卡瓦胡椒（Kava）

又名Ava，Awa，Intoxicating Pepper．Kava Kava, Kava-kava, Kava Pepper, Kava Root, Kawa, Kawa Kawa, Kawa-Kawa, Kew, Rauschpfeffer, Sakau, Tonga, Wurzelstock, Yagona。     

TREATMENT OF 119 CASES OF VERRUCAVULGARIS AND VERRUCA PLANA BY EXTERNALAPPLICATION OF PULVIS PEPPER ALBA

Both verruca vulgaris and verrucaplana are commonly encountered in clinic.We treated 119 cases of the disease by exter-nal application of Pulvis Pepper Alba withsatisfactory results. A brief summary of thetreatment is given as follows.     

Green Or对活髓基牙预备后牙本质敏感症的疗效观察

目的 评价Green Or对烤瓷冠桥活髓基牙预备后牙本质敏感症的防治效果.方法 将颗活髓基牙预备后随机分为2组,即Green Or实验组和对照组,采用NRS法,对病例治疗前后和烤瓷冠桥黏固时和1个月后的疗效观察对照. 结果 结果 Green Or脱敏后1周,烤瓷冠桥黏固时和1个月后的疗效,Green Or实验组与对照组有显著性差异.治疗后各阶段的敏感程度均较治疗前显著降低.结论 Green Or对活髓基牙预备后牙本质敏感症疗效较好.     

SYBR Green Ⅰ Real-time PCR检测IFN-CSP对HepG2.2.15细胞内HBV-DNA影响

目的 建立SYBR Green Ⅰ Real-time PCR检测HBV-DNA方法,并检测IFN-CSP对HepG2.2.15细胞内HBV-DNA影响.方法 提取HepG2.2.15细胞DNA,PCR扩增后纯化,PCR纯化产物梯度稀释作为标准品,采用SYBR Green Ⅰ Real-time PCR 检测,建立标准曲线,并分析方法的特异性、灵敏度、重复性和稳定性.运用建立的SYBR Green Ⅰ 方法检测IFN-CSP对HepG2.2.15细胞内HBV-DNA影响,并与Taqman方法进行比较.结果 SYBR Green Ⅰ Real-time PCR方法特异性、重复性及稳定性均较好,线性范围为107~102copies,检测灵敏度可达102copies.IFN-CSP对HepG2.2.15细胞内HBV-DNA具有抑制效果,且呈剂量依赖性.SYBR Green Ⅰ 方法与Taqman商业试剂盒检测结果差异无统计学意义.结论 SYBR Green Ⅰ Real-time PCR方法简便快速、结果准确、价格低廉,可以满足HBV-DNA拷贝数检测的需要.     

荧光染料SYBR GreenⅠ及EB在定量PCR中敏感性比较

目的比较荧光染料SYBR Green I及EB在定量PCR诊断中检测DNA的敏感性.方法分别用琼脂糖凝胶电泳SYBR Green I染色及EB染色,检测26例21-三体综合征患者及20例正常人DNA PCR扩增产物,并进行光密度分析比较.结果SYBR Green I染色于24个循环PCR产物带型清楚,可准确定量检测;EB染色则在28个循环才能进行定量分析.结论荧光染料SYBR Green I染色较EB染色测量DNA敏感、快捷,在定量PCR技术中值得推广应用.     

三种荧光染料 SYBR GreenⅠ、LCGreen PLUS、EvaGreen在实时定量 PCR应用中的比较

目的：探讨定量PCR中三种荧光染料SYBR GreenⅠ、LC Green PLUS、EvaGreen定量效果的差异。方法以三个样品基因组DNA为模板,应用巢氏PCR法先扩增G6PDH大片段,纯化回收产物,定量,并分别以10倍、5倍和2倍倍比稀释,作为定量PCR制作标准曲线的模板。应用real－time PCR仪指定试剂盒检测模板质量,再分别以含有相同Taq酶并分别含有SYBR GreenⅠ、LC Green PLUS、EvaGreen染料的试剂进行小片段定量PCR扩增,每个浓度3复孔。标准曲线拟合,结果分析用仪器自带分析软件完成。结果应用三种荧光染料获得的标准曲线回归系数≥0．98（除1个样品为0．97）,10倍、5倍梯度稀释标准曲线PCR效率为0．8～1．0,2倍稀释标准曲线PCR效率应用SYBR GreenⅠ有2／3样品＞1．2,而后两种染料为0．9～1．2。应用SYBR GreenⅠ较另两种染料的标准曲线误差较大,且样品间分散度也较大。结论在定量PCR中饱和染料LC Green PLUS、EvaGreen的定量效果好于SYBR GreenⅠ。     

SYBR Green Ⅰ联合TaqMan荧光定量PCR检测HBV-DNA的意义

目的探索SYBR GreenI联合TaqMan荧光定量PCR检测HBV-DNA的意义。方法选择浓度为108.48、105.70和103.70copies/ml的3种HBV-DNA阳性血清和<1×103.0copies/ml的阴性血清各1份,在TaqMan-PCR混合反应体系中加入SYBR Green I组成双荧光PCR(TaqMan SYBR Green I组),同时进行TaqMan和SYBR Green I的单荧光PCR(分别为TaqMan组和SYBR Green I组),设置同一PCR和熔解曲线的循环参数,检测HBV-DNA含量及其Tm,每种方法一次检测每份血清5次。结果TaqMan SYBR Green I组检测的HBV-DNA阳性血清均为阳性,其平均含量为108.55±、105.79±、103.81±,与TaqMan组的108.49±、105.69±、103.72±copies/ml0.320.290.300.310.300.25对应浓度值取10对数比较,无统计学意义(t=0.31、0.54和0.27,P>0.05);与SYBR Green I组的108.41±、0.35105.21±和103.26±copies/ml(不含未检出的两次血清)比较,除高浓度外,中低浓度有统计学意义(t=2.90和0.340.262.62,P<0.05)。TaqMan SYBR Green I组和SYBR Green I组阳性血清均出现明显熔解曲线,熔解温度(Tm)分别为71.8℃、72℃和79.8℃,阴性血清未出现扩增曲线和Tm值。结论SYBR Green I联合TaqMan-PCR检测HBV-DNA时,具有能维持TaqMan-PCR的高灵敏度、特异性更强,并能同时检测HBV-DNATm的特点,为HBV的DNA多态性分析,尤其是在HBV基因分型方面提供了新的检测思路。     

两种PCR方法检测狂犬病毒的敏感性和特异性比较

目的比较Nested-PCR和SYBR GreenⅠReal-Time PCR两种方法检测狂犬病毒的敏感性、特异性和时效性。方法对10倍连续稀释的狂犬病毒(疫苗株)核酸样品,采用Nested-PCR和SYBR GreenⅠReal-Time PCR方法进行平行检测,比较两种方法的敏感性;同时以登革热2型病毒、诺如病毒、星状病毒、EV71和乙型脑炎病毒核酸对两种方法的特异性进行评价。结果 SYBR GreenⅠReal-Time PCR方法可检测出2.3×106copies/μl核酸分子,与Nested-PCR方法相比,敏感度提高10倍。两种检测方法的特异性均好,与登革热2型病毒、诺如病毒、星状病毒、EV71和乙型脑炎病毒核酸均无交叉反应。SYBR GreenⅠReal-Time PCR方法检测花费3h,检测时间比Nested-PCR方法节省2h。结论与Nested-PCR相比,SYBR GreenⅠReal-Time PCR是相对高效的检测狂犬病毒的方法。     

第43届AMSECT国际会议见闻

第43届美国体外循环国际会议于2005年3月3日至6日在美国路易斯安那州新奥尔良市(New Orleans，Louisiana)召开。AMSECT国际会议由美国体外循环学会举办，每年一次。会议期间，来自全美各州的灌注师聚集一堂进行了学术交流，与会者还有来自欧洲、南美、亚洲的体外循环界同行。北京安贞医院董培青、武汉亚心医院刘燕、广东省心血管病医院陈萍及现已在美的灌注师李庶等中国医生到会。     

监测结直肠癌非常必要

美国的研究人员近日报道,原发性癌症治疗之后对病人进行密切监测时发现,在有疾病史的患者中,继发的原发性结直肠癌的发生率较高。美国Helen和Harry癌症研究所的Robert Green报道说,结直肠癌复发的危险性高于以往信息数据中预测的比率。Green教     

SYBR Green I荧光PCR检测登革热病毒基因方法的建立

目的建立SYBR Green I荧光PCR快速检测登革热病毒的方法。方法以通用引物对标准株提取物和血清样本进行RT—PCR扩增，同时以SYBR Green I标记进行实时PCR扩增，分析其灵敏性特异性和重复性。结果标准毒株的扩增结果与预期结果相同，测序结果显示实验结果序列与标准株序列一致。实验的灵敏性特异性和重复都较高。结论SYBR Green I荧光PCR检测登革热病毒的方法是一个快速、准确检测登革热的方法，但它更适用于早期传染病监测。     

腺相关病毒载体介导Zs Green基因在体转染大鼠心肌组织的实验研究

目的 观察腺相关病毒载体9型(AAV9)介导Zs Green基因在体转染心肌组织的效果.方法 采用冠状动脉灌注法将携带报告基因Zs Green的腺相关病毒9型(AAV9-Zs Green)以不同滴度(5×106TU,1×107TU)转导至大鼠心肌组织,分别于转染后1、2和4周在荧光显微镜下观察大鼠心肌组织绿色荧光表达情况.结果 病毒载体转染1周后心肌组织可见绿色荧光表达;2周时可见大量绿色荧光表达,荧光强度较1周时明显增强(P＜0.01);4周时荧光强度较2周有所减弱(P＜0.05),但仍有较强表达;随着病毒转导滴度提高,荧光强度明显增加(P＜0.05).结论 腺相关病毒载体能够有效介导Zs Green转染大鼠心肌组织,并长期稳定表达.     

实时RT-PCR定量检测NGF mRNA表达水平方法的建立

目的:建立一种用SYBR GreenⅠ实时定量逆转录(SYBR GreenⅠQ-RT-PCR)检测大鼠脑组织中神经生长因子(NGF)mRNA基因表达的方法。方法:以Trizol一步法提取大鼠脑组织总RNA,以Oligo(dt)18为引物逆转录产生cDNA,利用SYBRGreenⅠ荧光染料法实时检测NGF mRNA的表达水平。通过熔解曲线分析NGF mRNA检测的特异性,以管家基因β-actin为内参照对NGF进行定量分析。结果:建立的大鼠NGF mRNA SYBR GreenⅠ实时检测方法具有良好的特异性和敏感性。结论:成功建立实时RT-PCR检测NGF mRNA基因表达的方法。     

Real-time PCR与常规PCR在Q热立克体检测中的比较

目的比较与评价Real-time PCR与常规PCR,寻求适合于Q热患者早期诊断的方法。方法应用Taq Man探针定量PCR、SYBR Green染料定量PCR、巢式PCR和普通PCR四种方法分别对T-A克隆的Q热立克次体基因htp AB片断进行灵敏性、特异性和重复性检测及评价。结果 Taq Man PCR方法的灵敏度分别为SYBR Green PCR、巢式PCR和普通PCR的10倍、10倍和100倍。重复性测试Taq Man法Ct变异系数CV:0.2%~3.0%,SYBR Green法的CV:0.3%~6.0%。Taq Man和SYBR Green PCR均耗时约1h,巢式PCR耗时约2.5h,普通PCR耗时约1.5h。四种方法检测25种相关病原菌结果均为阴性。结论 Taq Man探针定量PCR方法具有很好的特异性、灵敏性、重复性和可操作性,可用于Q热患者临床早期诊断。     

SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR定性检验鼠疫样本材料的结果分析

目的 利用SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR定性检验鼠疫样本材料,分析实验结果的差异.方法 选取鼠疫菌质粒上的毒力基因caf1及染色体上的标识序列YP-LC为靶序列设计引物,利用SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR技术定性检测鼠疫样本,通过统计软件SPSS 21.0分析不同引物、不同浓度的模板DNA,Ct值的差异...     

新型核酸染料SYBR-Green在检测基因扩增产物中的应用

目的：将核酸SYBR—Green染料应用于端粒酶活性检测和食物中毒致病菌的PCR—SSCP分析。方法：采用TRAP法检测A549肺腺癌细胞株、293细胞株、HL—60白血病细胞株端粒酶活性。金黄色葡萄球菌、鼠伤寒沙门氏菌、大肠埃希氏菌、福氏志贺氏菌、腊祥芽胞杆菌标准株增菌后，进行PCR—SSCP分析。在上述两种检测方法中，扩增产物电泳后均采用SYBR—Green染色。结果：TRAP—SYBR—Green染色法检测HL—60白血病细胞株端粒酶活性的灵敏度可达15个细胞左右。PCR—SSCP检测常见食物中毒致病菌的敏感性可达10～15个鼠伤寒沙门氏菌细胞。结论；SYBR—Green染色法用于端粒酶活性的检测和致病菌的PCR—SSCP分析，具有快速、简便、灵敏度高、安全的特点。     

HIF-1α基因慢病毒载体的构建及其转染骨髓间充质干细胞后的表达

目的 构建携带缺氧诱导因子-1α(Hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)的慢病毒载体p LVX-HIF-1α-IRES-Zs Green1,并转染骨髓间充质干细胞(Bone marrow derived stem cells,BMSCs),检测该慢病毒载体在BMSCs的表达。方法 从Puc-57-HIF-1α载体中扩增出HIF-1α基因片段,将HIF-1α基因片段与载体连接,获得慢病毒载体p LVXHIF-1α-IRES-Zs Green1,将其与慢病毒包装系统共同转染到293T细胞内进行病毒包装,通过观察报告基因绿色荧光蛋白的表达来测定病毒滴度。将p LVX-HIF-1α-IRES-Zs Green1转染到BMSCs细胞内,通过Real-Time PCR和CCK-8法分别检测HIF-1αmRNA表达及BMSCs增殖能力。结果 PCR及测序结果显示慢病毒载体p LVX-HIF-1α-IRES-ZsGreen1构建正确,病毒滴度为3×108TU/m L。p LVX-HIF-1α-IRES-Zs Green1转染BMSCs后,BMSCs中HIF-1αmRNA表达水平及BMSCs细胞增殖能力明显高于非转染组(P<0.05)。结论 成功构建HIF-1α基因慢病毒载体p LVX-HIF-1α-IRES-Zs Green1,该慢病毒载体可以介导HIF-1α基因在BMSCs中稳定表达,并提高BMSCs增殖能力     

固相载体法提取胰腺癌患者外周血循环DNA

目的:建立简便快速、稳定的提取胰腺癌患者外周血循环DNA的固相载体法。方法:异硫氰酸胍-硅胶法提取DNA,并利用灵敏度极高的新型低毒荧光染料SYBR GreenⅠ对所提取的DNA进行显示。结果:异硫氰酸胍-硅胶法可用于提取血清DNA,且重复性好,SYBR GreenⅠ染色显示胰腺癌患者外周血循环DNA片段大小主要包括完整的基因组DNA、2000bp左右片断或两者兼而有之(而正常者几乎没有)。结论:胰腺癌患者外周血中存在较高水平的循环DNA,异硫氰酸胍-硅胶法提取及SYBR GreenⅠ染色显示外周血循环DNA简便实用,具有较大的临床开发价值。     

两种荧光定量聚合酶链反应法检测乳腺癌组织中微小RNA-21的应用分析

目的比较两种荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)法检测乳腺癌组织中微小RNA(miR)-21的表达,选择更适用于临床的检测方法。方法选取遵义医学院附属医院普外科2010年度住院的手术治疗的乳腺癌患者,手术切除的乳腺组织标本,包括乳腺癌组织和癌旁组织(距肿瘤边缘>5 cm)14对。分别用SYBR GreenⅠ染料和Taq-Man探针作为荧光指示剂,FQ-PCR法检测乳腺癌组织和癌旁组织中miR-21的相对表达水平,应用SPSS 15.0统计软件分析两种检测模式的差异。最后用Northern Blot法进行实验验证。结果 SYBR GreenⅠ染料法检测乳腺癌组织与癌旁组织中miR-21的表达,差异有统计学意义(t=6.704,P=0.000);TaqMan探针法检测乳腺癌组织与癌旁组中miR-21的表达,差异有统计学意义(t=7.238,P=0.000)。SYBR GreenⅠ染料法与TaqMan探针法检测乳腺癌组织中miR-21的表达,差异无统计学意义(t=2.33,P=0.053);SYBR GreenⅠ染料法与TaqMan探针法检测癌旁组织中miR-21的表达,差异无统计学意义(t=0.07,P=0.95)。Northern Blot法检测乳腺癌组织和癌旁组织中miR-21的表达,探针分别为miR-21和U6的反义链,由32P标记。用Image Quant软件测定灰度值评定信号表达强弱,结果表明,乳腺癌组织中miR-21高表达,而癌旁组织中miR-21低表达。结论 SYBR GreenⅠ染料法和TaqMan探针法检测乳腺癌组织miR-21表达均较癌旁组织中明显升高,与Northern Blot法检测结果一致,但SYBR GreenⅠ染料法简单、有效、成本较低,更适用于临床miR-21的检测。     

实时定量PCR检测大鼠神经激肽1受体mRNA方法的建立及评价

目的:建立检测大鼠神经激肽1(NK1)受体mRNA的SYBR Green Ⅰ实时定量PCR方法,为检测大鼠NK1受体基因表达提供有效的手段.方法:提取大鼠中脑总RNA,扩增NK1受体基因片段,将其克隆入pMD-18T载体,制作NK1受体标准品质粒;应用SYBR Green Ⅰ双链嵌合染料,对连续稀释的标准品质粒进行实时...