肾癌组织消减文库的构建与肾癌特异表达基因克隆

目的 构建人肾癌组织与正常肾组织差异表达的cDNA消减文库,从文中克隆鉴定出肾癌特异性表达的基因奠定基础。方法 应用抑制性消减杂交技术,分别从肾癌及正常肾组织中提取poly(A) RNA;依次合成单链及双链cDNA,分别与2种不同的接头衔接,再与正常肾cDNA进行2次消减杂交及2次抑制性PCR;将产物T／A载体连接接构建成功cDNA消减文库。结果 构成功具有高消减效率的人肾癌组织cDNA消减文库,文库扩增后得到350个阳性克隆,其中95％克隆均含50－400bp插入片段。结论 应用抑制性消减杂交技术所构建的人肾癌组织cDNA消减文库为进一步大批量筛选、克隆肾癌特异性表达的基因奠定了基础。     

肾癌抑制性消减杂交文库的构建及意义

目的　应用抑制性消减杂交技术构建人肾癌组织与正常肾组织间差异表达的cDNA组成的消减文库。　方法　分别从肾癌组织和正常肾组织提取polyA RNA ,合成双链cDNA ,经RsaI酶切后将肾癌cDNA分为两组并加上不同的DNA接头 ,再与过量正常肾组织cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性PCR ,PCR产物与T/A载体连接并转化大肠杆菌构建成cDNA消减文库 ,文库扩增后随机挑取克隆进行酶切、测序及同源性分析。　结果　文库共包含 4 14个阳性克隆 ,随机挑取 2 6 5个阳性克隆提取质粒并酶切分析 ,其中 2 4 6个克隆有插入片段。将其中 4 0个克隆进行测序 ,表明 1个克隆为新基因片段 ,其余 39个源于 35个已知基因。　结论　该消减杂交文库质量可靠 ,它的成功构建为进一步筛选、克隆肾癌差异表达基因提供了依据     

ox-LDL特异性人血管平滑肌细胞cDNA消减文库的构建

目的:构建ox-LDL特异性人血管平滑肌细胞cDNA消减文库。方法:35％ug/ml ox-LDL刺激培养的人血管平滑肌细胞,利用消减杂交技术,构建cDNA消减文库,并运用蓝白斑筛选和影印杂交进一步确定文库克隆的特异性。结果:成功构建ox-LDL特异性血管平滑肌细胞cDNA消减文库,约2000个白色克隆。影印杂交后共获82个差异表达克隆。结论:消减文库的构建为进一步克隆ox-LDL特异性基因cDNA片段和全长奠定了基础。     

抑制性消减杂交技术克隆肾癌差异表达基因

目的 应用抑制性消减杂交技术构建人吕组织与正常肾组织差异表达的ｃＤＮＡ消减文库，并从中克隆鉴定出蛑癌特异性表达的新基因。方法 分别从肾癌及正常肾组织中提取ｍＲＮＡ并合成ｃＤＮＡ，经酶切后将肾癌ｃＤＮＡ分为两组，分别与两种不贩接头衔接，再与正常肾组织（ｃＤＡＮ）进行两次的消减杂交及两次抑制性ＰＣＲ产物与Ｔ／Ａ载体连接构建成功ｃＤＮＡ消减文库，并转染大肠杆菌进行文库扩增，随机挑取克隆进行酶切、测序分析     

转化生长因子β_1刺激肝星状细胞差异表达下调基因筛选

目的筛选并克隆转化生长因子β1(TGF-β1)刺激肝星状细胞差异表达下调基因,阐明TGF-β1导致肝纤维化的分子生物学机制。方法以TGF-β1及磷酸盐缓冲液分别刺激大鼠肝星状细胞(即实验组和对照组),提取mRNA并逆转录为cDNA,经RsaⅠ酶切后,将对照组细胞cDNA分成两组,分别与两种不同的接头衔接,再与实验组细胞cDNA进行2次消减杂交及2次抑制性PCR扩增,将产物与pGEM-Teasy载体连接,构建cDNA消减文库,并转染大肠埃希菌进行文库扩增,随机挑选克隆经PCR扩增后进行测序及同源性分析。结果成功构建了TGF-β1刺激肝星状细胞差异表达基因的cDNA消减文库。文库扩增后得到98个阳性克隆,进行菌落PCR分析,均得到200～1000bp插入片段。选取含有插入片段的35个克隆进行测序,并通过生物信息学分析获得了19种已知基因序列和2个未知功能基因。结论应用抑制性消减杂交技术成功构建了TGF-β1刺激的肝星状细胞差异表达基因的cDNA消减文库,为进一步阐明TGF-β1参与肝纤维化的分子生物学机制提供了理论依据。     

膀胱癌患者尿脱落细胞抑制消减文库的构建及差异基因的初步筛选

目的 应用抑制性消减杂交方法 筛选膀胱移行细胞癌患者与正常人尿脱落细胞差异表达基因.方法 分离膀胱移行细胞癌患者与正常人尿液中总mRNA,用SMART技术反转录成cDNA,经过酶切、接头连接、两轮消减杂交及两轮抑制性PCR,使得差异表达的DNA片段得以富集.PCR产物与T/A载体连接并转化大肠杆菌XL-blue构建差异表达基因的cDNA消减文库.文库扩增后随机挑取克隆进行酶切、测序及同源性分析.结果 PCR鉴定有317个克隆载有主要在200～900bp之间呈随机分布的插入片段,片段插入率达93.2%,证实建库成功.对20个质粒测序结果 经同源性比对分析,其中20个片段源于17个已知基因,1个克隆在GenBank中未检索到与其有相似性的基因序列,表明它们可能为BTCC差异表达的新基因.结论 该消减杂交文库质量町靠,它的成功构建为进一步筛选、克隆膀胱肿瘤差异表达基因提供了依据.也为膀胱肿瘤诊断基因芯片的研究与开发奠定了基础.     

肾癌抑制性消减文库构建及差异表达基因鉴定

目的：应用抑制性消减杂交技术筛选人肾癌差异表达基因。方法：以786-0和HK-2为消减杂交对象构建人肾癌抑制性消减文库,挑选阳性克隆进行测序及Genbank BLAST分析。结果：文库包含362个有插入片段的阳性克隆,随机分析50个克隆,其中2个为新基因,另48个源于36个已知基因,这些差异表达基因与肿瘤细胞的转录、翻译、增殖、凋亡、代谢、信号转导、血管新生、膜受体表达异常等有关。结论：该文库质量可靠,筛选出包括低峰度和新基因在内的肾癌差异表达基因,为进一步研究肾癌发生、发展机制奠定了基础。     

用SSH方法构建BTCC患者尿脱落细胞差异表达基因的cDNA消减文库

目的:应用抑制性消减杂交(SSH)方法构建膀胱移行细胞癌(BTCC)患者与正常人尿脱落细胞差异表达基因cDNA消减文库。方法:分别从BTCC患者与正常人尿液中提取总mRNA,用SMART技术反转录成cDNA,经过HaeⅢ酶切后将BTCC尿脱落细胞cDNA分为两组并接上接头,再与过量正常膀胱尿脱落细胞cD-NA进行两轮消减杂交及两轮抑制性聚合酶链反应(PCR),使得差异表达的DNA片段得以富集。PCR产物与T/A载体连接并转化大肠杆菌JM109构建成差异表达基因的cDNA消减文库。文库扩增后,随机挑取克隆进行酶切、测序及同源性分析。结果:PCR鉴定有317个克隆载有主要在200～900bp之间呈随机分布的插入片段,片段插入率达82.6%,证实建库成功。对20个质粒测序结果经同源性比对分析,其中20个片段源于17个已知基因,1个克隆在GenBank中未检索到与其有相似性的基因序列,表明它们可能为BTCC差异表达的新基因。结论:该消减杂交文库质量可靠,其成功构建为进一步筛选、克隆BTCC差异表达基因提供了依据。     

应用抑制性消减杂交技术克隆肾癌转移相关基因

目的:应用抑制性消减杂交技术构建人高侵袭性肾癌细胞和低侵袭性肾癌细胞间差异表达的cD-NA消减文库,筛选并克隆肾细胞癌转移相关基因.方法:采用涂有Matrigel胶的Transwell小室分离回收高、低侵袭性肾癌细胞,分别从高侵袭性肾癌细胞与低侵袭性肾癌细胞中提取polyA RNA,合成双链cDNA,经RsaI酶切后将高侵袭性肾癌细胞cDNA分为两组并加上接头1和接头2,再与过量低侵袭性肾癌细胞cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性PCR,PCR产物与pMD18-T载体连接并转化JM109大肠杆菌构建成cDNA消减文库,文库扩增后随机挑取克隆进行测序及同源性分析.结果:文库共包含185个阳性克隆,随机挑取50个阳性克隆分析,其中45个克隆有插入片段.将其中15个有插入片段的克隆进行测序,表明源于7个已知基因.结论:利用抑制性消减杂交技术,从一对同源的高低转移表型差异的细胞株中获得了7条可能与肾癌转移相关的cD-NA序列,他们可能在促进肾癌转移中起到重要作用.     

原发性肝细胞癌消减杂交文库构建及差异表达基因筛选

目的构建人原发性肝细胞癌（HCC）消减杂交文库，筛选差异表达基因。方法以癌组织为检测者（tester）、癌旁组织为参照者（driver），应用抑制性消减杂交（SSH）方法构建消减杂交cDNA文库，随机挑选56个阳性克隆进行鉴定、测序及同源性分析。结果文库获得130个阳性克隆，鉴定96％有200～1500bp插入片断。获得的35个基因中包括已知基因26个，功能未知基因5个，新基日4个。已知基因中包含酶、细胞信号转导、基因调控因子、转录调节因子、癌基因、抗凋亡因子及细胞的黏附与生长调节因子等相关基因。结论应用SSH方法成功构建HCC差异表达基因cDNA文库，筛选出低丰度和新基因在内的HCC差异表达基因。     

308-nm Excimer Laser for the Treatment of Alopecia Areata

BACKGROUND Alopecia areata is loss of hair from localized or diffuse areas of hair-bearing area of the skin. Recently there are reports of efficacy of the 308-nm excimer radiation for this condition.
OBJECTIVE To study the effect of the 308-nm excimer laser in the treatment of alopecia areata.
MATERIALS AND METHODS Eighteen patients with 42 recalcitrant patches (including 1 adult with alopecia totalis) were enrolled in this study. The lesions were treated with the 308-nm excimer laser twice a week for a period of 12 weeks; one lesion on each patient was left as a control for comparison.
RESULTS There were 7 males and 11 females in this study. Regrowth of hair was observed in 17 (41.5%) patches. Thirteen of the 18 lesions in scalp showed a complete regrowth of hair. The extremity regions failed to show a response. Atopic diatheses had an unfavorable effect on the outcome in our patients.
CONCLUSION The 308-nm excimer laser is an effective therapeutic option for patchy alopecia areata of the scalp and for some cases with patchy alopecia areata of the beard area. It does not work for patchy alopecia areata of the extremities.     

肾癌差异表达基因GYLZ-RCC18的全长克隆及意义

目的 克隆并鉴定肾癌与下沉肾组织之间差异表达的基因。为研究肾癌发生发展机制提供新的突破口。方法 应用抑制性消减杂交技术,构建人肾癌组织与正常肾组织差异表达的ｃＤＮＡ消减文库,并从中克隆鉴定出肾癌特异表达的基因。结果：构建成功高消减效率的人肾癌组织ｃＤＮＡ消减文库,对其中１０个克隆的插入ｃＤＮＡ片段进行测序后,经基因库检索表明１０个片段均为未知新序列,其中ＧＹＬＺ－ＲＣＣ１８基因为５个拷贝,这提示以上１０个ｃＤＮＡ片段可能来自６个新基因。差异分析显示ＧＹＬＺ－ＲＣＣ１８的肾癌组织中有明显表达,而在正常肾组织中无表达,应用ＳＭＡＲＴ ＲＡＣＥ技术获得ＧＹＬＺ－ＲＣＣ１８基因的全长,并证明ＧＹＬＺ－ＲＣＣ１８是一个５′端有Ｄ３种不同剪切方式亚型的基因家族。结论 ＧＹＬＺ－ＲＣＣ１８基因是肾癌特异表达的新基因。人肾癌ｃ     

人毛乳头细胞条件培养液对斑秃患者的治疗作用

目的:观察人毛乳头细胞(DPC)条件培养液对斑秃患者的治疗作用,探讨DPC分泌促进毛囊生长的活性物质。方法:收集体外培养低传代DPC培养上清,制成冻干粉,用于治疗50例斑秃患者,并分别选择其中26例和10例作去炎松组和空白组自身对照。结果:DPC条件培养液组、去炎松组和空白组治愈率分别为74%、54%、10%,有效率分别为96%、73%、30%,DPC条件培养液组其治愈率和有效率均明显高于去炎松组和空白组(P<0.01)。结论:人DPC条件培养液有促进斑秃患者毛囊生长的作用。     

人毛乳头细胞条件培养液治疗斑秃的临床观察

目的：人毛乳头细胞条件培养液治疗斑秃患者的临床观察。方法：用人毛乳头细胞条件培养液治疗100例斑秃患者，并分别选择其中53例和30例作去炎松组和空白组自身对照。结果：人毛乳头细胞条件培养液组、去炎松组和空白组治愈率分别为75％、51％、10％，有效率分别为97％、72％、30％，人毛乳头细胞条件培养液组其治愈率和有效率均明显高于去炎松组和空白组（P〈0．05）。结论：人毛乳头细胞条件培养液对斑秃患者有明显的治疗作用。     

Failure of two TNF-alpha blockers to influence the course of alopecia areata

Alopecia areata is a form of hair loss believed to be due to an anti-hair-bulb autoimmune process in which CD4 and CD8 lymphocytes affect the peribulb area. Alopecia universalis is the most severe form of alopecia areata and manifests itself as a complete loss of all body hair. The authors present the case of a 44-year-old psoriasis patient with a 20-year history of alopecia universalis who failed to respond to etanercept in terms of skin psoriasis and alopecia universalis, while reporting improvement in arthropathy. While tumor necrosis factor-alpha inhibitors succeeded in the treatment of some autoimmune disorders, reports of alopecia areata failures and this one of alopecia universalis demonstrate resistance to such treatment. Tumor necrosis factor-alpha inhibitors seem to not represent an effective treatment modality for alopecia universalis. The understanding gained from this experience should redirect the aims of alopecia areata therapy toward alternate mechanistic interventions.     

Treatment of alopecia areata with diphencyprone

Topic immunotherapy in alopecia areata consist in a mild contact dermatitis with help of a chemical substances, with a high potency of sensitization, such as dinytroclorbenzenul (DNCB), squaric acid dibutylester (SADBE) and diphencypronil (DPCP). Eight patients with alopecia areata, 3 with mild form and 5 with severe form was treated with DPCP in acetone solution. We have obtained a positive result in 3 cases (37.5%), one with total regrows and 2 with partial regrows and a negative result in 5 cases, 3 with partial regrows and loss of the hair in other areas and 2 cases with no response after 24 weeks. We consider this method like an alternative therapy in severe alopecia areata resistant at other treatments.     

171例斑秃患者生活质量评定及其影响因素的分析

目的:对斑秃患者生活质量进行评定,探讨影响其生活质量的相关因素。方法:采用皮肤病生活质量指数(Dermatology Life Quality Index,DLQI)问卷,每项指标分四个等级,分别对应分值0、1、2、3,各项相加得出DLQI评分。评分结果与影响因素进行统计学分析。结果:年龄、性别、家族史、病程、脱发面积DLQI评分(P>0.05),差异无统计学意义;拔发试验DLQI评分(P<0.05),差异有统计学意义。结论:年龄、性别、家族史、病程、脱发面积差异对斑秃患者的生活质量无显著影响,而拔发试验阳性对斑秃患者的生活质量影响明显。