针刺对脑出血急性期血肿周围脑细胞内Ca~(2+)浓度影响的时效关系的实验研究

目的:通过观察针刺对脑出血模型大鼠血肿形成后不同时间的血肿周围脑细胞内Ca~(2+)浓度的影响,研究针刺作用及其时效性的相关保护机制。方法:采用Wistar大鼠尾状核自体血缓慢注入法制作脑出血模型。脑细胞内Ca~(2+)浓度通过特异性荧光探针Fluo-4与Ca~(2+)结合而荧光强度增强的技术原理,应用荧光分光光度仪进行测定。结果:脑出血急性期血肿周围脑细胞内Ca~(2+)浓度显著升高,针刺各组均偏低,但高于假手术组。结论:针刺治疗能够降低脑出血急性期所造成的血肿周围脑细胞内Ca~(2+)浓度,从而在脑出血急性期起到保护脑组织的作用,且脑出血发生后针刺干预越早疗效越好。     

黄竹清脑颗粒对脑出血急性期(痰热腑实证)大鼠脑组织细胞凋亡影响的实验研究

目的:研究黄竹清脑颗粒对脑出血急性期(痰热腑实证)大鼠血肿周围脑组织细胞凋亡的影响。方法:采用胶原酶Ⅶ-肝素混合液立体定位注射及配合SD大鼠自体粪便灌胃的方法制作60只脑出血急性期(痰热腑实证)大鼠模型,将大鼠随机分为空白对照组、痰热腑实证模型组、黄竹清脑颗粒大、中、小剂量组及清开灵口服液组,采用TUNEL法(脱氧核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法)进行脑组织细胞凋亡的检测。结果:(1)痰热腑实证模型组与空白对照组对比,前者大鼠血肿周围脑组织细胞凋亡阳性率明显高于后者大鼠正常脑组织(P<0.01),提示造模成功;(2)黄竹清脑颗粒大、中剂量组疗效优于清开灵口服液组及黄竹清脑颗粒小剂量组(P<0.05);结论:黄竹清脑颗粒能明显减轻脑出血期(痰热腑实证)大鼠粪便干结、烦躁易动、口干多饮、喉间痰鸣、舌苔黄腻等症状,改善大鼠脑出血后神经系统病态体征,并具有明显降低大鼠脑组织细胞凋亡,起到保护脑细胞作用。     

针刺干预实验性脑出血大鼠细胞凋亡的时效研究

目的 观察针刺对脑血肿周围组织细胞凋亡等的影响,研究不同时机介入针刺对脑出血病理状态下的脑保护作用.方法 采用自体血注入尾状核模型大鼠,随机分为空白组、模型组和四个针刺组.针刺组分别于造模成功后3h、9h、24h、48 h开始针刺,每日针刺2次,连续针刺3d,各针刺组与模型组均在造模成功后5d处死,断头取脑,观察相关指标.结果 针刺能降低脑出血大鼠脑组织促凋亡因子Bax的表达,增高抑凋亡因子Bcl-2及HSP70的表达,减少细胞凋亡的发生,这些作用均与介入时机正性相关.结论 针刺能减轻脑出血大鼠脑组织细胞凋亡,并且介入时机越早,效果越好.     

脑脉Ⅱ号口服液对高血压脑出血大鼠脑组织细胞凋亡的抑制作用

目的 探讨高血压脑出血大鼠血肿周围脑组织细胞凋亡的时程变化规律，并观察中药复方制剂脑脉Ⅱ号口服液对细胞凋亡的影响。方法 70只SD大鼠随机分为正常组（5只）、假手术组（5只），模型组（30只）．治疗组（30只）。向双肾双夹肾血管性高血压大鼠右侧尾状核注入含0．4U胶原酶（Ⅶ型）的生理盐水2μL诱导脑出血。假手术大鼠与模型大鼠手术过程相同，仅向尾状核注入2μL生理盐水。注射后2h开始，每日灌胃给予脑脉Ⅱ号口服液（8mL／d，6倍临床等效剂量）或等容积蒸馏水直至处死。注射后6，12h，1，3，7，14d取脑。用末端脱氧核苷酸转移酶介导的缺口末端标记（TUNEL）法检测凋亡细胞并计数TUNEL阳性细胞，用流式细胞术检测血肿周围细胞凋亡百分率。结果 正常组和假手术组大鼠脑内可见极少量凋亡细胞。与假手术组比较，模型组TUNEL阳性细胞数在注射后6h显著增加（P〈0.01），3d达到高峰，7d以后明显下降，持续增加至14d后；细胞凋亡百分率的时程变化规律与TUNEL阳性细胞数的变化规律一致。注射后12h至14d各时间点，治疗组TUNEL阳性细胞数和细胞凋亡百分率均较模型组显著降低（P〈0．05）。结论 脑脉Ⅱ号口服液对高血压脑出血大鼠血肿周围脑组织细胞凋亡具有抑制作用。     

针刺“水沟”“内关”对脑出血大鼠血肿周围脑组织细胞凋亡相关因子表达的影响

目的:观察大鼠脑出血急性期血肿周围脑组织中含半胱氨酸的天冬氨酸水解酶Caspase-3、Caspase-9表达随时间的动态变化及针刺干预对其影响,探讨针刺"水沟""内关"对大鼠脑出血急性期神经细胞凋亡的影响及其可能的神经保护机制。方法:健康雄性大鼠随机分为对照组、模型组、穴位组、非穴组,每组24只。采用自体非肝素抗凝动脉血二次注入大鼠尾状核制作急性脑出血模型,符合纳入标准的大鼠再按出血后6、24、48、72 h分为4个时间点亚组。穴位组用提插捻转泻法刺激双侧"内关",雀啄法强刺激"水沟",两穴留针30 min;非穴组用提插捻转泻法刺激双侧腋中线下5 mm的2个非穴点,雀啄法强刺激尾骨尖左侧旁开3 mm的非穴点。6、24 h组于造模后大鼠清醒即刻干预1次,对应时间点取材;48、72 h组每日干预1次,对应时间点取材。采用神经损伤评分(NSS)法对大鼠行为学进行评分;用免疫组织化学法检测血肿周围脑组织Caspase-3、Caspase-9蛋白表达情况。结果:与同时点对照组比较,模型组大鼠出血后各时点NSS、血肿周围脑组织中Caspase-3及Caspase-9蛋白表达均明显升高(P0.01,P0.05);与同时点模型组比较,穴位组72 h亚组NSS、各时点血肿周围脑组织中Caspase-3及Caspase-9蛋白表达均明显降低(P0.05);与同时点穴位组比较,非穴组72 h亚组NSS、各时点血肿周围脑组织Caspase-3及Caspase-9蛋白表达均明显升高(P0.05)。结论:针刺"水沟""内关"能改善出血后大鼠神经功能缺损体征,还可能通过降低出血后脑组织中Caspase-3、Caspase-9蛋白表达水平,抑制出血后由Caspase家族介导的神经元凋亡的发生,拮抗出血后脑组织损伤,保护神经元功能。     

针刺“百会”透“曲鬓”穴对急性脑出血大鼠血肿及CD36、HO-1表达的影响

目的:探讨针刺“百会”透“曲鬓”穴对急性脑出血大鼠血肿及其周围组织CD36、HO-1表达的影响,阐明针刺治疗脑出血的相关机制。方法:将108只Wistar雄性大鼠随机分为假手术组、模型组和针刺组,每组按1 d、3 d和7 d时间点再分3个亚组,每组12只。自体血注入法建立脑出血大鼠模型。采用针刺“百会”透“曲鬓”穴对模型大鼠进行干预。术后各时间点进行mNSS评分、血肿体积及脑水肿含量评估大鼠神经功能损伤以及脑损伤程度;Western-blot法检测血肿周围组织HO-1、CD36蛋白表达。结果:术后各时间点,与模型组比较,针刺组大鼠神经功能缺损评分降低(P0.01);大鼠脑组织含水量降低(P0.01);血肿周围脑组织HO-1、CD36蛋白表达升高(P0.01)。术后3 d、7 d针刺组大鼠脑组织血肿体积缩小(P0.05)。结论:针刺“百会”透“曲鬓”穴能促进脑出血大鼠血肿周围组织HO-1、CD36蛋白表达,减小血肿体积,减轻脑水含量,改善神经功能缺损。     

黄芩苷对脑出血大鼠脑组织凝血酶受体-1表达及细胞凋亡的影响

目的研究黄芩苷对大鼠脑出血后神经组织的保护作用及其机制。方法大鼠随机分为5组:假手术组、脑出血模型组、黄芩苷小、中、大剂量组,采用胶原酶Ⅶ诱导大鼠脑出血模型,术后2h各治疗组给予不同剂量的黄芩苷腹腔注射,余组给予等容量生理盐水,每天1次,连续用药1、3、5、10天后取脑组织,Western blot法检测脑出血周围脑组织凝血酶受体1(protease-activated receptor-1,PAR-1)表达,TUNEL法检测细胞凋亡情况,干湿比重法测定脑组织水肿情况。结果与脑出血模型组比较,黄芩苷各治疗组的大鼠脑组织PAR-1表达和TUNEL阳性细胞数明显减少、脑水肿减轻,差异均有统计学意义(P0.01)。结论脑出血后的脑组织PAR-1高表达可能介导了细胞凋亡和脑水肿,黄芩苷对脑出血大鼠有保护作用,可能参与抑制脑出血后脑组织PAR-1表达、减少细胞凋亡,从而减轻脑水肿症状。     

针刺对大鼠脑出血神经细胞凋亡变性的影响及机制探究

摘要：目的：通过针刺干预观察大鼠脑出血后神经细胞形态结构,凋亡变性的动态变化,探讨针刺治疗大鼠脑出血后对miR-34a-5p的影响及作用机制。方法：自体血脑内注射建立大鼠脑出血模型,随机分为假手术组、模型组、模型+针刺治疗组、模型+ 针刺治疗+阴性对照组、模型+针刺治疗+miR-34a-5p激动剂干预组,每组12只。每组再随机分为1 d、7 d两个亚组。建模12 h后针刺治疗,于1 d、7 d时间点对处死大鼠收集脑组织,HE 染色观察脑组织病理学变化,TUNEL和NeuN 荧光双染,Fluoro-Jade B染色观察神经元细胞凋亡变性情况。结果：模型组大鼠在脑出血损伤后出现不同程度的炎性反应和神经细胞凋亡坏死。针刺后炎性反应减轻,神经细胞凋亡和变性坏死的数目明显减少（P < 0.05）,在给予针刺治疗7 d后,TUNEL和NeuN荧光双染实验和Fluoro-Jade B染色实验中阳性细胞数进一步减少。与模型+针刺治疗组相比,激动剂干预组的神经细胞凋亡和变性坏死数目明显增多（P < 0.05）。结论：针刺可能通过下调miR-34a-5p减轻神经炎症,促进ICH大鼠神经功能恢复,发挥神经保护作用。     

针刺“人中”“内关”对脑出血大鼠血肿周围脑组织NGB、Cyt-C表达的影响

目的观察大鼠脑出血(ICH)急性期血肿周围脑组织脑红蛋白(NGB)、细胞色素C(Cyt-C)的表达随时间动态变化及针刺干预对其影响,探讨针刺“人中”“内关”对大鼠ICH急性期的神经保护及细胞凋亡的影响。方法健康雄性SD大鼠96只随机分为对照组、模型组、穴位组、非穴组,每组24只。采用自体非肝素抗凝动脉血二次注入大鼠尾状核制作动物模型,符合纳入标准的大鼠再按出血后6、24、48、72 h分为4个时间点亚组,每组6只大鼠。穴位组采取针刺“人中”“内关”干预;非穴组针刺非穴点干预;对照组及模型组捆绑束缚,干预后对应时间点取材。采用NSS评分法对术后大鼠神经功能缺损程度进行评分;运用免疫组化法定性测定血肿周围脑组织NGB、Cyt-C蛋白表达情况。结果与模型组相比,穴位组大鼠神经功能缺损体征明显降低,在72 h差异有统计学意义(P0.05)。与模型组相比,穴位组各时间点NGB表达均增高(P0.05)、Cyt-C表达均下降(P0.05);与穴位组相比,非穴组各时间点NGB表达低于穴位组(P0.05)、Cyt-C表达高于穴位组(P0.05)。结论针刺“人中”“内关”能改善ICH大鼠神经功能缺损体征,还可能通过提高出血后血肿周围脑组织NGB表达、降低Cyt-C表达,从而保护脑组织,抑制神经元凋亡,拮抗出血后继发的神经元损伤。     

头针透刺对脑出血大鼠脑组织Caspase-3表达影响的研究

目的：观察头针透刺对脑出血大鼠脑组织Caspase-3的动态调控,探讨针刺对脑出血神经细胞凋亡的干预作用。方法：健康雄性Wistar大鼠48只,将其随机分为模型组和针刺组,制备ICH大鼠模型,另设6只大鼠作空白对照组,采用免疫组织化学法观察模型组和针刺组不同时间点Caspase-3的动态变化。结果：与模型组比较,针刺组血肿周围组织Caspase-3阳性细胞各时间点表达均显著下调。结论：针刺抑制Caspase-3表达,在干预脑出血神经细胞凋亡中发挥作用。     

温通针法对急性期脑出血大鼠脑组织病理形态的影响

目的　观察温通针法对急性期脑出血大鼠脑组织病理形态的影响。方法　将 50只Wistar大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、捻转针刺组和温通针法组 ,并行相应处理。各组大鼠均于脑出血后第 3天相应时间处死 ,石蜡切片 ,光镜下观察脑组织病理形态的改变。结果　捻转针刺组脑实质大量出血 ,部分血凝块出现纤维素 ,脑组织高度水肿 ,较模型组有明显改善 ;温通针法组红细胞大量溶解 ,血凝块机化 ,大量纤维母细胞分布和炎性细胞浸润 ,血肿明显吸收 ,脑组织轻度水肿。结论　温通针法能有效清除急性脑出血后血肿 ,且有利于出血后的水肿消散     

下法对脑出血大鼠神经细胞凋亡的影响

目的：探讨中医下法对实验性脑出血大鼠神经凋亡细胞的保护作用。方法：雄性SD大鼠随机分为对照组、脑出血组、大黄治疗组、番泻叶治疗组,采用自体血缓慢注射法制作大鼠急性脑出血（intracerebral hemorrhage,ICH）模型,观察大鼠神经症状评分和脑组织病理学改变,以及大黄、番泻叶对神经细胞凋亡影响。结果：①脑出血组、大黄治疗组、番泻叶治疗组的神经症状评分较对照组大鼠显著增高（P〈0．01）;大黄治疗组、番泻叶治疗组较脑出血组显著降低（P〈0．01）;大黄治疗组较番泻叶治疗组显著降低（P〈0．05）。②病理观察结果显示：脑出血组、大黄治疗组、番泻叶治疗组脑组织均发生了不同程度的损伤,大黄治疗组、番泻叶治疗组与脑出血组比较,脑组织病理损伤减轻,正常神经元细胞数目显著增加。（3）大黄治疗组、番泻叶治疗组发生表达的TUNEL阳性细胞较脑出血组均显著减少（P〈0．05）。结论：中医下法对实验性脑出血损伤神经细胞凋亡具有神经保护作用。     

头针透刺对脑出血大鼠脑组织ICAM-1表达影响的研究

目的:通过对细胞间粘附因子( ICAM -1)的研究探讨头穴透刺对急性脑出血(ICH)炎症反应的干预作用.方法:按完全随机设计将96只健康雄性Wistar大鼠平均分为模型组、针刺组和西药组.每组观察6h、24 h、48 h、72 h和168 h共5个时间点,每个时间点6只大鼠,另设6只大鼠作为空白对照组.制备ICH大鼠模型,采用免疫组化技术观察不同时间点头穴透刺对ICH大鼠脑组织ICAM -1表达的影响.结果:针刺组大鼠脑内ICAM -1表达在不同时间点均有显著下调,与模型组比较具有显著性差异(P＜0.05).结论:针刺可抑制ICAM -1表达及其所致的继发性脑损伤.     

电针对脑出血大鼠脑组织病理形态学及脑组织含水量和神经损伤积分值的影响

目的：观察电针对大鼠脑出血模型的疗效。方法：选择胶原酶加肝素联合注射法诱导脑出血大鼠模型，观察电针不同穴位对其脑组织病理形态学、脑含水量和神经损伤积分值的影响。结果：电针水沟组（取水沟、上星穴）、电针风府组（取风府、哑门穴）均可明显改善胶原酶加肝素联合注射法诱导大鼠脑出血模型的脑组织形态学损害和神经行为功能的缺损，降低因出血导致的血肿周围组织的水肿；且电针水沟组在改善大鼠脑出血模型的脑组织形态学损害和神经行为功能的缺损方面（72h姿势反射和平衡反射积分值）优于电针风府组。结论：电针水沟、上星和电针风府、哑门对大鼠脑出血损伤均有一定程度的保护作用，且前者的保护作用优于后者。     

电针对脑出血大鼠脑组织病理形态学及脑组织含水量和神经损伤积分值的影响

目的 :观察电针对大鼠脑出血模型的疗效。方法 :选择胶原酶加肝素联合注射法诱导脑出血大鼠模型 ,观察电针不同穴位对其脑组织病理形态学、脑含水量和神经损伤积分值的影响。结果 :电针水沟组 (取水沟、上星穴 )、电针风府组 (取风府、哑门穴 )均可明显改善胶原酶加肝素联合注射法诱导大鼠脑出血模型的脑组织形态学损害和神经行为功能的缺损 ,降低因出血导致的血肿周围组织的水肿 ;且电针水沟组在改善大鼠脑出血模型的脑组织形态学损害和神经行为功能的缺损方面 (72h姿势反射和平衡反射积分值 )优于电针风府组。结论 :电针水沟、上星和电针风府、哑门对大鼠脑出血损伤均有一定程度的保护作用 ,且前者的保护作用优于后者     

实验性脑出血大鼠急性期脑组织含水量与ET、NO含量的关系

目的观察大鼠脑出血后血肿周围脑组织含水量与内皮素（ET）、一氧化氮（NO）含量之间的关系,探讨ET、NO在脑出血后脑水肿形成中的作用,为临床治疗提供新的理论依据和方法。方法选用健康雄性SD大鼠48只,体重250 g~300 g,随机分为脑出血组和假手术对照组,每组24只,两组动物再随机分为术后1 d、3 d、5 d、7 d四个时间点,每个时间点6只。通过脑内注射胶原酶建立大鼠脑出血模型。测定不同时间点脑组织含水量与ET、NO含量。结果脑出血组各时间点脑组织含水量及ET、NO含量均高于对照组（P〈0.05或P〈0.01）。脑组织含水量与ET、NO含量之间呈正相关关系（P〈0.05或P〈0.01）。结论脑出血后ET、NO过量生成,且与脑水肿程度呈正相关关系。脑出血后脑水肿的发生与ET和NO过量生成有关。     

针刺治疗脑出血时效关系的实验研究

[目的]探讨针刺治疗脑出血大鼠的时效关系及其主要机制。[方法]采用二次二步注血法复制大鼠脑出血模型,观察不同时间介入的针刺治疗对脑出血模型大鼠的脑细胞内Ca2 浓度、脑组织超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量以及海马组织中兴奋性氨基酸(EAA)含量的影响。[结果]各针刺组的各项指标与模型对照组的差异具有显著性(P<0.05)。各针刺组之间比较表明,3h针刺组与9h针刺组各项指标的差异无显著意义(P>0.05),但与24h、48h针刺组各项指标之间的差异具有显著性(P<0.05);24h针刺组与48h针刺组各项指标的差异具有显著性(P<0.05)。[结论]针刺治疗对脑出血大鼠脑细胞具有良好的保护作用,而且早期针刺治疗的保护作用更强,提示临床治疗脑出血越早针刺效果越好。其主要机制包括:针刺治疗可以降低细胞内Ca2 的浓度,提高SOD的活力,减少MDA的生成,并且抑制海马组织中EAA的神经毒作用(P<0.05)。     

中风胶囊对实验性脑出血大鼠保护机制的研究

目的：探讨中风胶囊治疗脑出血急性期的作用机制。方法：采用自体血注射法制作大鼠实验性脑出血模型，行末端脱氧核糖核酸转移酶介导的缺口末端标记法（TUNEL）观测血肿周围细胞凋亡程度，行免疫组化法观测血肿周围白细胞介素-6（IL-6）蛋白的表达情况。并设立正常组，假手术组，模型组以及中风胶囊大（2．7g·kg^-1·d^-1），小（1．8g·kg^-1·d^-1）剂量组。结果：中风胶囊组能够抑制细胞凋亡，并降低血肿周围IL-6的阳性细胞比例数。结论：中风胶囊能降低脑组织中IL-6蛋白的含量，从而抑制细胞凋亡，具有减轻炎症，减轻脑组织损伤的作用。     

头针透穴法对脑出血大鼠脑组织中β-catenin表达影响的实验研究

目的：通过观察针刺“百会”透“曲鬓”穴头针疗法对急性脑出血大鼠脑组织形态学及脑组织中β-catenin表达的影响,研究针刺对脑出血后NSCs增殖分化的影响及其与Wnt信号通路关键因子β-catenin的关系,阐明针刺促进脑出血后神经重塑的作用机制。方法：选用雄性Wistar大鼠按随机数字表法随机分为空白组、模型组、针刺组、通路激动剂（SB216763）组;每组再随机分为1天、3天、7天、14天4个亚组。模型组采用立体定向手术自体血注入法制备脑出血模型;针刺组大鼠针刺患侧“百会”透“曲鬓”穴。在光镜下观察各组大鼠脑组织形态学改变;运用蛋白免疫印迹方法检测和免疫组化方法检测各组大鼠脑组织β-catenin的阳性细胞表达以及针刺治疗对它们的影响。结果：针刺及激动剂组可明显改善大鼠神经功能缺损评分,与模型组比较,有显著性差异（P〈0．05）。模型组、针刺组及SB216763组大鼠灶周组织β-eatenin阳性细胞数表达均随时间点变化逐渐增加,3天时达高峰值,7天逐渐减少,14天时仍有表达;针刺组、SB216763组分别与模型组比较,差异均有统计学意义（P〈0．05）;针刺组与SB216763组中β-catenin表达比较无明显差异（P〉0．05）。结论：针刺及通路激动剂均可明显改善脑出血大鼠神经损伤功能评分。“百会”透“曲鬓”针刺法可能具有与通路激活剂SB216763有相类似的作用,可能通过上调β-catenin表达,激活Wnt信号通路,参与调控脑出血大鼠脑组织中神经干细胞的增殖与分化。