米非司酮对卵巢颗粒细胞的影响

米非司酮作为一种高；枣的孕酮受体拮抗剂，通过阻断孕酮的生理效应而发挥其生育调节作用。卵巢颗粒细胞是成熟卵泡中最大的细胞群，对卵细胞的发育、成熟及胚胎形成有重要影响。米非司酮能通过不同信号传导途径诱导卵巢颗粒细胞发生凋亡，干扰卵泡成熟及排卵。黄体生成激素峰后卵巢颗粒细胞分泌孕酮并表达孕激素受体（PR），米非司酮能抑制颗粒细胞分泌孕酮，改变颗粒细胞PR的表达。另外，米非司酮还可影响颗粒细胞生成雌二醇和松弛素。     

瘦素体外对人卵巢黄素化颗粒细胞雌、孕激素分泌的影响

目的:探讨瘦素体外对人卵巢黄素化颗粒细胞雌激素(E2)和孕激素(P)分泌的影响。方法:将来自体外受精-胚胎移植(IVF-ET)的卵巢黄素化颗粒细胞纯化后,在不同的浓度瘦素(0、10、20、100 ng/ml)和FSH(0、1、5、10 IU/ml)单独或联合作用下进行体外培养48 h,收集培养液,用放射免疫方法测定颗粒细胞产生E2及P的浓度。结果:①不同浓度的瘦素对黄素化颗粒细胞E2和P的基础分泌功能无明显影响;②FSH能促进黄素化颗粒细胞E2和P的分泌,随FSH浓度增加,E2和P的水平逐渐增高;③不同浓度瘦素对FSH促进黄素化颗粒细胞E2的分泌均有抑制作用,随瘦素浓度增加,抑制作用逐渐增强,但对P的分泌无影响。结论:瘦素抑制FSH刺激卵巢黄素化颗粒细胞雌激素的分泌,高浓度瘦素可能影响卵泡发育和黄体形成。     

米非司酮对卵巢颗粒细胞的影响

米非司酮作为一种高效的孕酮受体拮抗剂,通过阻断孕酮的生理效应而发挥其生育调节作用.卵巢颗粒细胞是成熟卵泡中最大的细胞群,对卵细胞的发育、成熟及胚胎形成有重要影响.米非司酮能通过不同信号传导途径诱导卵巢颗粒细胞发生凋亡,干扰卵泡成熟及排卵.黄体生成激素峰后卵巢颗粒细胞分泌孕酮并表达孕激素受体(PR),米非司酮能抑制颗粒细胞分泌孕酮,改变颗粒细胞PR的表达.另外,米非司酮还可影响颗粒细胞生成雌二醇和松弛素.     

镉对大鼠卵巢颗粒细胞孕激素合成的影响研究

目的研究镉对大鼠卵巢颗粒细胞孕激素合成的影响,并探讨其机制。方法未成年Wistar大鼠皮下注射孕马血清促性腺激素(PMSG)100IU,48h后,取出卵巢颗粒细胞体外培养,备用。①取备用细胞随机分成4组,染镉剂量分别为0、10、20、40μmol/L,孵化30min,测孕酮、cAMP含量。②取备用细胞,随机分为3组,分别为空白对照组、40μmol/LCdCl2、1mmol/L8-Br-cAMP(cAMP类似物) 40μmol/LCdCl2,培养2h,测量孕酮含量。结果各剂量组与对照组比较孕酮含量差异有统计学意义(P<0.01),且随着染镉剂量的增加孕酮含量明显下降;8-Br-cAMP 40μmol/LCdCl2组与单纯40μmol/LCdCl2比较,孕酮含量明显升高(P<0.01);高剂量(40μmol/L)、中剂量(20μmol/L)组镉抑制细胞内cAMP的含量(P<0.01)。结论在本实验的条件下,镉可抑制大鼠颗粒细胞孕酮的合成;8-Br-cAMP可增加孕酮含量,且可逆转镉所导致的孕酮降低;镉对cAMP的抑制作用可能是其抑制孕酮合成的机制之一。     

邻苯二甲酸二辛酯对大鼠卵巢颗粒细胞分泌功能的影响

以邻苯二甲酸二辛酯(DOP)对大鼠卵巢颗粒细胞进行体外染毒、培养来研究DOP对卵巢颗粒细胞分泌功能的影响。提取未成年大鼠卵巢颗粒细胞进行体外培养,DOP染毒后测定细胞分泌产物(雌二醇和孕酮)含量。染毒组与对照组比较,雌二醇和孕酮水平均降低,差异有统计学意义(P<0.01)。雌二醇含量与DOP剂量的相关系数为-0.68(P<0.01);孕酮含量与DOP剂量的相关系数为-0.79(P<0.01),提示在实验剂量下产生剂量-反应关系。DOP对大鼠卵巢颗粒细胞分泌功能有抑制作用。     

铅对大鼠原代卵巢颗粒细胞分泌雌激素能力的影响

目的检测铅对大鼠卵巢颗粒细胞分泌功能的影响。方法分别以250、50、10mg/L终浓度的醋酸铅对体外培养的大鼠卵巢颗粒细胞进行24h染毒,测定细胞活性和细胞分泌产物(雌二醇和孕酮)含量。结果各染毒组与对照组比较,细胞活性未受影响,而雌二醇和孕酮水平均有所降低,高、中剂量组与对照组比较差异有显著性(P<0.01)。雌二醇含量与醋酸铅剂量的相关系数为-0.900(P<0.01);孕酮含量与醋酸铅剂量的相关系数为-0.908(P<0.01),提示在实验剂量下产生剂量-效应关系。结论铅对大鼠卵巢颗粒细胞分泌功能有抑制作用。     

邻苯二甲酸二丁酯对大鼠卵巢颗粒细胞中细胞凋亡因子Bcl-2、Bax表达的影响

目的研究邻苯二甲酸二丁酯(dibutyl phthalate,DBP)对大鼠卵巢颗粒细胞中细胞凋亡因子Bcl-2、Bax表达的影响。方法体外培养25 d雌性SD大鼠卵巢颗粒细胞,分别加入DBP使终浓度分别(0、5、20、80μmol/L),培养24 h。采用放射免疫方法测定雌二醇(estradiol,E2)和孕酮(progestone,P)的水平;采用实时荧光定量PCR(real-time PCR)和免疫印迹试验(Western blot)检测卵巢颗粒细胞中Bcl-2、Bax mRNA和蛋白的表达。结果 DBP染毒后颗粒细胞分泌的E2及P水平下降,各剂量DBP均可降低颗粒细胞中Bcl-2 mRNA和蛋白的表达(P0.05),且表达量与DBP剂量呈反比,同时,DBP可以增加颗粒细胞中Bax mRNA和蛋白的表达(P0.05),且表达量与DBP剂量呈正比。结论 DBP可导致大鼠卵巢颗粒细胞凋亡,且Bcl-2/Bax比例失调可能是导致其凋亡的机制。     

超排卵后黄体期血雌孕激素水平对胚胎着床的影响

目的测定控制下超排卵周期黄体期血雌二醇(E2)和孕酮(P)水平,探讨黄体期甾体激素对体外受精-胚胎移植(IVF-ET)结局的影响.方法选择在本院辅助生育技术病房进行IVF-ET助孕治疗的因输卵管因素不孕的64例患者,用GnRHa(达必佳)/FSH/hMG/hCG超排卵治疗,在注hCG日及取卵后7天采集静脉血5ml,用双抗放射免疫法(RIA)测定血清雌二醇(E2)和孕酮(P).结果未妊娠组高反应组与正常反应组获卵数存在显著差异(P＜0.05),年龄、获卵数、移植胚胎数两组无显著差异(P＞0.05).继续妊娠组与流产组E2峰、黄体中期E2、P水平及P/E2比均无显著差异(P＞0.05),继续妊娠组E2从峰值下降至黄体中期水平与流产组相比,存在显著差异(P＜0.05),继续妊娠组E2下降幅度大;未孕高反应组E2峰、黄体中期E2、P水平与继续妊娠组相比均显著增高(P＜0.05),但P/E2比无显著差异,未孕正常反应组各激素水平及比与继续妊娠组相比无显著差异(P＞0.05).结论超排卵治疗后黄体期雌孕激素对妊娠的影响与卵巢反应有关,高反应组黄体中期过高的雌孕激素不利于妊娠,正常反应组黄体中期雌孕激素水平与妊娠无关.E2从峰值至黄体中期水平下降幅度与妊娠有关,E2缺乏下降也许对妊娠不利.     

肥胖对卵巢颗粒细胞功能的影响及研究进展

近年来,肥胖症及肥胖相关疾病,如心血管疾病、2型糖尿病、高胰岛素血症、多囊卵巢综合征(PCOS)、不孕症等患者不断增加。肥胖症主要通过调控细胞脂毒性、氧化应激、慢性炎症、瘦素抵抗、胰岛素抵抗和其他一些机制导致患者的卵巢功能、卵泡发育、颗粒细胞基因表达及类固醇激素分泌异常,使肥胖女性生育力下降。本文综述主要总结了肥胖对女性卵巢颗粒细胞的影响及研究进展。     

二噁英对大鼠卵巢颗粒细胞分泌功能的影响

分别以4．00、0．40、0．04ng/ml浓度的2,3,7,8-四氯苯二噁英（TCDD）对体外培养的大鼠卵巢颗粒细胞进行24h染毒,测定细胞活性和细胞分泌产物（雌二醇和孕酮）含量。结果显示,各染毒组与对照组比较,雌二醇和孕酮水平均有所降低,差别有统计学意义（P〈0．01）,且有剂量-反应关系。提示TCDD抑制大鼠卵巢颗粒细胞分泌功能。     

MIS,IGF-Ⅱ对人卵巢黄素化颗粒细胞分泌功能的影响

目的:探讨MIS,IGF-Ⅱ对人卵巢黄素化颗粒细胞分泌雌激素的影响。方法:体外受精-胚胎移植(IVF-ET)患者经阴道超声引导下取卵,剥离卵母细胞周围的颗粒细胞作体外培养,培养48h后更换无血清培养基,在有或无卵泡刺激激素(FSR)的作用下,分别加入基因重组人苗勒氏管抑制因子(rhMIS)及人胰岛素样生长因子Ⅱ(rhIGF-Ⅱ)作用于颗粒细胞,于培养后第4、6、8、10天收集培养液测定雌二醇(E2),观察rhMIS及rhIGF-Ⅱ对体外培养的颗粒细胞分泌E2的影响。结果:在无FSH作用下,rhMIS对颗粒细胞分泌E2无明显影响(P>0·05),rhIGF-Ⅱ刺激颗粒细胞分泌E2量增加(P<0·05);加入FSH后,rhMIS的明显抑制颗粒细胞E2分泌量(P<0·05),rhIGF-Ⅱ明显增加颗粒细胞E2的分泌(P<0·05)。结论:MIS和IGF-Ⅱ可单独或协同FSH刺激颗粒细胞甾体激素的分泌,对卵泡的生长发育及卵母细胞的分化成熟起着微观调控作用。     

Modulation of steroidogenesis by vitamin D3 in granulosa cells of the mouse model of polycystic ovarian syndrome

Polycystic ovarian syndrome (PCOS) is the most common endocrine disorder of women of reproductive age characterized by polycystic ovarian morphology, anovulation or oligomenorrhea, and hyperandrogenism. It is shown that disruption in the steroidogenesis pathway caused by excess androgen in PCOS is a critical element of abnormal folliculogenesis and failure in dominant follicle selection. Vitamin D plays an important role in the regulation of ovulatory dysfunction and can influence genes involved in steroidogenesis in granulosa cells. In the present study, we investigated the effects of vitamin D3 on steroidogenic enzyme expression and activities in granulosa cell using a PCOS mouse model. In our study, the PCOS mouse model was developed by the injection of dehydroepiandrosterone (DHEA) for 20 days. The mRNA and protein expression levels of genes involved in steroidogenesis in granulosa cells were compared between polycystic and normal ovaries using real-time PCR and Western blotting assays. Granulosa cells of DHEA-induced PCOS mice were then cultured with and without vitamin D3 and mRNA and protein expression levels of steroidogenic enzymes and serum 17beta-estradiol and progesterone levels were investigated using qRT-PCR, western blot, and radioimmunoassay, respectively. Steroidogenic enzymes including Cyp11a1, StAR, Cyp19a1, and 3β-HSD were upregulated in granulosa cells of PCOS mice when compared to normal mice. Treatment with vitamin D3 decreased mRNA and protein expression levels of steroidogenic enzymes in cultured granulosa cells. Vitamin D3 also decreased aromatase and 3β-HSD activity that leads to decreased 17beta-estradiol and progesterone release. This study suggests that vitamin D3 could modulate the steroidogenesis pathway in granulosa cells of PCOS mice that may lead to improving follicular development and maturation. This is a step towards a possible conceivable treatment for PCOS.

Abbreviations: AMHR-II: anti-müllerian hormone receptor-II; 3β-HSD: 3β-hydroxysteroid dehydrogenase; Cyp11a1: Cytochrome P450 Family 11 Subfamily A Member 1; Cyp19a1: cytochrome P450 aromatase; DHEA: dehydroepiandrosterone; FSH: follicle stimulating hormone; FSHR: follicle stimulating hormone receptor; IVF: in vitro fertilization; 25OHD: 25-hydroxy vitamin D; OHSS: ovarian hyperstimulation syndrome; PCOS: polycystic ovarian syndrome; P450scc: P450 side-chain cleavage enzyme; StAR: steroidogenic acute regulatory protein; VDRs: vitamin D receptors     

卵巢储备低下患者黄体期补充雌激素对IVF-ET结局的研究

目的:比较黄体期补充雌激素对卵巢低反应患者的影响。方法:60名卵巢低反应患者,30例在促排卵前黄体期给予雌二醇每天2mg,30例给予安慰剂。结果:使用雌二醇的妇女可以获得HCG日较厚的子宫内膜,更高的获卵数(P<0.05),更多的成熟卵母细胞(P<0.05),更高的受精率(P<0.05)和更多的优质胚胎(P<0.01)。两组启动日窦卵泡数、促排卵时间和临床妊娠率差异无统计学意义。结论:卵巢低反应患者促排卵前黄体期补充雌二醇可以提高IVF-ET优质胚胎数目和胚胎质量,增加子宫内膜厚度,从而可能提高妊娠率。     

2-甲氧基雌二醇诱导卵巢癌细胞凋亡的研究

目的探讨2-甲氧基雌二醇（2-ME）诱导卵巢癌细胞系OVCAR-3细胞和卵巢癌原代培养细胞凋亡的作用及其机制。方法以2-ME作用于卵巢癌OVCAR-3细胞和原代培养细胞,采用MTT法检测细胞存活率、Annexin V—FITC／PI双染流式细胞术检测细胞凋亡,JC-1染色流式细胞术检测细胞线粒体膜电位（△ψm）,比色测定试剂盒检测caspase-3和caspase-8活性。结果与对照组相比,OVCAR-3细胞2-ME组存活率显著下降（100％vs70．5％）,凋亡率明显增加（5．3％VS40．5％）;卵巢癌原代培养细胞2-ME组存活率显著下降（100％vs61．8％）,凋亡率明显增加（5．4％VS36．9％）;此外,2-ME明显降低卵巢癌OVCAR-3细胞和原代培养细胞的AtOm,提高caspase-3和caspase-8活性。而预先以Z—VAD阻断caspase能逆转2-ME的效应。结论2-ME通过凋亡信号通路的内源性和外源性途径,诱导卵巢癌细胞凋亡。     

Effect of resistin on estradiol and progesterone secretion from human luteinized granulosa cells in culture

ABSTRACT

Information on the role of resistin on steroidogenesis is limited to animal studies. The aim of this study was to investigate the effect of various doses of resistin on estradiol and progesterone secretion from human luteinized granulosa cells in culture. Granulosa cells were obtained from follicular fluid aspirated from 50 women undergoing in vitro fertilization (IVF) treatment. The cells were cultured for 48 h after a 24 h pre-incubation period. The effect of resistin at dosages 1, 10 and 100 ng/ml alone or in combinations with FSH (10 and 100 ng/ml) on steroidogenesis was investigated. Estradiol and progesterone were measured by radioimmunoassays in culture supernatants at 24 h and 48 h. FSH treatment increased both estradiol and progesterone secretion. Resistin suppressed basal estradiol (at 1 ng/ml) and progesterone secretion (at all concentrations tested). When resistin (all concentrations) was combined with FSH (100 ng/ml), it eliminated the stimulatory effect of FSH on the secretion of estradiol and progesterone. This study indicates an inhibitory effect of resistin on the secretion of estradiol and progesterone by human luteinized granulosa cells in vitro. It is likely that this adipokine locally affects ovarian function in women.

Abbreviations: 3β-HSD: 3β-hydroxysteroid dehydrogenase; CAP1: cyclase-associated protein 1; DCN: decorin; FIZZ: Found in Inflammatory Zones; hCG: human chorionic gonadotropin; IGF1: insulin-like growth factor type 1; IVF: in vitro fertilization; PCOS: polycystic ovary syndrome; RIA: radioimmunoassay; ROR1: receptor tyrosine kinase-like orphan receptor-1; TLR4: Toll–like receptor 4     

CD4~+ CD25~+调节性T细胞与卵巢癌的相关性研究

目的:探讨卵巢癌患者病灶间质中及上皮内CD3+TILs、CD4+TILs、CD8+TILs、Treg的分布特点。方法:采用免疫组织化学方法检测40例卵巢癌患者病灶间质中及上皮内CD3+TILs、CD4+TILs、CD8+TILs、Treg的表达情况及10例正常卵巢组织中CD3+T细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞、Treg的表达情况。结果:卵巢癌组织中CD3+T细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞数量与正常卵巢组织中相比显著增加,且卵巢癌组织上皮内Treg数量增加。结论:卵巢癌局部微环境中机体对肿瘤抗原可以产生免疫反应,但Treg的存在而抑制了肿瘤的特异性免疫。     

福建水华微囊藻毒素对小鼠免疫细胞影响的体外实验研究

[目的]探讨福建省水华微囊藻毒素对机体免疫细胞的损害.[方法]无菌取小鼠脾细胞和腹腔巨噬细胞,MC-LR染毒剂量均为0、1、5、10 μg/ml,观察MC-LR对小鼠T、B淋巴细胞增殖的影响和MC-LR染毒24、48和72 h对小鼠巨噬细胞增殖的影响.[结果]1、5、10 μg/ml剂量组T淋巴细胞刺激指数(SI)下降;5、10 μg/ml剂量组B淋巴细胞刺激指数下降.染毒48 h,各剂量组腹腔巨噬细胞增殖受到不同程度抑制,其中5、10 μg/ml剂量组抑制增殖明显;染毒72 h,1、5、10 μg/ml剂量组抑制增殖明显,呈现一定的剂量效应关系.[结论]福建省水华微囊藻毒素可以明显抑制小鼠脾T、B淋巴细胞的增殖,损伤特异性免疫功能;还可明显抑制小鼠腹腔巨噬细胞的增殖,损伤非特异性免疫功能.     

雌二醇对溴氰菊酯染毒大鼠皮层突触体神经毒性的影响

目的观察雌激素对溴氰菊酯染毒动物皮层突触体膜兴奋性氨基酸递质释放和ATPase活力的影响.方法用高效液相色谱(HPLC)检测不同水平17β-雌二醇(10-5、10-8、10-111mol/L)对2×10-5mol/L溴氰菊酯染毒的去卵巢大鼠皮层突触体氨基酸释放的影响;用化学比色法检测17β-雌二醇(10-5、10-8、10-11mol/L)对2×10-4mol/L溴氰菊酯染毒的去卵巢大鼠皮层突触体Na+-K+ATPase、Mg2+-ATPase、Ca2+-ATPase、Ca2+-Mg2+-ATPage活力的影响,并观察雌激素受体拮抗剂Tamoxifen对雌二醇作用的影响.结果2×10-5mol/L氰菊酯处理可增加高钾去极化状态下大鼠皮层突触体天冬氨酸(Asp)和谷氨酸(Glu)的释放;10-8、10-11mol/L的17β-雌二醇可抑制溴氰菊酯所致高钾去极化状态下突触体Asp和Glu的释放,对Asp释放抑制率为28.42%、24.36%,对Glu释放抑制率为21.52%、14.57%;Tamoxifen对17β-雌二醇的抑制作用未见拮抗.2×10-4mol/L溴氰菊酯可抑制突触体4种ATPage活力;10-5mol/L雌二醇可拮抗溴氰菊酯对4种ATPase活力的抑制;l0-8、10-11mol/L雌二醇可增加Ca2+-ATPase活力;Tamoxifen对雌二醇的拮抗作用仍未见明显影响.结论 17β-雌二醇对溴氰菊酯染毒所致皮层突触体兴奋性氨基酸递质释放增加和ATPase活力抑制有一定的保护作用,该作用可能是雌二醇非基因学机制的表现.     

体外受精-胚胎移植中颗粒细胞凋亡与妊娠率

目的探讨体外受精-胚胎移植中卵泡颗粒细胞凋亡与妊娠率的关系。方法随机选择体外受精-胚胎移植中60例患者,收集其颗粒细胞,采用流式细胞技术检测颗粒细胞亚二倍体的含量和PDCD5的荧光密度;颗粒细胞免疫组化检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、PDCD5的表达。比较妊娠组和非妊娠组年龄、基础FSH值、促性腺激素的用量、取卵总数、受精率、妊娠率和颗粒细胞亚二倍体细胞的百分率、颗粒细胞PDCD5荧光密度、颗粒细胞Bcl-2、Bax、PDCD5蛋白表达的积分光密度值。结果妊娠组和非妊娠组年龄、基础FSH值、促超排卵FSH的用量、取卵数、受精率及免疫组化Bax积分光密度比较,差异无显著性(P>0.05),颗粒细胞亚二倍体百分率、颗粒细胞PDCD5荧光密度、PDCD5蛋白表达的积分光密度值妊娠组低于非妊娠组,颗粒细胞Bcl-2表达的积分光密值妊娠组高于非妊娠组,差异有显著性(P<0.05)。结论体外受精-胚胎移植中卵泡中颗粒细胞凋亡与妊娠率有关,凋亡率高,妊娠率低。     

年龄,基础FSH、E_2,窦卵泡数预测卵巢反应性的回顾性研究

目的:比较年龄、基础卵泡刺激素(bFSH)、基础雌激素(bE2)、基础窦卵泡数(AFC)预测卵巢反应性的价值。方法:回顾性分析行IVF-ET治疗的736例临床资料。年龄按<35岁、35～岁、38～岁分组;bFSH按<10U/L、≥10U/L分组;AFC按<5个、≥5个分组;bE2按<292.8pmol/L、≥292.8pmol/L分组;分析各项指标与卵巢反应性的关系。结果:年龄、bFSH、AFC各指标不同组卵巢反应性差异均有统计学意义(P<0.001),bE2各组卵巢反应性也有统计学差异(P<0.05)。ROC分析显示,上述4项指标中以AFC预测价值最大,年龄次之。单因素预测时灵敏度低,AFC分别联合年龄、bFSH应用时灵敏度提高。结论:年龄、bFSH、AFC、bE2均能独立预测卵巢反应性,AFC最为重要,可分别联合年龄、bFSH、bE2预测卵巢低反应。