人涎腺黏液表皮样癌多药耐药细胞系的建立及其生物学特性

目的：建立一种耐药性稳定的人涎腺黏液表皮样癌细胞株（MEC/5-FU）,为研究其耐药机制和逆转药物的筛选奠定实验基础。方法：采用浓度递增法联合大剂量冲击诱导方法,建立稳定的MEC/5-FU。应用MTT法、RT-PCR、罗丹明123蓄积试验等方法检测该细胞株的耐药性能及其生物学特性。结果：MEC/5-FU耐药性能稳定,对5-FU的耐药倍数达到36.11,并且对其他几种化疗药物表现不同程度的交叉耐药性。RT-PCR显示耐药相关基因ABCA2、ABCB1、ABCB11、ABCC1、ABCC4等ABC家族基因在MEC/5-FU细胞中明显高表达。罗丹明123在MEC/5-FU细胞中的蓄积量远低于MEC细胞。结论：MEC/5-FU具有多药耐药特性,为人涎腺黏液表皮样癌耐药机制和耐药逆转研究提供了理想的实验模型。     

高转移人涎腺黏液表皮样癌耐药细胞系的建立及其生物学特性

目的:建立人涎腺黏液表皮样癌细胞系耐药细胞株并观察其生物学特性及耐药性能.方法:采用裸鼠体内成瘤加药诱导然后在体外用恒定浓度间歇法持续加药,建立高转移人涎腺黏液表皮样癌细胞系MC3的耐药细胞系,应用MTT法,细胞计数法,免疫组化,电镜,RT-PCR等方法观察及检测细胞的生物学特性及耐药性.结果:MC3细胞经过5-FU在体内、体外反复作用产生了多药耐药性,耐药细胞系命名为MC3/5-FU.MC3和MC3/5-FU细胞均为单层贴壁生长,局部可见重叠生长,增殖活跃,2种细胞形态及超微结构未见明显差别.MC3/5-FU,MC3细胞的群体倍增时间分别为55 h和60 h.MC3/5-FU细胞对于5-氟尿嘧啶(5-FU)、博莱霉素(BLM)、长春新碱(VCR)、长春花碱(VBL)、顺铂(CDDP)的耐药倍数分别为13.3、4.2、6.5、6.9、0.7.免疫组化结果显示:P-gp(P蛋白)在MC3/5-FU呈阳性表达,而在MC3则未见表达.PCR结果显示MDR-1基因在MC3/5-FU中表达高于MC3.结论:MC3/5-FU具有多药耐药性.     

复发性涎腺腺样囊性癌裸鼠移植瘤模型的建立及其生物学特性

目的建立人复发性涎腺腺样囊性癌裸鼠移植瘤动物模型。方法将人复发性涎腺腺样囊性癌组织块,进行裸鼠皮下接种、传代,建立裸鼠移植瘤模型,并对其进行光镜、电镜、免疫组织化学及染色体分析。结果人复发性腺样囊性癌组织块移植于裸鼠后,获原代移植成功。2年期间移植瘤在裸鼠之间共连续传代4代,移植BALB/C裸鼠5只,平均潜伏期44.33天。经光镜、电镜、免疫组织化学观察发现移植瘤与其原发肿瘤结构特征一致。染色体检查为亚中着丝点染色体,符合人类体细胞核型。结论成功建立人复发性涎腺腺样囊性癌裸鼠移植瘤模型并传代,移植瘤保留了原发肿瘤的组织学特征和染色体核型。     

腺样囊性癌和黏液表皮样癌耐药性研究进展

肿瘤细胞多药耐药性产生的主要机制是细胞膜上存在转运蛋白,RNAi技术既可以用来研究耐药机制,又可以用于逆转细胞耐药性.国内已建立了人涎腺腺样囊性癌和黏液表皮样癌耐药细胞系,多药耐药基因MDR1或多药耐药相关蛋白基因ABCC1可能发挥重要作用.用RNAi技术可以抑制耐药细胞中MDR1和 ABCC1基因及其蛋白表达,从而逆转细胞的耐药性.     

涎腺肿瘤组织TN－CmRNA和CDgmRNA的表达及其意义

目的：探讨Tenascin-C（TN－C）mRNA和CD9mRNA在涎腺肿瘤的表达及其对涎腺肿瘤鉴别诊断的价值。方法：采用原位杂交技术检测10例正常涎腺组织、25例多形性腺瘤（PA）、25例腺样囊性癌（ACC）、20例黏液表皮样癌（MEC）、10例腺泡细胞癌（ACCa）中TN-CmRNA和CD9mRNA的表达。结果：TN-CmRNA在正常涎腺组织中呈阴性表达;CD9mRNA在正常涎腺组织中的阳性率为100％;TN-CmRNA、CD9mRNA在4种涎腺肿瘤中均有表达,TN-CmRNA在多形性腺瘤中的阳性表达率显著高于腺样囊性癌和黏液表皮样癌,差异具有统计学意义,而在多形性腺瘤与腺泡细胞癌中的表达差异无统计学意义。CD9mRNA在多形性腺瘤中的阳性表达率高于腺样囊性癌,差异有统计学意义,而在多形性腺瘤和黏液表皮样癌、腺泡细胞癌中的表达差异无统计学意义;在多形性腺瘤中TN-CmRNA和CD9mRNA的表达呈正相关,在腺样囊性癌、黏液表皮样癌和腺泡细胞癌中TN—CmRNA和CD9mRNA的表达无相关性。结论：TN-CmRNA和CD9mRNA与涎腺肿瘤的发生有一定相关性,对涎腺肿瘤之间的鉴别诊断有一定意义。     

黏液表皮样癌中CEACAM5和CEACAM6的表达及意义

目的检测癌胚抗原相关细胞黏附分子5(CEACAM5)和癌胚抗原相关细胞黏附分子6(CEACAM6)在涎腺黏液表皮样癌(MEC)组织中的表达情况,分析二者与涎腺黏液表皮样癌发生发展的关系。方法 60例黏液表皮样癌标本,以30例癌旁正常涎腺组织作对照,通过免疫组化法分别检测CEACAM5和CEACAM6在标本中的表达情况。结果 MEC组中CEACAM5和CEACAM6的蛋白阳性表达率分别为(68.3%,65%),明显高于正常涎腺组织中的表达率(40%,36.7%)(P<0.05),MEC组中CEACAM5和CEACAM6蛋白的阳性表达与MEC的分化程度、临床分期及颈部淋巴结转移密切相关(P<0.05),与患者的性别和年龄无关(P>0.05)。CEACAM5和CEACAM6在MEC组织中的阳性表达呈正相关。结论 CEACAM5和CEACAM6在黏液表皮样癌组织中的异常表达促进肿瘤的发生,均参与肿瘤的进展,联合检测可能与患者的预后密切相关。     

涎腺正常与肿瘤组织中p63、CK5、CK19、CEA及SmA的表达

目的:探索涎腺正常导管、腺泡及其上皮性肿瘤的组织起源.方法:采用免疫组化(二步法)检测正常涎腺组织14 例、多形性腺瘤14 例、基底细胞腺瘤8 例、腺样囊性癌18 例、黏液表皮样癌9 例、低分化腺癌2 例及腺泡细胞癌、乳头状腺癌、恶性多形性腺瘤、肌上皮癌各1 例中p63、CK5、CK19、CEA及SmA的表达.结果:正常涎腺基底细胞与肌上皮细胞层表达CK5,其中部分细胞表达p63,导管部分基底细胞也呈CK19阳性.多形性腺瘤、基底细胞腺瘤、腺样囊性癌与黏液表皮样癌具p63、CK5及CK19高阳性率, SmA阳性率分别为85.71%、1.25%、61.11%、0.00%.CEA阳性细胞见于11.11%腺样囊性癌与55.56%黏液表皮样癌.结论:正常涎腺导管和腺泡的腺上皮及涎腺上皮性肿瘤可能来源于导管、腺泡基底层内呈p63和CK5阳性细胞中的干细胞.     

P-gp170、cytokeratin及nm23在人涎腺粘液表皮样癌MEC-1/5Fu耐药细胞中的表达

目的 :探讨人涎腺粘液表皮样癌耐药细胞株MEC 1/ 5Fu细胞的耐药机制。方法 :应用免疫组织化学SP方法观察该细胞及其亲本细胞中P 糖蛋白 (P gp170 )、cytokeratin(CK)及nm 2 3的表达。 结果 :P gp170在MCE 1/ 5Fu细胞中的阳性表达率为 95 .1% ,明显高于亲本细胞的阳性表达率 12 .3 % (P <0 .0 5 ) ,而CK与nm2 3在MEC 1/ 5Fu细胞与亲本细胞中的表达率分别达 90 %以上 ,无显著差异 (P >0 .0 5 )。结论 :MEC 1/5Fu细胞具有多药耐药 (MDR)表型 ,其耐药性的产生主要是由P gp170高表达所介导     

XIAP在涎腺黏液表皮样癌中的表达及意义

目的检测X染色体连锁凋亡抑制蛋白(x-linked inhibitor of apoptosis protein,XIAP)在涎腺黏液表皮样癌(mucoepidermoid carcinoma,MEC)中的表达,探讨XIAP的表达在涎腺黏液表皮样癌发生发展中的作用。方法采用免疫组织化学法检测25例涎腺黏液表皮样癌中XIAP的表达,分析其与临床病例的关系。结果 XIAP在MEC中呈高表达,在正常涎腺组织中不表达或低表达;MEC和正常涎腺组织XIAP阳性检出率分别为84%(21/25)和0.00%(0/10)(P<0.01);XIAP表达与MEC组织病理分化程度呈正相关关系(P<0.05),而与肿瘤部位、临床分期、远处转移无相关性(P>0.05)。结论 XIAP在MEC中高表达,可能在MEC发生过程中具有重要的作用。     

TNP-470联合顺铂抗腺样囊性癌生长和肺转移的实验研究

目的　研究血管生成抑制剂TNP 470联合顺铂 (CDDP)对口腔腺样囊性癌生长及肺转移的抑制作用。方法　分别将建株的口腔腺样囊性癌肺转移细胞株 (ACC M)细胞悬液注射至裸鼠皮下和尾静脉 ,建立口腔腺样囊性癌皮下移植瘤及实验性肺转移模型。从移植后的第 3周开始 ,于裸鼠对侧皮下注射TNP 470 30mg/kg,隔日 1次 ,共7次。CDDP分别在第 3周和第 4周腹腔给药各 1次 ,剂量为 5mg/kg。停药后第 2d处死裸鼠。测量肿瘤大小 ,称重并计数肺转移结节数。以兔抗人Ⅷ因子相关抗原抗体免疫组化染色后 ,计数皮下瘤块血管密度。结果　与单用TNP 470相比 ,TNP 470联合CDDP对口腔腺样囊性癌生长和肺转移的抑制作用更强 ,但对皮下移植瘤的血管密度影响无明显差异。结论　TNP 470联合CDDP对口腔腺样囊性癌生长和肺转移有明显的抑制作用。     

人涎腺粘液表皮样癌耐药细胞及其亲本细胞的线粒体分布及特点

目的 比较人粘液表皮样癌耐药细胞株(MEC—1／5—FU)及其亲本细胞(MEC—1)的线粒体数量和分布特点。方法 利用免疫荧光细胞化学染色结合激光扫描共聚焦显微镜、透射电镜观察两种细胞的线粒体分布及表达特征；细胞计数法观察细胞生长曲线及群体倍增时间。结果 MEC—1和MEC—1／5—FU细胞增殖活跃，细胞群体倍增时间分别为30h和28．8h；MEC—1／5—FU细胞线粒体的数量与分布较MEC—1细胞数量更多，多集中分布于细胞质内，且集中分布在粗面内质网附近。MEC—1／5—FU细胞线粒体外形较不规则，嵴较发达。结论 MEC—1和MEC—1／5—FU细胞线粒体数量和分布的不同以及线粒体嵴的数量、形态及排列方式、线粒体外形、嵴的发达程度等的差异均提示二者可能在能量消耗、细胞代谢及蛋白质合成功能方面存在差异。     

裸鼠体内原位移植法筛选粘液表皮样癌高转移细胞

目的：筛选高转移人涎腺粘液表皮样癌细胞。方法：用人涎腺粘液表皮样癌细胞Mc3经裸鼠涎腺移植、鼠间原位移植、细胞培养技术获取所需细胞,用相差显微镜、电子显微镜、细胞计数法、染色体显示法、流式细胞术、软琼脂克隆形成法以及癌细胞裸鼠尾静脉注射法研究其生物学特性。结果：经4次鼠间原位移植,肺转移率为3／10。取转移灶行细胞培养,获得形态均一、生长旺盛的上皮样细胞,命名为M3SP4。M3SP4细胞所致肺肿瘤显示粘液表皮样癌组织学特征,细胞染色体为亚二倍体,仍保持人类染色体形态。M3SP4与Mc3形态相似,群体倍增时间（h）分别为23.9和25.9,S期细胞（％）分别占细胞周期26.8和15.3,克隆形成率（％）分别为54.6和30.2,经尾静脉注射后M3SP4细胞引起的肺转移结节比Mc3多35％。结论：M3SP4是转移力强于Mc3的人涎腺粘液表皮样癌细胞系,Mc3细胞经裸鼠涎腺移植、鼠间原位移植后转移力有所提高。     

PTEN基因对粘液表皮样癌细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用

目的研究外源野生型PTEN抑癌基因对人高转移性粘液表皮样癌细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用。方法取PTEN抑癌基因转染粘液表皮样癌细胞的M3SP2-PTEN及逆转录病毒空载体转染的对照细胞M3SP2-pBp,接种于裸鼠背部皮下,测定移植瘤生长曲线,并对移植瘤进行组织学观察。结果对照组移植瘤生长迅速,肿瘤体积倍增时间为32.68h。HE染色切片显示,细胞数量多、排列紧密,核分裂相较多见;而实验组M3SP2-PTEN细胞移植瘤生长比较缓慢,肿瘤体积倍增时间延长为36.58h,肿瘤结节体积明显小于对照组(P<0.01),抑瘤率达63.82%。HE染色切片显示,细胞排列比较松散,较多的细胞出现变性和坏死,部分细胞染色体边集并出现凋亡小体。结论外源野生型PTEN抑癌基因能够显著抑制人高转移性粘液表皮样癌细胞在裸鼠体内的生长,其作用机制与PTEN基因诱导癌细胞变性和凋亡有关。     

六亚甲基二乙酰胺对MEC-1细胞体外粘附、移动和侵袭的影响

目的 研究分化诱导剂六亚基二乙酰胺（ＨＭＢＡ）对人粘液表皮样癌细胞系ＭＥＣ－１体外粘附、移动和侵袭的影响。方法 用２ｍｍｏｌ／Ｌ ＨＭＢＡ体外诱导培养ＭＥＣ－１细胞,用ＭＴＴ（ｔｈｉａｚａｌｙｌ ｂｌｕｅ,噻唑蓝）比色法测定细胞在重构基底膜Ｍａｔｒｉｇｅｌ上的粘附,用Ｍｉｌｌｉｃｅｌｌ－ＰＣＦ培养系统测定细胞的移动性和侵袭性。结果 ＨＭＢＡ诱导的ＭＥＣ－１细胞在３０ｍｉｎ和９０ｍｉｎ粘附实验中的粘     

裸鼠脊髓转移灶粘液表皮样癌细胞系Ms的建立及生物学特性

目的：建立Mc3细胞的脏器转移细胞系。方法：采用瘤细胞尾静脉注射法、组织块细胞培养法．从裸鼠体内获得Mc3细胞系脊髓转移细胞亚系。用染色体最示、细胞形态及细胞致瘤性观察证明其性质；用细胞生长曲线、流式细胞仪测定增值速度。结果：从50只受试课鼠中获得一只截瘫的裸鼠．取其脊髓组织行原代及传代培养获得细胞并建立细胞系．传代50次以上．生长稳定．倍增时间为13 h．s期细胞占22．7％．染色体众数为61，保持人类染色体形态、细胞形态与其母细胞相似．相差显微镜观察活细胞晕”铺路石”样外观。裸鼠肺内转移肿瘤组织切片显示为粘液表皮样癌．将该细胞命名为Ms。结论：Ms细胞系是Mc3细胞系在裸鼠体内的脊髓转移细胞亚系．其生物学性质与Me3细胞小不同     

大蒜素联合5⁃氟尿嘧啶对黏液表皮样癌MEC⁃1细胞增殖与凋亡的作用及机制

目的探讨大蒜素联合5⁃氟尿嘧啶(5⁃fluorouracil,5⁃FU)对黏液表皮样癌MEC⁃1细胞增殖抑制和凋亡的作用及机制,为临床药物应用提供相应基础。方法取对数生长期的MEC⁃1细胞,随机分成对照组和实验组,对照组为含有0.1%DMSO的PBS组,实验组为大蒜素组、5⁃FU组、联合用药组(大蒜素联合5⁃FU组)。用CCK8法检测不同浓度(0、25、50、75 mg/L)大蒜素、5⁃FU及大蒜素联合5⁃FU作用于MEC⁃1细胞24 h后细胞增殖抑制率并计算作用24 h后大蒜素及5⁃FU IC50值。用流式细胞仪检测不同浓度(0、25、50、75 mg/L)大蒜素、5⁃FU及大蒜素联合5⁃FU作用于MEC⁃1细胞24 h后细胞凋亡率。使用Western blot检测IC50浓度的大蒜素、5⁃FU单独及联合作用于MEC⁃1细胞24 h后Bax、Bcl⁃2蛋白表达量。结果联合用药组对MEC⁃1的增殖抑制率及凋亡率均强于大蒜素组和5⁃FU单独用药组(P<0.01)。大蒜素与5⁃FU单独及联合使用均可以下调Bcl⁃2蛋白和上调Bax蛋白表达量,且联合用药组Bax/Bcl⁃2比值最大(P<0.05)。结论大蒜素和5⁃FU单独及联合使用均对MEC⁃1细胞具有增殖抑制作用和诱导凋亡作用,且大蒜素增强了5⁃FU对MEC⁃1细胞的凋亡作用,其诱导MEC⁃1凋亡机制可能与Bax/Bcl⁃2信号通路相关。     

TGF‐β1 regulates the invasive and metastatic potential of mucoepidermoid carcinoma cells

J Oral Pathol Med (2011) 40 : 762–768 Background: Patients with mucoepidermoid carcinoma exhibit poor long‐term prognosis because of the lack of therapeutic strategies that effectively block tumor progression. We have previously characterized the Ms cells as a highly metastatic mucoepidermoid carcinoma cell line that expresses high levels of transforming growth factor β1 (TGF‐β1). Here, we studied the effect of suppressing TGF‐β1 by RNA silencing on the invasive and metastatic potential of mucoepidermoid carcinoma. Methods: Cell motility, substratum adhesion, and transmembrane invasion were estimated by migration, matrigel adhesion, and matrigel invasion assay. Matrix metalloproteinase (MMP)‐2 and MMP‐9 activity were determined using gelatin gel zymography. Balb/c nu/nu nude mice lung metastatic model was used to test the metastatic ability of the Ms cells. Lung metastatic tumors were experimentally induced by mice tail vein inoculation of cancer cells. Results: TGF‐β1 silencing inhibits cell motility, substratum adhesion, and transmembrane invasion. In vivo, a significant decrease in lung metastasis was observed when mice received tail vein injections of TGF‐β1‐silenced mucoepidermoid carcinoma cells, as compared to controls. Conclusion: These results unveil a critical role for TGF‐β1 in the progression of mucoepidermoid carcinomas and suggest that patients with this malignancy may benefit from therapeutic inhibition of the effectors of the TGF‐β1 pathway.     

PTEN抑癌基因对黏液表皮样癌实验性裸鼠肺转移的抑制作用

目的　探讨外源野生型PTEN抑癌基因对人高转移性黏液表皮样癌M3SP2细胞系实验性裸鼠肺转移能力的影响。方法　用脂质体介导方法将PTEN抑癌基因导入M3SP2细胞系 (M3SP2 -PTEN细胞 ) ,转染空载体的细胞系作为对照M3SP2 -pBp细胞 ) ,应用裸鼠肺转移实验测定癌细胞的体内转移能力 ,并进行组织学观察。结果　对照组裸鼠肺转移结节数为 (2 4 0± 1.2 )个 ,组织学观察瘤细胞转移灶体积大 ,细胞生长活跃 ,可见较多核分裂。实验组裸鼠肺转移结节数量减少为 (8 5± 3 4 )个 ,转移抑制率为 6 5 6 % ;组织学观察可见转移灶数量少、体积小 ,并有较多的坏死和凋亡细胞。结论　转染野生型PTEN抑癌基因能降低人高转移性黏液表皮样癌细胞转移能力。     

Survivin 和 PDCD5在黏液表皮样癌组织中的表达及临床意义

目的：探讨存活素（Survivin）和细胞程序性死亡因子5（PDCD5）在黏液表皮样癌组织中的表达及临床意义。方法：采用免疫组化 Elivision 二步法检测20例正常腮腺组织（A 组）、40例多形性腺瘤（B 组）及45例黏液表皮样癌（C 组）组织中 Survivin 和 PDCD5蛋白的表达情况。结果：（1）Survivin 在 A、B、C 组中表达阳性率分别为10％、27．5％、55．6％（χ2＝14．556,P ＜0．01）,PDCD 表达阳性率分别为85％、65％、33．3％（χ2＝17．439,P ＜0．01）;（2）Survivin 和 PDCD5的表达与肿瘤的分化程度、有无淋巴结转移及 TNM分期有关（P ＜0．05）;（3）Survivin 和 PDCD5在黏液表皮样癌中的表达呈负相关（χ2＝4．500,P ＝0．034,γs ＝－0．316）。结论：Survivin 高表达,PDCD5低表达在在黏液表皮样癌发生发展中可能发挥作用。