手性人参皂苷Rg_3的抗凝血和抗血小板聚集活性差异研究

目的:观察人参皂苷20(S)-Rg3和20(R)-Rg3的的大鼠体内抗凝血活性和体外ADP诱导的血小板聚集活性的差异,初步探究其抗凝作用机制。方法:将大鼠随机分为5组[对照组、20(S)-Rg3和20(R)-Rg3低、高剂量组],每组3只。给药组分别以5 mg·kg-1和20 mg·kg-1剂量尾静脉给药,眼眶取血后,测定血浆的APTT、PT和TT值;取大鼠全血,以ADP为诱导剂,体外测定Rg3对血小板聚集的抑制率。结果:在20 mg·kg-1的剂量下,20(R)-Rg3对APTT有显著的延长作用(P0.05),对PT有显著的缩短作用(P0.05),而S构型则对上述指标无显著的影响。1 mg·m L-1的20(R)-Rg3显著抑制ADP诱导的血小板聚集(P0.05),而20(S)-Rg3则显著促进ADP诱导的血小板聚集(P0.01)。结论:人参皂苷Rg3的两个手性异构体在抗凝血和抗血小板聚集作用上有差异。20(R)-Rg3构型相对于S构型更具有抗凝作用,通过延长APTT和抗血小板聚集两种机制体现出来。     

人参皂苷Rg2及其立体异构体对氧糖剥离/再灌注细胞模型的影响

目的观察不同浓度的人参皂苷Rg2(ginsenoside-Rg2)及其立体异构体[20(R)-Rg2和20(S)-Rg2]对氧糖剥离/再灌注(oxygen-glucose deprivation/reperfusion,OGD/R)细胞模型的保护作用,探讨其作用机制并比较天然型Rg2、20(R)-Rg2和20(S)-Rg2作用效果的差异性。方法将培养7天的皮层神经元分成5组:对照组、模型组、Rg2组、20(R)-Rg2组及20(S)-Rg2组,Rg2组、20(R)-Rg2组及20(S)-Rg2组分别加入浓度为20、40、80μmol/L的Rg2、20(R)-Rg2和20(S)-Rg2预先处理24 h,然后制备OGD/R模型;24 h后检测细胞存活率、凋亡因子Caspase-3的活性、胞内Ca2+浓度以及超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)含量。结果与对照组比较,模型组细胞的存活率、SOD活力明显降低,Caspase-3的活性、Ca2+荧光灰度值及MDA含量明显升高,差异有统计学意义(P0.05);与模型组比较,20、40、80μmol/L浓度时Rg2、20(R)-Rg2和20(S)-Rg2组细胞存活率、SOD活力均显著升高,Caspase-3活性、Ca2+荧光灰度值及MDA含量均显著降低(P0.05);与20(S)-Rg2组比较,20、40、80μmol/L浓度时Rg2和20(R)-Rg2组的细胞存活率升高、MDA含量降低(P0.05),80μmol/L浓度时20(R)-Rg2组及40、80μmol/L浓度时Rg2组的Caspase-3活性降低、SOD活力升高(P0.05),40、80μmol/L浓度时Rg2和20(R)-Rg2组的Ca2+荧光灰度值降低(P0.05);与20(R)-Rg2组比较,80μmol/L浓度时Rg2组的Ca2+荧光灰度值降低(P0.05),40、80μmol/L浓度时Rg2组的SOD活力升高(P0.05),20、40、80μmol/L浓度时Rg2组的MDA含量降低(P0.05)。结论人参皂苷Rg2及其立体异构体预处理可以提高OGD/R条件下的细胞活力,其机制可能与提高细胞抗凋亡、抗氧化能力及减少Ca2+内流有关,并且20(R)-Rg2的作用效果优于20(S)-Rg2却低于天然型Rg2。     

马尾松树皮提取物对顺铂所致体外人胚肾细胞毒性的保护作用

目的: 体外探讨马尾松树皮提取物(PMBE)对顺铂所致肾毒性的保护作用,并初步探究其作用机制。方法: 体外培养人胚肾细胞HEK293,用四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)方法分别检测PMBE、顺铂对HEK293细胞生长的影响,以及PMBE对顺铂所致HEK293细胞毒性的保护作用;并检测各组细胞内的活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)和谷胱甘肽(GSH)含量,以及过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)和硫氧还蛋白酶(TrxR)的活性。结果: PMBE低浓度下促进HEK293细胞生长,较高浓度下对细胞产生轻微毒性;顺铂抑制HEK293细胞生长,使细胞内ROS,MDA含量升高,GSH含量降低,同时降低SOD,CAT和TrxR酶活性;加入PMBE预保护后,在一定范围内降低顺铂对HEK293细胞的损伤,降低ROS,MDA含量,升高GSH含量,以及提高SOD,CAT和TrxR酶活性。结论: 一定浓度的PMBE对顺铂所致人胚肾细胞的毒性有保护作用,其机制可能与PMBE的抗氧化性密切相关。     

人参皂苷Rg3诱导小鼠肝癌细胞凋亡及抑制肿瘤血管内皮生长因子生成的研究

目的观察人参皂苷Rg3对小鼠肝癌细胞凋亡的诱导作用,及肿瘤血管内皮生长因子(VEGF)的变化,探讨Rg3抗肿瘤生长及抑制转移的机制。方法以Hca-F25//6A3-F(F)接种于615近交系小鼠,建立肝癌转移动物模型,分为5组:Rg3预防组(接种肿瘤前给Rg3)、Rg3治疗组(Rg3)、阳性对照组(PDD)、联合治疗组(Rg3 PDD)和阴性对照组(生理盐水),通过电镜及流式细胞仪分析肿瘤细胞的凋亡,并应用免疫组化方法检测VEGF的表达。结果人参皂苷Rg3预防组及治疗组电镜下可见较多细胞凋亡小体的形成;顺铂治疗组的形态改变以细胞破坏为主,凋亡的细胞较少;联合治疗组细胞的凋亡和坏死程度相当。流式细胞学检测分析结果为:Rg3预防组、治疗组及联合治疗组细胞凋亡的特征峰(5/5),而顺铂治疗组为(1/5),阴性对照组未见。应用Rg3各组均较未用药组VEGF表达减少。结论人参皂苷Rg3抗肿瘤生长及抑制转移的机制与诱导细胞凋亡、降低肿瘤血管生成有关。     

人参皂苷Rg1对LPS诱导的SK-N-SH细胞株脑啡肽酶表达的影响

目的:探讨人参皂苷Rg1对LPS诱导的SK-N-SH细胞株脑啡肽酶(NEP)表达的影响.方法:应用MTT比色法检测一定剂量LPS(50 mg/L)和不同浓度人参皂苷Rg1(5、10、20 μmol/L)对SK-N-SH细胞存活率的影响,应用RT-PCR观察细胞中NEP表达的变化.结果:50 mg/L的LPS能使SK-N-SH细胞存活率降低,细胞内NEP的表达下降.人参皂苷Rg1能提高LPS处理的SK-N-SH细胞的存活率,使NEP的表达增高.结论:人参皂苷Rg1对LPS造成的细胞毒性具有一定的保护作用,并可对抗LPS对细胞内NEP表达的降低.     

20(S)人参皂苷Rg3的指纹图谱

目的:研究20(S)人参皂苷Rg3的高效液相色谱指纹图谱,为科学评价及有效控制其质量提供可靠方法。方法:利用HPLC方法,采用梯度洗脱,测定了10批20(S)人参皂苷Rg3样品。采用HPLC-MS和对照品相结合的方法,确定主峰和主要共有峰的归属。结果:20(S)人参皂苷Rg3指纹图谱有5个共有峰,主峰为20(S)人参皂苷Rg3,3号和4号峰是20(S)人参皂苷-Rg3的双键位置异构体,5号共有峰为人参皂苷Rg5。结论:为20(S)人参皂苷Rg3的质量控制方法提供了特征性、专属性强的指纹图谱。     

人参药性菌质正丁醇部位化学成分(Ⅰ)

目的:对人参药性菌质中正丁醇部位化学成分进行研究,阐明其药效物质基础。方法:采用薄层色谱、硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶色谱、半制备液相等方法进行分离纯化,通过波谱数据和理化常数鉴定其化合物结构。结果:从人参药性菌质正丁醇部位中分离并鉴定得到5个化合物,分别为20(S)-人参皂苷-Rg2(1),20(R)-人参皂苷-Rg2(2),人参皂苷Rg1(3),20(S)-人参皂苷Rf(4),人参皂苷Rb1(5)。结论:所有化合物均为首次从人参药性菌质中分离得到。     

S型与R型人参皂苷Rh2对人肺腺癌A549 细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨人参皂苷Rh2(S型与R型)对人肺腺癌A549细胞增殖和凋亡的影响,以阐述人参活性成分抗肿瘤活性的构效关系及可能机制.方法:采用MTT实验测定细胞增殖;碘化丙啶(PI)单染流式细胞仪分析细胞周期中各时期的细胞百分数,观察人参皂苷Rh2对人肺腺癌A549细胞增殖周期的影响.AnnexinV-PI双染流式细胞术检测细胞凋亡,采用免疫荧光实验对作为细胞凋亡标志的Caspase-3活性进行测定.结果:人参皂苷Rh2对人肺腺癌A549细胞毒活性明显存在构效关系,其中25 mg·L-1的20(R)-人参皂苷Rh2和20(S)-人参皂苷Rh2作用48 h对肿瘤细胞株A549的增殖抑制率分别为28.5%,33.6%,IC50值分别为33.4,28.5 mg·L-1.20 mg·L-1的20(S)-人参皂苷Rh2作用A549细胞24 h后g0/G1期细胞比例显著高于对照组(P＜0.01),S期细胞比例显著低于对照组(P＜0.01),G2/M期细胞比例与对照组比较无显著性差异,说明20(S)-人参皂苷Rh2能阻滞细胞周期于G1期.30 mg·L-1的S型和R型人参皂苷Rh2作用A549细胞24 h后,无论是早期还是晚期凋亡率均明显高于正常组细胞(P＜0.05),并且20(S)-人参皂苷Rh2组早期凋亡率明显高于20(R)-人参皂苷Rh2组,表现出明显的构效效应(P＜0.05).20(R)-人参皂苷Rh2和20(S)-人参皂苷Rh2作用6 h的A549细胞中标记Caspase-3活性的荧光亮度明显增强,说明Caspase-3的激活参与了人参皂苷Rh2诱导的A549细胞凋亡.结论:S型和R型人参皂苷Rh2均可剂量依赖性地抑制A549细胞增殖,并且20(S)-人参皂苷Rh,的抗肿瘤活性明显强于20(R)-人参皂苷Rh2,阻滞细胞周期于G1期,具有构效效应;S型和R型人参皂苷Rh2均具有促进A549细胞凋亡作用,并且20(S)-人参皂苷Rh2组早期凋亡率明显高于20(R)-人参皂苷Rh2组,具有构效效应.     

人参皂苷溶血及抗溶血作用研究

目的：通过对几种单体人参皂苷溶血、抗溶血作用进行研究，得到人参皂苷浓度与溶血度间的关系曲线，探讨其作用规律。方法：不同浓度的单体人参皂苷溶液和相同浓度的兔血红细胞悬浊液组成的混合溶液充分作用后，用比色法测定溶血度；不同浓度的单体人参皂苷溶液与相同浓度的对照皂苷溶液混合后加入相同浓度的兔血红细胞悬浊液，三者组成的混合溶液充分作用后，用比色法测定溶血度并计算保护溶血百分数。通过数理统计软件对数据进行分析并拟合人参皂苷溶血或保护溶血作用的曲线。结果：在测定的人参皂苷各单体中分别或兼具有溶血和抗溶血的特性，且溶血和抗溶血能力各不相同。结论：原人参皂苷三醇型人参皂苷Re、Rg1、20（R）-Rg：、20（S）-Rg2和Rh。都具有抗溶血作用，其中20（R）-Rg2、20（S）-Rg2和Rh1，在较高浓度时还表现出溶血作用；原人参皂苷二醇型人参皂苷Rb1、Rb2、Rc和Rd均表现出抗溶血作用，其中Rd还在浓度较高时表现出了溶血作用。齐墩果酸型人参皂苷Ro在较低浓度便表现出抗溶血作用，未见溶血作用。     

HPLC法同时测定生三七和蒸制三七中10种皂苷类成分的含量

目的:建立生三七和蒸制三七中三七皂苷R1和人参皂苷Rg1、Re、Rh1、Rb1、Rd、Rk3、Rh4、20(S)-Rg3、20(R)-Rg310种皂苷类成分的HPLC测定方法。方法:采用Vision HT C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱;乙腈-水梯度洗脱,检测波长203 nm,流速1.2 m L/min,柱温20℃。结果:三七皂苷R1和人参皂苷Rg1、Re、Rh1、Rb1、Rd、Rk3、Rh4、20(S)-Rg3、20(R)-Rg3的线性关系良好(r0.9995);10种皂苷类成分的平均加样回收率为95.93%~102.54%。结论:该方法准确,重现性好,可用于生三七和蒸制三七中皂苷类成分的含量测定和质量控制,为三七"生打熟补"与物质变化之间的相关性研究提供了依据。     

姜黄提取物对Na2S2O4诱导SK—N—SH细胞凋亡的保护作用

目的观察姜黄提取物对Na2S2O4诱导SK—N—SH细胞凋亡的保护作用及其机制。方法取相同代的SK—N—SH细胞随机分为正常对照组、模型组、姜黄提取物低浓度（20μmol／L）组、姜黄提取物中浓度（40μmol／L）组、姜黄提取物高浓度（80μmol／L）组。用分光光度法检测姜黄提取物对细胞外SOD、MDA的影响,通过MTT比色法检测细胞存活率,TUNEL法检测细胞凋亡率,采用Westernblot检测法检测细胞Caspase-3蛋白的表达情况。蛄果与模型组比较,姜黄提取物各组细胞存活率升高（P〈0．01）,姜黄提取物各组SK—N—SH细胞培养液内的MDA水平均明显降低（P均〈0．01）,而SOD水平均明显升高（P均〈0．01）,同时Caspase-3活性受到抑制。结论姜黄提取物能够通过抗氧化作用抑制Na2S2O4对SK—N—SH细胞凋亡作用。     

人参皂苷对人体骨肉瘤细胞U_2OS增殖的影响

目的　为寻找人参中抑制骨肉瘤细胞增殖的活性成分。方法　采用细胞计数法检测了 2 7种从人参中得到的单体化合物对体外培养的人体骨肉瘤细胞 U2 OS增殖的影响 ;以流式细胞术分析 DNA含量 ,选择有抑制肿瘤细胞增殖作用的化合物对肿瘤细胞的细胞增殖周期的变化进行研究 ;另外 ,以荧光染色法检测了人参皂苷对细胞死亡率变化的影响。结果　对骨肉瘤细胞增殖的抑制作用研究表明 ,在 5 μmol/ L 浓度下 ,人参皂苷 - Ro,- Rh1 ,- Rh2 ,- F1 和 - L8较明显地抑制了肿瘤细胞的增殖 ,人参皂苷 - Rg1 ,- F3,- Rf,PPT和 PT显著地抑制了肿瘤细胞的增殖 ;进一步对骨肉瘤细胞有抑制作用的化合物检测其对细胞增殖周期影响发现 :人参皂苷 - Ro,- Rf,- Rg1 ,- F1 ,- Rh2 ,PPT和 PT使处于 G0 / G1 期的细胞数目明显增多 ,伴随着 S期和 G2 M期的细胞明显减少 ,说明这些化合物抑制了肿瘤细胞增殖周期的进行 ;与对照相比人参皂苷 - Rf1 ,- Rg1 ,- F1 和 PPT显著地促进了肿瘤细胞的细胞死亡现象。结论人参皂苷是通过阻止细胞增殖周期的 G0 / G1 期或促使细胞死亡两种方式抑制了肿瘤细胞 U2 OS的增殖     

Protective effect of Korean red ginseng extract on cisplatin ototoxicity in HEI‐OC1 auditory cells

Ginseng extract is known to have many beneficial effects, including the reversal of pathological and physiological changes induced by ischemia, stress, and aging. Cisplatin, an effective antineoplastic drug, can cause irreversible sensorineural hearing loss and serious tinnitus in humans; thus cisplatin‐induced ototoxicity is a useful experimental model for ototoxicity. This study investigated the protective effects of Korean red ginseng extract on cisplatin‐induced ototoxicity in auditory cells. Pretreatment with 2.5 mg/mL of ginseng extract prior to application of 20 μm of cisplatin significantly increased cell viability after 48 h of incubation in auditory cells. Pretreatment with ginseng extract significantly attenuated the cisplatin‐induced increase in reactive oxygen species (ROS). Ginseng extract also inhibited the expression of caspase‐3 and poly‐ADP‐ribose polymerase related to cisplatin‐induced apoptosis because a major mechanism of cisplatin‐induced toxicity involves ROS production. Thus, Korean red ginseng extract can play both an anti‐apoptotic and anti‐oxidative role on cisplatin‐induced ototoxicity in an auditory cell line. Copyright © 2009 John Wiley & Sons, Ltd.     

乳酸催化水解人参总皂苷制备抗癌活性物质人参皂苷Rg3工艺优化

以原人参二醇组皂苷为原料,乳酸催化下,通过正交试验优化了抗癌活性物质人参皂苷Rg3的制备工艺。实验结果表明,反应温度（B）对人参皂苷Rg3的制备具有显著影响,优方案为A1B2C3,而且高浓度酸、高反应温度和较长反应时间有利于生成20（R）-Rg3,而低浓度酸、低反应温度和较短的反应时间更有利于生成20（S）-Rg3。     

Aged garlic extract induces proliferation and ameliorates gentamicin-induced toxicity in LLC-PK1 cells

Gentamicin (GM)-induced nephrotoxicity limits the use of this antibiotic. It has been shown that aged garlic extract (AGE) and S-allylcysteine (SAC), the most abundant organosulfur compound in AGE, ameliorate GM-induced nephrotoxicity in rats. The present communication evaluated the effect of AGE and SAC on proliferation and on GM-induced toxicity and genotoxicity of porcine kidney epithelial cell line (LLC-PK1 cells). The cells were preincubated with different concentrations of AGE or SAC for 12 h before incubation with 8 mm GM for an additional 72 h. At the end of this time, cell viability, genotoxicity and proliferation were evaluated. AGE stimulated cell proliferation and protected LLC-PK1 cells from GM-mediated toxicity and genotoxicity. SAC partially prevented only GM-induced genotoxicity. These results suggest that the stimulation of cell proliferation could possibly be one of the mechanisms involved in the in vitro protective effect of AGE in GM-induced toxicity of LLC-PK1 cells.     

健脾养正消癥方通过激活PI3K/AKT信号通路减轻顺铂所致的肾毒性作用

目的:探讨健脾养正消癥方对顺铂肾毒性的防护作用及可能机制。方法:40只BALB/C小鼠,随机分为荷瘤组,顺铂组,健脾养正消癥方组,健脾养正消癥方和顺铂(联合用药)组,每组10只,按组别ig给药5 d后,将BALB/C小鼠右腋下注射H22腹水瘤,形成荷瘤小鼠模型并一次性注射顺铂20 mg·kg-1造成肾损害。造模后10 d,观察小鼠肾脏指数,血肌酐(SCr),血尿素氮(BUN),肾组织病理变化;并通过TUNEL,Western blot法检测健脾养正消癥方对顺铂损伤小鼠肾组织中凋亡及PI3K/AKT信号通路相关分子蛋白表达的影响。结果:与荷瘤组比较,顺铂组小鼠肾脏系数,SCr,BUN显著升高(P0.05),肾脏病理损伤明显,肾小管凋亡细胞增多,肾组织p-PI3K,p-AKT表达下调,Caspase-3表达上调(P0.05);与顺铂组比较,联合用药组肾脏指数降低,SCr,BUN下降(P0.05),肾脏病理损害减轻,肾小管凋亡细胞减少,肾组织p-PI3K,p-AKT表达上调,Caspase-3表达下调(P0.05)。结论:健脾养正消癥方能明显减轻顺铂引起的肾毒性,其作用机制与激活PI3K/AKT信号通路,减少细胞凋亡有关。     

灵芝抗癌活性及放化疗对HL-7702细胞的保护作用

目的：研究灵芝精粉（灵芝醇提物+水提物）、灵芝精粉氯仿提取物、氯仿提取后的醋酸乙酯提取物、2次提取后的剩余物对肝癌BEL-7402和胃癌MGC-803细胞的抑制效果及其对HL-7702细胞顺铂损伤、⁶⁰Coγ射线辐射损伤的修复与保护作用。方法: 采用MTT法检测灵芝抗癌活性及放化疗时对HL-7702细胞保护作用。结果: 灵芝氯仿提取物的抗癌活性为最强：在0.125 mg·mL^-1时,对癌细胞的抑制率已超过50％。对已受顺铂损伤的HL-7702细胞,4种提取物未能显示出修复作用,但氯仿提取物预处理可显著降低其损伤程度。对受辐射的HL-7702细胞,仅氯仿提取物对中、高剂量照射下的辐射损伤体现一定的修复作用；但4种提取物预处理均可降低其辐射损伤的程度。结论: 灵芝氯仿提取物对癌细胞的抑制作用,对正常细胞放化疗损伤的保护作用,均体现了显著的效果。     

20(S)‐ginsenoside Rg3, a neuroprotective agent,inhibits mitochondrial permeability transition pores in rat brain

Ginseng, the root of Panax ginseng C.A. Meyer (Araliaceae), is a well‐known traditional Chinese herbal medicine. Ginsenosides, which are triterpene derivatives that contain sugar moieties, are the main active ingredients of ginseng. 20(S)‐Ginsenoside Rg3, a triterpene glycoside which chemically belongs to the protopanaxadiol ginsenoside group, is effective in attenuating brain infarction after cerebral ischemia, but the detailed mechanism is not known. This study examined the effect of 20(S)‐ginsenoside Rg3 on mitochondrial permeability transition pore (MPTP) in the rat brain. 20(S)‐Ginsenoside Rg3 at 2–16 µm inhibited Ca²⁺‐ and H₂O₂‐induced swelling of mitochondria isolated from rat brains. The addition of Ca²⁺ generated reactive oxygen species (ROS) in isolated mitochondria. 20(S)‐Ginsenoside Rg3 (2–16 µm ) inhibited Ca²⁺ induced generation of ROS. At the same time, 20(S)‐ginsenoside Rg3 significantly improved mitochondrial energy metabolism, enhanced ATP levels and the respiratory control ratio. These results suggest that 20(S)‐ginsenoside Rg3 inhibits the opening of MPTP by free radical scavenging action in the brain, and this implies that inhibition of MPTP may contribute to the neuroprotective effect of 20(S)‐ginsenoside Rg3. Copyright © 2008 John Wiley & Sons, Ltd.     

一个新颖的人参皂苷元衍生物及其抗HL-60肿瘤细胞活性

目的研究人参皂苷元衍生物及其抗HL-60肿瘤细胞活性。方法利用Smith降解处理人参总皂苷,采用硅胶柱色谱、制备型高效液相色谱技术分离、纯化人参皂苷元等产物。通过波谱数据分析产物结构。采用MTT法测试产物抗HL-60肿瘤细胞活性。结果分离鉴定了原人参二醇(PD)、原人参三醇(PT)和24,25-烯-3β,6α-二羟基-12,20-(1′-羟基)双氧乙基-达玛烷(1),化合物1为新化合物命名为1′-羟基双氧乙基原人参三醇。结论化合物1为新型人参皂苷元衍生物,其抑制HL-60细胞增殖的作用强于PD和PT。