红景天甲醇冷浸提取物的体外抗病毒谱及抗病毒机制的研究

目的:为建立红景天抗病毒谱-效相关评价系统,对红景天抗病毒机制进行初步探究,通过对红景天甲醇冷浸提取物体外抗病毒活性进行筛选,最后选择红景天甲醇冷浸提取物抗柯萨奇病毒B型(COX-B5)活性进行研究病毒机制的初步研究。方法:采用体外抗病毒实验CPE法结合MTT染色法,以半数治疗浓度(EC50)和半数细胞毒性浓度(TC50)并以治疗指数TI值作为评价指标,观察红景天甲醇冷浸提取物对手足口病病毒71型(EV71)、柯萨奇病毒B型(COX-B5)、单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)和呼吸道合胞病毒(RSV)的抑制作用。结果:中药材红景天对于四种病毒感染都有一定程度的抑制效果,其中以肠道病毒的抑制效果最好,红景天甲醇提取物对呼吸道合胞病毒(RSV)的治疗指数为26.35,对单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)的治疗指数为14.03,对柯萨奇病毒B型(COX-B5)的治疗指数为33.82,对手足口病病毒71型(EV71)的治疗指数为27.28。在此基础上,选取红景天甲醇冷浸提取物抗柯萨奇病毒B型(COX-B5)活性做进一步的抗病毒机制研究,结果发现,红景天甲醇冷浸提取物在预防性治疗中,其治疗指数TI值为11.31,在抑制病毒穿入感染中,其治疗指数为19.29,在药物病毒直接作用的灭杀组中,药物的治疗指数为35.26。结论:中药材红景天对于肠道病毒的抑制有明显的效果,但其作用机制较复杂,并非针对病毒吸附感染复制的某一单一环节,作用机制有待进一步研究,红景天作为低毒高效的传统中药材,在抗病毒领域有很大潜力,有待进一步研究开发。     

黄芩提取物体外抗病毒药效学研究

目的研究黄芩提取物对肠道病毒71型(EV71)、柯萨奇病毒B5(COXB5)、呼吸道合胞病毒(RSV)、柯萨奇病毒B3(COXB3)、单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)的体外抑制作用。方法采用细胞体外抗病毒实验,通过CPE法结合MTT法得出半数中毒浓度(TC50)、半数有效浓度(EC50),并且以治疗指数(TI)作为评价指标,以利巴韦林和阿昔洛韦为阳性药,观察黄芩提取物对几种常见病毒的抑制作用。结果黄芩提取物对COXB5、EV71、COXB3、HSV-1、RSV的治疗指数分别为5.46、22.16、4.32、6.10、5.94。结论黄芩提取物对COXB5、EV71、COXB3、HSV-1、RSV都有抗病毒活性,为临床应用提供理论依据。     

手足口病的护理

手足口病(HFMD)是全球性传染疾病,主要由肠道病毒引起,多发生于5岁以下小儿.引发手足口病的肠道病毒有20多种,柯萨奇病毒A组的16、4、5、9、10型,B组的2、5型,以及肠道病毒71型,均为手足口病较常见的病原体,其中以柯萨奇病毒A16型(Cox A16)和肠道病毒71型(EV71)最为常见.     

金振口服液治疗儿童手足口病普通型96例临床观察

手足口病（hand-foot-mouth disease,HFMD）是一种多年存在的传染病,其病原体主要为小RNA病毒科、肠道病毒属的柯萨奇A组16、4、5、7、9、10型,B组2、5、13型;埃可病毒和肠道病毒71型（EV 71）。其中以EV 71和柯萨奇病毒A组16型（Cox A16）最为常见,其发病人群以2岁以下的婴幼儿为主,大多数病例症状轻微,     

槟榔提取物体外抗柯萨奇病毒B3及单纯疱疹病毒1型和乙型肝炎病毒的研究

目的 从槟榔9种提取物中体外筛选出抗柯萨奇病毒B3,单纯疱疹病毒1型活性成分,从其中3种提取物中体外筛选出抗乙型肝炎病毒的活性成分.方法 通过观察药物毒性、病毒引起的细胞病变效应、MTF法,判断药物毒性及药物抗病毒效应.结果 槟榔9种提取物对Hela,Vero细胞具有一定的毒性,而无抗病毒活性,3种提取物不能有效地抑制HepG2.2.15细胞HBeAg的表达.结论 槟榔9种提取物体外无抗柯萨奇病毒B3、单纯疱疹病毒1型的作用,3种提取物体外无抗乙型肝炎病毒的作用.     

海藻不同方法提取物体外抗病毒活性研究

目的:研究海藻4种不同方法提取物的体外抗病毒活性。方法:以呼吸道合胞病毒(RSV)、单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-Ⅰ)、柯萨奇病毒B5(COXB5)、肠道病毒71型(EV71)4种病毒感染的人喉癌上皮细胞(Hep2)、横纹肌瘤细胞(RD)为模型,运用4种不同方法提取的海藻提取物对4种病毒感染的细胞进行治疗,并设利巴韦林、阿昔洛韦作为阳性对照药。采用细胞病变效应法(CPE法)结合4,5-二甲基噻唑-2,5-二苯基四唑溴化物(MTT)比色法检测细胞存活率,计算药物的治疗指数TI值,分析4种不同提取方法提取的海藻提取物对4种病毒的抑制作用。结果:海藻各提取物均有不同程度的抗病毒活性,其中水提取物抑制作用最强,其对RSV、HSV-Ⅰ、COXB5、EV71的治疗指数TI值分别为413.00、310.83、7.36、176.07,与阳性对照药效果相当;乙醇超声提取物对COXB5效果较好,TI值为19.97。结论:海藻提取物具有体外抗RSV、HSV-Ⅰ、COXB5、EV71活性的作用。     

中西医结合治疗手足口病大疱样皮损临床观察

手足口病(Hand foot and mouth disease,HFMD)是由肠道病毒(Enterovirus,EV)感染引起的一种儿童常见传染病,5岁以下儿童多发,主要致病血清型包括柯萨奇病毒(Coxsackievirus,CV)A组4~7、9、10、16型和B组1~3、5型,埃可病毒(Echovirus)的部分血清型和肠道病毒71型(Enterovirus A71,EV-A71)等,其中以CV-A16和EV-A71最为常见,重症及死亡病例多由EV-A71所致。我国各地全年均有发生,近年部分地区CV-A6、CV-A10有增多趋势。     

热毒宁注射液组分抗CoxA16和EV71病毒活性研究

目的:明确热毒宁注射液组分抗柯萨奇病毒A16(coxsackievirus A16,Cox A16)和肠道病毒71(enterovirus 71,EV71)病毒的活性。方法:考察热毒宁注射液1~19号组分(RND1~19)对非洲绿猴肾细胞(Vero)的毒性,明确半数中毒浓度(TC50);进一步利用病毒感染的Vero细胞模型研究各组分的抗病毒活性及量效关系。采用50倍半数组织培养感染量(TCID50)Cox A16和EV71病毒分别感染Vero细胞(1万个/孔),热毒宁注射液组分(15.625~500 mg·L-1)给药3 d后,考察抗Cox A16和EV71病毒活性(n=3)。活性组分(最佳浓度)给药8 h后,检测病毒载量。结果:热毒宁注射液各组分的Vero细胞毒性,TC50从1 000 mg·L-1到221 mg·L-1不等;抗病毒活性及量效关系研究表明,RDN7和RDN18具有较好的抗Cox A16活性,半数有效浓度(EC50)分别为460,92 mg·L-1,治疗指数(TI)分别为1.44,2.40;RDN6和RDN17具有较好的抗EV71活性,EC50分别为395,378 mg·L-1,TI分别为2.22,1.10;病毒载量研究表明,RDN7极显著降低Vero细胞中Cox A16病毒载量(P0.01),RDN6,RDN17极显著地降低Vero细胞中EV71病毒载量(P0.01),而RDN18则没有上述活性。结论:明确了热毒宁注射液组分的抗Cox A16和EV71病毒活性。     

中药抗EV71病毒活性及其在治疗手足口病中的应用

手足口病是由肠道病毒引起的传染病.柯萨奇病毒A16和肠道病毒71型(EV71)是本病的主要致病原,且后者较凶险,更易导致严重并发症而致死、致残,危害性较大.目前对EV71感染尚缺乏有效的药物,因此研制抗EV71病毒活性的药物意义重大.中国中药资源丰富,具有进一步开发和利用的独特优势,从中筛选出具有抗EV71病毒活性的成分,进而开发出新的抗病毒药物具有很大潜力.同时,我国自1981年在上海始见手足口病以来,中药在临床治疗手足口病方面的报道日益增多且方法多样,大多疗效满意,对提高临床诊治水平、控制疾病的发生发展有着积极作用,展现了其独特的临床优势与特点.     

鸭跖草不同提取方法提取物的体外抗病毒实验研究

目的:为建立鸭跖草抗病毒谱-效相关评价系统,对鸭跖草不同提取方法提取物体外抗病毒活性进行筛选,最后选择鸭跖草75%乙醇冷浸提取物抗呼吸道合包病毒(RSV)活性和鸭跖草蒸馏水回流提取物抗单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)活性进行下一步研究。方法:采用体外抗病毒实验CPE法结合MTT染色法,以半数治疗浓度(EC50)和半数细胞毒性浓度(TC50)并以治疗指数TI值作为评价指标,观察鸭跖草不同提取物对肠道病毒71型(EV71)、单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)和呼吸道合胞病毒(RSV)的抑制作用。结果:中药材鸭跖草对于肠道病毒71型(EV71)病毒未见明显效果;75%乙醇冷浸的鸭跖草浸取液对呼吸道合胞病毒(RSV)病毒有较好的抗病毒效果,并且测得鸭跖草75%乙醇冷浸浸取液抗呼吸道合胞病毒(RSV)的治疗指数为21.1,阳性对照药治疗指数为29.8;采用蒸馏水提取的鸭跖草提取液对单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)病毒有较好的抗病毒效果,且测得鸭跖草蒸馏水回流提取物抗单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)的治疗指数为19.6,阳性对照药治疗指数为36.7。结论:鸭跖草在抗呼吸道合胞病毒(RSV)和单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)有一定的效果,为进一步进行鸭跖草抗病毒研究和建立鸭跖草谱-效模型提供了科学依据和数据支持。     

In vitro activity of Paris polyphylla smith against enterovirus 71 and coxsackievirus B3 and its immune modulation

Enterovirus 71 (EV71) and coxsackievirus B3 (CVB3) have resulted in severe pathogenesis caused by the host's immune response, including the cytokine cascade. Paris polyphylla Smith is a folk medicinal plant in Asia traditionally prescribed for the reduction of pain and elimination of poisoning. In this study, we investigated the anti-EV71 and CVB3 activity of P. polyphylla Smith as well as its immune modulation. The IC(50) for the P. polyphylla Smith 95% ethanol extract against EV71 and CVB3 were 12.5-23% and 99-156% of that of ribavirin, a positive control. Prevention of viral infection, viral inactivation, and anti-viral replication effects against both EV71 and CVB3 were demonstrated by the extract, the anti-viral replication effect being dominant. The extract significantly increased IL-6 production in both EV71- and CVB3-infected cells. A high correlation was possibly demonstrated between the high amounts of IL-6 induction in the EV71 and CVB3-infected cells and the anti-viral replication activity of the extract. In conclusion, good anti-EV71 and CVB3 activity was observed in the P. polyphylla Smith 95% ethanol extract. The high amounts of IL-6 induction in the virus-infected cells played a key role in the anti-viral activity of the extract.     

卷柏属药用植物提取物体外抗柯萨奇病毒作用研究

目的:比较研究卷柏属7种药用植物的13种提取物在体外抗柯萨奇病毒CVB3的作用。方法:采用13种提取物培养CVB3感染的Hep-2细胞,观察比较细胞病变效应(CPE),72h后MTT法测定细胞活性。结果:在Hep-2细胞体系中,卷柏属7种药用植物的乙酸乙酯和95%乙醇提取物部位具有一定的抑制CVB3对细胞的致病变作用,使细胞存活率提高。结论:卷柏属药用植物可以作为新的抗CVB3的资源植物。     

Antiviral activities of some Ethiopian medicinal plants used for the treatment of dermatological disorders

Acokanthera schimperi (Apocynaceae), Euclea schimperi (Ebenaceae), Inula confertiflora (Asteraceae), Melilotus elegans (Leguminosae), and Plumbago zeylanica (Plumbaginaceae), are some of the medicinal plants used in Ethiopia for treatment of various skin disorders. In this study, the antiviral activities of the 80% methanolic extracts of these plants have been examined against coxsackievirus B3 (CVB3), influenza A virus and herpes simplex virus type1 Kupka (HSV-1) using cytopathic effect (CPE) inhibitory assays in HeLa, MDCK, and GMK cells, respectively. In parallel, the cytotoxicity was quantified using a crystal violet uptake assay. The antiviral activity of the most active compound was confirmed with plaque reduction assays. The results revealed that the extracts of Acokanthera schimperi and Euclea schimperi showed antiviral activity against all three tested viruses albeit with unequal efficacy. Whereas the Acokanthera schimperi extract exhibited the strongest activity against CVB3, the extract of Euclea schimperi inhibited influenzavirus A replication most effectively. A weak anti-influenzavirus A activity was also exhibited by the other plant extracts tested. In addition, CVB3 was inhibited by the extracts of Plumbago zeylanica and HSV-1 by Inula confertiflora. Thus, the extracts of these plants, particularly those of Acokanthera schimperi, Euclea schimperi and Inula confertiflora which showed activity against CVB3 and HSV-1 support their traditional use in the treatment of skin diseases of viral origin.     

桑寄生乙醇提取物抗柯萨奇病毒B3的实验研究

目的：为研制抗柯萨奇病毒B3(CVB3)新药,观察了桑寄生乙醇提取物不同部分抗CVB3药效。方法：以病毒唑为阳性对照,用空斑减数实验检测了抗CVB3药效。结果：在HEp-2细胞系统中,乙酸乙酯萃取部分(B)对CVB3直接杀灭、感染阻断、增殖抑制的ED50为2.32,0.24,1.91 μg．ml-1。正丁醇萃取部分(C)的相应数值分别为1.44,2.06,3.70 μg．ml-1。病毒唑对CVB3增殖抑制的ED50为7.55 μg．ml-1。结论：桑寄生B部分对CVB3直接杀灭、感染阻断、增殖抑制的治疗指数(TI)为22.6,219,27.5,C部分的相应TI为115,165,21.6。病毒唑对CVB3增殖抑制的TI为38,数值相近。桑寄生B,C部分抗CVB3作用值得开发。     

鸡血藤醇提物体外抗病毒活性研究

目的 研究鸡血藤醇提物及其不同极性溶剂萃取物的体外抗柯萨奇B3病毒、单纯疱疹病毒Ⅰ型、呼吸道合胞病毒、甲型流感病毒以及乙型肝炎病毒的活性.方法 鸡血藤药材60%醇提物经石油醚、乙酸乙酯、正丁醇依次萃取后浓缩制得各不同极性溶剂萃取物,观察其药物毒性、病毒引起的细胞病变效应判断药物毒性及药物抗病毒效应.结果 鸡血藤醇提物无抗柯萨奇B3病毒和呼吸道合胞病毒活性,但具有抗甲型流感病毒、乙型肝炎病毒和单纯疱疹病毒Ⅰ型活性,且抗单纯疱疹病毒Ⅰ型效果显著.醇提物经初步萃取分离,得到5个不同极性溶剂萃取物,其中乙酸乙酯萃取物和水层留余物抗单纯疱疹病毒Ⅰ型活性最显著.结论 鸡血藤醇提物及其乙酸乙酯萃取物和水层留余物在体外对单纯疱疹病毒Ⅰ型具有明显的抑制作用,适用于抗单纯疱疹病毒Ⅰ型治疗药物的深入研究与开发.     

Glycyrrhizic acid as the antiviral component of Glycyrrhiza uralensis Fisch. against coxsackievirus A16 and enterovirus 71 of hand foot and mouth disease

Ethnopharmacological relevance

The radices of Glycyrrhiza uralensis Fisch. and herbal preparations containing Glycyrrhiza spp. have been used for thousands of years as an herbal medicine for the treatment of viral induced cough, viral hepatitis, and viral skin diseases like ulcers in China. Glycyrrhizic acid (GA) is considered the principal component in Glycyrrhiza spp. with a wide spectrum of antiviral activity.

Aim

The present study attempt to validate the medicinal use of Glycyrrhiza uralensis for hand, foot and mouth disease (HFMD) and further to verify whether GA is an active antiviral component in the water extract of Glycyrrhiza uralensis.

Materials and methods

Radices of Glycyrrhiza uralensis Fisch. were extracted with hot water. The chemical contents of the extract were profiled with HPLC analysis. The antiviral activity of the extract and the major components was evaluated against infection of enterovirus 71 (EV71) and coxsackievirus A16 (CVA16) on Vero cells. The cytopathic effect caused by the infection was measured with MTT assay. Infectious virion production was determined using secondary infection assays and viral protein expression by immunoblotting analysis.

Results

The extract at 1000 μg/ml suppressed EV71 replication by 1.0 log and CVA16 by 1.5 logs. The antiviral activity was associated with the content of GA in the extract since selective depletion of GA from the extract by acid precipitation resulted in loss of antiviral activity. In contrast, the acid precipitant retained antiviral activity. The precipitant at a concentration of 200 μg/ml inhibited EV71 and CVA16 replication by 1.7 and 2.2 logs, respectively. Furthermore, GA dose-dependently blocked viral replication of EV71 and CVA16. At 3 mM, GA reduced infectious CVA16 and EV71 production by 3.5 and 2.2 logs, respectively. At 5 mM, CVA16 production was reduced by 6.0 logs and EV71 by 4.0 logs. Both EV71 and CVA16 are members of Enterovirus genus, time-of-drug addition studies however showed that GA directly inactivated CVA16, while GA anti-EV71 effect was associated with an event(s) post virus cell entry.

Conclusions

This study validated the medicinal usefulness of radices Glycyrrhiza uralensis against the etiological agents of HFMD. In addition to the identification of GA as the antiviral component of Glycyrrhiza uralensis against EV71 and CVA16 infection, this study also reveals that GA inhibits EV71 and CVA16 with distinct mechanisms.     

EV71和CA16型手足口病动物模型及其病毒感染特点分析

手足口病(HFMD)是由肠道病毒引起的儿童常见传染病,发病率高,可引发肺水肿、心肌炎、无菌性脑膜炎等致命性并发症,严重威胁着患儿的健康。目前该病相关病毒的致病机制、致病病毒不同基因型之间的关系、药效学评价方法、药物抗病毒机制等核心问题尚不明确,而构建具有人类染毒模拟表现的动物模型是解决以上问题的关键。国内外研究人员建立了多种不同动物种属、品系的HFMD动物模型,以肠道病毒71型(EV71)和柯萨奇病毒A16型(CA16)最常见,应用也最为广泛。EV71与CA16同属小核糖核酸病毒科肠道病毒属肠道病毒A型,两者在病原学、感染和复制特征、感染导致的临床症状和免疫反应有相似的方面,但引发的HFMD动物模型在易感年龄,感染方法,表现出的神经毒性、临床症状及体征、组织器官损伤程度等也有明显不同的方面,因此,研究者应根据实际需要选择和建立合适的动物模型,这对于研究结果的可靠性具有重要意义。本文通过梳理感染EV71和CA16病毒建立的不同物种HFMD动物模型,分类阐述各模型的种属品系、病毒株类型、感染方法、病毒感染特点,深入研究EV71及CA16感染诱发的HFMD特点及其感染所导致的临床症状差异,整体评价小鼠、树鼩及非人灵长类3类动物模型各自的优缺点,以期为相关研究提供参考。     

直杆桉果实提取物体外抗单纯疱疹病毒和乙型肝炎病毒的实验研究

目的:研究3种不同溶剂的直杆桉果实提取物体外抗单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)和乙型肝炎病毒(HBV)的活性。方法:采用MTT法检测药物毒性,CPE法与空斑减数实验检测药物抗HSV-1活性;采用ELISA法检测药物对HepG2.2.15细胞分泌的乙型肝炎表面抗原(HBsAg)和乙型肝炎E抗原(HBeAg)的抑制作用。结果:直杆桉叶果实的醋酸乙酯提取物(P18-E1)和甲醇提取物(P18-E2)无明显抗HSV-1的活性,水提物(P18-E3)能明显抑制HSV-1的致病变作用,其TC50为69.20 mg/mLI,C50为126.77μg/mL,治疗指数为545.87;3种不同溶剂的提取物对HepG2.2.15细胞分泌的HBsAg和HBeAg均无明显抑制作用。结论:直杆桉果实的水提物(P18-E3)具有显著的抗HSV-1活性,主要是对病毒有直接灭活作用,也能影响病毒对细胞的吸附。初步推测其抗HSV-1活性的机理是影响病毒的囊膜结构从而使之失活。     

益心康对感染柯萨奇病毒B3的大鼠体外心肌细胞CVB3 mRNA复制及相关细胞因子的影响

[目的]通过检测益心康药液作用于感染柯萨奇病毒B3(CVB3)后的乳鼠心肌细胞中柯萨奇病毒mRNA的复制情况及其所释放的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及转化生长因子-β(TGF-β)表达情况,进一步探讨益心康对病毒性心肌炎的病毒复制及相关细胞因子的作用机制。[方法]使益心康的药液作用于乳鼠心肌细胞,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测心肌细胞中柯萨奇病毒mRNA的复制情况及其所释放的TNF-α及TGF-β的表达水平。[结果]益心康在CVB3感染的病毒性心肌炎的发病及发展过程中有抑制CVB3复制的作用,同时可以减少相关细胞因子TNF-α、TGF-β的分泌。益心康组(D组)、益心康加地塞米松组(E组)的细胞中的CVB3 mRNA、TNF-α、TGF-β表达水平明显低于病毒感染组(P<0.01),同时低于利巴韦林组(P<0.05),均有统计学意义;D组、E组之间P>0.05,无统计意义。[结论]益心康对柯萨奇病毒感染心肌细胞具有显著保护作用。     

生物碱类化合物抗病毒活性及其机制研究进展

生物碱是普遍存在于植物体内的含氮次生代谢产物,具有广泛的生物活性。研究表明,生物碱类化合物对多种病毒表现出良好的抑制作用和广谱的抗病毒活性,成为近年来抗病毒小分子化合物研究的新焦点。研究证实,生物碱对甲型流感病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、单纯疱疹病毒、艾滋病毒、寨卡病毒、柯萨奇病毒和烟草花叶病毒等表现出显著的抑制作用,其抗病毒机制主要包括抑制病毒吸附和进入、减少病毒RNA和蛋白质合成、促进细胞凋亡和自噬、调节各种病毒相关蛋白以及通路等。根据生物碱的抗病毒种类进行分类,以氧化苦参碱、麻黄碱、石斛碱等为例,综述了常见生物碱抗病毒作用特点和机制,为生物碱类抗病毒小分子化合物的研究提供参考。