重组生长激素预处理对大鼠肝脏热缺血再灌注损伤的作用

目的观察重组生长激素（rGH）预处理对大鼠肝脏热缺血再灌注损伤的作用。方法建立大鼠肝脏热缺血再灌注损伤模型，设立实验组，对照组和假手术组，每组10只。实验组术前连续7天皮下注射rGH，1U／Kg／d，对照组给予同体积生理盐水作为对照。实验组和对照组均予阻断第一肛门40分钟后恢复再灌注。假手术组仅作开关腹手术。分别在恢复再灌注后2小时和24小时后检测各组血清TNF-α、IL-1β水平及肝组织匀浆MDA、SOD含量。同时电镜下观察各组肝组织超微结构的变化以及应用TUNEL染色方法比较各组间细胞凋亡指数。结果实验组TNF-α水平在再灌注后2小时和24小时均低于对照组（P〈0．05），而IL-1β水平在两组之间差异无显著性。MDA水平实验组在再灌注后2小时和24小时均明显低于对照组（P〈0．05），而SOD水平在两组之间无显著性差异。对照组肝组织细胞凋亡指数明显高于实验组（P〈0．05）。电镜观察发现对照组肝细胞线粒体结构紊乱，嵴消失，细胞核染色质出现断裂，染色体碎片外溢，凋亡小体形成等现象，而实验组没有发现上述征象。结论重组生长激素预处理对大鼠肝脏热缺血再灌注损伤具有保护作用。     

急性肝损伤大鼠肝脏Fas和FasL的表达及其意义

目的 研究急性肝损伤大鼠肝脏Fas和FasL的表达情况，探讨细胞凋亡在中毒性肝损伤发病中的地位及其意义。方法 健康雄性Wistar大鼠35只，随机分为正常对照组和实验组，实验组再分为3、9、16、24、36和48h6个亚组，每组5只。制备四氯化碳中毒性肝损伤动物模型，采用苏木素-伊红（HE）染色，光镜下观察肝组织损伤情况，采用免疫组化方法测定不同时间点肝组织Fas和FasL的表达，采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法（TUNEL）观察肝细胞凋亡情况。同时测定各时间点血清丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）和肝组织超氧化物歧化酶（SOD）活性、肝组织丙二醛（MDA）含量变化。结果 Fas和FasL在正常大鼠肝细胞中未见表达，实验组3h后即开始有明显表达，并随时间延长表达相应增强；病理学和TUNEL检测结果均显示肝脏有严重损伤，大量肝细胞发生凋亡。大鼠染毒后血清ALT、AST活性和肝组织MDA含量明显升高，肝组织SOD活性显著降低，与正常对照组比较差异均十分显著（P〈O．05或P〈O．01）。结论 大鼠急性肝损伤时Fas和FasL表达显著增加，和肝细胞凋亡变化相一致，提示Fas／Fasl。系统及介导的细胞凋亡反应在中毒性肝损伤的发病机制中可能占有重要地位。     

冷保存-再灌注损伤对大鼠移植肝胆管上皮细胞凋亡及6cl-2／6ax表达的影响

背景：移植肝胆管上皮细胞凋亡是影响肝移植后胆道功能恢复的因素之一，调控基因bcl-2／bax可能对胆管上皮细胞的生存起到决定作用。 目的：观察缺血-再灌注损伤后大鼠肝内胆管上皮细胞的凋亡及调控基因bcl-2／baxmRNA表达的变化。 设计、时间及地点：动物实验，细胞形态学观察，于2008-02／08在解放军第三军医大学西南医院肝胆外科研究所实验室完成。 材料：健康雄性Wistar大鼠100只，随机分为3组：供肝冷保存1h组40只，冷保存12h组40只，对照组20只。 方法：供肝冷保存1，12h组，组内随机配对，体质量相对较轻的大鼠做为供体，供肝置于4℃器官保存液中，分别保存1、12h后行原位肝移植，对照组只行开、关腹手术。在“两套袖法”基础上，以“支架法”建立动脉化大鼠原位肝移植模型，供受体肝总动脉采用改良“支架法”进行端端吻合，重建肝动脉血供。 主要观察指标：分别于移植后1，3，7，14d检测血清总胆红素、碱性磷酸酶及肝内胆管上皮细胞的凋亡，实时荧光定量RT-PCR法检测胆管h皮细胞内bcl-2mRNA和baxmRNA的表达。 结果：保存1h组移植后1，3d可见轻度胆道损伤的血清学及病理学表现，肝内胆管上皮细胞凋亡指数分别为（4．62±0．23）％，（3．42±0．22）％，（2．91±0．23）％，（2．87±0．16）％，且在移植后7d即与对照组无明显差异。在保存12h组移植后1，3，7d，胆汁郁积征象明显，伴有严重的胆管损伤病理学改变，且肝内胆管上皮细胞凋亡指数明显高于保存1h组和对照组，分别为（6．51±0．33）％，（8．52±0．36）％，（3．51±0.27）％，（2．91±0．28）％。在移植后各时相点，保存1h组肝内胆管上皮细胞内bcl-2 mRNA／bax mRNA比值分别为（1．12±0．12）％，（1．34±0．13）％，（1．51±0．14）％，（1．60±0．15）％，在移植后7d即接近对照组水平，而保存12h组则为（0.90±0．08）％，（0．79±0．02）％，（1．36±0．12）％，（1．59±0．14）％，在移植后7d仍明显低于保存1h组和对照组，且与肝内胆管上皮细胞凋亡指数显著负相关（P=0．029）。 结论：冷保存时间延长导致胆道功能严重损伤，导致肝内胆管上皮细胞内bcl-2 mRNA／bax mRNA下调，促进移植后早期肝内胆管上皮细胞的凋亡。     

构建四氯化碳诱导的家兔肝纤维化模型

背景：四氯化碳诱导的大鼠肝纤维化模型常用于抗肝纤维化药物的筛选和评价，但目前很少有四氯化碳诱导兔肝纤维化模型的报道。目的：建立家兔肝纤维化动物模型，并观察造模过程中动物的肝脏功能和组织病理学变化。设计、时间及地点：随机对照动物实验，于2007-12／2008—04存解放军成都军区昆明总医院实验动物巾心完成。材料：40只普通级日本大耳家兔，雌雄各半，体质量1．75～2．25k，用于建立家兔肝纤维化动物模型。方法：40只家兔采用随机数字表法分为实验组m=30）和对照组（n=10）。实验组腹腔注射40gm四氯化碳橄榄油溶液，对照组腹腔注射等董生理盐水。1-3周四氯化碳剂量为0．1～0．2mL／kg，根据动物的情况每周注射2次：3-6周四氯化碳剂量调整为0．3-0．4mL／kg；6～8周为0．4～0．5mL／kg。于注药后4，8，12周分别留取肝组织和血清标本，进行苏木精一伊红染色病理观察和生化检测。主要观察指标：实验家兔肝脏大体及病理学改变，静脉血生化指标的变化。结果：纳入口本大耳家兔40只，造模20d时，实验组家兔死广4只，原因主要为急性肝坏死及对药物的耐受性差。40d时死亡1只；50d腹腔注射因药物误入血管死亡1只。①对照组家兔肝脏外观呈暗红包，病理切片示：肝小叶结构完整，肝细胞围绕中央静脉呈放射状排列。实验组8周时，肝脏呈暗紫色，表面有轻微粟粒样改变，病理切片示：肝细胞点状及点灶状坏死，汇管区炎症细胞浸润，呈早期纤维化症状。12周时，肝脏呈灰褐色，有较明显粟粒样改变。病理切片示：肝小叶结构破坏，肝索排列紊乱，肝细胞脂肪变性，问质纤维组织增生，有炎性细胞浸润，为明显肝纤维化症状。③家兔血生化指标随着注药时间的延长，白蛋白含量及白球蛋白比值逐渐下降，球蛋白、间接胆红素、直接胆红素逐渐升高，谷丙转氨酶、谷草转氨酶前期明显升高后期又有所下降。结论：长期给予四氯化碳可导致家兔的肝纤维化形成，并有较明显的阶段性变化。     

兔胆管形伤后一期修补缝线粗细的选择

本实验以家兔为实验对象，建立胆管损伤模型，１２只兔分为４组，一组作为对照，胆总管只游离，另外三组胆总管纵形伤后分别以６／０，７／０及９／０无损伤锦纶缝线按显微外科手术进行修补，术后不置管。２周后６／０缝线组肝脏有广泛的肝细胞变性，胆管明显扩张；７／０缝线组小片状肝细胞变性，胆管扩张不明显；９／０组与对照组相比，肝脏无明显改变，胆管扩张无显著性差异（Ｐ〉０．０５）。认为对术中发现的直径２￣３ｍｍ肝胆     

肝门部冷冻对肝脏血流动力学影响的实验研究

目的：探讨第一肝门深低温冷冻对肝脏血流动力学的影响。方法：选健康小猪１５只,实验组８只,阻断肝门,用冷冻头深低温冷冻第一肝门。对照组７只,仅阻断肝门。以彩色多普勒观察肝动脉及门静脉血流动力学变化,同时做肝功能及肝脏病理检查。结果：实验组动物术后肝动脉阻力指数、搏动指数增加,肝动脉、门静脉血流减慢、血流量减少,肝动脉、门静脉结构无明显改变;胆管系统不可逆损伤;肝功能进行性损害。结论：深低温冷冻第一肝门会严重影响肝动脉、门静脉血流动力学     

高密度脂蛋白对严重烧伤大鼠肝组织保护的组织学观察

目的：探讨高密度脂蛋白（HDL）对严重烧伤大鼠肝脏的保护作用。方法：制作大鼠30％体表Ⅲ度烫伤模型，观察正常对照组（不作任何处理），烧伤组（烫伤后30min补充平衡溶液）及实验组（烫伤后立即静脉注入HDL）。伤后12、24、48、72h4个时间点的肝组织学变化和细胞间粘附分子1（ICAml）的表达。结果：（1）组织学观察：烫伤后各组大鼠肝细胞均有不同程度损伤，其中以烧伤组伤后24h最重，肝窦扩张充血，窦内炎细胞浸润，肝细胞变性，点灶性坏死，实验组24h肝组织学改变与烧伤组比较上述损伤明显改善。正常对照组肝组织结构基本正常。（2）ICAm-1免疫组化检测：正常对照组无表达，烧伤组与实验组ICAm-1平均表达率分别为81．6％（49／60）及36．6％（22／60），两组24h时段的表达率分别为86．6％（13／15）及20％（3／15），烧伤组表达强度明显高于实验组（P〈O．01），而两组各其他时段表达强度差异无显著性（P〉0．05）。结论：严重烧伤大鼠早期应用HDL对抑制肝细胞中ICAm-1的表达，减少肝细胞免疫损伤有良好的效果。     

丹参对离体大鼠肝组织保护作用的实验研究

目的：探讨丹参对离体低温保存大鼠肝组织的保护作用及作用机理。方法：供肝切取采用模拟临床肝移植的标准取肝法，离体肝组织置于4℃保护液中。将72只SD大鼠随机分为3组：对照组（A组）32只（再根据不同保存时间分为1、2、3、6h4个亚组，每组各8只）、实验组（B组）32只（再根据不同保存时间分为1、2、3、6h4个亚组，每组各8只）和正常对照组8只（设为保存0h组）。肝脏保存1、2、3、6h后，测定肝细胞内三磷酸腺苷（ATP）等的含量，线粒体Ca^2＋含量及Ca^2＋-ATP酶活性。观察实验组、对照组肝细胞及线粒体形态学改变。结果：（1）实验组肝细胞ATP的含量、Ca^2＋-ATP酶活性、线粒体Ca^2＋含量与对照组比较，差异有显著性（P〈0．05）；（2）光电镜下见随保存时间延长，实验组细胞损伤较对照组轻微。结论：丹参能改善低温保存肝脏的能量代谢；减轻线粒体钙超载，减轻低温保存肝脏线粒体的损害，因此丹参能提高供肝保存质量，可用于供肝保存。     

射频消融与醋酸注射对大鼠肝脏超声影像及病理学改变的研究

目的比较射频消融与醋酸经皮注射对大鼠肝脏的超声影像及病理学改变产生的影响。方法20只健康sD大鼠均分为射频组（10只）和醋酸注射组（10只）,射频组大鼠开腹后对其肝组织给予射频消融;醋酸注射组大鼠在超声实时监视下经皮醋酸肝脏注射治疗,其后即刻应用二维B型超声及彩色多普勒超声观察肝脏局部损伤的特点;并在即刻处死后取大鼠肝脏进行病理学观察。结果大鼠肝脏射频消融灶超声影像表现为边界较为清晰的强回声团,其内未见明显血流信号;病理检查显示从射频消融灶中心到周边呈凝固性坏死一细胞变性一肉芽组织形成的演变特点。经皮醋酸肝脏注射后,注射部位超声影像表现为局限性多发点片状强回声,病理组织学检查呈现出多灶性凝固性坏死,周边肝细胞变性。结论射频消融与经皮醋酸肝脏注射均可对大鼠肝脏造成凝固性坏死,前者损伤范围较为局限;后者造成的损伤范围较为弥散。     

深低温对第一肝门部影响的实验研究

目的：了解深低温对第一肝门部的影响。方法：１５只小猪，随机分为两组，用平底冷冻头对实验组第一肝门部进行３分钟的直接深低温冷冻；对照组：仅阻断肝门３分钟，术后通过血清学、病理学等方法了解肝脏改变。结果：动物肝门部的胆管系统在冷冻后出现严重损伤，表现为进行性、不可逆的胆管坏死、狭窄、胆瘘、化脓性胆管炎等并发症，肝动脉、门静脉的结构不受影响。结论：如对第一肝门部进行直接深低温冷冻，应注意避免损伤胆管系统     

超声引导下兔肝脏VX_2肿瘤射频消融治疗术后残存瘤组织中caspase-9表达变化的意义

目的探讨兔肝脏VX_2肿瘤射频消融治疗术后残余瘤组织中天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-9(caspase-9)表达变化的意义。方法制备兔肝脏VX_2肿瘤动物模型,经超声引导下行射频消融术(RFA)治疗,人为造成肿瘤组织残余,应用免疫组化方法检测治疗后兔肝VX_2且叶,瘤残余瘤组织中caspase-9的表达情况。结果射频消融治疗术前caspase-9在兔肝脏VX_2肿瘤组织中呈低表达,为(9.6±5.3)%,治疗后即刻组残存瘤组织中的阳性表达率为(13.6±9.8)%;治疗1周后caspase-9于残存瘤组织中的阳性表达率为(46.8±1 2.8)%;治疗2周后的阳性表达率为(76.7±15.5)%。结论射频消融术可以诱导兔肝VX_2肿瘤残余瘤组织中的肿瘤细胞凋亡,从而起到进一步的治疗作用。     

彩色多普勒超声显像在肝移植术前的诊断价值

目的探讨彩色多普勒超声显像在肝移植术前的诊断价值。方法术前应用CDFI对77例欲实施肝移植病人的门静脉、肝动脉、肝静脉、下腔静脉进行检测，测量其内径、血流速度、血流方向，并检测肝肿瘤的部位、形态、大小、血管、胆道受侵情况及远处转移情况。结果肝动脉未显示5例，2例为肝动脉变异；下腔静脉栓塞1例；门静脉栓子9例，其中血栓3例，瘤栓6例；1例将周围开放的侧支循环误认为门静脉，出现假阴性。肝肿瘤阻塞胆管引起肝内胆管扩张1例。腹膜后淋巴结肿大1例。结论CDFI在肝移植术前能准确评估肝动脉、门静脉、下腔静脉、胆道情况，并发现远处转移情况，为临床手术提供重要依据。     

冷循环射频消融术治疗晚期非小细胞肺癌的临床研究

目的:探讨冷循环射频消融术(RFA)治疗晚期非小细胞肺癌的疗效。方法:76例晚期非小细胞肺癌患者行冷循环射频消融术治疗,术后3个月通过CT平扫和增强扫描评价疗效。结果:本组无手术死亡,均成功施行RFA;术后3个月复查CT,大多数肿瘤较术前有不同程度的固缩,肿瘤密度明显减低(P<0.05),其中CR6例,PR46例,MR16例,NC8例。结论:冷循环射频消融术治疗晚期非小细胞肺癌近期效果显著,可作为晚期肺癌综合治疗措施之一。     

Fate tracing of mature hepatocytes in mouse liver homeostasis and regeneration

Recent evidence has contradicted the prevailing view that homeostasis and regeneration of the adult liver are mediated by self duplication of lineage-restricted hepatocytes and biliary epithelial cells. These new data suggest that liver progenitor cells do not function solely as a backup system in chronic liver injury; rather, they also produce hepatocytes after acute injury and are in fact the main source of new hepatocytes during normal hepatocyte turnover. In addition, other evidence suggests that hepatocytes are capable of lineage conversion, acting as precursors of biliary epithelial cells during biliary injury. To test these concepts, we generated a hepatocyte fate-tracing model based on timed and specific Cre recombinase expression and marker gene activation in all hepatocytes of adult Rosa26 reporter mice with an adenoassociated viral vector. We found that newly formed hepatocytes derived from preexisting hepatocytes in the normal liver and that liver progenitor cells contributed minimally to acute hepatocyte regeneration. Further, we found no evidence that biliary injury induced conversion of hepatocytes into biliary epithelial cells. These results therefore restore the previously prevailing paradigms of liver homeostasis and regeneration. In addition, our new vector system will be a valuable tool for timed, efficient, and specific loop out of floxed sequences in hepatocytes.     

经皮肝穿刺射频消融治疗肝癌术后严重并发症的观察及护理

目的探讨经皮肝穿刺射频消融治疗肝癌术后严重并发症的临床观察及护理对策。方法 2006年1月至2009年12月收治939例经病理或临床证实为原发性肝癌或转移性肝癌的患者,共行1 098例次经皮肝穿刺射频消融治疗,术后定期随访,了解发生严重并发症的原因并给予针对性护理措施。结果发生严重并发症9例,发生率为0.82%(9/1 098),并发症相关死亡率为11.1%(1/9);其中胆道损伤4例(胆道出血1例)、胸腔内出血2例、腹腔内出血3例(1例死亡)。结论经皮肝穿刺肝癌射频消融术虽然创伤小、安全性高、疗效好,但对于肿瘤位于肝门区、凝血功能较差的患者,射频消融治疗可能发生严重并发症(如胆道损伤及胸腹腔内出血),围术期护理应加强相关症状的观察,做到早发现、早干预,以改善患者预后。     

Human intrahepatic biliary epithelial cells proliferate in vitro in response to human hepatocyte growth factor.

In previous studies, intrahepatic human biliary epithelial cells (BEC) were isolated in high purity. However, these cells demonstrated only limited growth responses. Here we report that human BEC proliferate in response to human hepatocyte growth factor (hHGF), retain BEC-specific phenotype, and can be serially passaged. BEC showed dose-dependent growth in response to 0.01-100 ng/ml hHGF. The maximum S-phase labeling index reached 40% with half-maximal stimulation at 1 ng/ml. The response of cells from normal and primary biliary cirrhotic liver to hHGF was similar. Cultures were immunostained with specific antibodies and then processed for [3H]thymidine autoradiography. Proliferating cells expressed BEC-specific markers (HEA125 and CK-19), but were negative for desmin and factor VIII-related antigen. Occasional vimentin-positive cells were observed, but these were nonproliferative. In conclusion, cells responding to hHGF were clearly BEC in origin. The observation that HGF is mitogenic for BEC as well as hepatocytes has important implications. First, greater yields of intrahepatic BEC are available for subsequent studies of the pathogenesis and etiology of diseases of the biliary epithelium. Secondly, some means of regulating the cellular response to HGF in vivo must operate, in that HGF levels rise early after partial hepatectomy and yet BEC proliferate 24 h later than hepatocytes.     

Localization of actin and cytokeratin in hepatocytes and biliary epithelial cells in normal human livers using a low temperature resin and post-embedding immunohistochemistry

Using a low temperature resin Lowicryl K4M and post-embedding immunogold labeling, localization of actin and cytokeratin was examined in hepatocytes and biliary epithelial cells in normal human livers. Preservation of the liver tissues was satisfactory at the electron microscopic level. In immunolabeling of actin, gold particles were mainly found on microvilli and around the junctional complexes and at cell borders in the hepatocytes as well as biliary epithelial cells. In immunolabeling of cytokeratin, the gold particles were rather preferentially found in the perinuclear cytoplasm and around the junctional complexes in the biliary epithelial cells and hepatocytes. These particles were mainly found to be located on the intermediate filaments at higher magnification, although a considerable number of intermediate filaments were not labeled in the hepatocytes and biliary epithelial cells. Double straining method using the gold particles of different sizes clearly confirmed the abovementioned distribution of actin and cytokeratin in the same cells. From these observations, it was suggested that post-embedding immunoelectron microscopy using Lowicryl K4M is a useful tool for analysis of cytoskeletal organization in the liver tissue.     

超声监测重型肝炎患者肝内胆管回声变化的临床意义

目的 探讨超声监测重型肝炎患者门静脉右支前方肝内胆管超声表现的临床意义.方法 对57例接受住院治疗的重型肝炎患者进行超声监测,常规检查肝脏大小、门静脉血流动力学变化、胆囊及肝内胆管变化及腹腔积液等.观察治疗过程中57例重型肝炎患者肝内胆管回声变化和血总胆红素水平变化.结果 治疗过程中,57例重型肝炎患者中15例(15/57,26.3%)出现肝内胆管回声变化,42例(42/57,73.7%)肝内胆管回声无变化.肝内胆管回声变化组患者均表现为门静脉右支前方肝内胆管壁回声增厚、增强及管腔结构模糊不清,患者血总胆红素最高值的平均值为(457.8±141.1)μmol/L,明显高于肝内胆管回声无变化组患者的(299.9±116.1)μmol/L,且差异有统计学意义(t=3.89,P<0.05).肝内胆管回声变化组中12例病情好转患者肝内胆管回声变化逐渐消退,而3例死亡患者此声像改变持续存在.结论 治疗过程中超声监测重型肝炎患者门静脉右支前方肝内胆管回声变化对临床观察重型肝炎的治疗效果及判断预后有重要提示作用.     

Ultrasound appearances of intra- and extrahepatic biliary ascariasis

Background: To determine the range of ultrasonographic (US) appearances of Ascaris lumbricoides roundworms in the biliary system, their distribution in the intra- and extrahepatic parts of the system, and associated features. Methods: All cases of biliary ascariasis during a 10-year period were reviewed. There were 42 cases in which diagnosis was based on established US criteria, and 2 cases diagnosed surgically in which US had been negative. These 44 cases occurred in 36 patients. Results: In the US-diagnosed cases, worms were present in intrahepatic ducts in 32 cases, in the main duct in 37, and in the gallbladder in eight. In six cases, the liver was lifted off the main portal vein by a bundle of worms obliterating the lumen of the main bile duct. Worms packing and dilating intrahepatic ducts produced pseudotumorous appearances in the liver in four cases and bundlelike appearances in three. Worms were also seen in the pancreatic duct in two cases. Stones in intrahepatic ducts were present in 12 patients. Conclusion: Biliary ascariasis should be searched for inside and outside the liver. The appearances of bundles and boluses are different from those of single worms. Intra- and extrahepatic biliary stones may be present. Received: 7/30/96/Accepted: 9/4/96