参白解毒方显著抑制小鼠结直肠腺瘤的形成及癌变： 基于PTEN/PI3K/AKT通路

目的 探讨参白解毒方（SBJDF）对结直肠腺瘤形成及癌变的影响及其对PTEN/PI3K/AKT信号通路的调控作用。方法 将4周龄的雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组（10只）、AOM/DSS模型组（20只）、参白解毒方低剂量组（14 g/kg,10只）和参白解毒方高剂量组（42 g/kg,10只）。除对照组外,其余各组采用AOM/DSS诱导小鼠结直肠腺瘤癌变模型,处理组于造模中给予参白解毒方灌胃干预。比较各组小鼠的生存率、体质量和生存状态,观察肠道组织腺瘤形成及癌变等病理情况,免疫组化检测肠道组织PTEN/PI3K/AKT信号通路相关分子的表达。结果 参白解毒方干预后小鼠的肿瘤发生率、数量和体积均显著低于AOM/DSS模型组,且高剂量的参白解毒方抑制效果更佳。HE病理切片结果显示模型组已形成腺癌,而参白解毒方可以抑制腺瘤的形成及癌变,参白解毒方低剂量组小鼠肠道同时存在腺瘤低级别瘤变和高级别瘤变,参白解毒方高剂量组小鼠肠道以正常粘膜组织为主,仅发现局部少量腺瘤低级别瘤变。机制研究发现模型组血浆中miRNA-222表达高于空白组（P<0.05）,用药各组miRNA-222的表达量较模型组下调（P<0.01）;小鼠肠道组织免疫组化结果显示,与AOM/DSS模型组相比,参白解毒方处理后PTEN、p-PTEN、GSK-3β表达上调,且在低剂量组、高剂量组表达有依次递增趋势;p-GSK-3β、PI3K、AKT、p-AKT、β-catenin、c-myc、CyclinD1、Survivin表达下调,且在低剂量组、高剂量组表达呈递减趋势。结论 参白解毒方可以显著抑制小鼠结直肠腺瘤形成及癌变,其作用机制可能与调控miRNA-222及影响PTEN/PI3K/AKT信号通路有关。     

黄芪甲苷对乌拉坦诱导肺癌小鼠的防治作用及其机制

目的探讨黄芪甲苷(AS-Ⅳ)对乌拉坦诱导的肺癌小鼠的防治作用及其机制。方法将100只美国癌症研究所小鼠随机分为对照组、模型组、低剂量AS-Ⅳ组、中剂量AS-Ⅳ组和高剂量AS-Ⅳ组,每组20只。模型组、低剂量AS-Ⅳ组、中剂量AS-Ⅳ组和高剂量AS-Ⅳ组小鼠腹腔注射乌拉坦600 mg·kg-1,每周1次,持续10周,建立肺癌模型;对照组小鼠腹腔注射等量生理盐水。造模当天,低剂量AS-Ⅳ组、中剂量AS-Ⅳ组和高剂量AS-Ⅳ组小鼠分别给予AS-Ⅳ12.5、25.0、50.0 mg·kg-1灌胃,对照组和模型组小鼠给予等量蒸馏水灌胃,每日1次,连续19周。记录各组小鼠的体质量、自主活动次数,每2周1次。各组小鼠乙醚麻醉后脱臼处死,取肺组织,计算肺癌发生率和肺肿瘤数;苏木精-伊红染色观察各组小鼠肺组织病理学变化。采用酶联免疫吸附法检测各组小鼠血清中癌胚抗原(CEA)、癌抗原125(CA125)水平,实时荧光定量聚合酶链式反应法检测各组小鼠肺组织中Wnt-1、β-连环蛋白(β-catenin)、C-myc、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1) mRNA表达水平,Western blot法检测各组小鼠肺组织中Wnt-1、β-catenin、C-myc、Cyclin D1蛋白表达水平。结果造模后第1、3周,5组小鼠体质量和自主活动次数比较差异无统计学意义(P> 0.05)。造模后第5～19周,模型组小鼠体质量显著低于对照组(P <0.05),低剂量AS-Ⅳ组、中剂量AS-Ⅳ组和高剂量AS-Ⅳ组小鼠体质量分别从第5、7、11周开始高于模型组(P <0.05)。造模后第5～19周,模型组小鼠自主活动次数显著少于对照组(P <0.05),中剂量AS-Ⅳ组和高剂量AS-Ⅳ组小鼠自主活动次数从第11周开始多于模型组(P <0.05),低剂量组小鼠自主活动次数从第13周开始高于模型组(P <0.05)。低剂量AS-Ⅳ组、中剂量AS-Ⅳ组和高剂量AS-Ⅳ组小鼠肺癌发生率和肺肿瘤数低于模型组(P <0.05),中剂量AS-Ⅳ组、高剂量AS-Ⅳ组小鼠肺癌发生率和肺肿瘤数低于低剂量AS-Ⅳ组(P <0.05),高剂量AS-Ⅳ组小鼠肺癌发生率和肺肿瘤数低于中剂量AS-Ⅳ组(P <0.05)。对照组小鼠肺组织形态正常,无增生和炎症细胞浸润;模型组小鼠肺组织被大量肿瘤细胞浸润,出现明显瘤区,失去原有肺组织形态;低剂量AS-Ⅳ组、中剂量AS-Ⅳ组和高剂量AS-Ⅳ组小鼠肺组织结构基本清晰,较少出现细胞核密集增生和炎症细胞浸润。模型组、低剂量AS-Ⅳ组、中剂量AS-Ⅳ组和高剂量AS-Ⅳ组小鼠血清中CEA和CA125水平高于对照组(P <0.05),低剂量AS-Ⅳ组、中剂量AS-Ⅳ组和高剂量AS-Ⅳ组小鼠血清中CEA和CA125水平低于模型组(P <0.05),中剂量AS-Ⅳ组、高剂量AS-Ⅳ组小鼠血清中CEA和CA125水平低于低剂量AS-Ⅳ组(P <0.05),高剂量AS-Ⅳ组小鼠血清中CEA和CA125水平低于中剂量AS-Ⅳ组(P <0.05)。模型组、低剂量AS-Ⅳ组、中剂量AS-Ⅳ组和高剂量AS-Ⅳ组小鼠肺组织中Wnt-1、β-catenin、C-myc和Cyclin D1 mRNA相对表达量高于对照组(P <0.05),低剂量AS-Ⅳ组、中剂量AS-Ⅳ组和高剂量AS-Ⅳ组小鼠肺组织中Wnt-1、β-catenin、C-myc和Cyclin D1 mRNA相对表达量低于模型组(P <0.05),中剂量AS-Ⅳ组、高剂量AS-Ⅳ组小鼠肺组织中Wnt-1、β-catenin、C-myc和Cyclin D1 mRNA相对表达量低于低剂量AS-Ⅳ组(P <0.05),高剂量AS-Ⅳ组小鼠肺组织中Wnt-1、β-catenin、C-myc和Cyclin D1 mRNA相对表达量低于中剂量AS-Ⅳ组(P <0.05)。模型组、低剂量AS-Ⅳ组、中剂量AS-Ⅳ组小鼠肺组织中Wnt-1、β-catenin、C-myc和Cyclin D1蛋白相对表达量高于对照组(P <0.05),低剂量AS-Ⅳ组、中剂量AS-Ⅳ组和高剂量AS-Ⅳ组小鼠肺组织中Wnt-1、β-catenin、C-myc和Cyclin D1蛋白相对表达量低于模型组(P <0.05),中剂量AS-Ⅳ组、高剂量AS-Ⅳ组小鼠肺组织中Wnt-1、β-catenin、C-myc和Cyclin D1蛋白相对表达量低于低剂量AS-Ⅳ组(P <0.05),高剂量AS-Ⅳ组小鼠肺组织中Wnt-1、β-catenin、C-myc和Cyclin D1蛋白相对表达量低于中剂量AS-Ⅳ组(P <0.05),高剂量AS-Ⅳ组小鼠肺组织中C-myc蛋白相对表达量高于对照组(P <0.05),高剂量AS-Ⅳ组与对照组小鼠肺组织中Wnt-1、β-catenin和Cyclin D1蛋白表达量比较差异无统计学意义(P> 0.05)。结论 AS-Ⅳ可显著抑制乌拉坦诱导的小鼠肺癌发生,其作用机制可能与减少Wnt-1、β-catenin、C-myc、Cyclin D1蛋白表达及抑制Wnt/β-catenin信号通路活化有关。     

金荞麦片对DSS诱导炎症模型小鼠炎症因子水平的影响

目的:观察金荞麦片对葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium,DSS)诱导的小鼠炎症性肠病的改善作用及机制。方法:20只SPF级C57BL/6小鼠随机分成对照组和金荞麦片组,两组小鼠给予自由饮用30 g·L~(-1) DSS连续7 d,同时每日给予对照组双蒸水、金荞麦片组金荞麦混悬液,均连续灌胃给药7 d。记录每日小鼠疾病活动指数,取材后测量结直肠长度及脾质量,HE染色后进行组织病理学评分,实时荧光定量PCR检测结直肠组织中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin,IL-6)、IL-1β和IL-10相对表达量。结果:与对照组比较,金荞麦片组DAI评分在第5天和第6天显著降低(P0.01);金荞麦片组结直肠长度显著长于对照组(P0.05),且脾脏指数显著减小(P0.01);金荞麦片组结直肠中TNF-α、IL-6和IL-1β水平显著低于对照组(P0.05)。结论:金荞麦片可能通过下调促炎因子表达从而预防性的减轻DSS诱导的炎症模型小鼠的炎症性肠病的炎症症状及结直肠组织的炎性损伤。     

金荞麦片对DSS诱导炎症模型小鼠炎症因子水平的影响

目的:观察金荞麦片对葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium,DSS)诱导的小鼠炎症性肠病的改善作用及机制。方法:20只SPF级C57BL/6小鼠随机分成对照组和金荞麦片组,两组小鼠给予自由饮用30 g·L~(-1) DSS连续7 d,同时每日给予对照组双蒸水、金荞麦片组金荞麦混悬液,均连续灌胃给药7 d。记录每日小鼠疾病活动指数,取材后测量结直肠长度及脾质量,HE染色后进行组织病理学评分,实时荧光定量PCR检测结直肠组织中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin,IL-6)、IL-1β和IL-10相对表达量。结果:与对照组比较,金荞麦片组DAI评分在第5天和第6天显著降低(P<0.01);金荞麦片组结直肠长度显著长于对照组(P<0.05),且脾脏指数显著减小(P<0.01);金荞麦片组结直肠中TNF-α、IL-6和IL-1β水平显著低于对照组(P<0.05)。结论:金荞麦片可能通过下调促炎因子表达从而预防性的减轻DSS诱导的炎症模型小鼠的炎症性肠病的炎症症状及结直肠组织的炎性损伤。     

消痰通腑方对肥胖氧化偶氮甲烷/葡聚糖硫酸钠模型小鼠血清白介素-6和脂联素的影响

目的观察消痰通腑方对肥胖氧化偶氮甲烷(AOM)/葡聚糖硫酸钠(DSS)模型小鼠成瘤率及血清白介素-6(IL-6)、脂联素(ADP)的影响。方法饲喂高脂饮食建立小鼠肥胖模型,设正常对照组、肥胖对照组、肥胖模型组及肥胖中药组,各6只。肥胖模型组及肥胖中药组第1天AOM 12.5 mg/kg腹腔注射,第2天开始饲喂含3.5%DSS饮水7 d,之后改为14 d正常饮水为1个循环,共循环3次。正常对照组及肥胖对照组腹腔注射等剂量生理盐水及正常饮水。模型建成后,肥胖中药组给予灌胃消痰通腑方0.4 m L/d,共4周,其余各组灌胃等剂量蒸馏水。实验结束后观察小鼠成瘤率及血清IL-6和ADP的变化。结果肥胖中药组成瘤率(50%)明显低于肥胖模型组(100%)(P<0.05)。肥胖中药组血清IL-6水平为(128.17±8.55)ng/L,明显低于肥胖模型组的(145.45±11.39)ng/L(P<0.05)。肥胖中药组ADP水平为(81.05±7.34)μg/L,明显高于肥胖模型组的(63.15±10.37)μg/L(P<0.05)。结论消痰通腑方可降低肥胖AOM/DSS模型小鼠的成瘤率及血清IL-6水平,升高ADP水平。     

人参瓜蒌莪术汤对小鼠lewis肺癌细胞增殖的影响

目的 探讨人参瓜萎莪术汤对lewis肺癌模型小鼠的治疗作用及机制.方法 建立小鼠Lewis肺癌移植瘤模型,分为模型对照组、环磷酰胺对照组和人参瓜萎莪术汤高、低剂量组.在计算抑瘤率的基础上,运用酶联免疫吸附剂测定法(ELISA)检测瘤组织细胞核抗原(PcNA)和细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)的表达.结果 人参瓜萎莪术汤对小鼠Lewis肺癌表现出明显的抑制作用,以中剂量组效果最为明显,抑瘤率可达47.88%;人参瓜萎莪术汤低、中、高剂量组均能明显降低瘤组织细胞PCNA的表达(P＜0.01),中、高剂量组的抑制作用显著强于低剂量组(P＜0.01);同时,人参瓜萎莪术汤低、中、高剂量组均能明显降低瘤组织细胞CyclinD1的表达(P＜0.05),中剂量组效果最为显著,并明显强于环磷酰胺阳性对照组(P＜0.01).结论 人参瓜萎莪术汤具有抑制小鼠Lewis肺癌生长的作用,其作用机制可能与降低肿瘤组织Cyclin D1的表达,抑制瘤细胞的增殖有关.     

小鼠肠腺瘤类器官培养及其辐射敏感性

目的 建立小鼠肠腺瘤类器官的体外培养方法,观察其对电离辐射的反应。方法 采用氧化偶氮甲烷(azoxymethane,AOM)和葡聚糖硫酸钠(detrain sodium sulfate,DSS)诱导小鼠产生肠腺瘤。体外分离腺瘤类隐窝结构,接种于基质胶。通过培养基筛选,确定肠腺瘤类器官的体外培养条件,采用免疫组化染色检测Ki67和β-catenin表达水平。进一步采用X线照射,观察肠腺瘤类器官损伤情况,比较其与大、小肠类器官的辐射敏感性。 结果 经AOM/DSS诱导,小鼠肠腺瘤成瘤率达95%,肿瘤均位于结肠靠近直肠处,肠腺瘤类器官在改良的小肠类器官中生长良好,Ki67阳性腺瘤细胞比例高且β-catenin入核特征明显。经X线照射,各类器官存活比例随辐射剂量增加而降低。9 Gy照射7天后,腺瘤类器官存活率为11.96%±1.42%,高于同剂量大肠类器官的5.46%±1.22% (t=6.0082,P＜0.01),小肠类器官几乎未见存活。腺瘤类器官剂量存活曲线较大、小肠类器官右移,提示其辐射敏感性低于大肠和小肠。 结论 在AOM/DSS诱导产生的小鼠肠腺瘤中成功分离培养出腺瘤类器官,其辐射敏感性低于大、小肠类器官。     

吴茱萸碱对炎症相关性结直肠癌的预防作用研究

目的 通过建立炎症相关性结直肠癌小鼠模型,探讨吴茱萸碱在炎症相关性结直肠癌中的预防作用。方法 用AOM/DSS建立炎症相关性结直肠癌模型,将小鼠分为空白组、模型组、吴茱萸碱低剂量组（10 mg/kg）和吴茱萸碱高剂量组（20 mg/kg）,给药过程中记录各组小鼠体质量、死亡情况,比较各组小鼠结直肠的长度、肿瘤数目及大小,通过HE染色观察各组小鼠的结直肠组织形态,通过免疫组化法检测COX-2和PCNA的表达。结果 AOM/DSS可造成小鼠的体质量下降和死亡率增多,而吴茱萸碱可改善这一现象,并且减少结直肠肿瘤的发生,降低组织炎症水平和细胞的异常增殖。结论 吴茱萸碱对炎症相关性结直肠癌具有良好的预防作用,其作用可能与降低组织炎症水平和抑制细胞异常增殖有关。      

葡聚糖硫酸钠和偶氮氧甲烷建立小鼠溃疡性结肠炎癌变模型

目的 建立溃疡性结肠炎癌变的小鼠模型.方法 雌性BALB/c小鼠随机分为4组:正常对照组、偶氮氧甲烷(AOM)组、葡聚糖硫酸钠(DSS)组、AOM+DSS组,AOM一次性腹腔注射,DSS喂养1周+普通水2周,如此3个循环共9周.每周称量体重,记录精神状态、大便性状、体毛亮泽及死亡时间,9周末取血用ELISA法检测TNF-a水平,HE染色观察炎症及病理类型.结果 ①小鼠饮用DSS后可出现腹泻、血便、体重下降、精神不振、体毛凌乱等,后期可见肛口肿物脱出.AOM+DSS组第4、7、8、9周末体重较正常对照组明显下降( P<0.05); ②DSS两组血浆TNF-a水平显著升高(P<0.05); ③HE染色,DSS两组可见炎细胞浸润和(或)淋巴滤泡形成.AOM+DSS组存活小鼠全部成瘤,肿瘤多位于远段结肠,病理组织学诊断为高度不典型增生和(或) 原位癌,另3组未见不典型增生或癌变.结论 低剂量AOM一次性腹腔注射联合DSS三循环喂养可建立溃疡性结肠炎癌变模型,该方法 时间较短,成瘤率高,病理类型稳定.     

抗CXCL1中和抗体在急性溃疡性结肠炎小鼠模型中的治疗作用

目的：探讨抗CXC趋化因子配体1(CXCL1)中和抗体对葡聚糖硫酸钠(dextra sulfate sodium,DSS)诱导的 急性溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)小鼠模型的治疗作用,并阐明其对结肠组织中细胞因子TNF-α,IFN-γ,IL- 17,IL-10的表达及中性粒细胞浸润的影响。方法：雌性BALB/c小鼠48只,随机分为正常对照组(DSS-)、疾病组 (DSS+saline)、抗CXCL1中和抗体治疗组(DSS+anti-CXCL1 Ab)和治疗对照组(DSS+IgG Ab),每组12只。正常对照组小 鼠给予蒸馏水自由饮用,疾病组、治疗组及治疗对照组给予3.5%的DSS自由饮用,至第8天处理小鼠。其中治疗组于 造模第3天和第6天腹腔注射抗CXCL1中和抗体(4 mg/kg),治疗对照组予以等量大鼠IgG抗体,正常对照组和疾病组 注射等量生理盐水。对各组小鼠进行疾病活动指数评分(disease activity index,DAI)及结直肠组织损伤学评分,并采用 RT-PCR法检测各组小鼠结肠组织中细胞因子TNF-α,IFN-γ,IL-17和IL-10的表达。运用免疫组织化学检测各组小鼠 结肠组织中中性粒细胞特异性标志物髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)的表达。结果：与正常对照组相比,疾病 组小鼠DAI评分及结直肠组织损伤学评分明显增高,但是予以抗CXCL1中和抗体干预治疗后能明显减低急性UC小鼠 的DAI和结直肠组织损伤学评分。RT-PCR检测结果显示：与正常对照组相比,疾病组小鼠结直肠组织中促炎细胞因 子TNF-α,IFN-γ和IL-17 mRNA表达水平均显著升高,抑炎因子IL-10 mRNA表达下降。而使用抗CXCL1中和抗体干预 治疗,明显抑制DSS诱导的小鼠结肠组织中促炎细胞因子TNF-α,IFN-γ和IL-17 mRNA表达水平的升高及抑炎因子IL- 10 mRNA表达水平的下降,差异具有统计学意义(P<0.05)。免疫组织化学结果显示：疾病组小鼠结肠组织中中性粒 细胞的浸润明显增加,予以抗CXCL1中和抗体治疗能显著减少结肠组织中中性粒细胞的浸润,差异具有统计学意义 (P<0.05)。结论：抗CXCL1中和抗体缓解了DSS诱导的急性UC的进展,其发挥抗炎作用的机制可能与抑制促炎因子的 表达和中性粒细胞的浸润有关。     

解毒祛瘀滋阴方对MRL/lpr狼疮鼠CD4+T细胞DNA甲基化敏感基因表达的影响

目的:观察解毒祛瘀滋阴方对MRL/lpr狼疮鼠CD4~+T细胞DNA甲基化敏感基因白介素10(IL-10)、蛋白磷酸酶2Ac(protein phosphatase 2Ac,PP2Ac)、CD70表达水平的影响。方法:40只MRL/lpr狼疮小鼠随机分为对照组和解毒祛瘀滋阴方中药组,分别予解毒祛瘀滋阴方中药和生理盐水灌胃8周。干预结束后,观察小鼠皮损及血清抗ds DNA抗体、C3浓度、尿蛋白水平变化;HE染色及荧光染色后观察肾脏病理改变;荧光定量PCR检测小鼠脾脏CD4~+T细胞甲基化敏感基因CD70、PP2Ac、IL-10 mRNA表达水平。结果:与对照组比较,中药组小鼠血清抗ds DNA抗体、C3浓度和肾脏病理损伤明显改善,CD70、PP2Ac和IL-10的mRNA表达水平明显降低(P0.05)。结论:解毒祛瘀滋阴方具有对MRL/lpr狼疮鼠的治疗作用,其作用机制可能与其抑制下游甲基化敏感基因CD70、PP2Ac、IL-10的过度表达有关。     

二甲双胍通过COX-2/PGE2/STAT3途径抑制结直肠癌的机制研究

目的 探讨二甲双胍对结直肠癌的抑制作用及相关机制。方法 在体外培养小鼠结肠癌细胞系MC38和人结肠癌细胞系SW480，同时在体内使用氧化偶氮甲烷（AOM）与葡聚糖硫酸钠（DSS）诱导的结直肠癌小鼠模型，使用二甲双胍进行干预，通过CCK-8、细胞凋亡试验、Western blotting、苏木精-伊红（HE）染色、免疫组织化学检测、酶联免疫吸附试验（ELISA）、粪便16S rDNA测序来分析二甲双胍是否可抑制结直肠癌的发生、发展，并阐明其机制。结果 不同浓度的二甲双胍分别处理MC38细胞和SW480细胞24 h可在镜下看到，随着二甲双胍浓度的增加，肿瘤细胞数量明显减少。CCK-8法检测结果表明，随着二甲双胍浓度的增加，两种结直肠癌细胞细胞活性率受到抑制。两种结直肠癌细胞加入0、20 mmol/L二甲双胍的细胞凋亡率比较，差异有统计学意义（P <0.05）。Western blotting结果可见，二甲双胍干预可抑制COX-2蛋白的表达，且随着浓度的增加，COX-2蛋白表达呈药物剂量依赖性减低。两种结直肠癌细胞添加不同浓度二甲双胍后PGE2蛋白水平比较，差异有统计学意义（P <...     

An Optimized Protocol of Azoxymethane-Dextran Sodium Sulfate Induced Colorectal Tumor Model in Mice

Since azoxymethane (AOM)-dextran sodium sulfate (DSS) induced tumorigenesis was used to explore inflammation-associated carcinogenesis of sporadic colorectal cancer (CRC), different administration modes of AOM or DSS have been reported. In this article we optimized the protocol of the AOM-DSS modeling using C57BL/6 mice for study on sporadic CRC by intraperitoneal injecting AOM solution at a proper concentration with a 100 μl sterile syringe once, feeding with DSS solution for 7 days in a roll and change DSS solution every day. More than 100 C57BL/6 mice had been treated with the optimized protocol, and all mice were demonstrated suffering from colorectal tumors when sacrificed in 8 to 20 weeks after AOM injection. These tumors mainly occurred in distal segment of colorectum with an increase in tumor density, which was similar to CRC in human beings. Tumor per mouse was high, and variation of tumor number per mouse was low. The histology of tumor developed through the defined stage ranged from precursor lesions, adenomatous lesions, adenomas to adenocarcinomas. The modified protocol of AOM-DSS model is easy, cheap, with high tumor formation rate of colorectal tumors.     

丹枝饮对盆腔炎性疾病后遗症小鼠体内炎性因子的影响

[目的]观察丹枝饮对盆腔炎性疾病后遗症(SPID)小鼠血清炎性因子白介素-17A(IL-17A)、白介素-17F(IL-17F)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、巨噬细胞炎症蛋白-2(MIP-2)表达水平的影响,探讨盆腔炎性疾病后遗症的发病机制及丹枝饮治疗SPID的药理作用机制。[方法]将48只SPF级BALB/c小鼠随机分为正常组、模型组、阿司匹林组[20.55 mg/(kg·d)]、丹枝饮小剂量组[7.91 g/(kg·d)]、丹枝饮中剂量组[15.82 g/(kg·d)]、丹枝饮大剂量组[31.64 g/(kg·d)],每组8只。其中模型组、阿司匹林组、丹枝饮小、中、大剂量组采用宫腔种植鼠衣原体复制SPID小鼠模型,造模后第6周开始灌胃给药3个动情周期(15 d)后,检测各组小鼠脸谱疼痛评分(MGS),血清IL-17A、IL-17F、MCP-1、MIP-2的表达水平。[结果]与模型组相比较,阿司匹林组、丹枝饮小、中、大剂量组MGS评分,血清IL-17A、IL-17F、MCP-1、MIP-2的表达水平均有显著降低(P0.01),且丹枝饮中剂量组在各项指标的降低程度上均优于阿司匹林组、丹枝饮小剂量组及丹枝饮大剂量组(P0.05)。[结论]盆腔炎性疾病后遗症可以引起炎性因子IL-17A、IL-17F、MCP-1、MIP-2的表达水平的增高,丹枝饮可以有效的减轻SPID小鼠脸谱疼痛评分,降低SPID小鼠血清炎性因子IL-17A、IL-17F、MCP-1、MIP-2的表达水平,从而达到治疗SPID的作用。     

参肤外洗方联合克林霉素乳膏治疗细菌性阴道炎的临床疗效分析

目的:评价参肤外洗方联合克林霉素磷酸酯乳膏治疗细菌性阴道炎的临床疗效及其安全性。方法:共纳入符合观察条件的150例细菌性阴道炎患者,随机分为3组,每组各50例。对照组给予克林霉素磷酸酯阴道用乳膏,治糜康栓组在对照组基础上联合治糜康栓,参肤外洗方组在对照组基础上联合参肤外洗方,疗程均为7 d。观察各组患者的临床疗效、局部不良反应,并追踪调查远期复发率。结果:对照组、治糜康栓组、参肤外洗方组的总有效率分别为74.00%、84.00%、96.00%,参肤外洗方组总有效率明显高于对照组(P0.05);3组的不良反应发生率分别为22.00%、16.00%、6.00%,参肤外洗方组的不良反应明显少于对照组和治糜康栓组(P0.05)。在完成1～3个月的随访患者中,对照组共复发12例、治糜康栓组复发10例、参肤外洗方组复发4例,参肤外洗方组的复发率显著低于对照组和治糜康栓组(P0.05)。结论:参肤外洗方联合克林霉素磷酸酯乳膏治疗细菌性阴道炎,可明显提高临床疗效、降低复发率,且安全性好。     

IL-6/STAT3通路介导lncRNA H19上调在小鼠溃疡性结肠炎相关结直肠癌发病中的作用

目的：检测长链非编码RNA H19（lncRNA H19,H19）和白细胞介素6/信号传导及转录激活蛋白3（IL-6/STAT3）通路在小鼠溃疡性结肠炎相关结直肠癌（CAC）组织中的表达,并探讨其可能的作用机制。方法：22只C57BL/6小鼠随机分为对照组（n=10）和模型组（n=12）,模型组小鼠采用氧化偶氮甲烷/葡聚糖硫酸钠（AOM/DSS）联合诱导建立CAC小鼠模型。第120天处死小鼠,评估小鼠疾病活动度（DAI）,计算成瘤率,测量结肠长度,HE染色观察小鼠结肠组织病理形态表现,ELISA法检测小鼠血清IL-6水平,qPCR法检测小鼠结肠组织中H19、let-7a、IL-6、STAT3和c-Myc mRNA表达水平,Western blotting法检测小鼠结肠组织中磷酸化STAT3（p-STAT3）和c-Myc蛋白表达水平。结果：与对照组比较,模型组小鼠成瘤率为100%,结肠长度明显缩短（P<0.01）,DAI评分增加,HE染色显示结肠组织呈上皮内瘤变,结肠组织中H19、IL-6、STAT3和c-Myc mRNA表达水平均明显升高（P<0.01）,let-7a mRNA表达水平明显降低（P<0.01）,血清IL-6水平升高（P<0.01）,结肠组织中p-STAT3和c-Myc蛋白表达水平明显升高（P<0.01）。结论：小鼠CAC的发病可能与IL-6/STAT3通路介导的c-Myc和H19表达上调及let-7a表达下调有关。     

养阴活血方干预ApoE-/-动脉粥样硬化小鼠DNA甲基化酶的研究

  目的  从DNA甲基化角度观察养阴活血方及其功效单元干预动脉粥样硬化(Atherosclerosis, AS)进程。  方法  ApoE-/-小鼠随机分为对照组、模型组、辛伐他汀组、养阴活血方组、养阴组、清热组和活血组。对照组小鼠给予普通饲料喂养, 其余组小鼠均给予高脂饲料喂养。分别于第10、12、14、16、18周, 对照组小鼠注射等体积无菌PBS, 其余组腹腔注射10 μg的LPS。灌胃给药与高脂饲料喂养同时进行, 第20周检测。油红O染色观测小鼠主动脉斑块面积; 生化试剂盒检测小鼠TC、TG、LDL-C、HDL-C、non-HDL-C水平; HE冠脉染色观测小鼠冠脉管腔狭窄情况和管腔面积; qPCR检测小鼠脾脏/主动脉DNA甲基化酶Tet1、Tet2、Tet3、Dnmt1、Dnmt3a、Dnmt3b mRNA表达; Western blot检测小鼠脾脏/主动脉DNA甲基化酶Dnmt1、Dnmt3a、Dnmt3b蛋白表达; ELISA检测细胞因子IL-6、IL-2、TGF-β1的变化。  结果  与模型组相比, 养阴活血方组能显著减少斑块面积并抑制冠脉狭窄(P < 0.01), 降低TG、LDL-C水平(P < 0.01), 升高HDL-C水平(P < 0.05), 降低脾脏Dnmt1和Dnmt3a蛋白表达(P < 0.05), 降低主动脉Dnmt1 mRNA、Dnmt3b mRNA(P < 0.05, P < 0.001)和主动脉Dnmt1、Dnmt3b蛋白表达(P < 0.05), 下调血清IL-6水平(P < 0.05), 上调TGF-β1水平(P < 0.05)。与模型组比较, 各功效单元组均不同程度减少斑块面积、调节血脂水平; 养阴组降低脾脏Dnmt3b mRNA表达(P < 0.05), 降低主动脉Dnmt3b mRNA(P < 0.001)和Dnmt3a蛋白(P < 0.05)表达, 升高TGF-β1水平(P < 0.05);清热组降低脾脏Dnmt1蛋白表达(P < 0.05), 主动脉Dnmt1和Dnmt3b mRNA(P < 0.05)和Dnmt1、Dnmt3a、Dnmt3b蛋白表达(P < 0.05), 降低IL-6水平(P < 0.05), 增加TGF-β1水平(P < 0.05);活血组降低主动脉Dnmt3a和Dnmt3b蛋白表达(P < 0.05), 降低IL-6水平(P < 0.05)。  结论  养阴活血方通过调节血脂, 降低DNA甲基化酶Dnmts的表达, 改善炎症水平, 从而有效减少高脂联合LPS注射诱发的ApoE-/-小鼠AS斑块的形成。      

双氧化酶2在5-羟色胺加重的小鼠结肠炎模型中的表达及作用

目的 探讨5-羟色胺(5-HT) 对双氧化酶2 (Duox2) 在小鼠结肠组织中的表达情况及其在炎症中的意义.方法 选取6~8周龄的健康清洁级C57BL/6J(B6)雄性小鼠,随机分为5组(n=8):对照组自由饮用无菌蒸馏水;葡聚糖硫酸钠(DSS)(1.0%、2.5%)组自由饮用相应浓度的DSS溶液;5-HT组采用直肠灌药方式(1.0 mg/kg)给药,每3 d 1次;DSS+5-HT组同时给予1.0% DSS和5-HT.于造模第6天处死小鼠取结肠组织.通过结肠长度、疾病活动指数(DAI)评分和HE染色等方法评估肠道炎症程度,采用实时定量PCR(RT-PCR)检测小鼠结肠组织中白介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α和 Duox2 mRNA表达水平,应用免疫组化检测结肠组织中Duox2蛋白的表达情况.结果 对照组和5-HT组小鼠无肠炎表现;DSS (1.0%) 组小鼠表现为轻度肠炎;DSS+5-HT组和DSS (2.5%) 组有严重急性肠炎表现.IL-1β、IL-6和TNF-α等表达量随炎症程度加重而增加.Duox2 mRNA在5-HT组和DSS (1.0%) 组表达增高(均P<0.05),在DSS+5-HT和DSS (2.5%) 组表达下调(均P<0.05).免疫组化结果显示Duox2蛋白主要表达于小鼠结肠上皮刷状缘及上皮细胞胞质中,与mRNA表达一致.结论 5-HT可能通过影响Duox2的表达在小鼠结肠炎的发生发展中发挥作用.     

CRF及其受体在DSS诱导的实验性结肠炎中的表达

目的 研究CRF及其受体在实验性DSS结肠炎中的表达,探讨其在肠道炎症形成中的可能作用。方法 将6~8周的雌性BALB/c小鼠分为正常对照组和实验组,建立DSS诱导的实验性结肠炎小鼠模型,小鼠进行DAI和组织病理学评分。免疫荧光检测小鼠肠黏膜组织中CRF1受体和CRF2受体的表达。Western blot法检测小鼠肠黏膜组织中CRF、CRF1和CRF2受体的表达。结果 根据肠黏膜DAI评分和组织学评分提示DSS组肠黏膜组织炎症明显,造模成功。免疫荧光检测显示CRF1受体在DSS组和正常肠黏膜组织中表达差异无统计学意义（P>0.05）,而DSS组小鼠肠黏膜组织中CRF2受体表达明显高于对照组（P<0.05）且主要分布在肠上皮细胞和固有层单个核细胞中。Western blot法检测显示CRF1受体在DSS组和正常肠黏膜组织中表达差异无统计学意义（P>0.05）,而DSS组小鼠肠黏膜组织中CRF和CRF2受体表达明显高于对照组（P<0.05）。结论 DSS结肠炎模型周围肠黏膜炎症组织中存在着CRF和CRF2受体的表达增高,而这种增高可能与肠道炎症发生有关。