人参皂甙Rh2诱导C6胶质瘤细胞凋亡的实验研究

目的:观察不同浓度人参皂甙Rh2(G-Rh2)对C6胶质瘤细胞的诱导凋亡作用,并在分子水平探讨其作用机理。方法:细胞计数法检测细胞增殖,流式细胞仪分析细胞的DNA组织含量变化,电镜下观察细胞的超微结构改变。结果:1)不同浓度G-Rh22、4、8μmol/L对C6胶质瘤细胞有增殖抑制作用,且呈明显量效关系;2)流式细胞术分析经G-Rh2作用72h的C6胶质瘤细胞的DNA组织直方图提示有凋亡发生;3)不同浓度G-Rh22、4、8μmol/L可使G0/G1期细胞比率下降(P<0.05,P<0.01),S期细胞比率明显升高(P<0.05,P<0.01),而G2/M期细胞相对稳定(P>0.05);4)电镜结果提示经4μmol/LG-Rh2作用72h的C6细胞呈典型的凋亡形态学改变。结论:G-Rh2对C6胶质瘤细胞有诱导凋亡作用,呈剂量依赖性抑制C6胶质瘤细胞增殖,对脑胶质瘤的治疗有重要意义。     

人参皂甙-Rh2诱导人肝癌Bel-7404细胞凋亡的作用

目的 研究人参皂甙-Rh2(GS-Rh2)诱导肝癌Bel-7404细胞凋亡的作用。方法 应用流式细胞术检测GS-Rh2对肝癌Bel-7404细胞凋亡的诱导作用以及对细胞周期的影响。结果 流式细胞术证实GS-Rh2具有诱导凋亡作用。细胞凋亡（AR）随GS-Rh2浓度增高和作用时间延长而升高，当GS-Rh2浓度由12.5μg/ml增至50.0μg/ml时，AR由16.2%升高至27.5%，但GS-Rh2浓度由50.0μg/ml进一步增至100.0μg/ml后，AR未见相应升高；GS-Rh2可将细胞周期阻滞于G1期。结论 GS-Rh2能诱导体外培养的Bel-7404细胞凋亡；GS-Rh2诱导Bel-7404细胞凋亡可能与细胞周期阻滞有关。     

人参皂甙Rg1协同诱生LAK细胞的抗瘤活性

淋巴因子激活性杀伤细胞(LAK细胞)过继输入疗法已经被证明是一种有效的抗肿瘤免疫治疗措施,但此疗法的临床应用却受到LSK细胞抗瘤活性尚低问题的困扰.我们曾经证明人参总皂甙能够增强LAK细胞杀伤新鲜急性白血病细胞的活性,本文进一步检测了人参总皂甙的单体之一人参皂甙Rg_1(Ginsenoside Rg_1)对LAK细胞抗瘤活性的影响,报告如下.     

低剂量IL-2诱导的人胚胎脾脏CD_3AK细胞治疗晚期恶性肿瘤效果及实验研究

用ＣＤ３ＭｃＡｂ和低剂量ＩＬ－２（５００Ｕ／ｍｌ）诱导的人胎脾ＣＤ３ＡＫ细胞治疗４３例晚期恶性肿瘤患者，取得疗效。经２～８疗程治疗，多数患者症状缓解，生活质量改善，ＰＲ＋ＭＲ１８例（４１．９％），Ｓ＋Ｐ２５例（５８．１％），死亡９例（２０．９％）。全组无严重毒副反应发生。同时比较ＣＤ３ＡＫ细胞和常规ＬＡＫ细胞体外增殖及其杀伤活性，表明前者１４４ｈ增殖力高于后者（Ｐ＜０．０１），靶细胞抑制率二者无显著差异（Ｐ＞０．０５）。初步表明ＣＤ３ＡＫ／ＩＬ－２疗法效果肯定，毒副作用小，可能成为继ＬＡＫ／ＩＬ－２之后更为有效的肿瘤辅助治疗。     

人参皂甙 Rh2对人肝癌细胞 SMMC-7721的诱导分化作用

背景与目的:目前寻找低毒高效的分化诱导剂是肿瘤诱导分化治疗的关键.人参具有抗肿瘤、抗衰老、抗辐射等多种生物学活性,其主要的活性有效成分人参皂甙 Rh2( ginsenoside Rh2,G-Rh2)具有较强的抗癌活性,但其抗肿瘤机制还不十分清楚.因此,本研究探讨 G-Rh2对人肝癌细胞株 SMMC-7721的生长抑制作用及抗癌机制.方法:以 MTT法、光镜、电子显微镜观察 G-Rh2对 SMMC-7721细胞增殖、形态、超微结构的影响.用免疫组化染色和 ELISA法检测细胞浆中甲胎蛋白( alpha-fetoprotein, AFP)合成情况,酶促反应试剂盒检测细胞浆中碱性磷酸酶( alkaline phosphatase, ALP)和γ谷氨酰转肽酶(γ-glutamyltranspeptidase,γ-GT)活性,放射免疫法检测细胞 AFP和白蛋白( albumin, Alb)分泌量,并观察 G-Rh2对以上指标的影响.结果: G-Rh2以时间依赖性和浓度依赖性抑制 SMMC-7721细胞增殖, 10 μ g/ml G-Rh2作用 6天抑制率达 50%;而 20 μ g/ml G-Rh2作用 4天抑制率近 50%.经 20 μ g/ml G-Rh2作用 4天,肝癌细胞形态及亚细胞结构向正常肝细胞方向逆转. 10 μ g/ml、 20 μ g/ml G-Rh2作用 SMMC-7721细胞后, AFP合成明显下降( P< 0.05),分泌量从 6.60± 0.30下降到 2.35± 0.06( P< 0.01);γ-GT及耐热型 ALP活性显著降低( P< 0.01); ALP活性及 Alb分泌量显著升高( P< 0.01).结论: G-Rh2具有诱导人肝癌细胞 SMMC-7721向正常细胞分化的作用.     

人参皂甙 Rh2 联合顺铂对食管癌细胞的杀伤作用

目的：体外观察低剂量人参皂甙Rh2（ginsenoside Rh2,GS-Rh2）对抗肿瘤药顺铂（cisplatin,DDP）杀伤人食管癌细胞株Eca109的影响,并探讨其可能的作用机制.方法：人食管癌细胞Eca109经培养符合条件后,分别加用0.3μg/ml DDP（A组）、20μmol/ml GS-Rh2（B组）、0.3μg/ml DDP＋20μmol/ml GS-Rh2（C组）、对照组（D组）处理48小时.流式细胞仪检测各组细胞凋亡率和死亡率.高效液相色谱检测各组细胞内DDP的药物浓度.蛋白质印迹法检测各组细胞中p53表达.结果：细胞凋亡率和死亡率C组显著高于A、B两组（P＜0.05）;C组细胞内DDP的药物浓度显著高于A组细胞（P＜0.05）;C组细胞p53表达水平低于A组（P＜0.05）.结论：体外低剂量GS-Rh2能增强DDP对人食管癌细胞Eca109的杀伤作用,其作用机制可能与降低细胞内p53表达有关.     

BCG及IL-2激活膀胱癌患者PBMC及TIL细胞的抗癌活性比较

 用Whitesides法从15例膀胱移行细胞癌患者外周血及癌手术标本中获得的外周血单个核细胞（PBMC）及肿瘤浸润淋巴细胞（TIL）,分别用活BCG、死BCG及IL－2刺激培养,计算细胞增殖倍数并测定其抗癌活性。结果,死BCG对细胞并无激活作用;IL－2对细胞的诱导增殖作用强于活BCG,而其激活这两种细胞的抗癌活性低于活BCG激活的抗癌活性。BCG对免疫受抑制的PBMC及YIL细胞的激活作用可能是BCG抗肿瘤重要作用机理之一。并为BCG的进一步临床免疫治疗奠定理论基础。     

去甲斑蝥素联合IL-12、IL-15处理增强PBMC对Raja细胞的杀伤效应【创新点评：中药抗癌药物去甲斑蝥素增强PBMC对淋巴瘤的杀伤－郑胡镛】

目的:探讨细胞因子IL-2、IL-15激活的人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)对去甲斑蝥素(norcantharidin,NCTD)处理后的人Burkitt淋巴瘤Raji细胞的杀伤效应及其可能机制.方法:锥虫蓝拒染法检测NCTD对Raji细胞和PBMC细胞增殖的影响;LDH释放法检测IL-2、IL-15激活后的PBMC对K562细胞和Raji细胞的杀伤;流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测IL-2、IL-15诱导后PBMC表面NKG2D的表达,以及NCTD作用前后Raji细胞表面NKG2D配体(MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3)的表达.结果:NCTD抑制Raji细胞的增殖,具有剂量、时间依赖性(P＜0.05),但对PBMC增殖无影响(P＞0.05).在效靶比为10∶1、20∶1时,IL-2、IL-15激活的PBMC对K562细胞的杀伤率较未激活的PBMC明显增高[(52.42±3.89)％vs (15.82±5.12)％,(79.55±9.22)％vs(27.67±3.66)％,P＜0.05];PBMC对NCTD处理后Raji细胞杀伤率较未经NCTD处理的Raji细胞明显增高[(23.63±6.20)％vs (5.04±1.25)％,(41.80±4.09)％ vs (8.59±2.19)％;P＜0.05],且IL-2、IL-15激活的PBMC对NCTD处理后Raji细胞的杀伤率较NCTD处理前明显提高[(38.97±2.76)％ vs(13.19±3.67)％,(63.09 ±7.30)％ vs(19.89 ±4.15)％;P＜0.05].激活后PBMC表面NKG2D表达率升高[(44.91±5.85)％vs (25.28±7.69)％,P＜0.05].NCTD作用后Raji细胞表面NKG2D的配体ULBP2表达显著升高[(12.69±3.99)％vs(1.03 ±0.42)％,P＜0.05],而其他配体MICA、MICB、ULBP1、ULBP3的表达无明显变化(P＞0.05).结论:NCTD联合细胞因子IL-2、IL-15处理能增强PBMC对Raji细胞的杀伤效应,其机制与NCTD上调Raji细胞表面ULBP2表达和细胞因子上调PBMC表面NKG2D表达有关.     

IL-2短期活化的HLA半相合的外周血单个核细胞治疗晚期恶性实体瘤初步观察

目的:初步探讨IL-2短期活化的HLA半相合的异体外周血单个核细胞(allo-mPBMCs)治疗晚期转移性/化疗抗性实体瘤的可行性。方法:11例晚期转移性/化疗抗性恶性实体瘤患者,供者为与患者HLA半相合直系亲属。供者经10μg/kg·dG-CSF动员3天后采集PBMC,体外用大剂量rhIL-2培养后回输患者。观察治疗后临床反应,采用流式细胞仪、LDH和ELISA试剂盒检测动员、活化前后表型,IL-2短期活化前后的非特异性杀瘤活性以及患者回输前后血清中各种细胞因子的含量变化。结果:11例患者回输的HLA半相合allo-mPBMCs总数达(2.5～4.3)×1010。体外经G-CSF动员后T细胞,尤其是CD4+T细胞显著下降,而NK细胞比例显著上升;经大剂量IL-2短期活化后,各种细胞亚群比例未见改变,但活化细胞(包括CD69+和CD25+细胞)亚群比例显著升高。体外实验中可观察到IL-2短期活化的allo-mPBMCs具有类似LAK样的较高的非特异性杀瘤活性。经过治疗,11例患者血清中Th1类细胞因子,如IL-2、IL-12、IFN-γ、TNF-α含量明显升高,而Th2类细胞因子,如TGF-β含量明显下降。治疗后8例观察到临床症状的缓解,或肿瘤标志物的降低,或影像学资料的改善,其中1例治疗后4个月达到部分缓解,而3例出现进展,其中2例死亡。结论:IL-2短期活化的HLA半相合的allo-mPBMCs具有明显的抗肿瘤效应,为治疗晚期转移性/化疗抗性实体瘤提供了新的希望。     

IL-15上调NKG2D表达对CIK细胞杀伤活性的增强效应

目的观察IL-15对细胞因子诱导的杀伤细胞( Cytokine-induced killer cells,CIK)NKG2D受体表达及其对食管癌EC9706细胞杀伤活性的影响。方法体外分离外周血单个核细胞,分为两组。对照组：干扰素-γ、白细胞介素-2、CD3单抗诱导培养CIK细胞。IL-15组：加用IL-15培养。流式细胞仪检测细胞免疫表型及CD3+细胞、CD56+细胞表面NKG2D的表达,LDH法测定第14天细胞在效靶比20∶1、30∶1时对EC9706细胞的杀伤活性;效靶比30∶1时,观察NKG2D单抗封闭细胞表面NKG2D分子后对两组细胞杀伤活性的影响。结果随着培养时间的延长,CIK群体细胞及CD56+细胞表面NKG2D表达逐渐增强,IL-15组与对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05);效靶比20∶1、30∶1时,IL-15组细胞对EC9706细胞的杀伤活性均较对照组明显增强,差异均有统计学意义(P＜0.05);效靶比30∶1时NKG2D单抗封闭CIK细胞表面NKG2D分子后,对照组细胞、IL-15组细胞对EC9706细胞的杀伤活性均较阻断前明显下降,差异均有统计学意义 (P＜0.05)。结论IL-15上调CIK细胞表面NKG2D分子表达,增强CIK细胞对EC9706细胞的杀伤活性,CIK细胞通过NKG2D发挥作用。     

细胞因子IL-2和IL-6对胰腺癌细胞表达VEGF-D的调节

目的探讨细胞因子白细胞介素2（IL-2）和白细胞介素6（IL-6）对胰腺癌细胞表达VEGF-D的调节。方法以细胞因子IL-2或IL-6分别刺激胰腺癌细胞株SW1990和BXPC-3后用逆转录 聚合酶链式反应技术（RT-PCR）分析其VEGF-D基因的表达。结果IL-2使细胞株SW1990和BXPC-3产生VEGF-D mRNA减少;IL 6使细胞株SW1990产生VEGF-D mRNA增加,但对细胞株BXPC-3产生VEGF-D mRNA无明显影响。结论IL-2抑制胰腺癌细胞VEGF-D mRNA的表达,从而抑制胰腺癌淋巴结转移;IL-6促进某些胰腺癌细胞VEGF-D mRNA的表达,但对胰腺癌细胞生物学特性的影响有待于进一步深入研究。     

BCL-2 Family Proteins Modulate Radiosensitivity in Human Malignant Glioma Cells

Radiotherapy is the standard treatment for glioblastoma. Here, we assessed the radiosensitivity of 12 human malignant glioma cell lines in vitro and correlated these data with irradiation-induced cell cycle changes, chemosensitivity profiles and BCL-2 family protein expression. Irradiation at 3Gy failed to cause major cell cycle perturbations. Radioresistance was associated with collateral sensitivity to the topoisomerase II inhibitors, teniposide and doxorubicin. High levels of BCL-X_L and low levels of BAX were independently linked to radioresistance. Ectopic expression of a BAX transgene induced radiosensitization in the LN-18 cell line. Thus, BCL-2 family protein expression modulates radiosensitivity in human glioma cells and targeted alterations in BCL-2 family protein expression are a promising strategy to improve the therapeutic efficacy of radiotherapy for gliomas.     

自体可溶性肿瘤抗原协同IL-2诱导外周血单个核细胞体外增殖及杀瘤作用的研究

本研究观察了胃癌自体可溶性肿瘤抗原协同IL-2诱导外周血单个核细胞(peripheral blood monoclear cells,PBMC)体外增殖及杀瘤作用.我们以生化方法提取胃癌自体可溶性抗原(rumor soluible antigen,TSA),协同IL-2体外培养淋巴细胞,MTT法测定增殖及杀瘤作用,APAAF法检测细胞表型变化.结果表明,一定剂量TSA可协同IL-2诱导PBMC增殖及杀瘤,单独TSA无此效应.促增殖效应呈时间剂量依赖特征.E/T为80:1时,TSA协同诱导的PBMC杀瘤活性为86.3%,单独IL-2诱导时为48.6%.表型测定表明,TSA协同诱导的PBMC其CD25及CD8表达均显著增高.由此可见,粗提自体胃癌抗原具有诱导T细胞增殖及杀伤肿瘤作用,提示增殖的T细胞可望用于肿瘤的临床过继免疫治疗.     

IL-2、IL-15增强免疫编辑后NK细胞NKG2D的表达及其对鼻咽癌CNE2细胞的杀伤活性

目的:观察IL-2、IL-15对免疫编辑后NK细胞NKG2D的表达及其对鼻咽癌CNE2细胞杀伤活性的影响.方法:抗CD56磁珠纯化NK细胞后分为4组:(1)编辑前NK细胞组:加入1130 U/ml IL-2;(2)单纯编辑组:NK细胞与CNE2细胞10:1混合,加入100U/ml IL-2;(3)IL-2再培养组:纯化编辑后的NK细胞,加入1 000 U/ml IL-2;(4)IL-15再培养组:纯化编辑后的NK细胞,加入10 ng/ml IL-15.24 h后,流式细胞仪检测各组NK细胞表面NKG2D的表达;LDH释放测定法测定效靶比20:1时各组NK细胞对CNE2细胞的杀伤活性.结果:编辑前NK细胞组、单纯编辑组、IL-2再培养组、IL-15再培养组NK细胞表面NKG2D的表达率分别为(97.63±0.83)%、(53.50±1.25)%、(94.47±1.00)%、(98.07±0.21)%.IL-2、IL-15再培养组NK细胞NKG2D的表达分别比单纯编辑组有显著的增加(P＜0.01),该4组NK细胞对CNE2细胞的杀伤活性分别为(35.90±3.27)%、(4.70±2.30)%、(31.70±3.56)%、(40.18±2.94)%,IL-2再培养组、IL-15再培养组明显提高编辑后NK细胞对CNE2细胞的杀伤活性(P＜0.01),IL-15的作用强于IL-2.结论:高剂量IL-2、IL-15可以上调免疫编辑后NK细胞表面NKG2D的表达,恢复编辑后NK细胞对鼻咽癌细胞CNE2的杀伤活性,IL-15的作用强于IL-2.     

血清白细胞介素2检测在恶性腹水白细胞介素2治疗中的应用

目的 对恶性腹水患者血清白细胞介素2(IL-2)水平进行测定,了解血清IL-2水平与腹腔灌注IL-2治疗疗效之间的关系,以期获得判定恶性腹水IL-2治疗疗效的指标。方法 54例恶性非肝癌性腹水患者均接受IL-2腹腔灌注治疗,治疗前应用ELISA法检测血清IL-2水平,将IL-2测定值较高的27例患者分为A组,IL-2测定值较低的27例患者分为B组。比较两组患者的治疗效果。结果 血清IL-2测定值较低组IL-2腹腔灌注治疗的有效率为77.8％(21/27),明显高于IL-2测定值较高组的51.9％(14/27,P<0.05)。结论 恶性腹水患者IL-2腹腔灌注治疗前血清IL-2水平高低与IL-2治疗的疗效明显相关,原有IL-2水平较低的患者IL-2腹腔灌注治疗的疗效较好。血清IL-2水平可作为判定IL-2腹腔灌注治疗疗效的指标。     

AKT1 and AKT2 Promote Malignant Transformation in Human Brain Glioma LN229 Cells

OBJECTIVE To confirm the role played by AKT1 and AKT2 in the β-catenin/Tcf-4 signaling pathway in promoting malignant transformation of glioma cells. METHODS LN229 cells were divided into five groups:a control group, acetone(ACE)group, acetylsalicylic acid(ASA; aspirin)group,ASA+AKT1 plasmid group and ASA+AKT2 plasmid group. Western blot and PCR were used to detect the expression of AKT1 and AKT2 after dealing with ASA and transferring AKT1/2 genes into LN229 cells. Cell proliferation was determined by flow cytometry, cell invasion was evaluated by transwell assay and cell apoptosis was detected with annexin V staining. The molecules regulating proliferation and invasion were examined by western blot analysis.RESULTS Aspirin down-regulates AKT1 and AKT2 expression by modulating R-catenin/Tcf-4 activity.AKT1 and AKT2 can enhance cell proliferation and invasion by up-regulating the expression of cyclin-D and matrix metal loprotein-9(MMP-9)in LN229 glioma cells. CONCLUSION AKT1 and AKT2 play an important role in the β-catenin/Tcf-4 signaling pathway promoting malignant transformation; AKT1 is more effective than AKT2.AKT1 and AKT2 may be potential targets for brain glioma therapy and an effective way to prevent metastasis of gliomas.     

联合应用IL－2治疗恶性肿瘤疗效分析

为了探索肿瘤生物治疗的方式和方法，我们应用白细胞介素Ⅱ（ＩＬ－２）与干扰素（ＩＦＮ－α）或香菇多糖联合应用治疗晚期恶性肿瘤１１例。每个病人均应用ＩＬ—２１～１５×１０４ｕ／天，肌肉注射，总量２～２８．５×１０４ｕ；联用ＩＦＮ－α６例，１～９×１０６ｕ／天，肌肉注射，总量４～１１４×１０６ｕ；联用香菇多糖５例，１～２ｍｇ／次，总量１２～１６ｍｇ。总客观有效率为２２％。治疗后患者生存质量提高，一些病人的免疫指标有不同程度的改善。从癌症治疗的战略上讲，生物治疗可使病人长远受益。