电损伤兔骨骼肌细胞内钙分布变化

目的:探讨电损伤骨骼肌细胞内钙离子分布变化及其意义.方法:36只兔随机均分为实验组和对照组,实验组制作成兔胫前单束肌高压电损伤精细模型.分别在电击后2、8、24、48、72 h和5 d每组随机抽取3只兔,取A区段肌组织标本,采用电镜细胞化学胞内Ca2 原位沉淀法检测亚细胞Ca2 分布,同时行HE染色观察其形态学变化.结果:电击后胞浆、线粒体内出现钙颗粒并渐增多,而肌浆网钙颗粒则减少、消失,这种Ca2 紊乱在伤后24～48 h达到高峰.之后钙颗粒开始减少,但至伤后第5天仍存在.对照组钙颗粒仅见于肌浆网.HE染色显示肌组织呈进行性坏死,这种病理改变与亚细胞Ca2 分布变化相一致.结论:骨骼肌高压电损伤后发生亚细胞Ca2 分布紊乱,胞浆和线粒体存在持续钙超载.它可能是电损伤骨骼肌进行性坏死的重要原因之一.     

静力负荷对大鼠骨骼肌线粒体及肌浆网功能的影响

目的：了解静力负荷作用下对骨骼肌线粒体及肌浆网功能的影响。方法：选择16只健康雄性Wistar大鼠,随机分为对照组、负荷组,每组8只。将大鼠麻醉后游离其左下肢比目鱼肌远端,负荷组施加100 g负荷,持续时间为90 min。在4℃条件下,9 000 r/min离心20 min分离比目鱼肌线粒体;40 000 r/min离心15 min,分离肌浆网,分别检测骨骼肌线粒体及肌浆网Ca2＋浓度、Ca2＋-ATPase活性和丙二醛（malondialchehyche,MDA）水平。结果：负荷组与对照组比较,线粒体Ca2＋浓度增加111.11%,Ca2＋-ATPase活力下降25.88%,MDA含量增加188.57%,差异均有显著性（P〈0.01）;肌浆网Ca2＋浓度下降75.89%,Ca2＋-ATPase活力下降61.49%,MDA含量增加122.86%,差异均有显著性（P〈0.01）;结论：静力负荷可致大鼠骨骼肌线粒体钙超载和肌浆网摄钙能力下降,肌浆网、线粒体膜Ca2＋-ATPase活力下降、MDA增多。     

阻塞性黄疸大鼠肾系膜细胞线粒体膜电位变化的研究

目的 探讨阻塞性黄疸大鼠肾系膜细胞线粒体膜电位的变化及其致肾损伤的作用机制。方法 60只SD大鼠,随机分为正常对照组、假手术组、实验组（再分为胆总管结扎后15d、21d两个亚组）,每组15只。胆总管双重结扎法建立阻塞性黄疸大鼠模型,切取肾脏行肾小球系膜细胞原代培养,流式细胞仪测定细胞线粒体膜电位平均荧光强度值,激光共聚焦显微镜法测定细胞浆[Ca^2＋]i浓度。结果 实验组大鼠肾小球系膜细胞线粒体膜电位平均荧光强度值明显下降（P〈0．05）,肾小球系膜细胞胞浆钙浓度明显升高（P〈0．05）。结论 [Ca^2＋]i内流引起的线粒体膜电位的下降在阻塞性黄疸大鼠肾系膜细胞损伤中起着重要作用。     

心肌缺血再灌注亚细胞钙变化电镜细胞化学研究

应用Ｃａ（２＋）细胞化学探针－焦锑酸钾技术，结合ｘ线电子探针微区分析研究心肌缺血再灌注肌浆网、线粒体等亚细胞Ｃａ（２＋）原位分布变化。结果表明，正常细胞Ｃａ（＠＋）主要位于肌浆网内、细胞膜及细胞核内，胞浆及线粒体内无Ｃａ（２＋）颗粒。缺血３０ｍｉｎ，Ｃａ（２＋）分布变化不明显。再灌注３０ｍｉｎ及６０ｍｉｎ肌浆网及肌膜Ｃａ（２＋）明显减少，同时胞浆及线粒体内出现大量Ｃａ（２＋）沉淀颗粒。Ｘ线电子探针微区分析证实心肌亚细胞高电子密度沉淀颗粒主要成分为Ｃａ（２＋）。本研究直接证实心肌肌浆网Ｃａ（２＋）聚集能力障碍及线粒体Ｃａ（２＋）沉积增多是心肌缺血再灌注损伤的重要原因。     

偏侧咀嚼对大鼠咬肌线粒体的影响

目的 探讨偏侧咀嚼对大鼠咬肌线粒体的影响,进一步研究偏侧咀嚼致咬肌功能紊乱的机制。方法 用电镜观察线粒体形态和数目的变化并计算线粒体损伤指数;用原子分光光度法检测Ca2+含量;用分光光度法检测线粒体渗透性转换孔道（MPTP）的开放程度。结果 实验组拔牙侧线粒体损伤指数评分均低于实验组非拔牙侧,并且明显低于对照组（P＜0.01）,其中,4周组评分最低。除8周组以外实验组拔牙侧Ca2+含量均升高,且明显高于对照组（P＜0.05）。其中,4周组Ca2+含量升高最为明显。实验组拔牙侧线粒体渗透性转换孔道的开放程度均大于实验组非拔牙侧和对照组（P＜0.05）,6周组达到最高。线粒体渗透性转换孔的开放程度与线粒体损伤程度呈负线性相关（r=-0.74,P＜0.05）。结论 高含量Ca2+激活了线粒体通透性转换孔开放的相关信号通路,引起线粒体损伤和细胞凋亡,这可能是偏侧咀嚼致咬肌功能紊乱的发生机制之一。     

大鼠严重烧伤早期心肌线粒体Ca2+转运变化及其机制研究

目的 探讨严重烧伤早期心肌线粒体Ca^2 转运变化及其发生机制。方法 复制30%Ⅲ度烫伤大鼠模型,测定伤后1、3、6、12、24h大鼠心肌线粒体Ca^2 转运速率,同时检测影响Ca^2 转运的相关指标--心肌细胞胞浆Ca^2 浓度（[Ca^2 ]c）、线粒体膜电位及ATP含量。结果 伤后1h心肌线粒体Ca^2 摄取速率明显升高,而Ca^2 释放速率无明显改变,但3、6、12、24h心肌线粒体Ca^2 摄取与释放速率、线粒体膜电位、ATP含量均显著降低,且烧伤后线粒体Ca^2 摄取速率与膜电位呈明显正相关,Ca^2 释放速率与线粒体ATP含量呈显著正相关。而伤后3、6、12、24h[Ca^2 ]c均明显高于正常对照组。结论 ①烧伤初始心肌线粒体Ca^2 摄取加强,伤后续阶段线粒体Ca^2 转运紊乱;②线粒体膜电位下降、ATP含量降低是烧伤后续阶段心肌线粒体Ca^2 转运紊乱的主要原因,伤后[Ca^2 ]c升高或有升高趋势也参与严重烧伤早期心肌线粒体Ca^2 转运变化的发生。     

静力负荷对大鼠骨骼肌超微结构的影响

目的：了解不同强度、不同时间静态负荷对骨骼肌细胞超微结构的影响。方法：96只雄性Wistar大鼠,随机分为12组,3个对照组,9个实验组。麻醉后游离左下肢比目鱼肌远端,分别施加负荷0 g、25 g、50 g和100 g,观察30 min、60 min、90 min后比目鱼肌细胞超微结构变化。结果：随着负荷加大和持续时间的延长,骨骼肌超微结构出现由线粒体数目增多、肌浆网扩张等轻微改变至肌节排列紊乱、肌丝溶解、线粒体呈髓鞘和空泡样等严重变化。结论：长时间静态负荷作用于骨骼肌,可引起骨骼肌超微结构的改变。     

尼莫地平对大鼠失神经骨骼肌细胞萎缩的延缓作用

目的探讨失神经骨骼肌细胞中Ca2＋浓度和MPTP开放率的变化及尼莫地平对它们的影响,寻找延缓失神经骨骼肌萎缩的新途径。方法采用右下肢失神经腓肠肌动物模型,将72只Wista大鼠随机分为3组：对照组,模型组、尼莫地平组（简称治疗组）。在术后2、14、28d每组取8只大鼠处死取双侧腓肠肌,测腓肠肌湿质量比,用荧光指针定量检测Ca2＋浓度的变化,激光共聚焦显微镜观察标本细胞线粒体MPTP开放率的变化。结果模型组术后2d Ca2＋浓度和MPTP开放率已经开始增加,随着时间延长（14d、28d）,Ca2＋浓度和MPTP开放率均持续增加（P〈0.05）。治疗组术后Ca2＋浓度和MPTP开放率均低于同期模型组（P〈0.05）,但却始终高于同期对照组的表达水平（P〈0.05）。Ca2＋浓度与MPTP开放率呈正相关（r=0.841,P〈0.05）。结论尼莫地平可以通过抑制Ca2＋超载和MPTP的开放来延缓失神经骨骼肌萎缩。     

脊髓损伤后大鼠脊髓线粒体呼吸功能和游离Ca2+含量的变化

目的：探讨脊髓损伤后大鼠伤段脊髓线粒体呼吸功能和线粒体内游离Ca^2＋含量的变化.方法：48只SD大鼠,随机分为对照组（假手术组,n=24）和脊髓损伤组（SCI组,n=24）,每组又分为处理后6、12、24 h三时相组,每组8只,采用Allen＇s打击法造成大鼠脊髓损伤模型,在各时相提取伤段脊髓线粒体,用Clark氧电极法测定线粒体呼吸功能,根据线粒体呼吸耗氧量换算出呼吸Ⅲ态（R3）、呼吸Ⅳ态（R4）、呼吸控制率（RCR）、磷氧比值（P/O比值）;用Reers法测定线粒体内游离Ca^2＋浓度.结果：SCI组在伤后6、12、24 h R3、RCR和P/O显著低于对照组,R4和线粒体游离Ca^2＋显著高于对照组,有极显著统计学意义（P＜0.01）.结论：大鼠脊髓损伤后伤段脊髓线粒体呼吸功能明显下降,线粒体Ca^2＋内流明显增加.     

维拉帕米对静力负荷大鼠骨骼肌线粒体功能的影响

目的:探讨维拉帕米对静力负荷大鼠骨骼肌损伤的保护性作用.方法:无特定病原体性Wiser大鼠24只随机分为对照组、负荷组和干预组.每组8只.干预组在实验前30 min,按10 mg/kg左下肢肌肉注射维拉帕米.实验前用2％苯巴比妥钠40 mg/kg腹腔注射麻醉,剥离大鼠左下肢比目鱼肌,将远端游离,给予100 g负荷,每组负荷90 min.对照组以同样的方式处理,不施加负荷.观察血清肌酸激酶( creatine kinase,CK)、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)及骨骼肌线粒体Ca2+浓度、Ca2+-Mg2+-ATPase和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量变化.结果:负荷组与对照组比较,血清CK、线粒体Ca2+浓度、MDA含量明显升高、Ca2+-Mg2+-ATPase活力下降,差异有统计学意义.干预组与负荷组比较,线粒体Ca2浓度、MDA含量明显降低,差异有统计学意义.结论:长时间静力负荷作用于骨骼肌,可导致骨骼肌损伤,维拉帕米可降低线粒体钙超载及氧化损伤作用.     

当归或三七对兔甘油致急性肾衰的保护作用及其机制研究

目的：用甘油复制兔急性肾小管坏死(ATN)模型，观察当归、三七对ATN的保护作用，并初步探讨其机制。方法：40只健康新西兰白色家兔，等分为四组：当归组、三七组、对照组、正常组。当归、三七、对照三组均用50％甘油等渗盐水15ml/kg注入兔双后肤皮下，复制ATN模型，当归组于注射甘油后即刻，第3小时，第6小时，肌注当归注射液50mg／kg，三七组于相同时点肌注三七皂甙50mg／kg，正常组则于兔双后肢皮下注射生理盐水15ml/kg，并于相同时点注射5％葡萄糖注射液。于实验第24小时取血液、尿液和肾脏，检测血清尿素氮、肌酐、尿液总渗透压、尿总氨基酸、肾组织MDA、SOD、GSH—PX、ATP酶、Ca2^ 、肾组织病理形态学检查。结果：各组与正常组比，肌酐、尿素氮明显升高，说明模型复制成功。当归、三七纪元l例死亡，对照组死士率为30％，血清肌酐、尿素氮、丙二醛、尿总氨基酸、滤过钠排泄分数和肾组织钙含量均明显低于对照组(P＜0．01)，而肾组织ATP酶、SOD、GSH-PX活性均高于对照组(P＜0.01)，病理形态学变化轻于对照组。以上指标，当归与三七组无显著差异(P＞0．05)。结论：当归、三七对甘油所致的ATN有明显保护作用，二者效果无差异，其机制可能与二者均有改善微循环、血液流变学、抑制脂质过氧化反应、保护肾脏抗氧化酶和ATP酶活性及减轻肾组织钙超载有关。     

Influence of Needling the Foot-Yangming Points on Intraceilular Ca^2＋ Concentration in Smooth Muscles of the Gastric Antrum in Rabbits

Objective： To investigate the influence of acupuncture at the points of Foot-Yangming Meridian on intracellular concentration of Ca^2, called the 2nd messenger of gastric smooth muscles. Methods： 45 rabbits were randomly divided into the following 5 groups： a normal saline group, a model group treated with atropine, an acupuncture group treated by needling the points of Foot-Yangming Meridian, an acupuncture group treated by needling the points of Foot-Shaoyang Meridian, an acupuncture group treated by needling the points of Foot-Taiyang Meridian, i.e. 9 rabbits in each group. After treatment, the smooth muscles of the gastric antrum were taken to make the suspension containing alive single muscular cells, and the intracellular calcium concentration （[Ca^2＋]i） was determined by a spectrofluorometer. Results： The concentration of [Ca^2＋]i in the group of Foot-Yangming Meridian was obviously higher than that of the atropine group （P〈0.01）, but with no significant differences found among all the other groups （P〉0.05）. Conclusion： The influence of acupuncture at the points of Foot-Yangming Meridian on gastric movement is related to the release of intracellnlar Ca^2＋ in the gastric smooth muscles     

尼莫地平对脑挫裂伤后神经细胞内游离钙浓度的影响

目的〓〖HTK〗研究尼莫地平对脑挫裂伤后神经细胞胞浆内游离钙离子浓度变化的影响。〖HTW〗方法〓〖HTK〗将Wistar大鼠随机分为对照组、创伤组、治疗组;创伤组按照Feeney自由落体脑损伤模型方式制作大鼠左顶叶脑挫裂伤模型,治疗组在外伤后开始静脉滴注尼莫地平。分别对脑挫裂伤后0.5、1、3、6、12、24、48h各时相点细胞内游离钙离子浓度和细胞凋亡率进行检测。对不同时相的创伤组、治疗组和对照组进行比较分析。〖HTW〗结果〓〖HTK〗脑挫裂伤后大脑皮层神经细胞内游离钙离子浓度迅速升高,0.5h时为正常值的4倍,24h时达到高峰,48h时降低明显,但仍然维持在比较高的水平。应用尼莫地平治疗后,钙离子浓度显著降低,6h时降至接近正常水平。脑挫裂伤后神经细胞凋亡率和胞内游离钙离子浓度存在相关性。〖HTW〗结论〓〖HTK〗脑挫裂伤后神经细胞胞浆内钙离子浓度升高,导致钙超载并引起细胞凋亡。早期应用尼莫地平能抑制钙超载,抑制细胞凋亡,对神经细胞具有极强的保护作用。     

GDNF与甲泼尼龙对脊髓损伤后细胞内游离钙含量的影响

目的：比较胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）与甲泼尼龙（MP）对脊髓损伤组织细胞内游离钙及水含量的影响。方法：SD大鼠分成对照组、GDNF组、MP一及GDNF＋MF组,改良Allen法撞击致伤脊髓T13节段,蛛网膜下腔给予GDNF 20μl,尾静脉给予MP 30mg/kg,不同时间取伤段脊髓以Fura-2法测定细胞内钙[Ca^2 ]i及组织中水含量。结果：治疗组[Ca^2 ]i及组织中水含量明显低于对照组（P＜0．01）;伤后24h[Ca^2 ]i及组织中水含量GDNF组＞MP组及GDNF＋MP组（P＜0．01）,MP组与GDNF＋MP组无差异（P＞0．05）;伤后72h的[Ca^2 ]i水平,GDNF组＞MP组＞GDNF＋MP组（P＜0．05）;组织中水含量GDNF组＞MP组及MP＋GDNF组（P＜0．01）;伤后7天[Ca^2 ]i的水平,GDNF组＞MP组＞GDNF＋MP组（P＜0．01）;组织中水含量各治疗组无显著差异（P＞0．05）。结论：GDNF、MP及其联合应用均能降低脊髓组织[Ca^2 ]i水平,减轻组织水肿,作用效果MP超过GDNF,MP联合GDNF治疗脊髓损伤能增强MP的疗效。     

CO2气腹对慢性肾衰大鼠肾功能及其线粒体功能的影响

目的：了解不同CO2气腹压力对慢性肾功能衰竭模型大鼠肾功能的影响。探讨CO2气腹造成肾功能变化在亚细胞水平上损伤的可能机制。方法：建立5/6肾切除大鼠慢性肾功能衰竭模型。分别施加0.67kPa(5mmHg),1.33kPa(10mmHg)CO2气腹压，检测解除气腹即时，1d,4d血肌酐（SCr)，尿素氮（BUN）水平及各时相点时肾脏组织线粒体Na^2 -K^ -ATP酶和Ca^2 -ATP酶活性。结果：解除气腹即时SCr开始升高，1d时升高显著，第4天时下降，接近对照组水平；BUN变化不明显，肾脏组织线粒体Na^2 -K^ -ATP酶和Ca^2 -ATP酶活性也分别在解除气腹即时及1d时下降，第4天时渐趋恢复，与0.67kPa各组相比，1.33kPa气腹压各组出现的变化更加明显。结论：CO2气腹可引起慢性肾功能衰竭肾脏功能改变；气腹压力的直接压迫使肾皮质缺血及解除气腹后血流再灌注损伤可能干扰细胞中线粒体的生物氧化功能，从而导致细胞功能障碍；高气腹压对肾脏的影响更明显。     

胰腺腺泡细胞钙超负荷在诱发大鼠由水肿性向坏死性胰腺炎转变中 …

OBJECTIVE: To investigate the potential of pancreatic acinar cell calcium overload in the conversion of acute edematous pancreatitis (AEP) to necrotizing pancreatitis (ANP). METHODS: Ninety-six Sprague-Dawley rats were randomized in three experimental groups. Sham-operated control (Group I) AEP (Group II) was induced by pancreatic duct ligation and intravenous injection of bombesin (100 micrograms/kg) and secretin (10 micrograms/kg). ANP (Group III) was induced same as group II but with a large dose of dextran 110,000(500 mg/kg) intravenously. Pancreatic acinar cell Ca2+ overload was studied using fluorescent probe Fura2. Cytosolic free Ca2+ concentration ([Ca2+]i) in isolated pancreatic acinar cells and Ca(2+)-ATPase activity in pancreatic cell plasma membranes were determined 1, 3, 6, 9 h respectively after treatment. RESULTS: The results showed that pancreatic acinar cell [Ca2+]i was elevated at 1 h[(213 +/- 19) nmol/L, P < 0.05] and increased to (464 +/- 29) nmol/L at 6 h(P < 0.05) in rats with ANP, pancreatic cell plasma membrane Ca(2+)-ATPase activity decreased significantly from (29.8 +/- 0.4) nmol.min-1.mgp-1 at 1 h to (18.6 +/- 0.5) nmol.min-1.mgp-1 at 9 h in rats with ANP (P < 0.05). CONCLUSIONS: In ischemia-induced conversion of AEP to ANP, there exists Ca2+ overload in the pancreatic acinar cells. The decreased pancreatic cell plasma membrane Ca(2+)-ATPase activity may be an important reason for acinar cell Ca2+ overload in the development of acute pancreatitis.     

Ca2+对新生大鼠脑缺氧缺血后CREB磷酸化及神经元凋亡的影响

目的: 探讨Ca2+对新生大鼠脑缺氧缺血(HI)后c-AMP反应元件结合蛋白(CREB)磷酸化及神经元凋亡的影响,为临床治疗缺氧缺血性脑损伤(HIBD)提供理论依据. 方法: 7 d龄SD鼠(n=126),完全随机分为3组:假手术组42只(仅作颈正中切口,游离右颈总动脉不结扎);缺氧缺血组42只、Ca2+拮抗剂加缺氧缺血组(干预组)42只. 后两组用0号线结扎右颈总动脉2 h,予以低氧2 h,制备成缺氧缺血(HI)脑损伤模型. 干预组动物分别在模型制成前、后腹腔内注射Ca2+拮抗剂尼莫地平. 用免疫组化法观察各组HI后不同时间点右侧海马CA1区P-CREB阳性细胞数;用TURNEL法观察各组HI后不同时间点右侧海马CA1区凋亡细胞数. 结果: HI组右侧海马CA1区P-CREB表达增强(P<0.01),4 h达高峰后逐渐下降;HI组的凋亡细胞数增多,48 h达高峰后逐渐下降. 干预组右侧海马CA1区P-CREB的表达较HI组无明显减少(P>0.05),但凋亡细胞数较HI组明显减少(P<0.01). 结论: Ca2+对CREB磷酸化无明显影响;Ca2+参与HI后神经元损伤;Ca2+拮抗剂可减轻神经元损伤.     

参麦对休克复苏时肠黏膜内一氧化氮、丙二醛及钙含量的影响

目的 :观察参麦注射液 (简称参麦 )对休克复苏期间肠黏膜内一氧化氮 (NO)、丙二醛 (MDA)及钙 (Ca2 + )含量的影响 ,探讨其肠黏膜保护作用机制。方法 :采用Lamson兔休克肠缺血再灌注模型 ,2 1只家兔随机分为对照组 (A组 )、单纯复苏组 (B组 )和参麦治疗组 (C组 )。C组于复苏同时首剂静注参麦 2 .1mg/kg ,随后持续泵入 7.5ml/kg·h ,直至观察结束。分别于放血前 (N)、休克 1h(S1)、再灌注 1h(R1)和 3h(R3 )观察参麦对乙状结肠黏膜内pH(pHi)及R3 时回肠黏膜NO、MDA及Ca2 + 含量的影响。结果 :C肠黏膜NO、MDA及Ca2 + 显著低于B组 (均为P <0 .0 5 ) ,其中Ca2 + 与A组无显著性差异 ,而NO及MDA含量高于A组 ,R1和R3 时肠 pHi明显高于B组 ;B组肠黏膜NO、MDA及Ca2 + 含量明显高于A组和C组 (P <0 .0 5 ) ,R1～R3 期间肠 pHi持续低水平。结论 :参麦减轻肠黏膜再灌注损伤与其改善黏膜灌注及氧合、抑制NO的产生或释放、降低氧自由基水平和防止钙超载有关。