雌激素调控小鼠大脑皮质及海马PCSK9表达

目的:研究脂代谢负调控因子人类枯草溶菌素转化酶9(Proprotein convertase subtilisin/kexin type 9,PCSK9)在小鼠脑内的表达及雌激素对其表达的影响。方法:选取15只10周龄C57BL/6J雌性小鼠随机分为:假手术组(n=5),去势组(n=5),去势+雌激素组(n=5)。其中,去势+雌激素组小鼠在去势4 w后每周皮下注射环戊丙酸雌二醇0.001 g·kg~(-1),共三次,3 w后收集小鼠脑组织,采用HE染色、免疫组化及Western Blot法分别评价小鼠脑内PCSK9蛋白表达及定位。结果:PCSK9主要表达于小鼠海马及大脑皮质;与假手术组相比,去势后小鼠脑内海马及皮质区的PCSK9蛋白的表达量均有显著增加(P0.05),去势后补充雌激素能明显减少上述脑区PCSK9表达(P0.001)。结论:PCSK9在小鼠海马及大脑皮质表达,其表达可受到雌激素调控。     

雌二醇经雌激素受体调控分拣蛋白相关受体A对小鼠海马神经元树突棘密度和突触蛋白表达的影响

目的 探讨雌二醇(E₂)调控分拣蛋白相关受体A(SorLA)表达对小鼠海马神经元树突棘密度和突触蛋白表达的影响及机制。方法 32只C57BL/6雌性小鼠随机分为假手术(sham)组、卵巢切除(OVX)组、卵巢切除+E₂组(OVX+E₂)组、卵巢切除+氟维司琼(Fu)+E₂组(OVX+Fu+E₂)组，通过Western blotting和免疫组织化学染色检测小鼠海马CA1区SorLA表达；40只C57BL/6雌性小鼠随机分为假手术+空白病毒(sham+NC-sgRNA)组、卵巢切除+空白病毒(OVX+NC-sgRNA)组、卵巢切除+空白病毒+E₂(OVX+NC-sgRNA+E₂)组、卵巢切除+SorLA敲降病毒+E₂组(OVX+Sorl1-sgRNA+E₂)组，通过高尔基染色检测小鼠海马CA1区神经元树突棘密度；通过Western blotting和免疫组织化学染色检测小鼠海马CA1区突触后致...     

左归丸对围绝经期抑郁症模型小鼠海马组织结构的影响

目的:探讨左归丸对围绝经期抑郁症模型小鼠行为的影响和神经机制。方法:清洁级昆明小鼠按随机数字表法分为假手术组、围绝经期抑郁症模型组、氟西汀+雌激素组、左归丸低、中、高剂量组,每组10只。采用双侧卵巢切除(OVX)联合慢性不可预知性温和应激(CUMS)法制备围绝经期抑郁症小鼠模型,评价各组小鼠行为学变化。尼氏染色法观察海马CA1区神经元形态学变化,TUNEL法检测海马CA1区神经元凋亡,Western Blot法检测海马组织Bcl-2、Bax蛋白表达。结果:左归丸低、中、高剂量治疗后,可改善围绝经期抑郁症模型小鼠抑郁样行为,表现为提高自发活动及探索活动能力、减少行为绝望程度、增加体质量;可减轻海马CA1区神经元损伤,减少海马神经元凋亡,增加海马组织抗凋亡蛋白Bcl-2表达,减少Bax表达(P 0. 05)。结论:左归丸通过减轻小鼠海马组织神经元损伤、减少神经元凋亡而发挥抗围绝经期抑郁症作用。     

CPZ介导急性脱髓鞘小鼠海马中nestin的表达

目的:探讨双环己酮草酰二腙(cuprizone,CPZ)介导急性脱髓鞘小鼠海马中nestin的表达。方法:用掺入0.2%CPZ的普通饲料饲养C57BL/6小鼠6周,制备脱髓鞘模型,然后使用免疫荧光染色、q RT-PCR、Western Blot方法,检测小鼠脑内髓鞘脱失后海马中nestin的表达变化。结果:(1)体重称量结果显示:CPZ组体重明显低于对照组(P0.01);(2)免疫荧光结果显示:CPZ组海马CA区和DG区颗粒细胞层中nestin阳性细胞明显低于对照组分别为:P0.05,P0.01;(3)Western Blot和q RT-PCR实验结果显示:CPZ组海马中nestin蛋白和m RNA含量均明显低于对照组(P0.05)。结论:CPZ介导小鼠急性脱髓鞘后海马内nestin表达降低,提示髓鞘脱失可能会抑制nestin表达。     

低氧预适应对小鼠海马神经元中TSC1表达的影响

目的:在体视显微镜下分割ICR小鼠海马CA1区和CA3区,研究结节性硬化症因子1(TSC1)在小鼠海马低氧中的神经保护作用。方法:ICR小鼠分为对照组(control)、低氧对照组(hypoxia)及低氧预适应组(HPC),在体视显微镜下观察海马形态并分割CA1区和CA3区;采用real time RT-PCR和Western Blot的方法分别检测小鼠海马组织TSC1 mRNA和蛋白的表达;采用免疫荧光检测小鼠海马组织TSC1荧光强度。结果:大脑冠状切片清晰显示出海马CA1区、CA3区和DG区;CA1区TSC1 mRNA在低氧组降低而在低氧预适应组增高;Western Blot和组织免疫荧光显示:与对照组相比,低氧预适应组CA1区TSC1表达增加;而CA3区TSC1在低氧组和低氧预适应组均增加。结论:TSC1的差异性表达可能提示TSC1可能参与了低氧预适应对低氧敏感的CA1区神经细胞的保护。     

雌激素缺乏状态下牙周组织中核转录因子κB及白细胞介素17的表达变化北大核心

背景:绝经期后骨质疏松症与牙周组织疾病有着十分密切的关系,而其作用机制尚不清楚。目的:通过切除卵巢建立雌激素缺乏状态下骨质疏松小鼠模型,观察在此状态下牙槽骨组织中核转录因子κB以及血清与牙龈组织中白细胞介素17的表达变化。方法:将3月龄雌性C3H小鼠随机分为卵巢切除组及假手术组。术后10周,苏木精-伊红染色观察下颌骨及股骨组织学改变;RT-PCR检测下颌骨中成骨相关因子OCN及Runx2表达变化;免疫组化染色及Western Blot检测下颌骨中核转录因子κB表达;CBA流式液相多重蛋白定量技术检测血清及牙龈组织匀浆中白细胞介素17水平。结果与结论:(1)卵巢切除组小鼠股骨的骨皮质变薄,骨髓腔扩大,骨小梁变细、数目减少、密度降低、结构不完整,骨吸收陷窝样结构增多;(2)卵巢切除组牙槽骨组织中OCN及Runx2相对表达量较假手术组低;(3)卵巢切除组小鼠下颌骨中核转录因子κB活化形式P65蛋白呈阳性表达;(4)卵巢切除组牙槽骨组织中核转录因子κB活化形式P65相对表达量高于假手术组;(5)卵巢切除组小鼠血清中白细胞介素17表达水平高于假手术组,但牙龈组织中白细胞介素17表达水平与假手术组相比无明显变化;(6)实验表明,雌激素缺乏导致的核转录因子κB信号通路激活可能在牙周骨吸收中发挥一定作用;而牙周局部组织内的白细胞介素17可能并非此状态下牙周组织破坏的关键因子。     

白藜芦醇对脑缺血大鼠海马β淀粉样蛋白和Tau蛋白的影响

目的:观察白藜芦醇对实验性脑缺血大鼠海马神经元β淀粉样蛋白(Aβ42)和磷酸化Tau蛋白(pTau)表达影响及与学习记忆功能障碍的关系。方法:选取Wistar雄性成年大鼠96只,按随机数字表法分为假手术组、脑缺血组、白藜芦醇组。采用线拴法建立左侧大脑中动脉脑缺血大鼠模型。采用Morris水迷宫测试各组大鼠学习记忆能力;干湿重法测定脑组织含水量;免疫组织化学法检测Aβ42和p-Tau在海马CA1区的分布情况;Western Blot法检测Aβ42、Tau,p-Tau在海马CA1区的蛋白表达量。结果:脑缺血组较假手术组相比脑组织含水量增加,逃避潜伏期延长,穿越平台次数及平台象限停留时间均减少,并且海马CA1区Aβ42和p-Tau蛋白的表达显著上调,差异均有统计学意义(P0.05)。白藜芦醇可显著减少脑组织含水量,改善学习和记忆功能障碍,下调海马CA1区Aβ42和p-Tau蛋白的表达,差异均有统计学意义(P0.05)。结论:白藜芦醇可改善脑缺血大鼠脑水肿及学习记忆障碍,这种脑保护作用可能与下调海马CA1区Aβ42和p-Tau蛋白的表达相关。     

血管性痴呆大鼠海马神经元LC3和Beclin-1的表达

目的:在血管性痴呆(vascular dementia,VD)模型大鼠,观察自噬相关蛋白LC3和Beclin-1在海马CA1区神经元中的表达变化情况。方法:采用重复夹闭双侧颈总动脉(CCA)同时腹腔注射硝普钠溶液方法制备VD大鼠模型,在1、3、5和7 d四个时间点,分别采用Morris水迷宫检测大鼠空间学习记忆能力;HE染色观察CA1区神经元形态变化情况;免疫组化和Western Blot观察海马CA1区神经元上LC3和Beclin-1的表达情况。结果:模型组大鼠各时间点的逃逸潜伏期(escape latency,EL)比假手术组均明显延长(P0.01)。HE染色结果发现,与假手术组相比,模型组大鼠海马神经元出现严重损伤,且随时间延长逐渐加重。免疫组化和Western Blot积分光密度值测定结果显示,模型组大鼠各时间点LC3和Beclin-1的表达均比假手术组明显升高(P0.01),5 d时间点达到高峰。结论:VD模型大鼠缺血再灌注短时间内海马CA1区神经元出现严重损伤,伴有自噬相关的LC3和Beclin-1一过性表达升高。     

雌激素对SAMP8小鼠学习记忆及海马CA1区神经元的影响

目的 观察雌激素对SAMP8鼠学习记忆及海马神经元的影响. 方法 将6月龄SAMP8鼠45只分为假手术组(sham组)、去卵巢组(OVX组)和去卵巢+雌激素组(OVX+E组)3组,并用同龄正常老化SAMR1小鼠作为同源对照组.采用Morris水迷宫实验检测小鼠学习记忆能力,苏木素-伊红染色和免疫组织化学显示海马CA1区神经元及神经型一氧化氮合酶(nNOS)阳性神经元的变化,流式细胞术检测其nNOS的表达量. 结果 OVX组与sham组相比,逃避潜伏期明显延长(P<0.05),跨越平台次数显著减少(P<0.05).雌激素补充治疗能改善学习记忆能力,与sham组比较差异无统计学意义(P>0.05);OVX组海马CA1区神经元病变严重,且CA1区nNOS阳性神经元的数量、吸光度和海马nNOS荧光指数(FI)值均低于sham组(P<0.05);给予雌激素后,OVX+E组各项实验结果与OVX组相比差异有统计学意义(P<0.05),与sham组相比,差异无统计学意义(P>0.05). 结论 雌激素能够改善小鼠的学习记忆能力,有效保护海马CA1区的神经元,提高海马CA1区nNOS阳性神经元的表达.     

去势雌性大鼠海马区Tau蛋白Alzheimer样磷酸化的变化

目的:探讨去势雌性大鼠海马区Tau蛋白Alzheimer样磷酸化的变化。方法:建立大鼠双侧卵巢切除(OVX)模型, 分别于术后1周、2周、3周、4周和8周取大鼠海马组织,Western blot检测Tau蛋白的磷酸化程度。结果:OVX组去势后4周和8周在海马区的PHF-1位点异常磷酸化Tau蛋白显著高于假手术组(P<0.01),而相同时间点和相同区域的Tau-1位点非磷酸化Tau蛋白的水平显著低于假手术组(P<0.01)。结论:卵巢切除可导致雌性大鼠海马区Tau蛋白Alzheimer样过度磷酸化。