切除 ,分别于模型 4、8、12周处死大鼠。用免疫组化检测Smad2、Smad3、Smad4和Smad7蛋白的定位和表达 ;纤维化程度通过测定肾组织羟脯氨酸含量来判断。结果　Smad2、Smad3和Smad4主要在肾小球和肾小管上皮细胞内有表达 ,而Smad7主要在肾小球表达。随着肾功能衰竭的加重 ,肾小球Smad2、Smad3和Smad4蛋白表达逐渐增加 ,而Smad7蛋白表达却逐渐下降 ,并伴有肾组织羟脯氨酸含量的明显增高。结论　TGF β Smad信号通路参与了肾间质纤维化进程 ,Smad2 ,3 ,4高表达和Smad7负调控不足是本模型TGF β高表达导致肾小球硬化加重的主要原因之一。     

TGF-β1及其信号蛋白Smad2,3在大鼠心肌细胞肥大中的作用

目的 探讨转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1，TGF-β1)及其信号蛋白Smad2，3在诱导大鼠心肌细胞肥大中的作用。方法 培养新生大鼠心肌细胞，用不同剂量TGF-β1刺激，检测[^3H]-Leu掺入量，RT—PCR检测信号蛋白Smad2，3mRNA的表达。结果 不同剂量的TGF-β1均能明显增加心肌细胞[^3H]-Leu掺入量，TGF-β1增加肥大心肌细胞Smad2，3mRNA的表达。结论 TGF-β1能诱导大鼠心肌细胞肥大，信号蛋白Smad2，3在其中发挥了重要作用。     

TGF-β/Smad/RUNX3信号通路在糖尿病肾病大鼠肾小管上皮细胞EMT过程中的作用

【摘要】 目的 探讨TGF-β/Smad/RUNX3信号通路在糖尿病肾病（DN）大鼠肾小管上皮细胞 间充质转化（EMT）过程中的作用。 方法 将45只Wistar雄性大鼠随机分成三组：对照组、模型组和实验组,每组各15只,实验组和模型组制备DN大鼠模型。按照实验分组进行给药。末次给药后,用血糖仪检测各组大鼠血糖含量,全自动生化分析仪检测各组大鼠24 h尿蛋白、血尿素氮及血肌酐含量,过碘酸希夫（PAS）、天狼星红（SR）染色观察各组大鼠肾脏组织病理变化,酶联免疫吸附测定（ELISA）检测各组大鼠血清白介素1β（IL-1β）、白介素6（IL-6）表达水平,蛋白免疫印迹（Western blot）检测各组大鼠肾脏组织α-SMA、E-cadherin、TGF-β1、Smad3、Smad4、RUNX3蛋白表达情况。 结果 与对照组相比,模型组大鼠肾小管肥大增生,肾间质有炎症细胞浸润现象,肾间质胶原纤维沉积、24 h尿量、24 h尿蛋白、血糖、血尿素氮、血肌酐浓度、血清IL-1β、IL-6表达量、肾脏α-SMA、TGF-β1、Smad3、Smad4蛋白表达显著升高 (P＜0.05),肾脏E-cadherin、RUNX3蛋白表达显著降低 (P＜0.05);与模型组相比,实验组大鼠肾小管肥大减轻,炎症细胞减少,肾间质胶原纤维沉积、24 h尿量、24 h尿蛋白、血尿素氮、血肌酐浓度、血清IL-1β、IL-6、肾脏α-SMA、TGF-β1、Smad3、Smad4蛋白表达显著降低 (P＜0.05),肾脏E-cadherin、RUNX3蛋白表达显著升高 (P＜0.05)。 结论 β抑制剂可通过抑制TGF-β/Smad通路激活促进RUNX3表达,减少糖尿病肾病大鼠肾间质纤维化及促炎因子分泌,抑制肾小管上皮细胞EMT的发展。     

转化生长因子-β及其下游信号蛋白Smad2/3和Smad7在牵张成骨中表达的研究

目的利用种植型牵张器增高兔下颌牙槽嵴,初步观察成骨过程中转化生长因子TGF-β及其下游蛋白Smad2/3和Smad7的变化规律并揭示其作用。进一步探讨牵张成骨的分子生物学机制,为使用TGF-β及其下游蛋白Smad2/3和Smad7在临床治疗中加快牵张成骨的新骨形成速度提供一定的理论基础和实验资料。方法24只成年雄性大耳白兔随机分成6组,每组4只。非手术组做为空白对照组,其余用自制的垂直牵张器按2次/天,0.5 mm/次,的速度牵张兔牙槽骨,分别于牵张后1天组、1、2、4周组、6周后处死动物取材。标本进行大体观察、X线、组织学观察和免疫组织化学的检测、通过细胞图像分析仪测定阳性面积,利用Spss14.0统计软件采用方差分析统计各组TGF-β、Smad2/3和Smad7的阳性表达。结果TGF-β及其下游信号蛋白Smad2/3和Smad7在兔下颌牵张成骨过程中,不同时期具有不同的表达,提示它们对牵张成骨新骨形成起到一定的作用。结论对兔下颌骨进行牵张成骨过程中,TGF-β以及下游信号蛋白Smad2/3和Smad7参与促进了牵张区新骨的形成。     

肾康丸对糖尿病肾病大鼠肾脏TGF-β1/Smad 7通路的影响

目的探讨肾康丸对糖尿病肾病(DN)大鼠肾脏TGF-β1/Smad 7信号通路的影响。方法用链脲佐菌素(STZ)腹腔注射法诱导建立大鼠糖尿病(DM)模型,模型成功后随机分为3组:模型对照组、开搏通组、肾康丸组,另设正常对照组。治疗8周后,取大鼠肾脏,采用免疫组化法观察各组大鼠肾脏组织纤连蛋白(FN)、转化生长因子-β1(TGF-β1)和Smad 7蛋白表达的情况。结果8周后,DN模型组大鼠与正常大鼠比较,肾脏组织中FN和TGF-β1蛋白表达明显增加,Smad 7蛋白表达明显减少。肾康丸和开搏通都可以减少FN和TGF-β1蛋白的表达,增加Smad 7蛋白的表达。结论肾康丸可以抑制DN大鼠肾脏中TGF-β1/Smad信号传导通路的激活,减少ECM的沉积,从而延缓DN进程。     

结肠癌组织中TGFβ1及其Ⅱ型受体和Smad4蛋白的表达

目的 探讨转化生长因子-β(TGF-β)通路中TGF-β1及其Ⅱ型受体(TβRⅡ)和Smad4的关系,及其在结肠癌中的可能作用机制.方法 用EnVision免疫组化法检测38例石蜡包埋人结肠癌标本中TGF-β1、TβRⅡ和Smad4蛋白的表达情况.结果 TGF-β1阳性率为52.6%(20/38),65.8%的TβRⅡ和63.2%的Smad4表达下降.Smad4的表达与肿瘤分化程度及Dukes分期相关(P<0.05).TGF-β1与TβRⅡ之间有相关关系(P<0.05).结论 TGF-β1与TβRⅡ对结肠癌的发生可能有协同作用.Smad4是TGF-β信号通路中的关键因子,但Smad4上游可能还存在其他信号通路,调控其表达.     

结肠癌组织中TGFβ1及其Ⅱ型受体和Smad4蛋白的表达

目的探讨转化生长因子-β(TGF-β)通路中TGF-β1及其Ⅱ型受体(TβRⅡ)和Sm ad4的关系,及其在结肠癌中的可能作用机制。方法用EnV ision免疫组化法检测38例石蜡包埋人结肠癌标本中TGF-β1、TβRⅡ和Sm ad4蛋白的表达情况。结果TGF-β1阳性率为52.6%(20/38),65.8%的TβRⅡ和63.2%的Sm ad4表达下降。Sm ad4的表达与肿瘤分化程度及Dukes分期相关(P<0.05)。TGF-β1与TβRⅡ之间有相关关系(P<0.05)。结论TGF-β1与TβRⅡ对结肠癌的发生可能有协同作用。Sm ad4是TGF-β信号通路中的关键因子,但Sm ad4上游可能还存在其他信号通路,调控其表达。     

TGF-β/Smad信号通路及Smad4、p15在结直肠癌中的研究进展

结直肠癌是消化系统常见肿瘤之一,其发病率和病死率较高。转化生长因子-β（transforming growth factor-β,TGF-β）/Smad（small mothers against decapentaplegic）信号通路可调控肿瘤细胞的增殖、分化、浸润、迁移,与结直肠癌的发生发展过程相关。研究表明,Smad4和p15是TGF-β/Smad信号通路的关键效应因子,与肿瘤的侵袭、进展及预后密切相关。本文对TGF-β/Smad信号通路及Smad4、p15在结直肠癌中的最新研究进展进行综述。     

TGF-β/Smad通路在糖尿病视网膜纤维化中的研究进展

糖尿病视网膜纤维化是糖尿病最主要的并发症之一,已成为成年人主要的致盲因素.其是增生性糖尿病视网膜病变阶段多种病因导致视网膜纤维膜形成且异常增生的一种疾病,主要由于细胞外基质(ECM)蛋白产量增加导致纤维化.而转化生长因子-β(TGF-β)是ECM形成过程中重要的细胞因子,使肌成纤维细胞转分化和ECM堆积.TGF-β驱动...     

氯沙坦对5/6肾切除大鼠残余肾组织中TGF-β1，p-Smad2/3及Smad7的作用

目的:观察氯沙坦对5/6肾切除大鼠肾组织中TGF-β1,p-Smad2/3及Smad7的影响,探讨氯沙坦抗肾小球硬化的作用机制.方法:雄性Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组和氯沙坦治疗组,用两步法建立5/6肾切除模型,于术后12周处死各组大鼠.处死前留取24 h尿检测尿蛋白,心脏取血检测血清肌酐、尿素氮,行HE和Masson染色观察各组大鼠肾组织病理改变,用免疫组织化学的方法检测肾组织中TGF-β1,p-Smad2/3及Smad7的表达.结果:模型组大鼠24 h尿蛋白、血清肌酐、尿素氮和肾组织胶原相对面积明显较假手术组增多(P＜0.01),氯沙坦治疗后上述指标均得到不同程度的改善.肾组织TGF-β1和p-Smad2/3在假手术组低表达,模型组呈强阳性表达,而氯沙坦治疗组TGF-β1和p-Smad2/3表达较模型组明显减弱(P＜0.01).假手术组肾组织可见较多的Smad7表达,模型组其表达明显减弱(P＜0.01),而氯沙坦治疗后Smad7表达较模型组增强(P＜0.01).结论:氯沙坦可以通过影响5/6肾切除大鼠肾组织中TGF-β/Smads信号通路中TGF-β1,p-Smad2/3和Smad7的表达而起到抗肾小球硬化的作用.     

Effects of transforming growth factor-β1 and signal protein Smad3 on rat cardiomyocyte hypertrophy

Background SMAD proteins have recently been identified as the first family of putative transforming growth factor-β1 (TGF-β1) signal transducers. This study was to investigate the effects of TGF-β1 and signal protein Smad3 on rat cardiac hypertrophy.Methods The incorporation of [3H]-leucine was measured to determine the hypertrophy of cardiomyocyte incubated with different doses of TGF-β1 in cultured neonatal cardiomyocytes. The model of rat cardiac hypertrophy was produced with constriction of the abdominal aorta. At different times after the operation, rats were killed, and their left ventricular mass index (LVMI) determined.The mRNA expression of TGF-β1 and Smad3 of cultured cells and hypertrophic left ventricles were assessed by RT-PCR. The protein expression of Smad3 was assessed by Western blot.Results In cultured neonatal cardiomyocytes, TGF-β1 significantly promoted incorporation of [3H]-leucine. With the concentration of 3 pg/L, it increased the expression of Smad3 in mRNA and protein levels after 15 minutes, and continued for up to 8 hours of cultured cardiomyocytes. The LVMI and theexpression of TGF-β1 (mRNA) and Smad3 (mRNA and protein) of hypertrophic left ventricle were increased by day 3 after the operation and continued to the 4th week. The peak expression of these was in the second week after operation.Conclusion TGF-β1 has positive effects on could be related to the pathologic progressionrat cardiomyocyte hypertrophy. Signal protein Smad3 of rat cardiac hypertrophy.     

Smad2和Smad4蛋白在乳腺癌组织中的表达及其意义

目的：研究细胞信号传导分子Smad2和Smad4蛋白在乳腺癌组织中的表达,阐明其与乳腺癌发生发展的关系及意义。方法：选取53例乳腺导管癌和50例癌周正常组织标本,应用免疫组织化学SP法检测乳腺癌组织和癌周正常组织中Smad2和Smad4蛋白的表达水平,并评估二者的表达与乳腺癌临床病理参数间的关系。结果：乳腺癌组织中Smad2蛋白表达水平明显高于癌周正常组织（Z=-2.08,P < 0.05）;乳腺癌组织中Smad4蛋白表达水平明显低于癌周正常组织（Z=-5.01,P < 0.01）。乳腺癌组织中Smad2和Smad4蛋白的阳性表达率与患者年龄无关（r=0.035,P > 0.05;r=-0.077,P > 0.05）,与肿瘤大小无关（r= 0.128,P > 0.05;r=0.133,P > 0.05）,与淋巴结转移无关（r=0.163,P > 0.05;r=0.006,P > 0.05）,与是否有远处转移无关（r=0.113,P > 0.05;r=0.126,P > 0.05）,与ER的表达无关（r=0.056,P > 0.05;r=0.047,P > 0.05）,与PR的表达无关（r=0.129,P > 0.05;r=0.107,P > 0.05）;但与HER2的阳性表达率呈负相关关系（r=-0.388,P < 0.01;r=-0.360,P < 0.01）,与乳腺癌病理分级呈负相关关系（r=-0.331,P < 0.05;r=-0.388,P < 0.01）;乳腺癌组织中Smad2与Smad4的表达呈正相关关系（r= 0.830,P < 0.01）。结论：Smad2和Smad4蛋白在乳腺癌的发生发展过程中起重要作用,可能成为评估乳腺癌恶性程度及预后的重要生物学指标。     

Smad4及Smad7在胃癌组织中的表达研究

目的:研究Smad4及Smad7在不同胃组织中的表达及作用.方法:病理学证实的胃癌根治术切除的胃癌组织标本78例,胃癌旁组织78例,采用SP免疫组织化学染色技术,检测Smad4及Smad7在不同胃组织中的表达.结果:qDSmad4蛋白在胃癌旁组织中的阳性表达率为69.23%,在胃癌组织中的阳性表达率为44.87%(P<0.01);随着胃癌分化程度的降低其阳性表达率降低;有淋巴结转移者阳性表达率为23.25%,无淋巴结转移者的阳性表达率为71.43%,差别亦有统计学意义(P<0.01).②Smad7蛋白在胃癌旁组织中的阳性表达率为17.95%,在胃癌组织中的阳性表达率为89.74%(P<0.01);随着胃癌分化程度的降低其阳性表达率升高;有淋巴结转移者阳性表达率为97.67%,无淋巴结转移者的阳性表达率为80.00%,有淋巴结转移者阳性表达率高于无淋巴结转移者(p<0.05 .结论:①smad4蛋白在胃癌组织中低表达,与癌旁组织比较差异有统计学意义(P<0.01),其表达的阳性率与胃癌的分化程度及转移有关.②Smed7蛋白在胃癌组织中高表达,与癌旁组织比较差异有统计学意义(P〈0.01),其表达的阳性率与胃癌的分化程度及转移有关.     

信号传导蛋白Smad2和Smad3的研究进展

Smad蛋自家族是近年来发现的新的细胞内信号转导蛋白,哺乳类中共发现了有8种不同的Smad蛋白.可分为3个不同的亚族:R-Smad、Co-Smad和I-Smad.Smad2和Smad3属于R-Smad,本文从Smad2和Smad3的结构、功能以及相关蛋白等多个方面探讨Smad2和Smad3在TGF-Bl信号转导中的不同作用.     

中药软肝饮对CCl4诱导的肝纤维化大鼠TGF-1/Smad信号通路的影响

[目的]研究中药软肝饮对CCl4诱导的大鼠肝纤维化肝脏TGF-1及Smad3,Smad7表达的影响,探讨其抗纤维化的作用机制。[方法]Wistar大鼠40只,随机分成正常对照组,模型对照组,软肝饮治疗组,鳖甲软肝片对照组,采用CCl4背部皮下注射构建肝纤维化模型,行HE和VG染色,光镜下观察肝组织肝纤维化程度。同时免疫组化SABC方法检测各组TGF-1、Smad3和Smad7的表达。[结果]与正常对照组相比,模型组TGF-1、Smad3表达明显增强,Smad7表达明显下降。经软肝饮治疗后大鼠肝脏TGF-1表达比模型组减弱。软肝饮同时下调Smad3的表达,上调Smad7的表达。另外,软肝饮组大鼠肝脏病理变化显著改善。[结论]肝炎平对大鼠肝纤维化肝脏TGF-1/Smad信号通路有明显的影响,能抑制CCl4诱导的大鼠肝纤维化,其作用机制可能为抑制TGF-1表达,下调Smad3及上调Smad7的表达。     

瓜蒌薤白汤对肺纤维化早期阶段肺组织中TGF-β、Smad3、Smad7表达的影响

目的:探讨瓜蒌薤白汤防治肺纤维化的作用机理。方法:72只SD大鼠随机分为4组,即博莱霉素组、瓜蒌薤白汤组、泼尼松组、正常组,每组18只。用博莱霉素诱导大鼠肺纤维化模型后,用药组每天灌胃瓜蒌薤白汤,分别于第7天、第14天后处死各组大鼠,观察、比较各组大鼠肺泡炎、肺纤维化程度和肺组织中转化生长因子-β(transforming growth factor,TGF-β)、Smad3、Smad7的表达。结果:光学显微镜下,正常组大鼠肺组织正常;博莱霉素组大鼠第7天肺泡间隔增厚,肺泡腔内有炎性细胞浸润,第14天呈1级肺泡炎改变和2级、3级肺组织纤维化;瓜蒌薤白汤组大鼠肺组织炎性改变和纤维化程度较博莱霉素组减轻,炎性细胞浸润减少,部分呈1级纤维化改变。免疫组织化学结果显示:与正常组比较,第7天和第14天博莱霉素组TGF-β、Smad3表达水平升高,Smad7表达下降(P0.05);与博莱霉素组比较,4 g·kg~(-1)瓜蒌薤白汤可使TGF-β、Smad3表达下降(P0.05),而Smad7表达增高(P0.05)。Real time-PCR结果显示:与正常组比较,第7天和第14天博莱霉素组TGF-β、Smad3表达水平明显升高(P0.05),Smad7表达下降(P0.05);与博莱霉素组比较,4 g·kg~(-1)瓜蒌薤白汤可使TGF-β和Smad3表达下降(P0.05),Smad7表达增高(P0.05)。结论:瓜蒌薤白汤能明显减轻博莱霉素所致的大鼠肺泡炎,有效调控TGFβ-Smad信号通路介导的致纤维化作用,进而起到抗纤维化的作用。     

shRNA抑制Smad3基因的表达对瘢痕疙瘩成纤维细胞Smad7表达的影响

目的 构建抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞(keloidfibroblast,KFB)Smad3基因表达的shRNA真核表达载体.研究Smad3 shRNA对KFB Smad7表达的影响.方法 用前期实验筛选出的1对最有效siRNA重组构建Smad3 shRNA表达质粒.通过脂质体介导的方法,将Smad3 shRNA转染到KFB,用RT-PCR及Western blot的方法检测Smad3、Smad7在不同时间点(0～9 d)表达的变化.结果 ①RT-PCR和Western blot的结果证实Smad3 shRNA载体构建成功.②转染Smad3 shRNA后,随着时间的延长,KFB中Smad3的mRNA与蛋白表达都显著减低,到72 h作用最强.光密度分析与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).Smad7的mRNA与蛋白表达都明显升高(P＜0.05).结论 体外构建的shRNA-Smad3 RNAi真核表达载体能显著抑制KFB Smad3的表达.Smad3可能对Smad7起反向调节的作用.