基于Drp1-Ser637磷酸化探讨补阴牵正方对PD小鼠脑线粒体的影响

目的通过帕金森病(PD)小鼠脑动力相关蛋白1(Drp1)和其磷酸化位点丝氨酸637(Ser637)表达的变化及对脑线粒体的影响探讨补阴牵正方防治PD的可能机制。方法选用C57BL/6小鼠72只,随机分为正常组、模型组、补阴牵正方组、美多芭组,每组18只。除正常组外,其余3组小鼠腹腔注射1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)建立PD模型,补阴牵正方组灌胃补阴牵正方水煎剂,每天灌胃2次,连续28 d,美多芭组腹腔注射美多芭,隔天1次,共28 d。爬杆法、抓握法观察小鼠行为学;免疫荧光组化法观察中脑黑质酪氨酸羟化酶(TH)阳性神经元数目;荧光素酶法测定脑线粒体三磷酸腺苷(ATP);JC-1法检测脑线粒体膜电位;蛋白印迹法(Western blot)检测脑蛋白Drp1及其磷酸化蛋白Drp1-Ser637表达。结果相比正常组,模型组小鼠爬杆时间延长(P0.01),抓握力度减弱(P0.01),黑质TH阳性神经元数目减少(P0.01),脑线粒体膜电位及ATP水平降低(P0.01),脑Drp1蛋白表达增加(P0.01),Drp1-Ser637磷酸化蛋白表达降低(P0.01)。与模型组相比,补阴牵正方组小鼠在第14天爬杆时间缩短、握力明显增加(P0.05),黑质TH数目明显增加(P0.05),Drp1蛋白表达减少(P0.01),Drp1-Ser637磷酸化蛋白表达增加(P0.05),脑线粒体膜电位及ATP水平显著升高(P0.01);而美多芭组除在第14天行为学较模型组有明显改善外(P0.05),其余指标均无统计学差异;补阴牵正方组与美多芭组比较其黑质TH数目、ATP水平及膜电位均有差异(P0.05,P0.01),Drp1-Ser637磷酸化蛋白表达也显著增加(P0.01)。结论补阴牵正方可能通过下调维持线粒体动态平衡的分裂蛋白Drp1、上调Drp1-Ser637磷酸化位点的表达改善PD小鼠脑线粒体功能,从而保护中脑黑质多巴胺神经元达到防治PD的作用。     

醒脑启智胶囊对血管性痴呆小鼠脑组织海马细胞Bcl-2和Bax蛋白的影响

目的 探讨中药醒脑启智胶囊对血管性痴呆小鼠脑组织海马细胞Bcl-2和Bax蛋白的影响.方法 将120只昆明种小鼠随机分为假手术组、模型组、醒脑液高剂量组、醒脑液低剂量组、银杏叶液对照组、尼莫地平液对照组,每组20只,采用双侧颈总动脉结扎反复脑缺血再灌注的方法制备血管性痴呆小鼠模型.术后15 d进行行为学实验和脑组织的病理形态学观察,并用流式细胞术检测各组海马细胞Bcl-2和Bax蛋白的含量.结果 （1）行为学实验显示,模型组小鼠学习成绩与记忆成绩下降,各治疗组小鼠的学习成绩与记忆成绩均有提高（P＜0.05）.（2）光镜下病理形态学显示,术后模型组小鼠脑组织海马区呈缺血性病理改变,各治疗组小鼠病变轻于模型组.（3）流式细胞术检测显示：模型组小鼠脑组织海马细胞Bcl-2和Bax蛋白含量高于假手术组（P＜0.01）,但二者的比值低于假手术组（P＜0.01）;各用药组与模型组比较,Bax蛋白降低（P＜0.01）,Bcl-2蛋白与Bcl-2/Bax的比值升高（P＜0.05）.结论 醒脑启智胶囊对血管性痴呆小鼠有明显治疗作用,其作用机制之一是调节海马细胞Bcl-2和Bax蛋白的表达.     

滋肾活血方对血管性痴呆大鼠分裂与融合蛋白Mfn1、Mfn2、Drp1、Fis1的影响

目的 观察滋肾活血方对血管性痴呆（vascular dementia, VD）大鼠海马组织线粒体融合蛋白1(mitofusin 1, Mfn1)、线粒体融合蛋白2(mitofusin 2, Mfn2)、线粒体动力蛋白相关蛋白1(dynamin-related protein 1, Drp1)、线粒体分裂蛋白1(fission mitochondrial 1, Fis1)表达的影响。方法 选用雄性SD大鼠60只,随机均分为假手术组、模型组、滋肾活血高剂量组、滋肾活血中剂量组、滋肾活血低剂量组、西药组。除假手术组外,其余各组均采用改良2-VO法建立VD大鼠模型。每组大鼠按9 mL/(kg·d)剂量灌胃相应药物。模型组、假手术组给予蒸馏水,滋肾活血低剂量组、滋肾活血中剂量组、滋肾活血高剂量组予以滋肾活血方溶液[9.8、17.8、35.6 g/(kg·d)]灌胃,西药组以多奈哌齐溶液[150 mg/(kg·d)]灌胃。连续喂药2周后,采用水迷宫实验评估大鼠学习记忆功能;取海马组织,采用免疫组化法检测实验大鼠海马组织中的Mfn1、Mfn2、Drp1、Fis1蛋白表达量。结果 与假手术组比较,模型...     

Sirt1在缺氧条件下对心肌细胞线粒体融合与分裂中的作用

目的 探讨缺氧条件下线粒体动态学变化及Sirt1在其中的作用.方法 ①收集2014年于新桥医院心血管外科行手术治疗的先心病患儿29例,其中非紫绀型先心病14例,紫绀型先心病15例,取术中所切除的右室流出道心肌组织为心肌标本,Western blot检测促线粒体分裂蛋白Drp1与Fis1表达情况.②将H9c2心肌细胞置入缺氧培养箱(94％N2,5％ CO2,1％ O2)中进行培养,检测缺氧0、2、4、8、12 h后促线粒体分裂蛋白Drp1与Fis1的表达水平.③将线粒体靶向质粒分别同空载质粒、Sirt1过表达质粒和Sirt1干扰质粒共转染H9c2细胞,常氧或缺氧培养箱中培养12 h后,激光共聚焦显微镜下观察线粒体融合、分裂情况;④运用腺病毒Ad-Sirt1和慢病毒Lv-Sh-Sirt1分别在H9c2细胞中过表达或干扰Sirt1后,将细胞置于缺氧培养箱中培养12 h,检测Drp1与Fis1表达水平;⑤分别转染空载质粒、Sirt1过表达质粒和Sirt1干扰质粒至H9c2细胞后,缺氧培养12 h,LDH试剂盒检测细胞毒性.结果 ①同非紫绀组相比,紫绀组心肌中Drp1与Fis1表达显著增高,Drp1相对灰度值:[(0.47±0.11)vs(0.76±0.12)、Fis1相对灰度值(0.53 ±0.02)vs (0.83 ±0.03),P＜0.05];②细胞水平研究结果显示Drp1与Fis1的蛋白表达随缺氧的时间的延长呈递增趋势;③激光共聚焦结果表明,Sirt1过表达后能够一定程度地缓解缺氧诱导的线粒体分裂(P＜0.05),而当Sirt1受到干扰后,缺氧所诱导的线粒体分裂水平明显提高(P＜0.05);④在缺氧条件下,过表达Sirt1能够抑制Drp1与Fis1蛋白表达水平(P＜0.05),而Sirt1被抑制后,Drp1与Fis1蛋白表达水平增加(对照组,过表达组,低表达组Drp1相对灰度值依次为[(0.47 ±0.02)vs(0.36±0.02) vs (0.78 ±0.04);Fis1相对灰度值依次为(0.64±0.02) vs (0.42±0.02) vs (0.80±0.04),P＜0.05];⑤Sirt1过表达能够降低缺氧刺激后H9c2心肌细胞的死亡率.结论 Sirt1可能通过调控促线粒体分裂蛋白Drp1与Fis1表达水平促进心肌细胞在缺氧条件下的适应.     

二氢杨梅素抑制高脂喂养小鼠肝脏脂肪蓄积与线粒体融裂基因变化的关系

目的 探讨肝脏线粒体融裂相关基因表达变化在二氢杨梅素抑制高脂喂养小鼠肝脏脂肪蓄积中的可能作用.方法 45只6周龄C57BL/6J雄性小鼠,按随机数表法分为普通饲料组(CON),高脂饲料组(HFD)和高脂加二氢杨梅素组(HFD+ DHM),每组15只,干预12周.检测小鼠体质量、肝脏指数、血清生化指标;分别采用HE染色和油红O染色观察肝细胞脂肪变性和脂滴数量与形态.使用增强型ATP试剂盒检测肝脏ATP含量;采用荧光定量PCR和Western blot分别检测肝脏线粒体融合与分裂相关基因[动力相关蛋白1(dynamin-related protein 1,Drp1)、分裂蛋白1(fission 1,Fis1)、融合蛋白2(mitofusion 2,Mfn2)、视神经萎缩蛋白1(optic atrophy1,Opa1)]的mRNA及蛋白表达.结果 与CON组相比,HFD组小鼠体质量、肝脏指数、空腹血糖、空腹胰岛素水平、甘油三酯、总胆固醇、低密度胆固醇明显增高(P＜0.05),肝脏ATP含量显著降低(P＜0.05),HE染色见明显的肝内脂肪空泡和肝细胞气球样变,油红O染色见大量的脂滴蓄积,肝脏组织Fis1、Drp1 mRNA和蛋白表达显著增高(P＜0.05),而Mfn2、Opa1明显降低(P＜0.05).二氢杨梅素干预显著抑制高脂喂养诱导的肝脏指数、空腹血糖、空腹胰岛素和血甘油三酯的升高,肝脏脂肪蓄积以及肝脏ATP含量的降低,并且明显拮抗高脂诱导的线粒体分裂与融合基因mRNA和蛋白的表达水平变化.结论 二氢杨梅素可明显改善高脂喂养小鼠肝脏的脂肪蓄积,该效应可能与其调节肝脏线粒体的融合与分裂有关.     

保肝解毒颗粒对急性肝损伤小鼠肝细胞Bcl-2、Bax表达的影响

目的:观察保肝解毒颗粒对雷公藤多苷所致小鼠急性肝损伤肝细胞凋亡相关基因Bcl-2、Bax表达的影响,探讨保肝解毒颗粒的干预作用。方法:60只昆明种清洁级小鼠随机分为6组,即空白组,模型组,对照组,保肝解毒颗粒给药高剂量组、中剂量组、低剂量组。造模前,每天1次,给予小鼠灌胃不同剂量的保肝解毒颗粒,连续5 d;对照组灌服甘利欣混悬液;空白组、模型组灌服生理盐水。第5天给药后禁食12 h,以雷公藤多苷造模。免疫组织化学法检测肝细胞Bcl-2、Bax基因表达。结果:与正常组对比,模型组Bcl-2蛋白表达下降(P0.05),而Bax蛋白阳性表达升高(P0.05);保肝解毒颗粒组与模型组对比,下调Bax蛋白表达(P0.05),上调Bcl-2蛋白表达(P0.05)。结论:保肝解毒颗粒可以下调促凋亡基因Bax水平,上调抗凋亡基因Bcl-2水平,抑制细胞凋亡,从而起到对肝脏的保护作用,这可能是其治疗急性肝损伤的机制之一。     

补元清脑颗粒对APP /PS1 双转基因小鼠学习记忆及Bax、Bcl-2表达的影响

目的观察补元清脑颗粒对APP/PS1双转基因小鼠学习记忆能力及Bax、Bcl-2表达的影响。方法将40只APP/PS1双转基因小鼠随机分为模型组、多奈哌齐组、补元清脑颗粒高剂量组和低剂量组,每组10只,同月龄相同遗传背景C57BL/6J小鼠10只为空白组。从5月龄开始分别灌胃,1天1次。空白组、模型组均给予等容积生理盐水灌胃。连续灌胃30天后进行Morris水迷宫测试评定各组小鼠学习记忆能力;采用Western Blot法检测小鼠海马组织Bax、Bcl-2蛋白的表达。结果与模型组比较,补元清脑颗粒高、低剂量组均可减少小鼠Morris水迷宫测试的上平台潜伏期[(37.90±20.10)s比(66.98±21.00)s,P0.01;(47.65±22.93)s比(66.98±21.00)s,P0.05]、减少游泳总路程[(414.94±171.10)cm、(559.72±178.76)cm比(1032.12±118.66)cm,P0.01]和第一次抵原平台时间[(21.36±20.22)s、(27.82±21.96)s比(51.71±20.96)s,P0.01],增加穿越平台次数[(5.90±1.60)次比(1.80±1.41)次,P0.01;(4.60±1.71)次比(1.80±1.41)次,P0.05]和目标象限时间[(17.71±7.58)s、(14.07±7.08)s比(5.55±4.42)s,P0.01],增加小鼠海马组织Bcl-2蛋白相对表达量(0.52±0.07比0.15±0.06,P0.01;0.42±0.06比0.15±0.06,P0.05)。结论补元清脑颗粒对APP/PS1双转基因小鼠的学习记忆能力具有改善作用,及有一定的抗神经元凋亡作用。     

长期低剂量锰染毒对子代大鼠睾丸生精细胞线粒体状态和细胞凋亡的影响

目的 探讨长期低剂量氯化锰染毒对子代大鼠睾丸生精细胞线粒体形态和凋亡的影响.方法 健康雌性SD大鼠32只分为对照组、低、中、高剂量组.腹腔注射2、4和8 mg/kg MnCl2·4H2O或生理盐水,1次/天,5天/周,共8周,并在妊娠期和哺乳期继续染毒.每组8只12周龄子代大鼠断头处死后,观察睾丸生精小管结构和生精细胞线粒体形态、视神经萎缩蛋白1(Opa1)、动力相关蛋白1(Drp1)、半胱氨酸蛋白酶9(Caspase9)表达和细胞凋亡情况.结果 随锰染毒剂量增加,生精细胞层数逐渐减少,细胞排列紊乱、数量减少;中、高剂量组可见线粒体分离、肿胀等表现;中、高剂量组Opa1显著降低(P＜0.05,P＜0.01),Drp1、Caspase9则随锰染毒剂量增加而递增(P＜0.05,P＜0.01);锰染毒组生精细胞凋亡指数随锰染毒剂量增加而上升(P＜0.05).结论 长期低剂量锰染毒可调节Opa1/Drp1基因表达而影响线粒体功能,导致子代大鼠生精细胞凋亡.     

线粒体动力学改变对APP/PS1小鼠移植黑色素瘤生长的抑制作用

目的：探讨线粒体动力学的变化对APP/PS1转基因小鼠移植黑色素瘤生长的抑制作用及其机制。方法：将C57BL/6J （C57）和APP/PS1雄性小鼠分为C57移植瘤组（n=7）和APP/PS1移植瘤组（n=7）。观察2组小鼠肿瘤出现时间并计算肿瘤体积,绘制移植瘤生长曲线。光学显微镜观察2组小鼠肿瘤组织形态表现,Western blotting法检测2组小鼠肿瘤组织中线粒体融合蛋白2（Mfn2）、动力相关蛋白1（Drp1）、线粒体分裂蛋白1（Fis1）、泛素化及多泛素化蛋白、LC3、PINK1及Parkin蛋白表达水平。结果：C57移植瘤组和APP/PS1移植瘤组小鼠皮肤下均见肿瘤组织,肿瘤细胞内呈现黑色素颗粒。与C57移植瘤组比较,APP/PS1移植瘤组小鼠出瘤时间晚,肿瘤组织体积小（P<0.05）。小鼠肿瘤组织中Mfn2表达水平降低（P<0.05）,Fis1和Drp1表达水平升高（P<0.05）,泛素化及多聚泛素化蛋白、LC3-Ⅱ、PINK1和Parkin蛋白表达水平升高（P<0.05）。结论：APP/PS1小鼠移植瘤模型肿瘤生长缓慢,其机制可能与PINK1/Parkin通路参与线粒体自噬有关。     

照射时间延长对小鼠LEWIS肺癌细胞杀伤作用影响

目的 模拟调强适形放射治疗(IMRT)模式,观察照射时间延长对小鼠LEWIS肺癌细胞杀伤作用的影响及凋亡相关基因蛋白Bcl-2、Bax表达的变化.方法 荷LEWIS肺癌的C57BL/6 雄性小鼠40只,随机分成假照组、常规照射组(A组)及IMRT模拟组(B1组、B2组).按设计要求对各个照射剂量点进行照射,每个剂量点分5 次照射,其间分别间隔7.0、10.5 min,照射后取出肿瘤,用末端标记法(TUNEL法)检测细胞凋亡指数,并采用免疫组化技术检测凋亡相关基因蛋白Bcl-2、Bax的表达水平.结果 各组凋亡指数的差别有显著性(F=161.54,P＜0.01),其中假照组的凋亡指数最低,A组的凋亡指数最高.各组间Bcl-2蛋白的半定量测定结果比较差别有统计学意义(F=737.40,P＜0.01),其中假照组的Bcl-2蛋白含量最高,A组的含量最低.各组Bax蛋白的半定量测定结果比较差别有统计学意义(F=161.45,P＜0.01),其中假照组的Bax蛋白含量最低.结论 在一定的范围内,随着照射时间延长,小鼠LEWIS肺癌细胞Bax表达降低,而Bcl-2表达升高,凋亡指数下降.照射时间延长可导致高能X线对小鼠LEWIS肺癌细胞杀伤作用降低.     

Bcl-2和Bax蛋白在大鼠脑缺血预处理脑组织中的表达及意义

目的:探讨Bcl-2和Bax蛋白在大鼠局灶性脑缺血预处理脑组织中的表达及意义.方法:线栓法阻断SD大鼠大脑中动脉建立脑缺血预处理及脑缺血模型.TTC染色法测量脑梗死体积,免疫组织化学检测前脑皮质、基底核Bcl-2和Bax蛋白的表达.结果:与缺血组相比,预处理缺血组脑梗死体积明显减小(P＜0.01),Bcl-2蛋白表达细胞数明显增加(P＜0.01),Bax蛋白表达减少(P＜0.05).结论:缺血预处理诱导Bcl-2蛋白表达增加和Bax蛋白表达下降可能是缺血预处理诱导抗凋亡、产生脑保护机制的原因之一.     

芝麻素对AD模型小鼠学习和记忆能力的影响及其机制

目的：观察芝麻素对阿尔茨海默病（AD）模型小鼠学习记忆和能力的影响,阐明其可能的作用机制。方法：40只C57BL/6雄性小鼠随机分为对照组、模型组、吡拉西坦组、低剂量芝麻素组和高剂量芝麻素组,每组8只。除对照组外其他各组小鼠采用侧脑室注射淀粉样β蛋白片段25-35（Aβ_25-35）的方法建立AD模型,24 h后,吡拉西坦组小鼠给予吡拉西坦灌胃,低和高剂量芝麻素组小鼠分别给予50和100 mg·kg^-1芝麻素灌胃,对照组和模型组小鼠给予等量的生理盐水。采用Morris水迷宫实验观察各组小鼠逃避潜伏期、小鼠在目标象限游程和目标象限停留时间,流式细胞术检测各组小鼠脑组织中活性氧（ROS）水平,ELISA法检测小鼠脑组织中超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）水平,Western blotting法检测各组小鼠脑组织中凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（Caspase-3）蛋白表达水平。结果：与对照组比较,模型组小鼠逃避潜伏期明显延长（P<0.05）,目标象限游程和目标象限停留时间明显缩短（P<0.05）;与模型组比较,吡拉西坦组、低剂量芝麻素组和高剂量芝麻素组小鼠逃避潜伏期明显缩短（P<0.05）,目标象限游程和目标象限停留时间增加（P<0.05）。与对照组比较,模型组小鼠脑组织中ROS和MDA水平明显升高（P<0.05）,SOD活性明显降低（P<0.05）,Bax和Caspase-3蛋白表达水平明显升高（P<0.05）,Bcl-2蛋白表达水平和Bcl-2/Bax比值明显降低（P<0.05）;与模型组比较,吡拉西坦组、低和高剂量芝麻素组小鼠脑组织中ROS和MDA水平明显降低（P<0.05）,SOD活性明显升高（P<0.05）,Bax和Caspase-3蛋白表达水平明显降低（P<0.05）,Bcl-2蛋白表达水平和Bcl-2/Bax比值明显升高（P<0.05）。结论：芝麻素可能通过提高神经元抗氧化能力、抑制神经元凋亡而提高AD模型小鼠的学习和记忆能力。     

清心通络方通过调控Nrf2/HO-1通路改善小鼠心肌缺血再灌注损伤

目的 研究清心通络方对小鼠心肌缺血再灌注损伤的影响,并探讨其机制是否与调控Nrf2/HO-1信号通路相关。方法 将45只C57BL/6J小鼠随机分为假手术组、模型组和中药组,每组15只。中药组予清心通络方(1.08g·kg-1·d-1)灌胃给药,余各组予等体积生理盐水(0.2mL·d-1)灌胃,灌胃处理14d后通过结扎小鼠左侧冠状动脉左前降支30min后再灌注构建心肌缺血再灌注损伤(myocardial ischemia-reperfusion injury,MIRI)模型,其中假手术组仅穿线不结扎。采用伊文思蓝和2,3,5-氯化三苯基四氮唑双重染色法测定小鼠心肌缺血和心肌梗死面积;采用生化试剂盒检测小鼠血清肌酸激酶(creatine kinase,CK)、肌酸激酶同工酶(creatine kinase isoenzyme,CK-MB)、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、天冬氨酸转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)、超氧化物歧化酶 (superoxide dismutase,SOD)及丙二醛(malondialdehyde,MDA)的水平;采用荧光实时定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)法检测心肌组织白介素-6(interleukin-6,IL-6)、白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)mRNA 相对表达量;采用蛋白免疫印 迹法(Western blot)检测心肌组织PARP-1、Bax、Bcl-2、Nrf2、HO-1的蛋白表达。利用H2O2模拟氧化应激损伤细胞模型,采用细胞凋亡试剂盒检测HL-1细胞的凋亡情况。结果 与假手术组相比,模型组小鼠心肌损伤加重,血清CK、CK-MB、LDH、AST水平升高(P 均<0.01);与模型组相比,中药组小鼠血清CK、LDH、AST水平均下降(P<0.05或P<0.01),且心梗面积明显减少(P<0.01)。与假手术组相比,模型组小鼠血清中SOD水平下降(P<0.05),MDA 含量升高(P<0.01);与模型组相比,中药 组小鼠血清SOD水平升高(P<0.01),MDA 含量下降(P<0.01)。炎症因子IL-6、IL-1β及TNF-α的mRNA表达在模型组中升高(P 均<0.01),中药处理后可显著降低上述炎症因子的mRNA 表达(P 均<0.01)。模型组心肌组织PARP-1、Bax蛋白表达较假手术组升高(P 均<0.01),Nrf2、HO-1蛋白表达则下降(P 均<0.01);与模型组相比,中药组心肌组织PARP-1、Bax蛋白表达量减少(P 均<0.01),Nrf2、HO-1蛋白表达量增加(P 均<0.05)。此外,H2O2 处理后的HL-1 细胞凋亡明显增加(P<0.01),不同浓度中药均可明显减少H2O2导致的细胞凋亡(P<0.01)。结论 清心通络方通过减轻炎症和氧化应激改善MIRI,其机制可能与激活Nrf2/HO-1信号通路有关。     

益气养阴方对Graves病合并白细胞减少小鼠骨髓Bax、Bcl-2 mRNA影响的实验研究

目的观察Graves病(GD)小鼠外周血白细胞计数和小鼠骨髓Bax、Bcl-2 mRNA的表达及益气养阴方对其的影响。方法基因枪造模建立GD小鼠模型,应用中药益气养阴方治疗30天后,检测各组小鼠外周血白细胞计数、甲状腺激素水平和小鼠骨髓Bax、Bcl-2 mRNA的表达的变化。结果模型组小鼠外周血白细胞计数、甲状腺激素水平和小鼠骨髓Bax、Bcl-2 mRNA的表达与正常组均有显著性差异(P0.01)。中药益气养阴方可明显增加外周血白细胞数量(均P0.05),其中中药大剂量组明显优于中药小、中剂量组(均P0.01);在降低小鼠骨髓Bax mRNA的表达和升高小鼠骨髓Bcl-2 mRNA的表达方面,与模型组比较均有显著差异(P0.05,P0.01),其中中药大、中剂量组明显优于小剂量组(P0.01,P0.05)。结论益气养阴方对Graves病合并白细胞减少有较好的治疗作用。     

Drp1缺失通过ABCB10激活线粒体未折叠蛋白反应

目的：在小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblast,MEF)中探讨动力相关蛋白1(dynamin related protein 1, Drp1)基因缺失激活线粒体未折叠蛋白反应(mitochondrial unfolded protein reaction,mtUPR)的分子机制。方法：采用不同浓度 (0、2.5、5.0、10.0mmol/L)3-硝基丙酸(3-nitropropionic acid,3-NP)处理Drp1敲除或敲低的MEF细胞、Drp1抑制剂Mdivi-1或选择性阻断Drp1与下游蛋白相互作用的小分子多肽P110处理的MEF细胞以及相应对照,随后进行Western blot检测CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CCAAT/enhancer-binding protein homologous protein,CHOP)、ATP 结合盒 B 亚家族成员 10(ATP binding cassette subfamily B member 10,ABCB10)、Lon肽酶1(Lon peptidase 1,LONP1)以及热休克蛋白60(heat shock protein 60,Hsp60) 的表达。RT-qPCR 检测Drp1敲低或Mdivi-1处理后MEF细胞的ABCB10的mRNA水平。同时敲低Drp1和ABCB10,Western blot检测CHOP蛋白的表达,试剂盒检测培养液中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)含量,流式细胞术检测线粒体活性氧和线粒体膜电位水平。结果：3-NP处理后,Drp1敲除或敲低的MEF细胞以及Mdivi-1或P110处理的MEF细胞中CHOP表达呈现倍数上调。Drp1敲除或敲低的MEF细胞以及Mdivi-1或P110处理的MEF细胞中ABCB10蛋白表达上调,mtUPR效应蛋白LONP1和 Hsp60表达上调。Drp1敲低的MEF细胞和Mdivi-1处理的MEF细胞中ABCB10 mRNA水平上调。同时敲低Drp1和ABCB10后, 与Drp1敲低组相比,CHOP表达下调,LDH含量降低,线粒体活性氧水平降低,线粒体膜电位水平增加。结论：在MEF细胞中, Drp1表达下调可引起ABCB10表达量增加,导致mtUPR关键蛋白CHOP、LONP1和Hsp60蛋白表达上调,进而激活mtUPR。     

益智温胆颗粒对APP/PS1(B6)双转基因小鼠行为学、脑组织病理形态及Aβ含量的影响

目的观察中药益智温胆颗粒对APP/PS1(B6)双转基因小鼠行为学、脑组织病理形态及Aβ的影响。方法选用APP/PS1(B6)双转基因小鼠随机分为模型组、益智温胆组和多奈哌齐组,将同系背景小鼠作为空白组。益智温胆组、多奈哌齐组以相应药物灌胃,模型组和空白组给予等体积的生理盐水,连续灌胃90天。采用Morris迷宫测试、跳台测试评估APP/PS1(B6)小鼠行为学;HE染色观察APP/PS1(B6)小鼠海马组织病理变化;ELISA法检测APP/PS1(B6)小鼠海马Aβ含量。结果 Morris水迷宫测试:与空白组比较,模型组小鼠发现平台时间显著延长(P0.01),且游泳总路程明显增加(P0.01);与模型组比较,给药组小鼠发现平台时间均缩短(P0.01),且游泳总路程均减少(P0.01)。跳台测试:与空白组比较,模型组小鼠出错次数明显增加(P0.01),且潜伏期明显缩短(P0.01);与模型组比较,给药组小鼠出错次数明显减少(P0.01),潜伏期明显延长(P0.01)。海马组织形态:模型组有明显的脑神经元变性,可见到淀粉样蛋白斑块沉积;多奈哌齐组可看到神经元数量增多且细胞结构排列较整齐;益智温胆组空泡变性和细胞核增大有所改善,神经细胞排列和细胞形态较好。海马Aβ含量:与空白组比较,模型组小鼠海马Aβ_(1-42)和Aβ_(1-40)明显增加(P0.01);与模型组比较,益智温胆组和多奈哌齐组小鼠海马组织中的Aβ_(1-42)和Aβ_(1-40)含量明显下降(P0.01);与多奈哌齐组比较,益智温胆组小鼠海马组织中Aβ_(1-42)和Aβ_(1-40)含量无明显差异(P0.05)。结论益智温胆颗粒有助于提高痴呆小鼠学习记忆能力,可能是通过保护海马神经细胞,降低β样淀粉蛋白沉积实现。     

青紫薯色素抑制~（60）Co辐射小鼠胸腺淋巴细胞凋亡机制

目的 探讨青紫薯色素对60Co辐射的小鼠胸腺淋巴细胞活性氧(ROS)及凋亡蛋白Bcl-2、 Bax的影响及其机制.方法 建立雄性昆明小鼠胸腺淋巴细胞60Co单次辐射(3 Gy)病理损伤模型,随机分为6组:对照组(不作任何处理)、60Co单纯照射组、60Co+0.625 g/L青紫薯色素组、60Co+1.250 g/L青紫薯色素组、60Co+2.500 g/L青紫薯色素组和60Co+1 g/L Vit C组.酶生化法测定各组小鼠胸腺淋巴细胞胞浆超氧化物歧化酶(SOD)活性、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-px)活性、ROS含量,免疫细胞化学法检测各组Bcl-2、Bax的表达.结果 与60Co单纯照射组比较,不同剂量(0.625、1.250、2.500 g/L)青紫薯色素组及对照组小鼠胸腺淋巴细胞ROS含量降低,GSH-px、SOD活性升高(F=46.75、13.47、17.32,q=4.04～16.22,P<0.05、0.01); Bcl-2蛋白表达增强,Bax蛋白表达减弱(F=33.30、163.11,q=3.53～29.68,P<0.01).结论 青紫薯色素能够有效抑制60Co辐射引起的小鼠胸腺淋巴细胞凋亡,其机制与抑制 ROS及调节凋亡因子Bcl-2与Bax之间的平衡有关.     

四生汤对照射小鼠胸腺淋巴细胞凋亡和抗氧化能力的作用

目的探讨四生汤对受辐射小鼠胸腺淋巴细胞抗氧化能力及细胞凋亡的影响及作用机制。方法建立60Co（辐射强度为3Gy）对体外培养的小鼠胸腺淋巴细胞辐射损伤模型。实验设计分为5组：对照组,60Co模型组,高、中、低剂量四生汤组。MTT法检测细胞活性;酶生化法测定各组小鼠胸腺细胞胞浆超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）含量;流式细胞仪测定小鼠胸腺淋巴细胞凋亡率,免疫细胞化学法检测各组Bcl-2和Bax的表达。结果在强度为3Gy60Co辐射情况下,1%-4%浓度范围内四生汤能显著提高小鼠胸腺淋巴细胞的活性;显著提高细胞浆中SOD活性,降低MDA含量;各四生汤组淋巴细胞凋亡率明显低于模型组（P〈0.01）;Bcl-2蛋白表达增强,Bax蛋白表达减弱。结论四生汤能提高体外培养的小鼠胸腺淋巴细胞活性,抑制60Co辐射诱导的淋巴细胞凋亡,其作用机制与四生汤提高抗氧化酶SOD活性,抑制脂质过氧化水平及调节凋亡因子Bcl-2与Bax之间的平衡有关。     

复方四参颗粒对动脉粥样硬化豚鼠心肌损伤的保护作用

目的:探讨复方四参颗粒对动脉粥样硬化引发心肌损伤的保护作用及其可能的作用机制。方法:将60只雄性豚鼠随机分为6组,分别为空白组、模型组、阳性药物(稳心颗粒)组及复方四参颗粒高、中、低剂量组,每组各10只。空白组给予标准饮食;其余各组复制动脉粥样硬化病理模型,并于第8周造模成功后,模型组给予0.9%Na Cl溶液灌胃,稳心颗粒组及复方四参颗粒各组按设定剂量灌胃给药。连续用药4周后,动脉采血并采集心脏,检测血清乳酸脱氢酶(LDH)、磷酸肌酸激酶(CK);测算心脏指数,并检测心肌细胞凋亡情况及相关凋亡因子的表达。结果:模型组LDH、CK和心质量指数、心室指数均较空白组显著提高(P0.01),而稳心颗粒组、复方四参颗粒高剂量组各指标均较模型组显著降低(P0.01),中剂量组的LDH和CK值也显著降低(P0.05)。模型组的心肌细胞凋亡率和坏死率均明显高于空白组(P0.01),而稳心颗粒组、复方四参颗粒高剂量组均较模型组显著改善(P0.01),复方四参颗粒中、低剂量在细胞凋亡中晚期也有明显改善(P0.05);模型组Bcl-2蛋白表达较空白组明显下降、Bax与Fas蛋白表达均显著升高(P0.01),稳心颗粒组与复方四参颗粒高剂量组与模型组比较均可显著提高Bcl-2表达、降低Bax与Fas表达(P0.01),复方四参颗粒中剂量组可提高Bcl-2表达(P0.01),中、低剂量组均可显著降低Fas表达(P0.01)。结论:复方四参颗粒对动脉粥样硬化引起的心肌损伤有显著的保护作用,其作用机制可能与双向调节凋亡相关因子,从而抑制心肌细胞凋亡有关。     

银杏内酯B诱导人结直肠癌HCT116细胞凋亡的研究

目的 探讨银杏内酯B(ginkgolide B,GB)对人结直肠癌细胞增殖和凋亡的影响及其可能机制.方法 通过制备HCT116裸鼠瘤模型,观察GB对肿瘤生长的影响,并通过体外培养人结直肠癌HCT116细胞,分别加入不同质量浓度GB,与其共孵育72 h,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖抑制率,Giemsa染色观察细胞形态,Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡,Western blot法检测Bcl-2蛋白(B-cell leukemia/lymphoma 2,Bcl-2)、Bax蛋白(Bcl-2-associated protein x,Bax)和线粒体融合蛋白1(mitofusin 1,Mfn1)的表达.结果 GB抑制裸鼠瘤的生长(P＜0.05),并显著抑制HCT116细胞的增殖(P＜0.01),诱导HCT116细胞发生凋亡.同时,GB能够显著下调HCT116细胞Mfn1蛋白和Bcl-2蛋白的表达水平(P＜0.01),并上调Bax蛋白的表达(P＜0.05).结论 GB可能通过抑制Mfn1的表达,调节促凋亡蛋白Bax活性,降低抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,促进结直肠癌细胞的凋亡.