慢性氟中毒大鼠学习记忆损害与AKT激酶表达

目的：观察实验性慢性氟中毒大鼠脑组织中AKT激酶（AKT）表达及其学习记忆能力损害,探讨氟中毒大鼠脑组织中AKT蛋白表达水平与其学习记忆能力降低的关系.方法：SD大鼠72只,随机分为对照组、低剂量染氟组、高剂量染氟组,每组24只,雌雄各半,实验期6个月;观察氟中毒表现,Morris水迷宫检测实验大鼠学习记忆能力;分别用蛋白印迹（Western-blot）和逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测大鼠脑组织中AKT蛋白与AKT mRNA的表达.结果：经6个月饲养,低剂量及高剂量染氟组大鼠出现不同程度慢性氟中毒表现;Morris水迷宫实验中定向航行实验结果显示,高剂量染氟大鼠找台时间较对照组延长,空间探索实验显示氟中毒大鼠平台区停留时间较对照组减少（P＜0.05）;与正常对照组相比,高剂量及低剂量染氟组大鼠脑组织中AKT蛋白表达量增加（P＜0.05）,但脑组织中AKT mRNA表达水平与对照组相比差异无统计学意义（P＞0.05）.结论：慢性氟中毒可导致大鼠学习记忆能力的降低,其机制可能与大鼠脑组织中AKT蛋白表达量增加有关.     

糖基化终产物对心肌微血管内皮细胞表达MCP-1和ICAM-1的影响及机制研究

目的：观察体外孵育的牛血清白蛋白（BSA）非酶促糖基化终末产物（AGEs）对心肌微血管内皮细胞细胞间黏附分子（ICAM-1）和单核细胞趋化因子-1（MCP-）表达的影响及机制．方法：取50g／L牛血清白蛋白（BSA）、500g／LD-葡萄糖,于37℃孵箱内避光孵育12wk,制备外源性AGEs-BSA．体外培养大鼠心肌微血管内皮细胞（CMECs）．分设不同浓度梯度的AGEs实验组、BSA对照组,采用ELISA法测定MCP-1的表达,流式细胞术测定ICAM-1的表达,Western Blot法测定糖基化终末产物受体蛋白（RAGE）的表达,RT-PCR检测RAGE mRNA的表达．结果：100,200,400mg／L AGEs可显著增加心肌微血管内皮细胞ICAM-1（13．2％,14．5％,38．1％）,MCP—1[（52．5±5．5）,（116．0±3．1）,（139．6±8．7）μg/L]的表达（与对照组相比较,P〈0．05）,且在蛋白水平及mRNA水平均明显增加RAGE的表达（P〈0．05）,并呈浓度依赖性．结论：AGE—BSA可刺激心肌微血管内皮细胞过量表达ICAM-1和MCP-1,从而加速心肌微血管炎症的发生与发展．其机制可能是AGEs上调了心肌微血管内皮细胞RAGE的表达．也进一步证实了AGEs—RAGE信号系统的起动是糖尿病心肌微血管病变发生发展一个重要原因．     

慢性氟中毒大鼠脑组织中Nrf2和HO1蛋白表达

目的：观察慢性氟中毒时大鼠脑组织中核因子E2相关因子2（nuclear factor-E2-related factor 2,Nrf2）和血红素氧合酶1（heme oxygenase-1,HO1）蛋白水平表达改变,探讨氟中毒性脑损伤机制.方法：SD大鼠90只,随机分为正常对照组、染氟组及维生素E（VitE）拮抗组,实验期10个月;观察氟斑牙情况,用氟离子选择电极法测定大鼠尿氟及骨氟含量,用免疫组织化学方法检测脑组织中Nrf2和HO1蛋白表达.结果：染氟组和VitE拮抗组大鼠出现不同程度的氟斑牙,染氟组重于VitE拮抗组,差异有统计学意义（P＜0.05）;染氟组与VitE拮抗组大鼠尿氟和骨氟含量均高于对照组,染氟组高于VitE拮抗组,差异有统计学意义（P＜0.05）;免疫组化显示染氟组和VitE拮抗组大鼠脑组织中Nrf2及HO1阳性表达较对照组升高,VitE拮抗组升高程度不如染氟组,差异都有统计学意义（P＜0.05）.结论：慢性氟中毒可导致脑组织中Nrf2及HO1表达水平升高,增强细胞抗氧化能力,可能与慢性氟中毒脑损伤的机制有关.     

慢性氟中毒大鼠肝脏中P-糖蛋白和细胞核因子-κB的表达水平

目的:研究慢性氟中毒大鼠肝脏中P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)和细胞核因子κB(Nuclear factorκB,NF-κB)的表达变化,探讨氟中毒肝脏损害的发病机理.方法:将60只SD大鼠随机分为3组,即对照组、小剂量染氟组和大剂量染氟组,分别给予自来水、加10 mg/L和50 mg/L氟(NaF)的的自来水喂养6个月观察3组大鼠氟斑牙程度及尿氟,同时取大鼠肝脏;采用蛋白印迹方法检测P-gp和NF-κB的蛋白表达水平,实时荧光定量PCR方法检测NF-κB mRNA表达水平.结果:6个月后,小剂量染氟组、大剂量染氟组大鼠氟斑牙程度及尿氟含量明显高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);小剂量染氟组、大剂量染氟组大鼠肝脏中P-gp和NF-κB蛋白和mRNA表达高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);小剂量染氟组、大剂量染氟组NF-κB mRNA表达高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:慢性氟中毒引起大鼠肝脏中P-gp和NF-κB表达明显升高,这可能与氟中毒性肝脏损伤的发生机制有关.     

过量氟与大鼠骨质硬化关系的研究

目的：研究过量氟与大鼠骨质硬化发生之间的关系。方法：Wistar大鼠40只,雌雄各半,随机分为四组,其中三组分别饮用氟（F^-）浓度为25、50、100mg／L的含氟水,一组为对照组,饮用蒸馏水。3个月后采用管式炉高温燃烧水解法-氟离子选择电极法测定骨氟含量,采用氟离子选择电极法测定血清氟和尿氟含量。采用全自动生化分析仪测定血清中钙（Ca）、磷（P）及碱性磷酸酶（ALP）等指标;采用骨密度测量仪测量大鼠股骨骨密度。结果：与对照组相比,各染氟组大鼠的血清氟、骨氟、尿氟含量明显升高（P〈0．05）,血清中ALP水平明显升高（P〈0．05）,各染氟组大鼠骨密度显著高于对照组（P〈0．05）,且骨密度和骨氟含量都密切相关（r=0．493,P〈0．01）。结论：过量氟对大鼠骨质硬化的形成发挥重要作用。     

晚期糖基化终末产物受体在2型糖尿病大鼠种植体骨结合中的表达

目的 探讨晚期糖基化终末产物（advanced glycation end products,AGEs）及其受体影响种植体骨结合的可能机制。方法建立2型糖尿病大鼠模型,随机分为正常对照组、糖尿病对照组、正常种植组、糖尿病种植组,分别于正常种植组和糖尿病种植组胫骨近骺端植入纯钛种植体,于植入8周后下腔静脉采血处死大鼠,用Hitachi2850型荧光分光光度计测定血清中AGEs含量的变化,取种植侧胫骨拍X线片和骨密度测量,并制作病理标本,采用免疫组化检测种植体周围晚期糖基化终末产物受体（RAGE）的表达并作图像分析。结果4周后,糖尿病种植组和糖尿病对照组与正常对照组和正常种植组比较,骨质疏松明显,胫骨BMD明显下降,血清中AGEs含量增多;糖尿病对照组和正常对照组骨组织RAGE蛋白的阳性表达强度分别低于前两组。图像分析阳性细胞率和阳性细胞平均光密度值结果,糖尿病种植组明显高于正常种植组,糖尿病对照组明显高于正常对照组,差异有统计学意义（P〈0．05）;糖尿病种植组高于糖尿病组,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论AGEs—RAGE途径是2型DM影响种植体骨结合的机制之一。     

菩人丹超微粉对STZ诱导糖尿病大鼠视网膜病变的保护作用及其对NF-κB信号通路的影响

目的：探讨菩人丹超微粉（PRD）对糖尿病大鼠视网膜的保护作用及其对核因子κB （NF-κB）信号通路的影响,并阐明其作用机制。方法：40只Wistar大鼠随机分为正常对照组、模型组、低剂量PRD组和高剂量PRD组。给药3个月后,测定各组大鼠血糖水平,RT-PCR法检测大鼠视网膜组织中血管内皮生长因子（VEGF）和血管生成素2（Ang-2） mRNA表达水平,Western blotting法检测大鼠视网膜组织中晚期糖基化终末产物（AGEs）、晚期糖基化终末产物受体（RAGE）、NF-κB、VEGF和Ang-2蛋白表达水平。结果：与正常对照组比较,模型组大鼠血糖水平及视网膜组织中VEGF、Ang-2 mRNA表达水平和AGEs、RAGE、NF-κB、VEGF、Ang-2蛋白表达水平明显升高（P<0.05）;与模型组比较,低和高剂量PRD组大鼠血糖水平及视网膜组织中VEGF、Ang-2 mRNA表达水平和AGEs、RAGE、NF-κB、VEGF、Ang-2蛋白表达水平明显降低（P<0.05）。结论：PRD可能通过特异性阻断AGEs/RAGE/NF-κB信号通路对糖尿病大鼠视网膜起保护作用。     

AGEs对老年大鼠内皮细胞NF-κB活性与Fn mRNA表达的影响

目的：探讨糖基化终末产物（AGEs）对老年大鼠内皮细胞中NF-κB活性及纤维结合蛋白fibronectin（Fn）mRNA表达的影响。方法：取24月龄的SD大鼠主动脉内皮细胞进行原代培养．实验分为3组。A组葡萄糖（5mmol／L）的对照组;B组AGEs（25mg／L,48h）处理组;C组AGEs（50mg／L．48h）处理组。采用荧光免疫化学法检测NF-κB活性和逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）检测Fn mRNA的表达。结果：与对照组相比,AGEs呈浓度依赖性地诱导NF-κB的激活（P〈0．05）和上调Fn mRNA表达（P〈0．05）。结论：AGEs呈浓度依赖性地诱导内皮细胞NF-κB的活化、Fn的基因表达上调,这可能与糖尿病慢性血管并发症的发生发展有关。     

白松片对慢性应激抑郁模型大鼠海马突触蛋白SYT和SYN的影响

目的：观察白松片（Baisong tablet，BST）对慢性应激模型大鼠海马神经元囊泡纤夫蛋白（synaptotagmin，SYT）、突触融素（synaptophysin，SYN）的影响。方法：成年Sprague—Dawley雄性大鼠28只按体质量分层随机分为空白对照组、慢性应激抑郁模型对照组、氟西汀对照组及白松片试验组，每组7只。除空白对照组外，其余各组均给予慢性轻度不可预见性刺激。采用原位杂交及免疫印迹方法观察各组大鼠脑内SYT和SYN在海马区域的分布以及表达量的差异。结果：原位杂交及免疫印迹结果显示模型组大鼠海马SYT mRNA，SYN mRNA及蛋白表达量明显下降，与空白对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05）；氟西汀组、白松片组大鼠海马SYT mRNA，SYN mRNA及蛋白表达量显著增加．与模型组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：抑郁模型大鼠海马神经元内的突触可塑性下降。白松片能上调SYT，SYN蛋白及其mRNA的表达水平。     

七氟醚预处理对局灶性脑缺血再灌注大鼠T细胞死亡耦联基因8表达的影响

目的：观察七氟醚预处理对局灶性脑缺血再灌注大鼠缺血半暗带内T细胞死亡耦联基因8（TDAG8）表达的影响。方法：选取54只成年雄性SD大鼠,随机分为对照组、再灌注组和七氟醚组,每组18只。采用大脑中动脉内线栓阻断法（middle cerebral artery occlusion,MCAO）制造大鼠局灶性脑缺血再灌注模型。缺血2h后再灌注48h。七氟醚组在造模前吸入最低肺泡有效浓度（MAC）为1的七氟醚30min,对照组和再灌注组则吸入O2。大鼠行神经行为学评分后处死。取大脑行2,3,5-氯化三苯基四氮唑（TFC）染色,计算脑梗死容积百分比,采用蛋白印迹法和RT—PCR法检测脑缺血半暗带内的TDAG8蛋白和mRNA的表达变化。结果：①与对照组相比,再灌注组和七氟醚组脑梗死容积百分比均显著升高（P均〈0．05）;七氟醚组脑梗死容积百分比较再灌注组显著降低（P〈0．05）。②与对照组相比,再灌注组和七氟醚组TDAG8蛋白和mRNA表达均显著升高（P均〈0．05）;七氟醚组较TDAG8的表达再灌注组明显降低（P〈0．05）。结论：七氟醚预处理可降低TDAG8的表达,对脑缺血再灌注损伤具有一定保护作用。     

慢性氟中毒大鼠海马区病理学改变

目的：复制饮水型慢性氟中毒大鼠模型,观察模型大鼠大脑海马各区病理学改变及维生素E（VitE）拮抗氟中毒脑损伤的效果.方法：健康纯系SD大鼠36只,随机均分为对照组、染氟组及染氟-VitE拮抗组,雌雄各半,实验期10个月;观察大鼠氟斑牙发生情况,用氟离子选择电极法测定尿氟含量,利用光学显微镜观察各组大鼠脑组织海马病理学改变.结果：染氟组大鼠出现不同程度的氟斑牙,尿氟含量（2.35±0.51）mg/L明显高于对照组（1.50±0.14） mg/L,差异有统计学意义（P＜0.05）;染氟-VitE拮抗组氟斑牙程度及尿氟含量（1.95±0.12） mg/L均低于染氟组,差异有统计学意义（P＜0.05）;光镜下染氟组大鼠脑组织海马CA3、CA4区神经元胞浆及胞核未见明显改变,部分区域可见轻度排列紊乱;尼氏染色显示染氟组大鼠海马CA3、CA4区神经元内尼氏小体灰度值为（14.11±4.72）和（13.80±4.60）较对照组（70.06±7.77）和（73.55±5.94）及染氟-VitE拮抗组（37.56±8.68）和（44.54±8.52）明显减少,染色明显变浅,差异有统计学意义（P＜0.01）;染氟-VitE拮抗组较对照组灰度值也明显减少,差异有统计学意义（P＜0.01）.结论：慢性氟中毒可使大鼠出现氟斑牙,尿氟含量升高;大脑海马神经元发生病理学改变,抗氧化剂VitE在一定程度上可降低慢性氟中毒引起的脑损伤.     

补脾肾活血中药对糖尿病大鼠肾皮质糖基化终产物受体mRNA表达的影响

目的观察补脾肾活血中药对糖尿病大鼠肾皮质糖基化终产物(AGEs)含量及其受体mRNA(RAGE mRNA)表达的影响,探讨补脾肾活血中药防治糖尿病肾病(DN)的机制.方法采用链脲佐菌素(STZ)左下腹腔内单次注射造成糖尿病大鼠模型,随机分糖尿病组、中药组及氨基胍组,另设正常对照组.用荧光光谱法测定肾皮质AGEs含量,用RT-PCR的方法检测肾皮质RAGEmRNA的表达.结果糖尿病组大鼠肾皮质AGEs含量明显增加,RAGE mRNA出现过度表达.中药组治疗12周后肾皮质AGEs含量明显减少,RAGE mRNA表达明显下调,与糖尿病组比较都有显著差异(P＜0.01).结论补脾肾活血中药能够通过减少AGEs在肾皮质的积累,下调糖尿病大鼠肾皮质RAGE mRNA的过度表达,从而防治糖尿病肾病.     

AGEs对人腹膜间皮细胞FN和CTGF的合成和表达作用研究

目的 观察糖基化终末产物（AGEs）对体外培养的人腹膜间皮细胞（HPMC）纤维连接蛋白（FN）和结缔组织生长因子（CTGF）表达的影响.方法 分别以不同浓度的AGEs（0、200、600、1 000mg/L）刺激HPMC 48h后,用RT-PCR法检测FN的表达情况.同时将体外培养的HPMC分为正常组（未加任何刺激因素）和AGEs组（终浓度为600mg/L）,两组均予刺激HPMC48h后,用RT-PCR及ELISA法检测细胞内FN和CTGF mRNA及蛋白的表达水平.结果 AGEs呈剂量依赖性上调HPMC FN mRNA的水平;AGEs组FN、CTGF mRNA和蛋白表达水平均较正常组明显增加（P＜0.05或0.01）.结论 AGEs可诱导体外培养HPMC的FN、CTGF基因和蛋白高表达.     

燃煤型氟中毒对大鼠睾丸生精细胞凋亡的影响

目的：观察燃煤型氟中毒对大鼠睾丸生精细胞凋亡的影响。方法：5月龄SD雄性大鼠18只,按体质量随机分为染氟组、染氟＋大豆组和对照组,各组大鼠自由饮用自来水（含氟〈0.5 mg/L）;各染氟组采用含氟量为69.33 mg/kg的煤烘玉米饲食,染氟＋大豆组的大豆重量比为20%,对照组采用含氟为9.37 mg/kg的常食玉米饲食,实验期间动物自由进食、进水;染氟第90天,处死大鼠,使用H-E染色法和TUNEL方法对大鼠睾丸切片进行染色,观察细胞凋亡情况,结果：染氟组生精细胞凋亡个数高于对照组[（278.17±25.47）个,（129±21.02）个,P〈0.05];染氟＋大豆组生精细胞凋亡个数高于对照组[（141.5±5.24）个,（129±21.02）个,P〈0.05];染氟＋大豆组生精细胞凋亡数低于染氟组[（141.5±5.24）个,（278.17±25.47）个],P〈0.05。结论：燃煤型氟中毒可造成大鼠生精细胞凋亡增加,增加营养后可有效减少氟中毒造成的生精细胞的凋亡。     

替米沙坦对AGEs诱导人内皮细胞表达VCAM-1及MCP-1的作用和机制

目的 通过观察替米沙坦对晚期糖基化终末产物(AGEs)诱导的人脐静脉内皮细胞表达血管细胞黏附因子-1(VCAM-1)和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的影响,研究替米沙坦对AGEs所致动脉粥样硬化(AS)的干预作用和机制.方法 采用胶原酶消化法获取人脐静脉内皮细胞,分为4组:空白对照组,牛血清白蛋白(BSA)对照组,AGEs诱导组(10-4~10-1mg/mL),AGEs+替米沙坦组(1、10、100 nmol/L).活性氧检测试剂盒检测及倒置荧光显微镜观察细胞内活性氧含量,RT-PCR检测VCAM-1、MCP-1及晚期糖基化终末产物受体(RAGE)的mRNA.结果 AGEs组人内皮细胞内活性氧荧光强度增强,替米沙坦干预后降低;AGEs呈浓度依赖性地增强人内皮细胞对VCAM-1和MCP-1基因的转录,与空白对照组相比,AGEs(10-4mg/mL)组VCAM-1和MCP-1 mRNA表达水平显著增高(0.24±0.01 vs 0.07±0.02;0.25±0.01 vs 0.18±0.03,P<0.05);替米沙坦呈浓度依赖性地抑制人内皮细胞对VCAM-1和MCP-1基因的转录,与AGEs诱导组相比,替米沙坦(10 nmol/L)组人内皮细胞的VCAM-1和MCP-1基因转录水平显著降低(0.23±0.01 vs 0.85±0.11;0.62±0.10 vs 1.05±0.04,P<0.05);与AGEs诱导组相比,替米沙坦(1 nmol/L)组人内皮细胞RAGE基因表达水平显著降低(0.64±0.03 vs 1.18±0.10,P<0.05).结论 AGEs增强人内皮细胞表达VCAM-1和MCP-1;替米沙坦可能通过抑制RAGE表达来抑制AGEs诱导的人内皮炎性损伤.