c-Ski对创伤性脑损伤后小胶质细胞活化的抑制作用研究

目的观察c-Ski对小胶质细胞活化的影响,以探讨其对创伤性脑损伤(traumatic brain injury,TBI)后炎症反应的调节作用。方法在小鼠中度TBI后的第1、3、7天,IBA-1免疫荧光检测伤周组织中活化小胶质细胞数量、形态改变;ELISA检测炎症因子白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)含量变化;免疫荧光、Western blot检测c-Ski蛋白水平变化;然后转染腺病毒过表达c-Ski,观察上述指标的变化。结果在TBI后,伤周组织活化小胶质细胞数量与IL-1β、TNF-α含量均升高并在伤后1 d达高峰,伤后3 d时开始下降(P0.05);TBI后伤周组织活化的小胶质细胞中可见c-Ski表达,其水平在TBI后3 d达高峰(P0.05);Ski过表达则抑制了TBI后1 d、3 d伤周组织活化小胶质细胞的数量(P0.05),及IL-1β、TNF-α的含量(P0.05)。结论在TBI后,c-Ski可能通过抑制小胶质细胞活化而发挥抑制炎症反应的作用。     

针刺对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠的神经保护作用及对小胶质细胞和 炎症反应的影响

目的:探讨针刺对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠的神经保护作用及对小胶质细胞和炎症反应的影响。方法:将150只大鼠根据随机数字法分为假手术组、模型组(建立缺氧缺血性脑损伤模型)和针刺组(建立缺氧缺血性脑损伤模型+针刺治疗),每组50只。采用2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)染色法测定脑梗死情况,采用免疫组化法测定脑组织小胶质细胞标记物离子钙接头分子(Iba-1)表达,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定脑组织IL-6、IL-1β、TNF-αmRNA表达水平,采用ELISA法测定脑组织IL-6、IL-1β、TNF-α含量水平,采用Morris水迷宫测定大鼠空间学习记忆能力。结果:与假手术组比较,模型组和针刺组大鼠逃避潜伏期延长(P0.05),穿台指数降低(P0.05);与模型组比较,针刺组大鼠逃避潜伏期缩短(P0.05),穿台指数增加(P0.05)。假手术组大鼠无梗死现象,针刺组脑梗死面积明显低于模型组(P0.05)。与假手术组比较,模型组和针刺组大鼠脑组织Iba-1阳性细胞增多(P0.05),与模型组比较,针刺组大鼠脑组织Iba-1阳性细胞减少(P0.05)。与假手术组比较,模型组和针刺组大鼠脑组织IL-6、IL-1β、TNF-α含量水平及mRNA相对表达量升高(P0.05);与模型组比较,针刺组大鼠脑组织IL-6、IL-1β、TNF-α含量水平及mRNA相对表达量降低(P0.05)。结论:针刺对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠有神经保护作用,其机制可能与抑制小胶质细胞活化和降低脑组织炎症反应有关。     

帕瑞昔布钠预给药可减轻脂多糖诱导的小鼠认知功能损伤及神经炎症反应

目的:探讨帕瑞昔布钠(PA)预给药对脂多糖(LPS)诱导的小鼠疾病行为模型认知功能改变及神经炎症的影响。方法:雌性C57BL/6J小鼠80只,10～12月龄,随机分为4组(n=20):空白对照组(CON组)、PA组、LPS组和PA预处理组(P+L组)。LPS腹腔注射制备疾病行为模型,PA组和P+L组在注射LPS前1 h按10 mg/kg剂量腹腔注射PA。采用Morris水迷宫实验评价认知功能;ELISA检测血液及海马区IL-1β、IL-6、IL-18、TNF-α和PGE_2的表达;HE染色观察肺组织和海马组织的病理形态改变;免疫荧光法观察海马区小胶质细胞和星形胶质细胞的数目;Western blot法检测海马区COX-2、iNOS、NLRP3、ASC及caspase-1蛋白的表达。结果:与CON组相比,LPS组小鼠Morris水迷宫的逃避潜伏期显著延长,目标象限停留时间及穿越平台次数显著减少(P0.01),IL-1β、IL-6、IL-18、TNF-α和PGE_2的含量显著增多(P0.01),海马CA1区神经元细胞深染,坏死损伤明显,小胶质细胞和星形胶质细胞的数目显著增加(P0.05),COX-2、iNOS、NLRP3、ASC及caspase-1蛋白表达量显著增加(P0.01)。而与LPS组相比,PA明显降低小鼠的神经炎症水平,提高小鼠的记忆能力。结论:帕瑞昔布钠预给药对LPS诱发的认知功能障碍和神经炎症具有一定的预防和改善作用,其作用机制可能与特异性拮抗COX-2,抑制中枢小胶质细胞和星形胶质细胞的活化,减少NLPR3炎症小体的激活,从而降低炎症因子的水平有关。     

海马注射米诺环素对CCI大鼠热痛阈以及海马炎症因子表达的影响

目的:观察海马CA1区注射米诺环素对坐骨神经缩窄性损伤(chronic constriction injury,CCI)大鼠海马小胶质细胞激活、Toll样受体2(Toll like receptor 2,TLR2)、Toll样受体4(Toll like receptor 4,TLR4)、IL-1β、TNF-α和诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,i NOS)表达的影响。方法:成年SD大鼠随机分为3组(n=8):(1)sham组(假手术组+0.01 mol/L PBS)、(2)CCI组(CCI+0.01 mol/L PBS)、(3)CCI+米诺环素组。大鼠海马CA1区置管7 d后行坐骨神经结扎,CA1区注射0.01 mol/L PBS或米诺环素(2μg/μl),每日2次,连续7 d。于CCI术前1 d,术后1、3、5和7 d测定海马给药1 h后热缩足潜伏期(thermal withdrawal latency,TWL);术后第7 d取海马,荧光定量PCR检测Iba-1、TLR2、TLR4、IL-1β、TNF-α和i NOS m RNA表达;酶联免疫吸附试验测定海马IL-1β和TNF-α含量。结果:大鼠CCI术后即形成稳定的热痛敏,与假手术组相比,TWL明显缩短(P0.01);与CCI组相比,海马CA1区注射米诺环素可明显延长CCI大鼠的TWL(P0.05)。与假手术组相比,CCI大鼠海马Iba-1、TLR2、TLR4、IL-1β、TNF-α和i NOS m RNA表达明显上调(P0.01);与CCI组相比,海马CA1区注射米诺环素几乎完全抑制海马Iba-1、TLR2、TLR4和TNF-αm RNA表达上调(P0.01),仅部分阻断IL-1β和i NOS m RNA表达上调(P0.05)。与假手术组相比,CCI大鼠海马IL-1β和TNF-α含量明显增多(P0.01);与CCI组相比,注射米诺环素后几乎完全抑制海马TNF-α水平上升(P0.01),仅部分抑制IL-1β水平上升(P0.05)。结论:海马CA1区注射米诺环素可明显缓解CCI大鼠热痛敏症状,其机制可能与抑制海马小胶质细胞激活和TLR2、TLR4表达,进一步抑制IL-1β、TNF-α及i NOS表达有关。     

BMSCs脑内移植改善AD小鼠学习记忆功能的分子机制研究

目的:观察骨髓间充质干细胞(BMSCs)脑内移植对阿尔茨海默病(AD)小鼠学习记忆能力及病理改变的影响,并对其分子机制进行探讨。方法:将C57/BL6野生型(WT)小鼠和C57/BL6 APP/PS1转基因(Tg)小鼠随机分为4组:WT/PBS组、WT/BMSCs组、Tg/PBS组及Tg/BMSCs组,侧脑室注射法将PBS或BMSCs注入小鼠脑内。术后第3天起进行持续8 d的Morris水迷宫实验以检测小鼠认知能力。术后第10天取材,组织免疫荧光染色检测小鼠脑内小胶质细胞的激活;real-time PCR检测CX3C趋化因子配体1(CX3CL1)、CX3C趋化因子受体1(CX3CR1)、IL-1β、TNF-α、Nurr1、YM1、胰岛素降解酶(IDE)和基质金属蛋白酶9(MMP9)的mRNA表达;ELISA检测脑组织匀浆CX3CL1和Aβ42的含量;Western blot检测突触后致密蛋白95(PSD95)、突触小泡蛋白(SYP)、p85和p110蛋白表达以及Akt磷酸化水平的变化。结果:术后第10天,在APP/PS1小鼠海马区附近观察到移植的BMSCs。水迷宫实验结果显示,与WT/PBS组小鼠相比,Tg/PBS组小鼠逃避潜伏期明显延长(P0.01),BMSCs移植治疗后APP/PS1小鼠逃避潜伏期明显缩短(P0.05);与Tg/PBS组相比,Tg/BMSCs组CX3CL1在海马区的mRNA水平(P0.01)及皮质区的蛋白水平(P0.05)明显增加;BMSCs移植可以促进WT和Tg小鼠脑内小胶质细胞的激活,同时M2型小胶质细胞表面标志物YM1的mRNA表达上调(P0.05)。Tg/PBS组与WT/PBS组相比,皮质区和海马区TNF-α的mRNA表达明显升高(P0.05),皮质区Nurr1的mRNA表达降低(P0.01);而与Tg/PBS组相比,Tg/BMSCs组皮质区的TNF-α(P0.01)mRNA表达降低,CX3CR1和Nurr1的mRNA表达明显上调(P0.05),海马区TNF-α和IL-1β的mRNA明显下调(P0.05),CX3CR1和Nurr1的mRNA表达明显增加(P0.05)。此外,Tg/BMSCs组的PSD95、p85和p110蛋白表达及Akt的磷酸化水平均较Tg/PBS组明显增加(P0.05)。与Tg/PBS组比,BMSCs移植降低了APP/PS1小鼠脑内Aβ42蛋白的水平(P0.05),增加了海马区Aβ清除相关酶IDE和MMP9的表达(P0.05)。结论:BMSCs移植可以调控神经炎症因子分泌,促进神经保护因子和突触蛋白的表达,从而改善APP/PS1小鼠的学习记忆能力,其分子机制可能是BMSCs移植上调CX3CL1后激活了PI3K/Akt通路。     

海马背侧注射β-淀粉样蛋白_(25～35)激活胶质细胞和p38丝裂原活化蛋白激酶诱导神经元凋亡

目的探讨海马背侧注射β-淀粉样蛋白25~35(Aβ25~35)后胶质细胞与p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)激活的关系,及Aβ25~35诱导神经元凋亡的可能机制。方法采用免疫组织化学及免疫印迹方法观察海马背侧注射Aβ25~35后不同时段小胶质细胞(MG)、星形胶质细胞(AS)的激活和磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)在海马组织中的表达;酶联免疫吸附法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及白细胞介素-1β(IL-1β)在海马组织中的含量;Nissl染色法观察海马神经元存活;TUNEL染色观察海马神经元凋亡。结果注射Aβ25~35后海马内抗特异性标记小胶质细胞(ox-42)、胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)、和p-p38MAPK的表达与TNF-α、IL-1β的含量同步增加,于7d达到高峰,而Nissl阳性神经元数量逐渐减少,TUNEL阳性神经元数量则逐渐增多,亦于7d达到高峰。结论海马背侧注射Aβ25~35可能通过激活胶质细胞和p38MAPK,使TNF-α,IL-1β含量增加导致海马神经元凋亡。     

利福平通过抑制小胶质细胞活化对大鼠全脑缺血发挥保护作用

目的:探讨利福平对大鼠全脑缺血/再灌注损伤的保护作用及对小胶质活化的影响。方法:采用双侧颈总动脉夹闭合并低血压建立全脑缺血/再灌注大鼠模型,成年雄性SD大鼠42只,随机分成3组,假手术组(S),缺血再灌注组(I/R),利福平干预组(I/R+RFP)。利福平(20 mg/kg)在缺血后30 min腹腔注射。采用Morris水迷宫测定大鼠认知功能改变,HE染色观察海马CA1区病理学变化,免疫组织化学方法检测海马CA1区小胶质细胞活化情况,酶联免疫法(ELISA法)测定各组大鼠海马组织IL-1β、IL-6和TNF-α的表达水平。结果:利福平对大鼠急性全脑缺血/再灌注损伤后的行为学有明显的改善作用,I/R+RFP组大鼠的寻台潜伏期明显缩短,同时,该组大鼠海马神经元损伤数目也显著减少。此外,利福平处理后全脑缺血/再灌注大鼠海马CA1区小胶质细胞活化明显受到抑制,海马组织内IL-1β、IL-6和TNF-α表达显著下调。结论:利福平对全脑缺血/再灌注大鼠脑损伤有明显的保护作用,其机制可能与抑制小胶质细胞活化,减少IL-1β、IL-6和TNF-α等炎症因子的释放,从而抑制炎症反应相关。     

大鼠脑出血后MicroRNA-21抑制小胶质细胞激活产生炎症反应的机制

目的研究大鼠脑出血后MicroRNA-21抑制小胶质细胞激活产生炎症反应的机制。方法 60只成年SD大鼠构建脑出血ICH模型,并随机分对照组、模型组和MicroRNA-21组。收集大鼠脑组织,采用HE染色检测脑组织损伤;TUNEL法检测脑组织神经元凋亡情况;Real-time PCR法检测MicroRNA-21基因表达;免疫组织化学染色观察脑组织小胶质细胞Iba-1活化。ELISA方法测定脑组织IL-1β、IL-6和TNF-α含量变化。结果与对照组相比,模型组和MicroRNA-21组中受损神经细胞数显著升高,细胞凋亡数显著升高(P0.05);模型组血肿周围MicroRNA-21mRNA显著降低,IL-1β、IL-6和TNF-α含量显著升高(P0.05);MicroRNA-21组血肿周围MicroRNA-21mRNA显著升高,IL-1β、IL-6和TNF-α含量显著降低(P0.05);与模型组相比,MicroRNA-21组受损神经细胞数显著降低,细胞凋亡数显著减少(P0.05),血肿周围MicroRNA-21 mRNA显著升高,IL-1β、IL-6和TNF-α含量显著降低(P0.05)。结论 MicroRNA-21可减轻大鼠脑出血后激活小胶质细胞所致的脑内炎症反应,对损伤的神经细胞具有保护作用。     

痤疮丙酸杆菌对小胶质细胞产生TNF-α、IL-1β的影响

目的:探讨痤疮丙酸杆菌(P.acnes)对小胶质细胞产生TNF-α、IL-1β的影响,明确外伤后细菌性致死性肉芽肿(FBGT)致病菌P.acnes临床株、标准株刺激机体产生细胞因子的差别.方法:采用ELISA法、RT-PCR的方法观察标准株、临床株对小胶质细胞产生TNF-α和IL-1β的影响.结果:(1)P.acnes临床株和标准株均可促进小胶质细胞产生TNF-α和IL-1β,与空白对照组相比有统计学意义(P<0.05),标准株较临床株有较强的刺激小胶质细胞产生 TNF-α的能力;(2)临床株和标准株均能促小胶质细胞进产生IL-1β,二者差别无统计学意义,但产生IL-1β的能力大于TNF-α.结论:P.acnes均可促进小胶质细胞产生TNF-α、IL-1β,但其能力不同,说明P.acnes刺激机体早期免疫应答水平不同.     

DHA减轻电磁脉冲诱导的N9小胶质细胞活化

目的:观察二十二碳六烯酸(DHA)对电磁脉冲(EMP)诱导的小胶质细胞活化及炎症介质释放的影响。方法:小鼠小胶质细胞来源的N9细胞分为Control组、DHA组和EMP组和DHA+EMP组,N9细胞根据分组接受DHA孵育或EMP辐照处理24 h后,采用MTT法检测各组细胞活性,利用乳酸脱氢酶(LDH)检测试剂盒检测培养基中LDH的浓度,采用免疫组化法和Western Blot方法检测i NOS的表达量,通过酶联免疫吸附实验(ELISA)方法检测各组培养基中炎症介质TNF-α、IL-1β和IL-6的含量。结果:与Control组相比,EMP组小胶质细胞存活率下降(P 0. 05),LDH浓度增高(P 0. 05),而与EMP组相比,DHA+EMP组小胶质细胞存活率增高(P 0. 05),LDH浓度下降(P 0. 05);与Control组和DHA组相比,EMP组小胶质细胞i NOS蛋白表达上调(P 0. 05),而与EMP组相比,DHA+EMP组小胶质细胞i NOS蛋白表达显著下调(P 0. 05);与Control组和DHA组相比,EMP组N9小胶质细胞TNF-α、IL-1β和IL-6释放量增加(P 0. 05),而与EMP组相比,DHA+EMP组N9小胶质细胞TNF-α、IL-1β和IL-6释放量减少(P 0. 05)。结论:DHA减轻EMP所致细胞损伤,抑制N9细胞过度活化,并且减少炎症介质TNF-α、IL-1β和IL-6的释放。     

慢性痛大鼠模型前扣带皮层内小胶质细胞活化与细胞因子表达

目的:观察慢性炎症性疼痛大鼠前扣带皮层(ACC)中小胶质细胞标记物(CD14,IBA1)及促炎症细胞因子(IL-1β,TNF-α)的表达变化。方法:单侧足底注射完全弗氏佐剂(CFA)诱导大鼠慢性炎症性疼痛,用RT-PCR检测ACC中CD14、IL-1β、TNF-αmRNA的表达,用免疫组织化学染色观察ACC中IBA1免疫阳性小胶质细胞的变化。结果:足底注射CFA后4 h、3 d双侧ACC中CD14 mRNA表达较生理盐水(NS)组有显著增加(P<0.001);CFA后4 h、3 d、14 d双侧ACC中IL-1βmRNA表达较NS组有显著增加(P<0.001);CFA后3 d、14 d双侧ACC中TNF-αmRNA表达较NS组有显著增加(P<0.001)。CFA 3 d组双侧ACC中IBA1免疫阳性小胶质细胞胞体变大、突起变粗。结论:ACC中小胶质细胞的活化以及IL-1β和TNF-α的表达增加可能在慢性炎症性疼痛的产生和维持中发挥作用。     

异氟烷预处理增强大鼠海马内M2型小胶质细胞活化减轻电磁脉冲所致神经损伤

目的:观察异氟烷预处理是否通过增强大鼠海马内M2型小胶质细胞活化,减轻炎症反应改善电磁脉冲所致神经元损伤。方法:24只SD大鼠随机分为4组,分别为对照组(CON组)、异氟烷预处理组(IP组)和电磁脉冲照射组(EMP组)和异氟烷预处理加电磁脉冲照射组(IP+EMP组)。各组于照射后24 h进行尼氏染色;采用Western Blot和免疫荧光组织化学染色方法检测M2型小胶质细胞标志物Arg-1的表达;并采用ELISA方法测定海马组织中TNF-α和IL-1β的含量。结果:与CON组相比,EMP组海马齿状回颗粒细胞的尼氏体明显减少,而与EMP组相比,IP+EMP组海马齿状回颗粒细胞的尼氏体明显增多增大。Western Blot结果显示:与CON组相比,EMP组海马内Arg-1蛋白的表达明显减少(P0.05),与EMP组相比,IP+EMP组Arg-1蛋白的表达明显增加(P0.05)。免疫荧光染色结果显示:与CON组相比,EMP组海马内Arg-1的表达减弱;而与EMP组相比,IP+EMP组Arg-1的表达明显增强。EMP组海马组织中炎症因子TNF-α和IL-1β的含量较CON组增加(P0.05),IP+EMP组脑组织中炎症因子TNF-α和IL-1β的含量较EMP组减少(P0.05)。结论:异氟烷预处理可通过增加M2型小胶质细胞,减少脑组织中炎症因子含量,减轻EMP所致神经元损伤。     

淫羊藿苷减轻七氟醚诱导的小鼠认知功能障碍

目的 评价淫羊藿苷对七氟醚诱发的术后认知功能障碍(POCD)的影响,探讨其作用机制。方法 将小鼠分为对照组、模型组(七氟醚麻醉+剖腹探查术建立小鼠POCD模型)、淫羊藿苷组、PI3K抑制剂组、淫羊藿苷+抑制剂组、PI3K激活剂组,每组12只。分别采用条件恐惧实验、Y迷宫实验评价小鼠认知功能障碍;ELISA检测血清TNF-α、IL-1β及BDNF水平;取海马组织,尼氏染色观察神经元形态变化;TUNEL染色检测神经元凋亡率;免疫荧光法检测M1型、M2型激活小胶质细胞及其标志物表达水平;Western blot检测TNF-α、IL-1β、IL-10、GSK-3β磷酸化蛋白、Bcl-2表达。结果 与对照组相比,模型组小鼠出现认知功能损伤,海马神经元损伤及凋亡严重,海马组织中小胶质细胞M1型极化介导的促炎反应高于M2型极化介导的抗感染反应,PI3K/Akt-GSK-3β通路及其介导的抗感染及抗凋亡蛋白表达降低(P<0.05)。淫羊藿苷及PI3K激活剂干预处理,均可促进PI3K/Akt-GSK-3β通路及其介导的抗感染及抗凋亡反应,促进海马小胶质细胞M2型极化介导的抗感染反应,缓解海马神经元...     

两性霉素B通过NF-κB通路对小鼠隐球菌性脑膜炎脑组织中小胶质细胞及炎性因子的影响

目的探讨两性霉素B是否通过NF-κB通路对小鼠隐球菌性脑膜炎脑组织中小胶质细胞及炎性因子产生影响。方法以C57BL/6小鼠为研究对象,分为假手术组(sham组)、隐球菌性脑膜炎模型组(CM组)、两性霉素B低剂量组(CM+AmB-L组,0.5mg/kg)和两性霉素B高剂量组(CM+AmB-H组,1 mg/kg),HE染色观察小鼠脑组织病理变化,ELISA检测小鼠脑脊液中TNF-α、IL-6和IL-10的水平变化,提取原代小胶质细胞并测定小胶质细胞活力,免疫组化检测小胶质细胞中Iba1的表达情况,免疫荧光染色检测小胶质细胞中Rab5的表达情况,流式细胞仪检测小胶质细胞中Caspase-3活性的变化,Western blot检测NF-κB信号通路相关蛋白的表达水平。结果 CM组小鼠脑组织中发现大面积炎症部位和隐球菌生物,CM+AmB-L组和CM+AmB-H组小鼠脑组织中炎症部位和隐球菌生物明显减少;CM组小鼠脑脊液中TNF-α、IL-6的含量明显升高(均P0.01),IL-10的含量明显下降(P0.01),CM+AmB-L组和CM+AmB-H组小鼠脑脊液中TNF-α、IL-6的含量下降(均P0.05),IL-10的含量升高(均P0.05);CM组小胶质细胞活力明显升高(P0.01),CM+AmB-L组和CM+AmB-H组小胶质细胞活力降低(均P0.05);CM组中Iba1呈阳性表达(P0.001),Rab5的表达明显下调(P0.001),CM+AmB-L组和CM+AmB-H组中Iba1的阳性表达降低(均P0.05),Rab5的表达上调(均P0.05);CM组小胶质细胞中Caspase-3活性显著降低(P0.001),CM+AmB-L组和CM+AmB-H组小胶质细胞中Caspase-3活性升高(均P0.05);CM组小鼠脑组织中TLR4、NF-κB p65蛋白显著上调(P0.001),CM+AmB-L组和CM+AmB-H组小鼠脑组织中TLR4、NF-κB p65蛋白下调(均P0.05)。结论两性霉素B通过抑制NF-κB通路的激活,下调小胶质细胞活力来治疗隐球菌引起的脑膜炎。     

嘌呤P2Y受体激动剂ADPβS对脊髓来源小胶质细胞产生IL-1β、IL-6和TNF-α的刺激作用

目的:观察嘌呤P2Y受体激动剂ADPβS对脊髓背角来源小胶质细胞炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α表达和释放的影响。方法:培养新生SD大鼠脊髓背角小胶质细胞,PCR检测ADPβS作用下小胶质细胞IL-1β、IL-6和TNF-α在mRNA水平表达变化;ELISA检测ADPβS作用下小胶质细胞IL-1β、IL-6和TNF-α释放变化。结果:与正常对照组相比,ADPβS(10μmol/L)可以刺激脊髓背角小胶质细胞Iba-1、IL-1β、IL-6和TNF-αmRNA表达上调。P2Y_(12)受体拮抗剂MRS2395和P2Y_(13)受体拮抗剂MRS2211部分阻断ADPβS刺激小胶质细胞IL-1β、IL-6和TNF-αmRNA表达上调,MRS2395和MRS2211联合预处理几乎全部阻断ADPβS刺激小胶质细胞Iba-1、IL-1β、IL-6和TNF-αmRNA表达上调。结论:P2Y_(12)/P2Y_(13)受体激活可以促进脊髓背角小胶质细胞激活和IL-1β、IL-6和TNF-αmRNA表达上调及释放。     

姜黄素减弱Aβ_(25-35)致大鼠原代小胶质细胞的神经炎症反应

目的:研究姜黄素(Cur)对β-淀粉样蛋白(Aβ)刺激下大鼠原代小胶质细胞活力及高迁移率族蛋白1(HMGB1)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的影响。方法:取新生SD大鼠大脑皮层行混合胶质细胞原代培养,摇床振摇法分离小胶质细胞并行Iba-1免疫细胞化学鉴定。在培养的小胶质细胞中加入Aβ_(25-35)作用24 h后,观察细胞形态并用CCK-8实验确定造模浓度及Cur的治疗浓度。将大鼠原代小胶质细胞分为5组:正常组、Aβ_(25-35)模型组、Cur组、Aβ_(25-35)+Cur治疗组、Aβ_(25-35)+DMSO组;用Western blot法检测细胞内HMGB1、晚期糖基化终末产物受体(RAGE)、NF-κB的表达情况,取上清液用ELISA检测HMGB1、IL-1β、TNF-α的表达。结果:Iba-1的阳性率在95%以上,培养的大鼠原代小胶质细胞可用于实验。Western blot实验结果示Aβ_(25-35)活化诱导后,细胞内的HMGB1、RAGE和NF-κB表达明显升高(P0.05),加入姜黄素后细胞内的HMGB1、RAGE和NF-κB表达明显减少(P0.05)。ELISA结果示Aβ_(25-35)活化诱导后,细胞上清液中HMGB1、IL-1β、TNF-α明显升高(P0.05),加入姜黄素后上清液中HMGB1、IL-1β、TNF-α明显下降(P0.05)。结论:姜黄素可明显抑制Aβ_(25-35)刺激下大鼠原代小胶质细胞的神经炎症反应。     

短管兔耳草总黄酮降低阿尔茨海默病模型小鼠大脑皮层及海马组织炎性细胞因子的水平

目的探讨短管兔耳草总黄酮(TF-LBM)治疗阿尔茨海默病(AD)的作用机制。方法 8月龄SAMP8小鼠50只,随机分为模型组,阳性药物组,低、中、高剂量TF-LBM组5组,每组10只;8月龄SAMR1小鼠10只为正常老化组。低、中、高剂量TF-LBM组以(150、300、600)mg/kg TF-LBM灌胃,阳性药物组以0.65 g/kg盐酸多奈哌齐灌胃,模型组和正常老化组用溶解TF-LBM等量蒸馏水灌胃。8周后,进行Morris水迷宫实验,计算各组小鼠定位航行潜伏期。行为学实验后进行取材,分别取各组小鼠大脑皮层组织及海马CA1区组织进行检测,应用放射免疫法检测药物对小鼠大脑皮层及海马白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量的影响。结果短管兔耳草总黄酮对小鼠行为学干预结果观察:与模型组相比,正常老化组、阳性药物组、高剂量组小鼠逃逸潜伏期明显缩短;与正常老化组相比,模型组小鼠皮层组织中IL-1β、IL-6、TNF-α显著增高;与模型组相比,低剂量TF-LBM组IL-1β含量无明显差异,而中剂量TF-LBM组、高剂量TF-LBM组及阳性对照组IL-1β含量降低。低剂量TF-LBM组、中剂量TF-LBM组、高剂量TF-LBM组及阳性对照组IL-6含量均降低。低剂量TF-LBM组及中剂量TF-LBM组TNF-α含量无明显差异,而高剂量TF-LBM组及阳性对照组TNF-α含量降低。与正常老化组相比,模型组小鼠海马组织中IL-1β、IL-6、TNF-α显著增高;与模型组相比,低、中、高剂量TF-LBM组及阳性对照组IL-1β、IL-6、TNF-α含量均降低。结论短管兔耳草总黄酮可以使SAMP8小鼠行为学得到改善,TF-LBM能够降低脑皮层及海马CA1区组织IL-1β、IL-6、TNF-α含量。     

小胶质细胞M1型极化诱发小鼠焦虑样行为及其对前额叶神经元树突棘密度的影响

目的:焦虑样行为与脑内小胶质细胞M1型极化关系密切,但M1型小胶质细胞如何作用于神经元导致焦虑样行为并不清楚,因此本研究的目的在于观察小鼠脑内小胶质细胞向M1型极化诱发产生焦虑样行为,并探讨其对神经元树突棘的影响。方法:实验组采用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)脑内注射诱导C57小鼠小胶质细胞向M1型极化,通过旷场实验和高架十字迷宫实验观察小鼠的行为学改变;应用免疫荧光染色方法观察实验组和对照组小鼠的内侧前额叶皮质(medial prefrontal cortex,m PFC)内一氧化氮合酶(i NOS)与小胶质细胞标志物iba-1的表达变化,通过Western Blot方法观察实验组和对照组小鼠的m PFC内i NOS、致炎因子白介素1(IL-1)β、肿瘤坏死因子(TNF)-α的表达变化,以i NOS、IL-1β和TNF-α表达量均显著增加作为小胶质细胞向M1型极化的标志。采用高尔基(Golgi)染色观察m PFC内神经元树突棘的变化。结果:(1)实验组小鼠mPFC内小胶质细胞i NOS、IL-1β和TNF-α表达量均升高,提示小胶质细胞向M1型极化。(2)实验组小鼠在旷场内的中央活动距离和中央活动时间比对照组均明显减少(P0.001);实验组小鼠在高架十字迷宫开臂停留时间比正常组明显减少(P0.05)。(3)Golgi染色结果显示实验组小鼠mPFC内神经元树突棘的密度相较于对照组增多(P0.05)。结论:mPFC内小胶质细胞M1型极化可诱发小鼠产生焦虑样行为,并伴随mPFC内神经元树突棘密度增多,提示脑内小胶质细胞M1型极化可诱导焦虑样行为,可能与内侧前额叶皮质锥体神经元树突棘可塑性改变相关。     

高浓度酒精摄入对大鼠学习记忆及海马炎症因子表达的影响

目的:研究高浓度酒精摄入对大鼠学习记忆能力及海马内炎症因子表达的影响。方法:将20只雄性SD大鼠随机分为酒精组和对照组。酒精组大鼠给予酒精灌胃(50%,8 ml/kg,1次/d,28 d);对照组大鼠给予生理盐水灌胃。利用Morris水迷宫检测大鼠空间学习记忆能力,尼氏染色显示海马结构,免疫组化及免疫印迹检测海马内TNF-α和IL-6的表达。结果:酒精组大鼠学习记忆能力、海马尼氏染色强度均显著低于对照组;而海马TNF-α和IL-6的表达则强于对照组,且阳性细胞为多突起小细胞。结论:高浓度酒精可能通过增强海马内炎症因子表达而影响其功能、导致大鼠空间学习记忆能力下降。     

炎症反应在S14G-Humanin拮抗Aβ31-35所致大鼠行为学改变中的作用

目的:以小胶质细胞形态和功能的改变为观察指标,探究炎症反应在S14G-Humanin(HNG)拮抗Aβ31-35所致大鼠行为学改变中的神经保护作用。方法:SD大鼠60只随机分为5组,经侧脑室分别注入生理盐水(对照组)、Aβ31-35(Aβ31-35组)、Aβ31-35+HNG(0.01 mmol/L)、Aβ31-35+HNG(0.1 mmol/L)、Aβ31-35+HNG(1 mmol/L)。注射第7 d行Morris水迷宫实验观察各组大鼠的行为学改变;注射12 d后处死大鼠,运用免疫组化法检测海马及皮层的激活小胶质细胞的数量,采用ELISA法检测大鼠海马及皮层组织IL-6的含量。结果:与对照组相比,Aβ31-35组大鼠的学习、记忆能力明显下降(P<0.05),Aβ31-35+HNG(0.1,1 mmol/L)组大鼠的学习、记忆能力有所改善,与Aβ31-35组相比差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,Aβ31-35组的激活小胶质细胞数及IL-6的含量在皮层及海马组织中均增加(P<0.05);与Aβ31-35组相比,Aβ31-35+HNG(0.01,0.1,1 mmol/L)组皮层及海马的激活小胶质细胞数及IL-6的含量均减少(P<0.05)。结论:S14G-Humanin对Aβ31-35诱导的大鼠行为学改变具有保护作用,而抑制Aβ31-35诱导的小胶质细胞激活产生的炎症反应可能是HNG拮抗Aβ神经毒的机理之一。