负载PCA3启动子及CD-TK自杀基因腺病毒载体的构建及包装

目的 构建负载PCA3启动子联合CD-TK基因的腺病毒载体,并对其进行包装及滴度测定.方法 将PCA3启动子无缝克隆到pHBAd-U6-GFP上,取代原有U6启动子形成pHBAd-PCA3-GFP,AgeI单酶切该重组载体,将CD-TK基因片段无缝克隆至线性化pH-BAd-PCA3-GFP上,抽提质粒抗性筛选后经PCR及测序鉴定为pHBAd-PCA3-CD-TK载体.取上述重组载体质粒及骨架质粒pHBAd-BHG,用LipofiterTM转染试剂进行转染HEK293细胞包装成病毒,大量扩增并测定病毒感染性滴度.结果 经PCR及测序验证证实成功构建负载PCA3启动子及CD-TK自杀基因的重组腺病毒pHBAd-PCA3-CD-TK并包装扩增,病毒滴度为1×1010PFU/mL.结论 构建负载PCA3启动子及CD-TK自杀基因的重组腺病毒,为进一步体内外对前列腺癌细胞的杀伤效应研究奠定了基础.     

携带前强啡肽基因的Ad5 F35重组腺病毒制备及鉴定

目的 用Ad5F35载体制备携带前强啡肽基因的重组腺病毒Ad5F35-PDP并对其进行鉴定.方法 利用NheI和Agel分别对合成的目的 基因prodynorphin聚合酶链反应(PCR)产物和pDC316-LacZ-a载体质粒进行双酶切.将PDP目的 基因片段和线性化的pDC316连接,克隆构建pDC316-PDP.pDC316-PDP与腺病毒骨架pBHG-fiber5/35共转染293细胞制备Ad5F35-PDP重组腺病毒,收获并纯化病毒,检测重组病毒滴度,运用PCR进行鉴定.结果 编码PDP的基因序列经测序鉴定证实与Gene Bank中的一致,pDC316-PDP构建成功.pDC316-PDP与腺病毒骨架共转染293细胞后见明显的毒斑,说明两者在293细胞中同源重组并包装成功.经PCR证实Ad5F35-PDP重组腺病毒构建完成.病毒滴度为1×1012v.P./ml.结论 本实验成功制备了含PDP全序列的高滴度、高纯度的Ad5F35-PDP重组腺病毒,为下一步进行该重组病毒生物安全性能和生物学功能研究及今后应用Ad5F35-PDP重组腺病毒对吗啡成瘾患者进行基因治疗奠定了基础.     

膀胱癌中CDH13基因启动子甲基化的临床意义

目的 探讨膀胱癌中CDH13基因启动子甲基化的临床意义.方法 应用甲基化特异性PCR检测在23例正常膀胱黏膜和71例原发性膀胱移行细胞癌组织中CDH13基因启动子甲基化状态,并结合膀胱癌临床病理资料进行统计学分析.结果 在23例正常膀胱黏膜组织中CDH13基因启动子均未出现甲基化,在71例膀胱癌组织中CDH13基因启动子甲基化率为60.6％,两组相比差异有统计学意义(P＜0.01);在膀胱癌组织中CDH13基因启动子甲基化与患者年龄、性别、肿瘤数目和肿瘤形态无关(P＞0.05),但是与肿瘤的生长、分化不良以及侵袭密切相关(P＜0.05).结论 CDH13基因启动子甲基化与膀胱癌的发生发展密切相关,有可能成为膀胱癌早期诊断、监测和预后判断的分子标志物.     

携带融合基因CTLA4-Ig重组腺病毒载体的构建及表达

目的　为进行基因转移阻断T细胞共刺激通路诱导移植免疫耐受的研究 ,构建携带融合基因CTLA4 Ig的重组腺病毒载体。方法　构建含人CTLA4 Ig的重组腺病毒载体质粒pShuttle Tracker CMV CTLA4 Ig ,与腺病毒骨架质粒 pAdEasy 1 △E1、△E3共转化大肠杆菌BJ5 183 ,经细菌内同源重组 ,获得重组腺病毒质粒pAd Tracker CTLA4 Ig ,转染 2 93细胞 ,制备携带CTLA4 Ig的重组腺病毒 ,体外感染L O2细胞 72h后ELISA检测其外分泌性表达。 结果　获得携带CTLA4 Ig的重组腺病毒 ,滴度为 6× 10 1 3 PFU L ;在其感染的L O2细胞培养上清中能检测到可溶性重组蛋白CTLA4 Ig的表达 (P N =4.6 ,阳性 )。结论　制备的重组腺病毒在体外能有效感染L O2细胞 ,受感染细胞能表达、分泌可溶性的融合蛋白CTLA4 Ig ;为进行体内移植免疫耐受的基因治疗研究奠定基础。     

胃癌组织中E钙黏素基因启动子甲基化状态的研究

目的 研究胃癌组织中E钙黏素(E-CD)基因启动子区甲基化的状况.方法 采用甲基化特异性PCR方法,检测106例胃癌组织及其邻近小凹上皮中E-CD基因启动子区甲基化状态.结果 在慢性胃炎小凹上皮、胃癌邻近小凹上皮及胃癌组织中E-CD基因启动子区甲基化率分别为0(0/15),22.6%(25/106)和50.0%(53/106),三者之间差异均有统计学意义(P＜0.01).Ming浸润型胃癌E-CD基因启动子区甲基化率(62.7%,37/59)和Laurén弥漫型胃癌E-CD基因启动子区甲基化率(64.5%,40/62)分别明显高于Ming膨胀型胃癌甲基化率(34.0%,16/47)和Laurén肠型胃癌E-CD基因启动子区甲基化率(29.5%,13/44),二者之间差异均有统计学意义(P＜0.01).甲基化与胃癌的分化程度、浸润深度、区域淋巴结转移和pTNM分期亦有关(P＜0.05).结论 E-CD基因启动子区甲基化在胃癌组织中普遍存在,它可能是胃癌发生的早期事件.胃癌E-CD基因启动子区甲基化状态与胃癌生物学行为密切相关.     

IDO的免疫调节机制及在移植耐受和肿瘤逃逸中的作用

吲哚胺2,3双加氧酶(IDO)是一种能分解色氨酸的细胞内血红素单体蛋白,实验证明通过色氨酸的剥夺和分解产物聚集可以抑制T细胞成熟并促其凋亡.随着对IDO免疫调节机制研究的不断累积,其在器官移植和肿瘤治疗等领域的临床应用前景令人期待.本文就IDO的免疫调节机制及在移植耐受和肿瘤逃逸中的作用做一综述.     

IDO的免疫调节机制及在移植耐受和肿瘤逃逸中的作用

吲哚胺2,3双加氧酶(IDO)是一种能分解色氨酸的细胞内血红素单体蛋白,实验证明通过色氨酸的剥夺和分解产物聚集可以抑制T细胞成熟并促其凋亡.随着对IDO免疫调节机制研究的不断累积,其在器官移植和肿瘤治疗等领域的临床应用前景令人期待.本文就IDO的免疫调节机制及在移植耐受和肿瘤逃逸中的作用做一综述.     

携带反义多药耐药相关蛋白的重组腺病毒微球的构建

目的 构建携带反义多药耐药相关蛋白(MRP)基因的重组腺病毒微球并进行理化性质的鉴定,以用于肝癌多药耐药的基因治疗研究.方法 采用可降解的生物材料聚乳酸-聚乙烯醇(PELA)包被携带反义MRP基因的重组腺病毒制成微球,体外测定微球的粒径、载病毒量、包封率及释放规律,并用其转染人肝癌耐药细胞株HepG2/ADM,48 h及120 h后检测转染细胞荧光强度.结果 成功地构建了携带反义MRP基因的重组腺病毒微球,直径约1.765 μm,包封率为52.4%,载病毒率为5.5× 108 efu/mg,在120 h内释放病毒量为49.2%,总的释放时间长于240 h.释放出的病毒保持活性,10 mg微球48 h释放病毒滴度为1.0× 108 efu/ml,对HepG2/ADM细胞株转导效率町达90%以上.结论 聚乳酸-聚乙烯醇共聚物(PELA)包载反义RNA重组腺病毒制备的微球,包封率较高,载病毒量较大,能保持病毒活性,较长时间释放,转导效率高,可望有效地将反义MRP导人人肝癌耐药细胞株,为进一步研究肝癌耐药机制及其逆转方式提供实验基础.     

大鼠TRESK基因重组腺病毒载体的构建

目的 构建大鼠TRESK基因重组腺病毒载体.方法 从大鼠背根神经节细胞中克隆TRESK全长cDNA,进行PCR鉴定及DNA测序验证,构建以CMV启动子转录调控的pAd/CMV/V5DEST-TRESK.转化DH5α大肠杆菌,挑选阳性重组克隆行PCR鉴定并行DNA测序.将测序正确的质粒经PacⅠ酶切线性化,转染包装293T细胞,包装产生腺病毒,逐孔稀释滴度法测定病毒滴度.结果 从大鼠背根神经节细胞中克隆的TRESK全长cDNA为781 bp,DNA测序验证DNA序列与GeneBank 中收录的大鼠TRESK序列完全一致.以pAD-GFP空载体为对照,pAD/CMV/V5-DEST-TRESK gDNA为模板的PCR扩增,目的 片段781 bp,鉴定结果 与预期相符.腺病毒滴度为1.31×109 TU/ml.结论 本研究成功地构建了大鼠TRESK基因重组腺病毒载体:pAD/CMV/V5-DEST-TRESK.

Abstract：

Objective To construct rat TRESK gene recombinant adenovirus expression vector.Methods TRESK full-length cDNA was cloned from rat dorsal root ganglion cells and confirmed by RT-PCR and sequencing. pAd/CMV/V5-DEST-TRESK was then constructed under the control of CMV-promotor. DH5α colibacillus was translated and the positive recombinants were subsequently identified by PCR and DNA sequencing. 293T cells were cotransfected and packed to produce adenovirus. Results The titer of virus was tested using Hole-by-dilution titer method. The full length of TRESK from rat dorsal root ganglion cells is 781 bp. It was demonstrated that the DNA sequencing was completely consistent with TRESK sequencing of rat recorded in GeneBank. The PCR amplification of the pAd/CMV/V5-DEST-TRESK gDNA was matched with pAD-GFP blank vector as anticipated. The titer of the concentrated virus was 1.31×109 TU/ml. Conclusion Rat TRESK gene recombinant adenovirus vector is constructed successfully.     

p50PIK基因重组腺病毒的构建及对Hela细胞的影响

目的 构建携带P50基因的重组腺病毒载体,观察其感染宫颈癌Hela细胞后对p-AKT(Thr308)的影响.方法 以PcDNA3.1-p50PIK质粒为模板,构建带有p50PIK基因的重组腺病毒质粒Ad-p50PIK-GFP,酶切鉴定后经PacI线性化后转染HEK293包装细胞,观察细胞内绿色荧光蛋白(GFP)表达情况,并进行3轮扩增,收获带有目的 片段的腺病毒.将重组腺病毒Ad-p50PIK-GFP感染Hela细胞并通过Western blot技术检测其对p-AKT的影响.结果 将Ad-p50PIK-GFP经Xho I和Kpn I双酶切鉴定和琼脂糖电泳,在1400bp附近有目的 条带,送测序结果与GeneBank报道的序列完全一致,表明重组腺病毒Ad-p50PIK-GFP构建成功;然后将其转染HEK293细胞,绿色荧光表明Ad-p50PIK-GFP在HEK293包装细胞中成功表达;用SDS-PAGE电泳方法检测p50对Akt磷酸化的影响,结果表明高表达蛋白p50明显促进AKT的磷酸化(Thr308).结论 成功构建重组腺病毒Ad-p50PIK,p50在宫颈癌Hela细胞株中的过表达可使p-AKT表达升高.

Abstract：

Objective To construct recombinant adenovirus carrying p50PIK gene and examine the effect on cervix cancer Hela cell lines after transfection with Ad-p50PIK. Methods p50PIK cDNA was amplified by polymerase chain reaction (PCR), with the template PcDNA3. 1-p50PIK, then cloned into the shuttle plasmid pAdTrack-CMV. The plasmid pAdTrackCMV-p50 was linearized by PmeI, followed by homologous recombination with bone plasmid pAdEasy-1 in BJ5183, then identified by enzyme digestion.After linearized by PacI and transfection into HEK293 cells, recombinant adenovirus Ad-p50PIK were obtained in HEK293 cells then amplified by 3 circles. The green fluorescence in HEK293 cells was observed.Ad-p50PIK was transfected into Hela cells. The phosphorylation of Akt was detected by Western blotting.Results After double restriction enzyme digestion and agarose gel electrophoresis of The Ad-p50PIK-GFP,the 1400 bp purpose band was sequenced, Results was exactly the same with the sequence GeneBank had reported,indicating that the recombinant adenovirus Ad-p50PIK-GFP were successfully constructed; Then transfected into HEK293 cells, green fluorescence shows that Ad-p50PIK-GFP in HEK293 packaging cells successfully expressed; by SDS-PAGE electrophoresis was used to detect p50 on Akt phosphorylation, the Results show that high expression of p50 protein significantly increased AKT's Phosphorylated (Thr308).Conclusion Recombinant adenovirus Ad-p50PIK had been successfully constructed. Overexpression of p50PIK in Hela cell lines can promote phosphorylation of AKT.     

丁酸钠通过信号转导和转录激活因子1抑制肝癌细胞吲哚胺2,3-双加氧酶的表达

目的 观察丁酸钠(NaB)对干扰素-γ(IFN-γ)诱导的人肝癌细胞HepG2内吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)表达的影响.方法 利用低浓度(10、20、30、40 mmol/L)的NaB作用于人肝癌细胞HepG2 24 h,通过噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞的增殖;利用蛋白印迹法及细胞免疫化学法检测NaB对HepG2细胞内IDO表达的影响;蛋白印迹法检测NaB对IDO基因表达的关键性干扰素应答因子1 (IRF-1)及信号转导和转录激活因子1(STAT1)的影响.结果 低浓度NaB对人肝癌细胞HepG2的增殖具有1％～20％的抑制作用;3 mmol/L的NaB能完全抑制IFN-γ诱导的IDO的表达;这种抑制作用通过抑制STAT-1701位的酪氨酸磷酸化实现.结论 NaB通过抑制STAT1的磷酸化而抑制肝癌细胞HepG2中IDO的表达.     

吲哚胺2,3双加氧酶和叉状头转录因子3对胆囊癌免疫耐受的作用及影响

目的 研究吲哚胺2,3双加氧酶(IDO)、叉状头转录因子3(FOXP3)在原发性胆囊腺癌中的表达情况,探讨其对胆囊癌细胞免疫耐受的作用及影响.方法 采用免疫组化SP法检测51例原发性胆囊腺癌组织、90例慢性胆囊炎组织和20例正常胆囊组织中IDO和FOXP3的表达情况.结果 IDO和FOXP3在胆囊癌组织的阳性率分别为72.5％(37/51)和60.8％(31/51);在正常对照组胆囊黏膜阳性表达率分别为5.0％(1/20)和20.0％(4/20);在胆囊炎及胆囊结石分别为11.1％(10/90)和32.2％(29/90).三组间IDO和FOXP3阳性表达率差异均有统计学意义(P＜0.01).IDO在单纯增生、不典型增生、胆囊癌Ⅰ～Ⅲ期和胆囊癌Ⅳ～Ⅴ期的阳性表达率分别为7.1％、17.7％、40.0％和77.4％,FOXP3的阳性表达率分别为14.3％、35.3％、35％和64.5％,IDO和FOXP3在单纯增生、不典型增生、胆囊癌Ⅰ～Ⅲ期和胆囊癌Ⅳ～Ⅴ期的阳性率差异均有统计学意义(IDO:x2=50.75,P＜0.01;FOXP3:x2=22.79,P＜0.01).胆囊癌在Nevin不同分期、有无淋巴结或远处转移、有无并发结石组间的IDO和FOXP3的阳性率表达差异均有统计学意义(P值均＜0.05),而不同性别、年龄、组织学分化程度间IDO和FOXP3的阳性率表达差异均无统计学意义(P均＞0.05).胆囊癌组织中IDO阳性表达率(69.8％)与FOXP3阳性表达率(58.1％)显著正相关(γ=0.406,P=0.003).结论 原发性胆囊癌组织中IDO的高表达,以及间质淋巴细胞FOXP3的表达与胆囊癌的免疫耐受密切相关.IDO可能为胆囊癌免疫治疗的新靶点.     

Serum indoleamine 2,3 dioxygenase and tryptophan and kynurenine ratio using the UPLC-MS/MS method,in patients undergoing peritoneal dialysis,hemodialysis, and kidney transplantation

Background: The level and activity of indoleamine 2,3-dioxygenase (IDO) and the concentrations of L-tryptophan and its metabolite L-kynurenine were determined in association with various renal diseases. However, there have been no data regarding these parameters in patients on peritoneal dialysis compared to those undergoing hemodialysis or kidney transplantation.

Methods: This study investigated the level and activity of IDO and determined oxidative balance by calculating the total oxidant status (TOS), total antioxidant status (TAS), and oxidative stress index (OSI). We enrolled 60 kidney disease patients, including 20 on peritoneal dialysis (PD group), 19 on hemodialysis (HD group), and 21 with kidney transplantation (KT group), as well as 21 control group.

Results: IDO levels were increased in the PD, HD, and KT groups compared to the control group. The concentration of kynurenine was significantly increased in the PD group compared to the other groups (p?p?p?Conclusion: The results showed that IDO levels were increased in peritoneal dialysis and hemodialysis patients and in renal transplant recipients, while oxidative stress was found to be related to IDO activity and was most increased in the patients on peritoneal dialysis.     

SFRP2基因重组腺病毒载体的构建与鉴定

目的:成功构建携带SFRP2基因的腺病毒载体。方法:从pGBKT-SFRP2质粒中扩增SFRP2基因,将SFRP2基因亚克隆至质粒穿梭载体pAd-Track-CMV。用脂质体转染法将重组腺病毒pAd-Track-PPARγ2-CMV和pAdEasy-1共转染293细胞,成功构建的重组腺病毒Ad-SFRP2,确定转染效率。原代培养增生性瘢痕成纤维细胞,利用Ad-SFRP2感染该细胞。通过RT-PCR和Western Blot分别检测感染后人瘢痕成纤维细胞及对照组细胞中SFRP2基因mRNA和蛋白表达水平。结果:RT-PCR检测结果显示腺病毒Ad-SFRP2的PCR产物约为904bp,SFRP2 mRNA表达水平明显增高;用抗SFRP2多克隆抗体进行Westernblot检测为阳性,感染的重组腺病毒载体在人瘢痕成纤维细胞中SFRP2蛋白有较高的稳定表达。结论:成功构建含有人SFRP2基因的重组腺病毒Ad-SFRP2;它可有效提高人增生性瘢痕成纤维细胞中SFRP2基因的表达水平。     

表达前强啡肽基因的Ad5型腺病毒载体的构建及鉴定

目的 构建且鉴定含前强啡肽基因(prodynorphin)的血清5型腺病毒载体(Ad5).方法 应用分子生物学方法 将前强啡肽基因序列克隆入腺病毒穿梭质粒pDC316-PDP,后者与骨架质粒共转染HEK293细胞,包装得到含前强啡肽转基因的腺病毒Ad5-PDP.用聚合酶链反应(PCR)方法 对转基因病毒进行鉴定,TCID50法测定病毒滴度.结果 PCR法证实转基因正确插入了Ad5型病毒基因组内,且没有野生型病毒污染,病毒滴度为1×1012v.p./mL.PCR鉴定Ad5-PDP重组成功.结论 获得的Ad5-PDP滴度高,感染性好,可以用于转基因治疗的实验研究.     

Studying the immunosuppressive role of indoleamine 2,3-dioxygenase: tryptophan metabolites suppress rat allogeneic T-cell responses in vitro and in vivo

Pregnancy is a natural model of successful tolerance induction against allogeneic tissues. Recent studies pointed to a role of indoleamine 2,3-dioxygenase (IDO), a tryptophan-degrading enzyme expressed in the placenta, in mediation of T-cell suppression. We want to apply to organ transplantation what nature has developed for suppression of fetal rejection during pregnancy. Here we analyze whether IDO-induced tryptophan metabolites are able to suppress the allogeneic T-cell response and allograft rejection in rats. Rat lymphocytes were stimulated with allogeneic dendritic cells in vitro in the presence of increasing amounts of tryptophan metabolites (kynurenine, 3-hydroxykynurenine, anthranilic acid, 3-hydroxyanthranilic acid and quinolinic acid) and T-cell proliferation was determined. The findings showed that kynurenine, 3-hydroxykynurenine and 3-hydroxyanthranilic acid strongly suppress the T-cell response, whereas anthranilic and quinolinic acid are non-effective. Vital staining of cells with subsequent fluorescence-activated cell sorter analyses demonstrated that suppression is mediated by T-cell death. Thereafter, the action of metabolites was analyzed in a skin allograft model (BN-->LEW). Lewis recipients received daily s.c. injections of tryptophan metabolite mixture (kynurenine + 3-hydroxyanthranilic acid), cyclosporin A (positive control), or no treatment (negative control). The metabolites induced a significant prolongation (P = 0.0018) of graft survival. We conclude that IDO-induced tryptophan metabolites suppress the T-cell response and prolong allograft survival in rats.     

前列腺特异性膜抗原启动子增强子调控重组质粒的构建及鉴定

目的探讨前列腺特异性膜抗原(PSMA)启动子和增强子调控目的基因表达的前列腺细胞特异性，了解增强子增强转录效率的能力。方法采用PCR方法从前列腺癌细胞DNA中分别扩增PSMA启动子和增强子序列，先后克隆到含有报告基因绿色荧光蛋白(GFP)的质粒载体，脂质体介导基因转染不同癌细胞并观察GFP在不同细胞的表达情况。结果成功构建质粒pEGFP—PS—MAPro和pEGFP-PSMAEP，转染结果显示PSMA表达阳性的LNCaP细胞中存在GFP的有效表达，且pEGFP—PSMAEP的调控转录能力较pEGFP—PSMAPro强20倍。结论PSMA启动子增强子调控GFP表达的重组质粒的构建证明该调控序列具有前列腺细胞特异性，增强子能够明显增强启动子的转录效率，增加了目的基因的表达水平。PSMA启动子和增强子的共调控可以保证基因表达的强度和细胞特异性，为前列腺癌基因靶向性治疗研究提供实验依据。     

胰腺癌特异性受体基因载体的构建及环氧合酶2L启动子的作用

目的构建环氧合酶-2L启动子（Cox-2L）及2型生长抑素受体（SSTR2）基因重组腺病毒载体，以研究SSTR2重新表达及腺病毒感染对胰腺癌细胞的影响。方法用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）法从人正常胰腺组织中调取SSTR2基因，以HL60细胞基因组DNA为模板，以PCR法调取Cox-2L基因，以SSTR2及Cox-2L基因片段为模板，以PCR法扩增Cox-2L—SSTR2融合基因并连入TaKaRa公司pAxcwit腺病毒载体中，以电穿孔法转化E．Coli后挑选阳性克隆进行PCR及酶切鉴定。以pAxcwit—Cox-2L—SSTR2转染HEK293细胞获得重组腺病毒颗粒，进行PCR、酶切鉴定。结果调取并连接后的基因片段经测序证实为Cox-2L、SSTR2及Cox-2L-SSTR2融合基因，Cox-2L-SSTR2基因片段及PolyA克隆入T载体，经酶切并测序证实PMD18-T—Cox-2L—SSTR2-PolyA构建成功。pAxcwit—Cox-2L—SSTR2-PolyA经酶切及PCR鉴定，Cox-2L—SSTR2-PolyA融合基因正确连入腺病毒载体。结论成功构建了Cox-2L—SSTR2基因重组腺病毒载体，为进一步研究SSTR2在胰腺癌细胞中的表达及作用奠定了基础。     

凋亡素基因重组腺病毒的构建

目的构建携凋亡素基因的腺病毒载体,为进一步研究凋亡素基因功能及其作用机制建立基础。方法Pmel酶切线性化已经构建好的含凋亡素基因的穿梭质粒pAdTrack-CMV-VP3,然后电转化到BJ5183-AD-1细胞中进行同源重组。PacⅠ酶切出含凋亡素基因的腺病毒DNA,然后转染293细胞进行包装获得重组腺病毒,运用RT-PCR鉴定重组腺病毒。用氯化铯梯度离心纯化病毒。用物理和生物方法确定病毒的滴度。结果PacⅠ酶切证实同源重组成功。绿色荧光观察证实病毒包装成功并且具有感染力,RT-PCR证实了重组腺病毒具有凋亡素蛋白的编码。重组腺病毒的浓度为84.52×109VP/ml,滴度为6.561×109PFU/ml。结论成功构建含凋亡素基因的重组腺病毒,它的滴度足以满足体内外实验。