杜仲对紫外线致ESF-1细胞光老化保护作用的研究

目的:研究杜仲抗紫外线致ESF-1细胞光老化作用,并初步探讨其作用机制。方法:杜仲70%乙醇提取物上D101大孔树脂制备不同浓度乙醇梯度洗脱部位,采用40 J.cm-2的UVA或70 mJ.cm-2的UVB照射ESF-1细胞后,立即加入不同浓度的杜仲50%乙醇洗脱部位,24 h后MTT法测定细胞活性,试剂盒法测定细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化歧化酶(SOD)活力及丙二醛(MDA)含量。结果:杜仲50%乙醇大孔树脂洗脱部位250,500 mg.L-1的给药浓度能使UVA诱导的光老化细胞活性明显增强(P<0.05),细胞培养液中LDH活力明显降低(P<0.05),其中250 mg.L-1的给药浓度能使细胞培养液中SOD活力明显升高(P<0.05),MDA含量明显降低(P<0.05);125,250,500 mg.L-1的给药浓度能使UVB诱导的光老化细胞活性明显增强,其中125 mg.L-1的给药浓度能使细胞培养液中LDH活力明显降低(P<0.05),SOD活力明显升高(P<0.05),MDA含量明显降低(P<0.05)。结论:杜仲50%乙醇大孔树脂洗脱部位对UVA和UVB致ESF-1细胞光老化具有良好的保护作用,推测其机制为通过提高SOD活力、加速氧自由基的清除和减少氧自由基的产生,使细胞的脂质过氧化损伤程度降低;同时,可能通过抗氧化作用,维持了细胞膜结构和功能的完整性,使LDH的漏出减少。     

异补骨脂素对人皮肤角质形成细胞光老化p-ERK及炎症因子影响

摘要:目的:研究异补骨脂素对人皮肤角质形成细胞（HaCaT）光老化p-ERK表达的影响及对光老化细胞分泌的白介素1α（IL-1α）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α)等炎症因子的影响。方法：使用照射强度为35mJ/cm2,照射时间为 5min的UVB,建立光老化模型;10-7 mol/L、10-6 mol/L、10-5 mol/L三种不同浓度的异补骨脂素处理光老化模型;MTT法检测细胞的活性;GSH、LDH及MDA试剂盒检测不同浓度异补骨脂素对细胞氧化酶活性;Western Blot法检测不同浓度的异补骨脂素对细胞p-ERK、IL-1α及TNF-α蛋白的影响。结果:与空白组比,UVB组GSH活性降低,LDH活性升高,MDA含量升高,P-ERK、IL-1α及TNF-α蛋白表达量升高（P<0.01或P<0.05）;与模型组相比,不同浓度异补骨脂素可以显著的升高GSH的活性,降低LDH活性,降低MDA含量,降低p-ERK、IL-1α及TNF-α蛋白表达量（P<0.01或P<0.05）,且作用呈浓度的依赖性。结论：异补骨脂素可通过抑制ERK磷酸化,抑制炎症因子的分泌,达到抗炎的作用。     

杜仲抗UVB致HaCaT细胞光老化活性部位的初步筛选

目的：确定杜仲抗皮肤光老化的有效部位。方法：杜仲乙醇提取物经大孔树脂制备不同浓度乙醇梯度洗脱部位,分别作用于HaCaT细胞光老化模型,以细胞形态、细胞活性及细胞培养基中LDH、MDA、SOD活力为评价指标,筛选并确定杜仲抗皮肤光老化的有效部位。结果：与模型组相比,浓度为125μg·mL-1的50％乙醇大孔树脂洗脱部位能提高细胞活性（P〈0．05）,使培养基中LDH降低（P〈0．01）、MDA活力降低（P〈0．05）、SOD活力提高（P〈0．05）;62．5μg·mL。的给药浓度能降低LDH活力（P〈0．05）。结论：50％乙醇大孔树脂洗脱部位能清除氧自由基而提高SOD活力、降低MDA活力．保护细胞膜免受损伤,降低LDH的泄露,具有一定的抗皮肤光老化作用。     

大蒜多糖对中波紫外线辐射后人角质形成细胞活性的影响

目的探讨大蒜多糖(GP)对中波紫外线(UVB)辐射后人角质形成细胞增殖的影响。方法不同浓度(250～8 000μg/ml)的GP处理人角质形成细胞后,分别以不同剂量(0,30,60,90 mJ/cm2)UVB照射细胞,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖活性。结果①不同剂量UVB照射12 h后细胞增殖活性均下降,其下降程度与UVB照射剂量呈正相关;②同UVB辐射剂量下,不同浓度GP处理的细胞其细胞活性相对于未加药组明显增加(P﹤0.05)。结论大蒜多糖可以减少UVB诱导的角质形成细胞损伤。     

杜仲提取物抗UVA致ESF-1细胞光老化作用的机制研究

目的:探讨杜仲提取物(EE)抗UVA致人真皮成纤维细胞光老化的作用机制。方法:将体外培养的ESF-1细胞通过UVA照射建立细胞光老化模型,给予500μg/mL、250μg/mL、125μg/mL、62.5μg/mL 4种不同浓度的杜仲提取物,采用ELISA法检测细胞培养液中Ⅰ型胶原蛋白(ColⅠ)、基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、基质金属蛋白酶-3(MMP-3)的含量。结果:ESF-1细胞接受40J/cm的UVA照射后,细胞培养液中MMP-1、MMP-3含量明显升高(P0.05),ColⅠ含量明显降低(P0.05);给予EE后,细胞培养液中ColⅠ含量明显升高(P0.05),MMP-1含量明显降低(P0.05),MMP-3含量无明显变化。结论:杜仲提取物能抑制UVA引起的人MMP-1及MMP-3的异常分泌,降低ColⅠ的降解。     

探讨强脉冲光治疗紫外线所致皮肤光老化作用的机制

探讨强脉冲光治疗紫外线所致皮肤光老化的可能作用机制,为临床应用提供理论依据。     

水飞蓟素对UVB致人角质形成细胞光老化保护作用的研究

目的：对水飞蓟素中的主要成分水飞蓟宾、异水飞蓟宾、水飞蓟宁、水飞蓟亭的抗细胞光老化作用进行研究。方法：采用UVB辐射HaCaT进行造模并设置空白对照组,运用酶生化法检测水飞蓟宾、异水飞蓟宾、水飞蓟宁、水飞蓟亭对UVB辐射HaCaT后的细胞增殖及抗氧化酶的影响,确定水飞蓟素中抗HacaT细胞光老化的主要有效成分。结果：与模型组相比,水飞蓟素中的水飞蓟宾、异水飞蓟宾、水飞蓟宁、水飞蓟亭均可增强细胞的增殖活力、提高细胞中SOD的活性、降低MDA的产生和LDH的漏出量。结论：水飞蓟素中的水飞蓟宾、异水飞蓟宾、水飞蓟宁、水飞蓟亭对UVB致人角质形成细胞光老化均具有保护作用,其中水飞蓟宁和水飞蓟亭的抗光老化作用更为显著。     

绞股蓝总皂苷干预光老化人皮肤角质形成细胞炎症分泌因子的研究

目的:研究绞股蓝总皂苷对光老化人皮肤角质形成细胞分泌炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α表达的影响。方法:选取10只大鼠,随机分为2组,每组5只,分别设为空白血清组、绞股蓝总皂苷含药血清组,分别用以制备空白大鼠血清和绞股蓝含药血清。应用UVB人工照射方法制备光老化人皮肤角质形成细胞模型,用含绞股蓝总皂苷的大鼠血清进行干预,12h后采用ELISA方法检测各组细胞培养上清液中IL-1β、IL-6和TNF-α的水平。结果:与空白对照组比较,UV模型组细胞IL-1β、IL-6和TNF-α表达显著上调(P<0.01);与UV模型组比较,绞股蓝总皂苷含药血清组细胞中IL-1β、IL-6和TNF-α表达均显著下调(P<0.01);与空白血清组比较,绞股蓝总皂苷含药血清组细胞中IL-1β、IL-6和TNF-α表达均显著下调(P<0.01)。结论:绞股蓝总皂苷可抑制UV辐射人皮肤角质细胞分泌炎症因子,抑制皮肤光老化。     

甘草苷对中波紫外线诱导人皮肤角质形成细胞凋亡的影响

目的:研究甘草苷对中波紫外线(UVB)诱导人皮肤角质形成细胞(Ha Ca T)凋亡的影响。方法:以不同浓度的甘草苷作用于Ha Ca T细胞,噻唑蓝(MTT)比色法筛选甘草苷的有效安全浓度;用30 m J·cm-2的UVB作用于Ha Ca T细胞,建立光老化模型,MTT比色法检测光老化Ha Ca T细胞增殖率;流式细胞术检测各组细胞中活性氧自由基(ROS)含量和总凋亡率;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测光老化Ha Ca T细胞中半胱氨酸天冬氨酸-3(Caspase-3),半胱氨酸天冬氨酸-9(Caspase-9)mRNA表达水平;蛋白免疫印记法(Western blot)检测光老化Ha Ca T细胞中B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),Caspase-3,Caspase-9蛋白表达量。结果:筛选出甘草苷的最佳有效安全浓度为1×10-7,1×10-6,1×10-5mol·L-1。与空白组比较,UVB组细胞增殖率显著降低(P0.01),细胞中ROS含量和总凋亡率显著升高(P0.01),Caspase-3,Caspase-9 mRNA表达水平显著升高(P0.01);Bcl-2蛋白表达量显著降低(P0.01),Caspase-3,Caspase-9蛋白表达量显著升高(P0.01)。与UVB组比较,1×10-7,1×10-6,1×10-5mol·L-1甘草苷+UVB组细胞增殖率显著升高(P0.01);细胞中ROS含量和总凋亡率显著降低(P0.05,P0.01),Caspase-3,Caspase-9 mRNA表达水平显著降低(P0.05,P0.01);Bcl-2蛋白表达量显著升高(P0.05,P0.01),Caspase-3,Caspase-9蛋白表达量显著降低(P0.05,P0.01)。结论:甘草苷能通过促进抗凋亡因子Bcl-2蛋白的表达,减少促凋亡相关细胞因子Caspase-3,Caspase-9 mRNA和蛋白的表达,从而抑制UVB诱导的Ha Ca T细胞凋亡。     

蒿秦化斑方对紫外线B诱导的HaCaT细胞光损伤的影响

目的 观察蒿秦化斑方对紫外线B(ultraviolet-B,UVB)诱导的HaCaT细胞光损伤的保护作用并探讨其可能机制。方法 建立300 m J/cm2UVB辐射损伤HaCaT细胞的病理模型,使用蒿秦化斑方干预,实验分为空白对照组、UVB模型组及蒿秦化斑方高、中、低剂量组。使用MTT法测定蒿秦化斑方的安全性及HaCaT细胞的增殖;吸光度法测定HaCaT细胞中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(catalase,CAT)的活性和丙二醛(malondialdehyde,MDA)的含量; ELISA法检测HaCaT细胞细胞间粘附分子-1(intercellular adhesion molecule 1,ICAM-1)、血管细胞间黏附分子-1(vascular cell adhesion molecule 1,VCAM-1)、内皮细胞选择素(endothelium-selectin,E-selectin)、白细胞介素-10 (interleukin-10,IL-10)、转化生长因子β(transforming growth facor-β,TGF-β)的含量。结果 与空白对照组比较,UVB模型组细胞增殖能力降低(P0.05),与UVB模型组比较,蒿秦化斑方高、中、低剂量组细胞增殖能力均增强(P0.05);与空白对照组比较,UVB模型组SOD、CAT活性降低(P0.05),MDA含量增加(P0.05);与UVB模型组比较,蒿秦化斑方高剂量组SOD、CAT的活性增强(P0.05),MDA的含量降低(P0.05)。与空白对照组比较,UVB模型组ICAM-1、VCAM-1、E-selectin、IL-10含量均增加(P0.05),TGF-β含量表达降低(P0.05);与UVB模型组比较,蒿秦化斑方高剂量组ICAM-1、VCAM-1、E-selectin、IL-10的含量均降低(P0.05),TGF-β含量升高(P0.05)。结论 高剂量蒿秦化斑方能够通过增强抗氧化酶SOD、CAT的活性及减少脂质过氧化物MDA的产生抑制UVB诱导的HaCaT细胞氧化损伤,通过降低HaCaT细胞中炎症相关因子ICAM-1、VCAM-1、E-selectin、IL-10的表达抑制UVB诱导的HaCaT细胞炎症反应,通过细胞增殖和上调TGF-β的表达修复HaCaT细胞屏障功能,从而对UVB诱导的HaCaT细胞光损伤起到保护作用。     

益母草对紫外线所致皮肤光老化防护作用的研究

目的:建立皮肤光老化动物模型并探讨益母草对紫外线所致皮肤光老化的防护作用。方法:采取高剂量中波紫外线和长波紫外线短期联合照射的方法,建立皮肤光老化的实验动物模型。每天每次紫外线光照后的间歇,在紫外线照射区域的皮肤上外涂益母草赋形剂。结果:正常皮肤、紫外线照射和外涂益母草赋形剂皮肤区域的各组小鼠皮肤组织中CAT、MDA、SOD、HyP、GSH-Px的含量均有变化,差异有显著性(P<0.01)。结论:短期高强度的紫外线照射能够引起皮肤光老化的表现;益母草对紫外线照射所致皮肤光老化的损害有保护和修复作用。     

甘草次酸对UVB诱导HaCaT细胞光老化的保护作用及相关细胞因子的影响

目的:研究甘草次酸对中波紫外线(UVB)诱导人皮肤角质形成细胞(Ha Ca T)细胞光老化的保护作用及相关炎症因子影响。方法:用不同浓度的甘草次酸作用于Ha Ca T细胞,噻唑蓝(MTT)比色法测定细胞增殖率,筛选出药物最佳有效浓度;用30 m J·cm-2的UVB照射Ha Ca T细胞,建立光老化模型,用3个不同浓度的甘草次酸作用于光老化细胞,MTT比色法检测光老化Ha Ca T细胞增殖率;谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px),过氧化氢酶(CAT)和乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒分别检测甘草次酸对光老化Ha Ca T细胞中GSH-Px,CAT和LDH活性的影响;蛋白免疫印记法(Western blot)检测甘草次酸对光老化Ha Ca T细胞中白细胞介素-1β(IL-1β),IL-6和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)蛋白表达量的影响。结果:筛选出1×10-7,1×10-6,1×10-5mol·L-1甘草次酸为最佳有效浓度。与空白组比较,UVB组细胞增殖率显著降低(P0.01),GSH-Px,CAT活性显著降低,LDH活性显著升高(P0.01),IL-1β,IL-6,TNF-α蛋白表达量显著升高(P0.05,P0.01)。与UVB组比较,1×10-7,1×10-6,1×10-5mol·L-1甘草次酸+UVB组细胞增殖率显著上升(P0.01),GSH-Px,CAT活性显著上升,LDH活性显著降低(P0.01),IL-1β,IL-6,TNF-α蛋白表达量显著降低(P0.05,P0.01)。结论:甘草次酸可通过提高GSH-Px,CAT活性,降低LDH活性,减少炎症因子IL-1β,IL-6和TNF-α的表达,从而抑制UVB诱导Ha Ca T细胞光老化。     

天然中草药对抗皮肤光老化的研究概况

皮肤衰老是内源性作用和光老化作用的共同结果,而紫外线的辐射是导致皮肤光老化最为重要、常见的外源性因素.严重的皮肤光老化不仅损害美容,而且还能造成多种不同的不良反应,如晒伤、炎症、色斑,甚至皮肤癌症的发生.近年来,开发天然中草药作为对抗皮肤光老化安全有效的防护剂,成为了国内外不少学者的研究热点.本文就抗皮肤光老化理论自由基学说中提及的天然中草药及其化学成分的研究概况进行总结和分析,并对其进一步发展前景提出展望.     

黄芩素对中波紫外线诱导角质形成细胞凋亡及相关细胞因子表达的影响

目的:研究黄芩素对中波紫外线(UVB)诱导角质形成细胞凋亡及相关细胞因子表达的影响。方法:体外培养人皮肤角质形成细胞(HaCaT),取对数生长期的细胞,随机分为空白组、模型组和黄芩素组,并用30 mJ·cm~(-2)的UVB照射模型组和黄芩素组,建立光老化模型。噻唑蓝(MTT)比色法筛选黄芩素的有效安全浓度,并测定黄芩素对光老化HaCaT细胞增殖率的影响;活性氧自由基(ROS)试剂盒测定各组细胞中ROS含量;Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒测定各组细胞凋亡率;蛋白免疫印迹法(Western blot)测定各组细胞中B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),半胱氨酸天冬氨酸-3(Caspase-3)及Caspase-9蛋白表达水平。结果:筛选出1×10~(-7),1×10~(-6),1×10~(-5)mol·L~(-1)黄芩素为最佳有效安全浓度。与空白组比较,模型组ROS含量和细胞凋亡率显著升高(P0.01),Bcl-2蛋白表达水平显著降低(P0.01),Caspase-3及Caspase-9蛋白表达水平显著升高(P0.01)。与模型组比较,1×10~(-7),1×10~(-6),1×10~(-5)mol·L~(-1)黄芩素组ROS含量和细胞凋亡率显著降低(P0.05,P0.01),Bcl-2蛋白表达水平显著升高(P0.05,P0.01),Caspase-3及Caspase-9蛋白表达水平显著下降(P0.05,P0.01)。结论:黄芩素可以通过降低细胞ROS含量和凋亡率,调控Bcl-2家族中抗凋亡因子Bcl-2蛋白的表达,降低凋亡相关细胞因子Caspase-3和Caspase-9的表达水平,抑制UVB诱导的细胞凋亡。     

玉屏风散抗角质形成细胞光损伤作用的研究

目的探讨玉屏风散对皮肤光老化角质形成细胞生长增殖的影响。方法采用血清药理学方法制备玉屏风散含药血清,紫外线照射建立细胞光老化模型,以不同浓度含药血清处理光老化细胞,观察细胞形态的变化,以MTT法和集落细胞形成能力实验测定细胞活力及增殖能力。结果紫外线能够显著损伤细胞形态,抑制其生长和增殖;玉屏风散含药血清具有抵抗紫外线对细胞损伤的作用,以服用8g生药/kg大鼠的含药血清作用24h效果最佳。结论玉屏风散含药血清能够缓解紫外线对角质形成细胞损伤,具有抗皮肤光老化的作用。     

绞股蓝总皂苷含药血清对皮肤光老化HaCaT细胞分泌炎症因子IL-1β、IL-6的影响

目的:研究绞股蓝总皂苷含药血清对皮肤光老化HaCaT细胞分泌炎症因子IL-1β、IL-6表达的影响.方法:选取20只大鼠,随机分为四组,每组5只,分别设为空白血清组、低剂量绞股蓝总皂苷含药血清组、中剂量绞股蓝总皂苷含药血清组、高剂量绞股蓝总皂苷含药血清组,采用UVB照射人工模拟光老化HaCaT细胞模型,照射后用含不同浓度绞股蓝总皂苷的大鼠血清进行干预,12h后采用ELISA方法检测各组细胞分泌IL-1β、IL-6的表达水平.结果:与空白对照组比较,UVB模型组细胞IL-1β、IL-6表达显著上调;与UVB模型组比较,低剂量绞股蓝总皂苷含药血清组、中剂量绞股蓝总皂苷含药血清组、高剂量绞股蓝总皂苷含药血清组细胞中IL-1β、IL-6表达显著下调(P＜0.01).结论:绞股蓝总皂苷含药血清可能通过抑制UVB辐射人皮肤角质细胞诱导炎症信号分子防护皮肤光老化.     

大黄酚及P38阻断剂对紫外线诱导人永生化表皮细胞光老化的影响及机制研究

目的 研究大黄酚及P38阻断剂SB203580抑制中波紫外线诱导的人永生化表皮细胞(HaCaT immortalizedhuman epidermal cells,HaCaT)光老化的作用及其作用机制.方法 采用MTT法检测不同浓度的大黄酚及SB203580对HaCaT细胞增殖的影响;将细胞按随机数字表法分为空白组、模型组、大黄酚组、P38阻断剂组.培养24 h后,大黄酚组及P38阻断剂组分别加入10-6 mol/L大黄酚及10-7 mol/L SB203580溶液.继续培养24 h,除空白组外,其他各组细胞于紫外灯下照射,照射强度0.61 mW/cm2,照射时间7 min,照射距离10 cm.继续培养24 h后,采用MTT法检测各组细胞的增殖活性;Western Blot检测各组细胞中P38、磷酸化P38(P-P38)、TNF-α 及IL-6蛋白表达.结果 与空白组比较,模型组HaCaT细胞增殖率降低(P<0.01);与模型组比较,大黄酚组及P38阻断剂组HaCaT细胞增殖率升高(P<0.01);与模型组比较,大黄酚组及P38阻断剂组细胞P-P38[(0.419±0.029)、(0.398±0.015)比(0.497±0.051)]、TNF-α[(0.435±0.025)、(0.411±0.021)比(0.509±0.040)]及IL-6[(0.457±0.027)、(0.432±0.018)比(0.478±0.036)]蛋白表达降低(P<0.01).结论 大黄酚及SB203580可抑制紫外线诱导的HaCaT细胞光老化,其作用机制可能与抑制P38MAPK通路及炎症因子表达有关.     

皮肤光老化研究进展

人体的皮肤每天都接受来自日光中的紫外线的辐射,皮肤光老化就是由紫外线长期辐射引起。随着逐年空气污染所致的臭氧层变薄,大量的紫外线更易通过大气层,从而加重皮肤光损害,皮肤光老化的许多改变是可以通过药物改善和逆转的。对皮肤光老化的研究做一综述为其防治研究提供新的思路。