补肾活血中药对体外培养成骨细胞活性的影响

目的研究补肾活血中药对体外培养成骨细胞活性的影响.方法取二次酶消化法培养的胎鼠颅骨第三代成骨细胞,随机分为5组,即:细胞对照组、空白血清组、含药血清组、原药组、阳性对照药α D3组,分别加入普通细胞培养液、含空白血清及不同浓度补肾活血中药含药血清、补肾活血中药原药液、阳性对照药(αD3)的条件培养液,分别在培养第3天和第6天进行各试验组成骨细胞碱性磷酸酶及骨钙蛋白分泌量测定,观察补肾活血中药含药血清及原药液对成骨细胞活性的影响.结果含药血清组成骨细胞活性指标碱性磷酸酶(ALP)值在培养第3天均低于空白血清组,且与含药血清浓度呈负相关关系;第6天,含药血清组各浓度组ALP值明显升高,均显著高于空白血清组,ALP值与含药血清浓度存在正相关关系;空白血清组ALP值在培养第6天时下降,其均值低于培养第3天ALP值.培养第3天及第6天,各浓度原药组ALP值均高于细胞对照组及αD3组;ALP值与原药浓度呈正相关关系.含药血清组及中药原药组骨钙素(OC)含量显著高于空白血清及其他各对照组.结论补肾活血中药含药血清及原药能够直接作用于体外培养的成骨细胞,促进成骨细胞增殖,增强其分泌活性;可延长成骨细胞活性分泌期,使其活性分泌高峰后移而峰值升高,增加其活性分泌总量.     

补肾中药对体外培养成骨细胞增殖和功能的影响

目的:观察补肾中药活性成分对体外培养成骨细胞增殖和功能的影响.方法:体外培养成骨细胞,观察补肾中药含药血清对成骨细胞增殖率和ALP活性的影响.结果:补肾中药含药血清对成骨细胞增殖能力和ALP活性有增强作用.结论:补肾中药活性成分对体外培养成骨细胞的增殖和功能有促进作用.     

补肾健脾活血方对大鼠成骨细胞增殖的影响

目的:观察补肾健脾活血方中药含药血清对大鼠成骨细胞增殖的影响.方法:制备补肾健脾活血方中药含药血清,取不同浓度剂量干预体外培养的成骨细胞,用MTT检测成骨细胞增殖率.结果:补肾健脾活血方含药血清能明显增加成骨细胞增殖率形成,且与含药血清浓度呈正相关.结论:补肾健脾活血方能明显促进成骨细胞的增殖,并能促进成骨细胞对骨机质的功能.     

壮骨止痛胶囊含药血清对大鼠成骨样细胞增殖分化影响的实验研究

【目的】观察壮骨止痛胶囊含药血清对成骨细胞增殖、分化的影响,为明确壮骨止痛胶囊防治骨质疏松症的作用机制提供实验依据。【方法】取2代培养的大鼠成骨细胞,在壮骨止痛胶囊含药血清为40％的浓度中培养。观察细胞的生长及钙结节的形成,碱性磷酸酶(ALP)测定成骨细胞增殖和分化,噻唑蓝(MTT)法测成骨细胞生长曲线。【结果】成骨细胞在6d可铺满瓶壁,30d可形成钙结节,壮骨止痛胶囊含药血清可促进成骨细胞的增殖、ALP的分泌。【结论】壮骨止痛胶囊含药血清可促进大鼠成骨细胞的增殖、分化。壮骨止痛胶囊含药血清可能通过直接促进成骨细胞增殖、分化,从而防治骨质疏松症。     

复方中药含药血清对大鼠成骨细胞增殖及矿化功能的影响

目的：观察补肾健脾活血方中药含药血清对大鼠成骨细胞增殖及矿化功能的影响。方法：制备补肾健脾活血方复方中药含药血清，取不同浓度剂量干预体外培养的成骨细胞，用MTT法检测成骨细胞增殖率，用茜素红染色法显示矿化结节的形成。结果：补肾健脾活血方含药血清能明显增加成骨细胞增殖率和矿化结节形成数，且与含药血清浓度呈正相关。结论：补肾健脾活血方能明显促进成骨细胞的增殖，并能促进成骨细胞对骨机质的矿化功能。     

丹仙康骨胶囊对培养成骨细胞增殖分化的影响

目的 :为了解补肾活血中药丹仙康骨胶囊对体外培养成骨细胞的作用。方法 :应用MTT ,对硝基苯磷酸盐法及骨钙素含量放免测定法 ,观察丹仙康骨胶囊对成骨细胞增殖与分化作用的影响。结果 :丹仙康骨胶囊刺激成骨细胞增殖 ,提高ALP活性及骨钙素含量。结论 :丹仙康骨胶囊具有刺激体外成骨细胞增殖分化的功能     

抗骨增生胶囊含药血清对大鼠成骨细胞增殖、分化的影响

目的探讨抗骨增生胶囊含药血清对大鼠成骨细胞增殖、分化及骨保护蛋白(OPG)和核因子-кB受体活化子配体(RANKL)蛋白表达的影响。方法采用中药血清药理学方法制备含抗骨增生胶囊大鼠血清。取乳鼠颅骨,利用复合胶原蛋白酶反复消化,离心,体外培养成骨细胞。加入不同浓度的抗骨增生胶囊含药血清进行干预,噻唑蓝(MTT)法检测中药血清对成骨细胞增殖的影响,测定碱性磷酸酶(ALP)活性,Western Blot检测OPG和RANKL蛋白表达。结果成骨细胞经抗骨增生胶囊含药血清作用后,细胞的生长呈现不同程度的增殖,中、高剂量中药组在24、48、72 h均有明显的促进作用(P0.01),且呈剂量依赖性。低剂量中药组在24、48 h时与空白对照组比较差异无统计学意义(P0.05),72 h时作用较强(P0.05)。除低剂量组培养24 h外,低、中、高剂量中药组培养24、48、72 h后,ALP分泌均呈不同程度增加,均有明显的促进作用(P0.01)。成骨细胞经过抗骨增生胶囊含药血清低、中、高剂量作用72 h后,对比值进行统计分析,与空白对照组比较,OPG表达明显升高(P0.01),RANKL表达明显降低(P0.01)。结论抗骨增生胶囊含药血清可以促进成骨细胞的增值、分化,从而促进骨形成。     

补肾活血复方含药血清对大鼠成骨细胞磷酸化GSK-3β、p38MAPK及ERK1/2蛋白的影响

目的:观察补肾活血复方含药血清对大鼠成骨细胞磷酸化糖原合成激酶3β(GSK-3β)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)及细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)蛋白的作用。方法:3月龄SD雌性大鼠灌胃制备空白血清和含药血清,并分离培养1日龄新生鼠颅骨成骨细胞。实验分为空白血清组和含药血清组,分别采用MTT、ELISA、Western-blot等方法检测两组成骨细胞的增殖、ALP和BGP的分泌及磷酸化GSK-3β、p38 MAPK和ERK1/2蛋白的变化。结果:与空白血清组相比,含药血清组可明显促进成骨细胞的增殖、ALP和BGP的分泌,并促进胞内磷酸化p38 MAPK和ERK1/2蛋白的表达,对磷酸化GSK-3β蛋白的表达未见明显影响。结论:补肾活血复方含药血清可促进大鼠成骨细胞的增殖和分化,提高p38 MAPK和ERK1/2蛋白磷酸化水平。     

补肾活血方含药血清通过PI3K/Akt信号通路促进成骨细胞增殖分化研究

目的：观察补肾活血方含药血清对人成骨细胞增殖分化以及PI3K/Akt信号通路的影响,探讨补肾活血方防治骨质疏松症的作用机制。方法：通过新西兰大白兔制备补肾活血方含药血清,将人成骨细胞株分为空白组（Control组）、补肾活血方组（Z组）、补肾活血方含药血清＋10%μmol/L的抑制剂LY294002组（Z＋LY组）,采用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）检测各组成骨细胞的增殖情况,生化方法检测成骨细胞的碱性磷酸酶（ALP）活性,Western blot法检测AKT的活化情况。结果：补肾活血方含药血清能促进成骨细胞的增殖,并使之分化增强,且较Control组差异有统计学意义（P〈0.01）;阻断PI3K/AKT信号通路后,Z＋LY组对成骨细胞增殖分化的抑制较Z组差异有统计学意义（P〈0.05）,且对成骨细胞的分化功能有显著抑制作用（P〈0.01）;Western blot结果显示,补肾活血方含药血清能促进磷酸化AKT（p-AKT）的表达,用LY294002阻断PI3K/Akt信号通路后,p-AKT表达含量明显减少（P〈0.01）。结论：补肾活血方可能通过PI3K/Akt信号通路促进成骨细胞的增殖,并促进成骨细胞分化功能,这可能是补肾活血方防治骨质疏松症的机制之一。     

补肾活血中药对大鼠骨髓间充质干细胞体外增殖的影响

目的观察补肾活血中药含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)体外增殖的影响。方法采用Percoll密度梯度离心法分离纯化大鼠骨髓间充质干细胞,体外培养,建立大鼠骨髓间充质干细胞培养体系;收集补肾活血中药的含药血清,用10%含药血清代替10%的血清,绘制生长曲线,观察补肾活血中药含药血清促进骨髓间充质干细胞体外增殖的作用。结果所培养的大鼠骨髓细胞在表型表达和细胞形态上具备MSC特征,补肾活血中药含药血清组增长速度比空白对照组明显加快,并与剂量呈正比。结论补肾活血中药含药血清能促进干细胞在体外增殖。     

补肾健脾药物血清对体外培养的成骨细胞增殖与分化的影响

目的观察补肾健脾药物血清对新生大鼠颅骨成骨细胞增殖和分化的影响.方法用多次酶消化法分离培养新生大鼠颅盖骨成骨细胞,加入含不同药物浓度的补肾健脾药物血清条件培养液共同培养;改良Gomori钙钴法染色鉴定,MTT法测定细胞增殖率,对硝基苯酚法检测碱性磷酸酶(ALP)活性.骨疏康和尼尔雌醇作为阳性对照药物.结果补肾健脾中药组成骨细胞的增殖、ALP活性均显著高于空白对照组(P＜0.05),与骨疏康和尼尔雌醇组比较有显著性差异.结论补肾健脾中药可通过增加成骨细胞的增殖与分化而促进骨形成.     

巴戟天多糖含药血清对体外成骨细胞DKK-1表达的影响

目的探讨巴戟天多糖含药血清对成骨细胞增殖、分化及DKK-1蛋白表达的影响。方法源于大鼠颅盖骨的原代成骨细胞中加入不同浓度的巴戟天多糖含药血清进行干预。MTT法观察巴戟天多糖含药血清对成骨细胞增殖的影响,用硝基苯磷酸盐(P-nitrophenyl phosphate,PNPP)偶氮法观察含药血清对成骨细胞碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性的影响,用蛋白印记法观察含药血清对成骨细胞DKK-1蛋白表达的影响。结果巴戟天多糖含药血清可使体外培养成骨细胞的增殖率明显提高(P<0.01),并能提高成骨细胞ALP活性(P<0.01)。此外,巴戟天多糖含药血清可以下调成骨细胞DKK-1蛋白的表达。结论巴戟天多糖含药血清可促进成骨细胞的增殖能力和ALP活性,并可通过下调成骨细胞DKK-1蛋白的表达影响骨代谢。     

淫羊藿总黄酮对去势大鼠骨密度的影响

目的:探讨淫羊藿总黄酮(TFE)对去势大鼠骨密度的影响及其机制。方法:采用卵巢切除的方法建立大鼠骨质疏松模型,将大鼠随机分为正常对照组,模型对照组,TFE低、中、高剂量组,β-雌二醇组6组,每组10只,分别予相应药物灌胃90d。采用双能X线骨密度仪检测TFE对去势大鼠骨密度的影响、MTT法分析TFE含药血清对体外培养的成骨细胞(OB)增殖的影响。结果:与正常对照组相比,模型对照组各项骨密度均降低且有统计学意义(P0.05,P0.01);与模型对照组相比,各给药组骨密度均上升,除TFE低、中、高剂量组的全身骨密度,TFE低剂量组的腰椎、颅骨骨密度外,股骨、第2腰椎及第2腰椎椎体骨密度均具有统计学意义(P0.05,P0.01);2.5%和5%TFE含药血清可刺激OB增殖。结论:TFE可提高去势大鼠的骨密度,其机制可能是刺激OB的增殖。     

菟丝子含药血清对成骨细胞代谢调控的影响

目的探讨菟丝子含药血清对体外培养大鼠成骨细胞代谢调控的影响。方法采用血清药理学方法制备菟丝子含药血清;采用改良的组织块法体外培养大鼠成骨细胞;分别用5%、10%、15%、20%菟丝子含药血清诱导培养成骨细胞24h、48h、72h后,MTT法检测大鼠成骨细胞的增殖情况;用对硝基苯二钠基质动力学法(PNPP)测定细胞内碱性磷酸酶(ALP)的活性;培养48h后用RT-PCR方法检测Ⅰ型胶原(COL-Ⅰ)mRNA的表达。结果 5%和10%菟丝子含药血清在48h和72h能显著促进成骨细胞增殖并提高ALP活性;在48h时10%菟丝子含药血清可促进COL-ⅠmRNA的表达。结论 10%菟丝子含药血清能够明显促进大鼠成骨细胞的增殖与分化,表明其具有促进成骨作用。     

健骨颗粒含药血清对成骨细胞增殖的影响

目的：探讨健骨颗粒含药血清对体外培养大鼠成骨细胞增殖的影响。方法：采用酶消化法培养SD大鼠成骨细胞,健骨颗粒含药血清干预,以生理盐水大鼠血清为对照,运用MTT法、流式细胞术检测成骨细胞增殖情况及细胞周期分布。结果：与同浓度生理盐水血清相比,20%健骨颗粒含药血清能明显促进体外培养成骨细胞增殖（P〈0.05）,明显降低G0/G1期细胞分数（P〈0.01或P〈0.05）,提高S期、G2/M期细胞分数和增殖指数（P〈0.01或P〈0.05）。结论：健骨颗粒含药血清能推进体外培养成骨细胞细胞周期,从而促进成骨细胞增殖。     

淫羊藿总黄酮含药血清对成骨细胞增殖、分化的影响

目的:研究淫羊藿总黄酮含药血清对体外培养成骨细胞增殖与分化功能的影响,进一步揭示淫羊藿"补肾壮阳,益精健骨"的作用机制。方法:采用中药血清药理学方法制备含淫羊藿总黄酮大鼠血清;用多次酶消化法体外培养成骨细胞;将含淫羊藿总黄酮大鼠血清(SRAT)以2.5%,5%,10%三种质量浓度分别加入新生大鼠颅骨成骨细胞培养液中,研究它们对细胞增殖与分化成熟的影响。细胞增殖采用MTT法进行分析;细胞分化并于培养第4、8、12、16天检测碱性磷酸酶活性(组织化学法)、Ⅰ-型胶原(Co-l)的表达(免疫组化法)和矿化结节(组织化学法)。结果:2.5%和5%SRAT表现出强烈的刺激细胞增殖活性并显著提高碱性磷酸酶活性、矿化结节数和Ⅰ-型胶原表达。结论:淫羊藿总黄酮代谢产物强烈刺激成骨细胞的增殖并促进其分化成熟,说明淫羊藿总黄酮代谢产物具有促进骨形成活性。     

复方血尿停经肝微粒体代谢后对肾小球系膜细胞的影响

目的探讨复方血尿停治疗以系膜增生为主要病理改变的肾小球疾病的作用机制。方法将复方血尿停与大鼠肝微粒体共同孵育后加入到肾小球系膜细胞(GMC)体外培养体系中,MTT法观察细胞增殖情况,放射免疫法测定白细胞介素-6(IL-6)、内皮素-1(ET-1)水平,速率法检测乳酸脱氢酶(LDH)的含量。结果经肝微粒体代谢后,复方血尿停2、4、8mg/mL均抑制GMC的增殖及IL-6、ET-1的产生,且呈剂量依赖方式。结论复方血尿停能抑制IL-6、ET-1的分泌和GMC的增殖,此作用可能是其治疗系膜增生性肾小球疾病的作用机制之一。     

肾系膜细胞在补肾药物基础上进一步上调成骨细胞collagenⅠ和cbfα1基因表达

目的:观察系膜细胞是否影响补肾药物对成骨细胞的作用。方法:空白组大鼠灌服蒸馏水,药物组大鼠以熟地鳖甲1:1配比制成浸膏,3.3g浸膏/kg体质量/d灌服,3d后取血离心,获得无药血清和熟地鳖甲含药血清。无药血清、熟地黄鳖甲含药血清及肾系膜细胞处理的熟地鳖甲含药血清作用于成骨细胞3d,MTT法观察成骨细胞增殖率,实时荧光定量PCR检测成骨细胞Ⅰ型胶原(collagenⅠ)和核心结合因子α1(cbfα1)基因表达。结果:熟地黄、鳖甲含药血清可促进成骨细胞增殖,经肾系膜细胞处理后的含药血清进一步促进细胞增殖(P0.05),荧光定量PCR显示含药血清组成骨细胞collagenⅠ和cbfα1基因表达量明显上调(P0.05),经肾系膜细胞处理后的含药血清2种基因表达量进一步增加(P0.05)。结论:肾脏固有细胞——肾系膜细胞可在补肾药物基础上进一步促进成骨细胞的增殖和成骨相关基因的表达。     

中药骨康对去势大鼠骨吸收与骨形成影响的实验研究

目的：评价中药骨康防治骨质疏松症的作用。方法：60只雌性大鼠随机分正常组，模型组，骨康防治组（高、中、低三个剂量组）及尼尔雌醇防治组，除正常组其余各组均切除卵巢，实验前后检测血清E2、IL-6、BGP、ALP和尿HOP含量，实验结束前检测骨密度。结果：骨康防治组骨密度和血清E2含量高于模型组，血清IL-6及尿HOP含量明显低于模型组。结论：去卵巢引起骨吸收加速，这可能与E2的水平较低及IL-6水平较高有关，骨康可防止去卵巢后的骨吸收，这可能与其提高体内E2含量有关，E2含量的提高，IL-6分泌减少，从而抑制骨吸收。