分泌粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子的重组痘苗病毒转染的瘤苗裂解物抗肿瘤作用

将小鼠粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）基因经过同源重组得到表达ＧＭ－ＣＳＦ的重组痘苗病毒，用此痘苗病毒转染小鼠黑色素瘤细胞，制备黑色素瘤瘤苗裂解物（ＧＭ－ＣＳＦＶＭＯ），Ｃ５７ＢＬ／６小鼠皮下接种Ｂ１６－Ｆ１０细胞３天后在注射部位注射瘤苗裂解物，一周后再注射一次。结果发现ＧＭ－ＣＳＦＶＭＯ能够显著地抑制荷瘤小鼠肿瘤结节的生长并明显延长荷瘤小鼠的存活期。用此瘤苗裂解物免疫小鼠两次，间隔一周，免疫一周后给Ｃ５７ＢＬ／６小鼠皮下接种Ｂ１６－Ｆ１０细胞，结果肿瘤结节出现时间明显延长，部分小鼠肿瘤不再生长。经ＧＭ－ＣＳＦＶＭＯ治疗或免疫后小鼠的外周血和脾淋巴细胞对肿瘤细胞杀伤活性明显升高，ＮＫ活性变化不明显。本结果提示，诱导机体特异性细胞免疫可能是瘤苗裂解物的抗肿瘤作用机理之一。     

Ｃ２１５抗原基因转染的瘤苗联合单抗与超抗原的融合蛋白Ｃ２１５Ｆab—SEA的

目的：研究抗Ｃ２１５单抗与超抗原－金黄色葡萄球肠毒素Ａ（ＳＥＡ）的融合蛋白C２１５Fab-SEA与Ｃ２１５抗原基因转的瘤苗共同激发的抗肿瘤效应,方法：以脂质体法将人大肠癌相关Ｃ２１５抗原的基因转梁Ｂ１６小鼠黑色素瘤细胞系制备成瘤苗,建立Ｃ５７ＢＬ／６小鼠黑色素瘤荷模型,观察其与融合蛋Ｃ２１５Ｆab-SEA对肿瘤生长的抑制作用。结果：融合蛋白与瘤苗联合治疗组小鼠的抑瘤率明显高于单用融合蛋白组和单用瘤苗组（Ｐ＜０．０１）,结论：融合蛋白Ｃ２１５Fab-SEA与Ｃ２１５抗原基因转梁的瘤苗,两者的抗肿瘤效应能相互增强,其共同激发的免疫应答能控制荷瘤动物的生长。     

N—CWS激活小鼠巨噬细胞抗肿瘤作用的研究

Ｎ－ＣＷＳ在线只鼠体内１００－２００μｇ可明显抑制Ｂ１６黑色素瘤细胞在Ｃ５７ＢＬ／６小鼠体内的生长。Ｎ－ＣＷＳ腹腔给药后３天可明显增强小鼠脾脏自然钉伤细胞（ＮＫ）和腹腔巨噬细胞的杀伤活性，认为Ｎ－ＣＷＳ的抑制Ｂ１６黑色素瘤作用与其激活小鼠细胞免疫功能有关。体外实验结果表明，当有ＩＦＮ－γ存在的条件下，Ｎ－ＣＷＳ对小鼠腹腔Ｍψ释放ＮＯ及ＴＮＦ都具有显著促进作用，认为这一作用与Ｎ－ＣＷＳ激活小鼠腹腔Ｍ     

CD自杀基因联合GM-CSF基因治疗的抗肿瘤作用及免疫机理

目的研究自杀基因与粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）基因联合治疗抗肿瘤作用及免疫机理。方法小鼠皮下接种黑色素瘤Ｂ１６Ｆ１０细胞３天后,分别在肿瘤局部直接注射表达小鼠ＧＭ－ＣＳＦ的重组腺病毒ＡｄＧＭ－ＣＳＦ和表达大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶（ＣＤ）基因的腺病毒Ａｄ－ＣＤ,然后连续１０天腹腔注射５氟胞嘧啶（５ＦＣ）（ＡｄＣＤ／５ＦＣ／ＡｄＧＭＣＳＦ组）、单用ＡｄＣＤ／５ＦＣ组、单用ＡｄＧＭ－ＣＳＦ组、注射对照病毒ＡｄｌａｃＺ／５ＦＣ组或ＰＢＳ组。结果与接受ＡｄＣＤ／５ＦＣ、ＡｄＧＭ－ＣＳＦ、ＡｄｌａｃＺ／５ＦＣ或ＰＢＳ治疗的荷瘤小鼠比较,经联合治疗后荷瘤小鼠皮下肿瘤结节的生长明显受到抑制,荷瘤小鼠的存活期明显延长（Ｐ＜０．０１）。经ＡｄＣＤ／５ＦＣ／ＡｄＧＭＣＳＦ联合基因治疗后,肿瘤瘤体内或瘤周有大量树突状细胞、ＣＤ８＋Ｔ细胞浸润,黑色素瘤细胞表达ＭＨＣ－Ⅰ和Ｂ７－１分子明显增加,荷瘤小鼠脾细胞对Ｂ１６Ｆ１０黑色素瘤细胞特异性杀伤功能增强。结论联合应用自杀基因和ＧＭ－ＣＳＦ基因转移可以直接杀伤肿瘤细胞,又可提高机体对肿瘤的免疫应答,两者可协同发挥抗肿瘤作用     

黑色素瘤与活化B淋巴细胞融合株的建立及体内外的生长特性

以５０％ＰＥＧ为融合剂，将Ｃ５７ＢＬ／６来源的Ｂ１６黑色素瘤与ＬＰＳ活化的Ｃ５７ＢＬ／６小鼠Ｂ淋巴细胞进行融合。融合细胞经ＨＡＴ选择性培养基的筛选，用有限稀释法克隆到一表达Ｈ－２Ｋｂ和Ｂ７的融合瘤株。与Ｂ１６相比，该融合瘤株在体外生长缓慢，接种Ｃ５７ＢＬ／６小鼠发现其体内的致瘤性也有下降。实验结果提示：与活化的Ｂ淋巴细胞融合可以改变瘤细胞的免疫生物学特性。     

三种淋巴因子在重组痘苗病毒中的表达及其对重组病毒毒力和免疫效果影响的初步研究

研究了巨噬细胞游走抑制因子（ＭＩＦ）、白细胞介素６（ＩＬ－６）及白细胞介素２（ＩＬ－２）等三种淋巴因子分别在含有甲型肝炎病毒基因的重组痘苗病毒中表达后，对病毒毒力及免疫效果的影响。使用Ｂａｌｂ／Ｃ小鼠和家兔进行免疫的初步结果显示，表达ＩＬ－６的重组痘苗病毒免疫后特异性抗体反应明显增强，痘苗病毒抗体及甲型肝炎病毒抗体阳转小鼠数量分别由对照的３／１０和１／１０提高到８／１０和７／１０，痘苗病毒和甲型肝炎病毒抗体滴度也明显升高。家兔初次免疫痘苗病毒后，抗体平均滴度比对照病毒组提高约６倍，并能促使甲型肝炎病毒抗体阳转。而ＩＬ－２和ＭＩＦ重组痘苗病毒免疫后，特异性抗体反应升高不明显。重组痘苗病毒毒力变化结果显示，兔皮内接种ＩＬ－２和ＭＩＦ均显示了一定的减毒能力，二者的重组痘苗病毒毒力均比单纯ＴＫ病毒下降接近１个对数，而表达ＩＬ－６的重组痘苗病毒的毒力与单纯ＴＫ病毒对照无差别。     

用合成肽替代肿瘤抗原诱导肿瘤特异性T杀伤细胞的研究

利用海绵移植模型，将Ｆｆｉｅｎｄ病毒ｇａｇ基因编码蛋白的两个合成肽片段分别注入海绵中，植入Ｃ５７ＢＬ／６（Ｈ－２）小鼠皮下，经一定潜伏期后收集其中的浸润淋巴细胞（ｓｐｏｎｇｅｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｎｇｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ，ＳＩＬｓ）体外培养扩增后，发现合成肽３号能诱导出针对该合成肽特异性的ＳＩＬｓ，并特异性杀伤用合成肽３号致鳘的Ｅ１０靶细胞，但不杀伤Ｆｒｉｅｎｄ病毒在Ｃ５７ＢＬ／６小鼠诱导的ＦＢＬ－     

锂增强小鼠LAK细胞活性及其体内抗瘤作用的研究

本文观察了锂体外对小鼠ＬＡＫ细胞的作用及其体内抗瘤作用，以期找到一种能增强ＬＡＫ细胞活性，降低ＩＬ－２毒副作用的免疫调变剂。在ＩＬ－２诱导ＬＡＫ的同时加入ＬｉＣｌ，则能增强ＬＡＫ细胞的活性。以Ｃ５７ＢＬ／６小鼠接种Ｂ１６黑色素瘤细胞为荷瘤小鼠模型，比较了ＩＬ－２／ＬＡＫ，单独锂及ＩＬ－２／ＬＡＫ合并锂三组的抗瘤作用，结果表明，单独锂及ＩＬ－２／ＬＡＫ组与对照组相比均有抗瘤作用，但ＩＬ－２／ＬＡＫ和锂一起作用，其抗瘤作用最强，表现为能抑制肿瘤的生长及延长荷瘤小鼠的存活时间。因此，锂可望作为一种新型的免疫调节剂用于免疫性疾病及肿瘤的治疗。     

检测Epstein-Barr病毒特异性细胞毒性T淋巴细胞方法的建立及其初步研究

目的建立一种非放射性、简便易行的可检测特异性细胞毒性Ｔ淋巴细胞的方法，并且初步应用于Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒ病毒的细胞免疫应答。方法用重组的ＥＢＶ－ＬＭＰ１痘苗病毒、ＴＫ＋痘苗病毒和杆状病毒系统表达的ＥＢＶ－ＬＭＰ１蛋白分别免疫Ｂａｌｂ／Ｃ小鼠，用Ｐ８１５细胞和乳酸脱氢酶法检测ＥＢ病毒特异性细胞毒性Ｔ细胞的杀伤效应。结果重组ＥＢＶ－ＬＭＰＩ痘苗病毒免疫组原发ＣＴＬ水平和体外诱生的二次ＣＴＬ水平均高于ＴＫ＋痘苗病毒免疫组和正常组；杆状病毒系统表达的ＥＢＶ－ＬＭＰ１蛋白免疫组的ＣＴＬ水平也明显高于正常鼠。结论本法可以较好的反映ＥＢ病毒特异性细胞毒性Ｔ细胞的水平，而且再一次说明ＬＭＰ１基因能够诱发特异性的细胞免疫。     

从植入载有抗原的海绵中收集肿瘤特异性T细胞方法的应用

将含灭活ＦＢＬ－３瘤细胞的聚氨酯海绵块植入免疫的Ｃ５７ＢＬ／６小鼠皮下，１０天后收集海绵中的浸润淋巴细胞（ＳＩＬｓ），经体外含ｒＩＬ－２的培养系统中扩增后作特异性杀伤试验。结果表明：所获得的ＳＩＬｓ对ＦＢＬ－３瘤细胞显示出明显的特异杀伤活性，而且高于同一宿主脾脏中的致敏Ｔ细胞和未免疫鼠中ＳＩＬｓ。经流式细胞仪分析表明，从免疫鼠中以的ＳＩＬｓ是以Ｌｙｔ２＾＋占绝对优势的Ｔ细胞系列，联合应用化疗与ＳＩ     

检测Epstein—Barr病毒特异性细胞毒性T淋巴细胞方？…

目的 建立一种非放射性、简便易行的可检测特异性细胞毒性Ｔ淋巴细胞的方法，并且初步应用于Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｒ病毒的细胞免疫应答。方法 用重组的ＥＢＶ－ＬＭＰ１痘苗病毒、ＴＫ＾＋痘苗病毒和杆状病毒系统表达的ＥＢＶ－ＬＭＰ！蛋白分别免疫Ｂａｌｂ／Ｃ小鼠，用Ｐ８１５细胞和乳酸脱氢酶法检测ＥＢ病毒特异性细胞毒性Ｔ细胞的杀伤效应。结果 重组ＥＢＶ－ＬＭＰ１痘苗病毒免疫组原发ＣＴＬ水平和体外诱生的二次ＣＴＬ     

点突变p53及其抗原肽重组痘苗病毒抗肿瘤效应？…

目的 比较点突变Ｐ５３及其抗原肽重组痘苗诱导的抗瘤免疫反应。为重组抗原轩用于肿瘤免疫治疗提供实验依据。方法 以人１３５位Ｃｙｓ→Ｔｙｒ为Ｐ５３为肿瘤相关抗原模型,观察以表达该点突变Ｐ５３蛋白的重组痘苗病毒ｒＶＶ－ｐ５３ＦＬ与表达包含该点突变抗原肽：５３１２５－１４５的重组痘苗病毒ｒＶＶ－ｐ５３Ｍ所诱导包含该突变抗原肽Ｐ５３１２５－１４５重组的痘苗病毒ｒＶＶ－ｐ５３Ｍ所诱导的ＣＴＬ及对荷瘤Ｂａｌｂ／     

Scid小鼠免疫重建及T,B和NK细胞CNE—2Z—H5移植瘤生长…

采用近系淋巴细胞输入或移植胸腺重建Ｓｃｉｄ小鼠免疫功能，以环磷酰胺抑ＢＡＬＢ／Ｃ裸鼠ＮＫ功能，然后移植ＣＮＥ－２Ｚ－Ｈ５。移植瘤生长速率及瘤重依次为：Ｓｃｉｄ小鼠组－ＮＫ功能抑制组－ＢＡＬＢ／Ｃ裸鼠组－免疫重建组；淋巴细胞输入组６／６、胸腺移植组１／３例于荷瘤２２天内移植瘤完全消退。表明免疫重建成功，有较强抗瘤效应。     

Epstein—Barr病毒潜伏膜蛋白2A重组痘苗病毒转染DC及特异性CTL的体外诱导

通过ＥＢ病毒ＬＭＰ２Ａ重组痘苗病毒转染的ＤＣＳ体外诱导ＬＭＰ２Ａ特异性ＣＴＬ,并通过ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－４和ＴＮＦ－ａ培养体系,我们诱导出了人外周血单核细胞来源的ＤＣ。同时选用在鼻咽癌患者中表达的ＥＢ病毒潜伏蛋白之一ＬＭＰ２Ａ作为靶基因,利用重组痘苗病毒转染诱导的ＤＣＳ。ＤＣＳ与自体ＰＢＭＣＳ混合培养,在ＩＬ－２的刺激作用下获得特异性ＣＴＬ。结果如下：１．人外周血单核细胞经ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－４、ＴＮＦ－ａ的混合培养,１０天可获得成熟的功能性ＤＣＳ。ＦＡＣＳ检测显示ＤＣ表面相对特异性标志ＣＤ８３…     

异基因嵌合体与移植耐受关系的研究Ⅱ.成年小鼠联体共生诱导耐？…

将ＢＡＬＢ／ｃ（Ｈ－２＾ｄ）小鼠及Ｃ５７ＢＬ／Ｈ（Ｈ－２＾ｄ,Ｂ６）小鼠的脾细胞分别经尾静脉注射给对方,２ｄ后再分别腹腔注射环磷胺（ＣＹ）１５０ｍｇ／ｋｇ,ＣＹ注射后１ｄ对ＢＡＬＢ／ｃ及Ｂ６小鼠进行联体（ｐａｒａｂｉｏｓｉｓ）,１周后分开并进行相互间的植皮。发现ＢＡＬＢ／ｃ小鼠对Ｂ６小鼠的皮肤耐受期明显延长（ＭＳＴ＝２５．７ｄ）,但是Ｂ６对ＢＡＬＢ／ｃ及Ｂ６小鼠在联体分开后的第１天和第３０天进行胸     

移植耐受诱导的异基因胎肝移植小鼠的免疫功能重建

本文用门静脉注射异型脾细胞加腹腔注射环磷酰胺方法，成功地诱导了成年Ｂａｌｂ／ｃ小鼠（Ｈ－２ｄ）对Ｃ５７ＢＬ／６（Ｈ－２ｂ）小鼠的免疫耐受。致死照射的耐受Ｂａｌｂ／ｃ小鼠用Ｃ５７ＢＬ／６（Ｂ６）小鼠的胎肝细胞移植后，无移植排斥产生。嵌合状态分析的结果表明，在胎肝移植后９０ｄ和２４０ｄ，重建的Ｂａｌｂ／ｃ小鼠的脾细胞分别有７４．４％和８３．７％来自于供体Ｂ６小鼠．证明Ｂ６小鼠胎肝造血干细胞已经在致死照射的Ｂａｌｂ／ｃ小鼠体内稳定植入。免疫功能检测的结果表明，在胎肝移植后９０ｄ，照射Ｂａｌｂ／ｃ小鼠的免疫功能已经重建。     

黄芪多糖对IL－2／LAK抗肿瘤增强作用的动物实验研究

采用Ｃ５７ＢＬ／６鼠荷其自发产生的黑色素瘤Ｂ＿１６细胞，以生存期为指标，建立了黄茂多糖（ＡＰＳ）增强ＩＬ－２／ＬＡＫ抗肿瘤作用的动物模型，结果表明：ＡＰＳ自身具有一定的抗肿瘤作用，ＡＰＳ（５ｍｇ／ｋｇ）与ＩＬ－２／ＬＡＫ（５×１０￣３Ｕ／ｋｇ、５×１０￣７／ｋｇ）的抗肿瘤作用相似，荷瘤鼠生存期分别为２１．５７±１．８１天和２０．８６±１．８６天（荷瘤对照鼠为１５．７１±０．４９天）；ＡＰＳ对ＩＬ－２／ＬＡＫ的抗肿瘤效应有明显的增强作用，二者在上述剂量下联合应用，荷瘤鼠生存期为２４．８６±２．７３天（Ｐ＜０．０１）。并对荷瘤鼠进行动态细胞免疫功能观察，提示：ＡＰＳ和ＩＬ－２／ＬＡＭ均具有抵抗鼠脾ＮＫ细胞活性，ＩＬ－２产生能力和腹腔Ｍψ吞噬能力下降的作用，ＡＰＳ对ＩＬ－２／ＬＡＫ仍有显著增强效应。     

特异性细胞毒性T细胞检测方法的建立及其在重组痘苗病毒活疫苗细胞免疫研究中的应用

报道了用ＣＢＡ／Ｊ小鼠、Ｌ９２９细胞及ＭＴＴ比色法建立的特异性细胞毒性Ｔ细胞（ＣＴＬ）的检测方法及其在重组痘苗病毒活疫苗细胞免疫研究中的应用。通过检测痘菌病毒特异性初发ＣＴＬ的动态变化及其二次反应ＣＴＬ，表明，本法能较好地检测初发及二次反应ＣＴＬ水平的变化。用本法检测了不同启动子控制下的表达Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｓ（ＥＢ）病毒膜抗原（ＥＢＶ－ＭＡ）的重组痘菌病毒ＥＢＶ－ＭＡ特异性ＣＴＬ、以及与表达人白细胞介素－２的重组痘苗病毒联合免疫时的ＥＢＶ－ＭＡ特异性ＣＴＬ。结果表明，Ｐ７５００启动子表达的ＥＢＶ－ＭＡ比Ｐ１１０００启动子表达的ＥＢＶ－ＭＡ诱导的ＥＢＶ－ＭＡ特异性ＣＴＬ高，但无显著性差异。当上述重组痘苗病毒与表达人白细胞介素－２的重组痘苗病毒联合免疫时，均能使二者的ＥＢＶ－ＭＡ特异性ＣＴＬ增高，但增高幅度本身及其二者之间均无显著性差异。     

rhPRL对骨髓移植小鼠结肠腺癌肺转移的实验性治疗及免疫机？…

通过体内实验进一步观察荷瘤小鼠放疗加骨髓移植后并用ｒｈＰＲＬ的治疗效果。选用Ｃ５７ＢＬ／６纯系小鼠，静脉注入同基因结肠腺癌细胞（ＭＣＡ－３８），待定向形成大量肺转移结节（１０ｄ）时进行全身致死放疗并进行ＳＢＭＴ，同时进行ｒｈＰＲＬ治疗。在治疗开始的１０ｄ和２０ｄ分别处死部分动物观察肺癌结节、骨髓ＣＦＵ－Ｃ、脾脏Ｔ细胞丝裂原反应与ＮＫ活性，最终计算生存期。结果表明ｒｈＰＲＬ对荷瘤小鼠具明显的治疗效果     

人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子在重组痘苗病毒中的 …

目的 观察人ＧＭ－ＣＳＦ（粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子）对重组痘苗病毒免疫效果的影响。方法 大鼠体内观察。结果 从核酸和蛋白水平均证实重组痘苗病毒ＲＶＪＳＢ１１７５Ｄ／ＧＭ－ＣＳＦ可同时表达ＧＭ－ＣＳＦ及ＨＳＶ－１ｇＤ（单纯疱疹病毒ｇＤ糖蛋白），但ＲＶＪＳＢ１１７５Ｄ／ＧＭ－ＣＳＦ免疫大鼠产生的抗－ＨＳＶ１ｇＤ特异性抗体水平与ＲＶＪＳＢ１１７５Ｄ组相比无显著性差异。结论 人ＧＭ－ＣＳＦ在大鼠体内对