Nrf2因子在烫伤脓毒症大鼠免疫脏器中的表达

研究表明,核转录因子Nrf2是脓毒症中调节氧化应激的关键因子[1],对许多细胞因子和炎症介质基因均有特异性调控作用.本研究以烫伤合并金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌感染大鼠模拟烫伤脓毒症模型,观察Nrf2在烫伤脓毒症大鼠各免疫脏器组织中的表达并分析其可能机制.     

Nrf2因子在烫伤脓毒症大鼠免疫脏器中的表达

研究表明,核转录因子Nrf2是脓毒症中调节氧化应激的关键因子[1],对许多细胞因子和炎症介质基因均有特异性调控作用.本研究以烫伤合并金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌感染大鼠模拟烫伤脓毒症模型,观察Nrf2在烫伤脓毒症大鼠各免疫脏器组织中的表达并分析其可能机制.     

胰岛素在烫伤大鼠脑组织中的表达

目的观察烫伤大鼠脑组织中胰岛素的表达情况。方法将15只Wistar大鼠背部造成30％TBSAⅢ度烫伤(烫伤组),于伤后4、12、24 h以Zamboni液行左心室灌注,然后取大鼠脑组织,用免疫荧光法检测脑组织中胰岛素的表达。另取10只大鼠作为对照组,除不烫伤外,其余处理同烫伤组。结果对照组大鼠脑组织中胰岛素的表达不明显。烫伤组大鼠伤后4 h脑组织的嗅球、大脑皮质等部位可见胰岛素免疫反应阳性细胞,其细胞胞体较大,呈椭圆形或梭形;胞核大、圆而透亮,突起明显;阳性产物主要分布于细胞的细胞质,少数细胞的突起内也可见明显的胰岛素阳性产物。伤后12、24 h烫伤组大鼠脑组织中未见胰岛素免疫反应阳性细胞。结论大鼠脑组织具有自身合成胰岛素的潜能,但在正常基础状态下合成量极少,而在烫伤的应激状态下合成量增加。     

烫伤脓毒症大鼠细胞因子信号转导抑制因子基因表达的改变与意义

目的观察烫伤后金黄色葡萄球菌(金葡菌)脓毒症大鼠重要脏器细胞因子信号转导抑制(SOCSs)基因表达的规律及其与细胞因子变化的关系.方法采用大鼠20%体表面积Ⅲ°烫伤后金葡菌攻击致脓毒症模型,检测动物肝、肺组织中SOCS1、SOCS2和SOCS3 mRNA表达,并测定组织中干扰素-γ(INF-γ)水平.结果烫伤后金葡菌感染大鼠肝、肺组织IFN-γ产生均显著增多,分别于伤后0.5 h和6 h达峰值(P＜0.01).同时,动物肺组织SOCS1、SOCS2和SOCS3 mRNA表达均明显上调,其中SOCS2和SOCS3 mRNA表达改变较为迅速,伤后0.5 h即明显高于对照组,2h达峰值.肝组织SOCS1 mRNA表达于伤后2 h明显增强,24 h仍维持于较高水平;而肝脏SOCS2和SOCS3 mRNA表达仅呈现升高趋势.金葡菌肠毒素B单抗早期干预后,随着肺脏IFN-γ产生减少,肺组织SOCS1、SOCS2和SOCS3基因表达亦明显降低.结论烫伤后金葡菌感染可诱导体内SOCSs表达上调,其改变与IFN-γ的"消涨"密切相关,提示它们可能参与了金葡菌脓毒症时炎症反应平衡的调节过程.     

肿瘤坏死因子mRNA在严重烫伤大鼠肝脏中的表达及细胞定位

作者采用原位杂交法检测了大鼠严重烫伤后肿瘤坏死因子ｍＲＮＡ（ＴＮＦｍＲＮＡ）在肝脏中的表达及细胞定位。结果发现，在正常大鼠肝脏中的枯否氏细胞就表达ＴＮＦｍＲＮＡ。烧伤后，ＴＮＦｍＲＮＡ表达阳性细胞数迅速增加。伤后６～１２小时达顶峰，２４小时与正常无明显差异。其动态变化与门静脉血浆内毒素的变化极为相似。同时还发现烧伤后血窦内皮细胞及门静脉周围浸润的炎症细胞ＴＮＦｍＲＮＡ表达也为阳性，其变化以伤后１２～２４小时最为明显。作者认为肠源性内毒素是ＴＮＦｍＲＮＡ表达的主要刺激物。内皮细胞、中性粒细胞表达阳性提示其已被活化。上述三种细胞在内毒素导致的肝脏损害中发挥了重要作用。     

肿瘤坏死因子mRNA在严重烫伤大鼠小肠中的表达及细胞…

为探讨严重烫伤后肿瘤坏死因子在大鼠小肠中的表达及细胞定位，应用斑点杂交及原位杂交方法，结合血浆ＴＮＦ，内毒素浓度的变化，探讨了ＴＮＦｍＲＮＡ的表达及细胞定位规律。结果发现，烧伤后小肠ＴＮＦｍＲＮＡ的表达量迅速高，在伤后６小时达峰值，是正常值的５．５６倍。门静脉血浆ＴＮＦ，内毒素的变化与之类似。     

肿瘤坏死因子mRNA在严重烫伤大鼠小肠中的表达及细胞定位的研究

为探讨严重烫伤后肿瘤坏死因子(TNF)在大鼠小肠中的表达及细胞定位,应用斑点杂交及原位杂交方法,结合血浆 TNF、内毒素浓度的变化,探讨了 TNF mRNA 的表达及细胞定位规律。结果发现,烧伤后小肠 TNF mRNA 的表达量迅速升高,在伤后6小时达峰值,是正常值的5.56倍。门静脉血浆TNF、内毒素的变化与之类似。正常大鼠小肠有少量的细胞表达 TNF mRNA,主要是小肠固有层内的单核吞噬细胞。烧伤后固有层内的阳性细胞明显增多,而且固有层毛细管内皮细胞表达也是阳性,隐窝内也出现大量的阳性细胞。提示 TNF 的表达分泌,在烧伤早期与肠源性内毒素血症有非常密切的联系。固有层及粘膜下层间质中的内皮细胞及单核吞噬细胞是肠道分泌 TNF 的主要细胞。TNF 分泌量明显增加,其结果是造成小肠局部微循环障碍或诱导自由基的产生,从而导致肠粘膜屏障的破坏。     

肿瘤坏死因子mRNA在严重烫伤大鼠小肠中的表达及细胞定位的研究

为探讨严重烫伤后肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）在大鼠小肠中的表达及细胞定位，应用斑点杂交及原位杂交方法，结合血浆ＴＮＦ、内毒素浓度的变化，探讨了ＴＮＦｍＲＮＡ的表达及细胞定位规律。结果发现，烧伤后小肠ＴＮＦｍＲＮＡ的表达量迅速升高，在伤后６小时达峰值，是正常值的５．５６倍。门静脉血浆ＴＮＦ、内毒素的变化与之类似。正常大鼠小肠有少量的细胞表达ＴＮＦｍＲＮＡ，主要是小肠固有层内的单核吞噬细胞。烧伤后固有层内的阳性细胞明显增多，而且固有层毛细管内皮细胞表达也是阳性，隐窝内也出现大量的阳性细胞。提示：ＴＮＦ的表达分泌，在烧伤早期与肠源性内毒素血症有非常密切的联系。固有层及粘膜下层间质中的内皮细胞及单核吞噬细胞是肠道分泌ＴＮＦ的主要细胞。ＴＮＦ分泌量明显增加，其结果是造成小肠局部微循环障碍或诱导自由基的产生，从而导致肠粘膜屏障的破坏。     

烫伤后金葡菌脓毒症大鼠组织CD14 mRNA表达的改变

业已证明,CD14作为G-菌脂多糖的重要受体,与脂多糖结合蛋白(LBP)共同构成内毒素增敏系,在G-菌脓毒性休克中具有重要地位.新近体外观察发现CD14也可作为G+菌细胞壁成份(如肽聚糖和脂磷壁酸)的功能受体,在介导G+菌所致的单核/巨噬细胞活化和细胞因子的产生中可能具有一定作用.但迄今为止,对于G+菌脓毒症时CD14在体内的变化规律及其意义尚缺乏了解.为此,本实验进行了初步探讨,旨在明确CD14在严重烫伤后金葡菌脓毒症病理生理过程中的作用.采用大鼠20％总体表面积Ⅲ°烫伤复合金葡菌攻击造成脓毒症模型,将42只大鼠随机分为三组：正常对照组(n=6),于麻醉后活杀;烫伤对照组(n=6),于烫伤后24 h活杀;烫伤复合金葡菌感染组(n=30),分别于0.5、2、6、12、24 h活杀,各时间点动物数均为6只.动态检测动物心、肝、肺、肾等重要器官中CD14 mRNA表达的改变,同时观察内毒素在动物循环及主要脏器内的分布特点.烫伤复合金葡菌脓毒症早期,各脏器及血浆中内毒素含量即明显高于正常对照组,并于2～6 h达峰值,其中以肝、肺组织内毒素水平升高幅度最为显著(P＜0.05).同时,小肠组织中二胺氧化酶的活性降低,且与肝组织内毒素水平呈显著负相关(r=-0.94796,P＜0.05).烫伤复合金葡菌攻击后,各组织中CD14 mRNA的表达亦呈不同程度升高,其中肺脏CD14 mRNA表达上调尤为显著,伤后6、24 h肺脏CD14 mRNA表达显著高于正常对照组(P＜0.05).但肝、肾组织中CD14 mRNA的改变在统计学上无显著性意义.烫伤复合金葡菌攻击可导致内毒素易位和组织CD14mRNA表达不同程度升高,CD14基因表达的上调可能与易位内毒素的刺激作用有关.     

环氧合酶2对脓毒症大鼠免疫功能的影响

目的 研究环氧合酶2(cyclooxygenase-2,COX-2)在脓毒症大鼠肝组织炎症反应中的表达及其对免疫功能的影响.方法 选择质量相近的Wistar大鼠54只,分为假手术组(6只)、脓毒症组(24只)、NS-398干预组(24只).通过建立盲肠结扎穿孔脓毒症动物模型,用RT-PCR方法检测肝组织COX-2mRNA的表达,ELISA法检测血清IL-6、IL-10、TNF-α水平,流式细胞仪检测T淋巴细胞亚群CD4+、CD8+细胞的变化,同时观察肝脏病理变化.结果 (1)脓毒症组病理损伤重,NS-398干预组损伤减轻.(2)COX-2mRNA:假手术组呈低表达,脓毒症组、NS-398干预组升高,但NS-398干预组较脓毒症组明显偏低.(3)IL-6:脓毒症组较假手术组和NS-398干预组明显增高(F=125.582,134.712,54.760,121.441,P＜0.05).(4)IL-10:NS-398干预组高于假手术组和脓毒症组(F=39.064,34.382,51.115,8.174,P＜0.05).(5)TNF-α:脓毒症组、NS-398干预组增高,但两组比较差异无统计学意义(x2=5.600,6.162,7.136,7.200,P＞0.05).(6)CD4+/CD8+比值:NS-398干预组高于脓毒症组(F=17.448,15.055,30.068,64.210,P＜0.05).结论 COX-2在脓毒症中发挥重要作用,其作用途径可能是通过改变促炎、抗炎细胞因子之间以及CD4+、CD8+细胞之间的平衡,使机体免疫状态紊乱而实现的.     

细胞外信号调节激酶抑制剂对烫伤脓毒症大鼠肿瘤坏死因子-α表达的影响及意义

目的　观察细胞外信号调节激酶 (ERK)抑制剂对烧伤后金黄色葡萄球菌 (金葡菌 )脓毒症动物组织肿瘤坏死因子 (TNF) α表达及多器官功能损害的影响。方法　采用SD大鼠 2 0 %总体表面积Ⅲ度烫伤后金葡菌攻击所致脓毒症模型 ,34只动物随机分为正常对照组 (n =6 )、烫伤对照组 (n=6 )、烫伤后金葡菌感染组 (n =12 )和ERK抑制剂AG12 6拮抗组 (n =10 ) ,检测动物肝、肾、肺组织中ERK磷酸化和TNF α基因 /蛋白表达的改变。结果　烫伤脓毒症后 0 5～ 2 0h肝、肺、肾组织ERK均呈现不同程度的活化 ,其中 2 0h分别为正常对照组的 1 94倍 (P <0 0 5 )、2 86倍 (P <0 0 1)、1 4 1倍。AG12 6拮抗组肺组织磷酸化ERK水平在 2 0h下降 70 6 % (P <0 0 1) ,而肝、肾组织其磷酸化水平不同时相点几乎完全抑制 ,同时各组织中TNF α基因及蛋白表达水平明显下调 (P<0 0 5或 0 0 1)。与烫伤脓毒症组相比 ,AG12 6拮抗组 2 0h肝、肾功能指标明显改善 ,肺组织髓过氧化物酶活性下降 4 0 3% (P <0 0 5 )。结论　ERK信号通路参与了严重烧伤后金葡菌感染所致炎症反应与急性组织损伤的病理过程 ,针对该环节进行早期干预可有效缓解多器官功能异常改变。     

生物喋呤合成酶抑制剂在大鼠烫伤后金葡菌脓毒症防治中的意义

目的采用大鼠20%体表面积Ⅲ°烫伤后金黄色葡萄球菌(简称金葡菌)攻击所致脓毒症模型,探讨生物喋呤合成限速酶抑制剂-2,4-二胺-6-羟基嘧啶(DAHP)在金葡菌脓毒症防治中的意义.方法56只动物随机分为正常对照组、烫伤对照组、烫伤后金葡菌感染组和DAHP拮抗组.无菌留取动物心、肝、肺、肾组织,采用RT-RCR方法检测三磷酸鸟苷环水解酶I(GTP-CHI)、诱生型一氧化氮合酶(iNOS)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)基因表达,同时测定上述组织中四氢生物喋呤(BH4)和一氧化氮(NO)的水平.结果烫伤后金葡菌感染可导致组织GTP-CHI基因表达广泛上调、BH4合成显著增加.与之相对应,组织iNOS基因表达和NO水平亦明显升高,其中肝、肺改变尤为显著.给予DAHP不仅可显著抑制各组织GTP-CHI基因表达和BH4的产生,iNOS基因表达和NO的生成亦明显受抑,同时TNF-(基因表达也明显降低.此外,DAHP拮抗组动物6h死亡率明显降低(与未拮抗组相比,P=0.08,趋于统计学意义).结论早期应用DAHP进行干预可在一定程度上改善革兰阳性菌脓毒症动物的预后,其作用机理可能与DAHP抑制了体内BH4和NO的产生有关.     

高迁移率蛋白-1在脓毒症大鼠肺中的表达

目的探讨脓毒症大鼠肺组织中高迁移率蛋白-1(HMG-1)的表达。方法 50只SD 大鼠随机分为对照组(10只)和试验组(40只),使用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测肺与空肠组织HMG-1 mRNA的表达,采用Western blot法检测HMG-1蛋白的表达。结果试验组肺、空肠组织中HMG-1 mRNA表达量明显高于对照组(0．866±0．026 vs 0．232±0．009和0．859±0．053 vs 0．227±0．025,P<0．05),试验组肺组织中HMG-1蛋白表达量明显高于对照组(1．060±0．036 vs 0．360±0．006,P<0．05),但各亚组之间差异无统计学意义(P>0．05);空肠组织中HMG-1蛋白表达量与对照组比较,差异无统计学意义(P>0．05)。结论 HMG-1可能是炎症反应的重要介质,在炎症反应的持续发展过程中起一定作用。     

清热解毒方改善脓毒症大鼠脏器功能的比较

目的:探讨清热解毒方对脓毒症大鼠的治疗作用.方法:将Wistar大鼠分为正常对照组、模型组、清热解毒方1组(QR1)、清热解毒方2组(QR2)和血必净组,采用盲肠结扎穿孔法制备脓毒症大鼠模型,给予不同配伍的清热解毒方治疗,治疗后0～3 d,观察各组大鼠的死亡率;检测尚存活大鼠的AST、ALT、AST/ALT、BUN、Cr以及血小板膜表面CD62p表达情况.结果:清热解毒方,尤败酱草能够提高脓毒症大鼠的存活率,并显著降低血小板CD62P阳性血小板的百分率(P＜0.05).给药3 d后,与模型组比较,各清热解毒方组在不同程度上降低了AST及ALT的表达水平.各给药组都可以使造模后升高的BUN、Cr有显著的下降(P＜0.05).结论:清热解毒方可以改善脓毒症大鼠的肝、肾及血小板功能,其中败酱草在提高存活率及降低血小板活化方面发挥重要的作用.     

烫伤大鼠组织肿瘤坏死因子mRNA表达与内毒素血症的关系

目的 探讨烫伤后不同组织肿瘤坏死因子（ＴＮＦ－α）ｍＲＮＡ的动态表达及其与内毒素血症的关系。方法 采用大鼠３５％体表面积Ⅲ度烫伤模型,实验随机分为正常对照组、烫伤组、多粘菌素Ｂ治疗组。血浆内毒素水平采用改良过氯酸预处理血浆偶氮显色法鲎试验定量测定;组织ＴＮＦ－αｍＲＮＡ含量采用逆转录聚合酶链反应检测。结果 烫伤后门静脉及体循环内毒素水平均显著升高,８ｈ达高峰,２４ｈ则逐渐下降。给予低剂量多粘菌素Ｂ     

烫伤大鼠组织肿瘤坏死因子mRNA表达与内毒素血症的关系

目的探讨烫伤后不同组织肿瘤坏死因子(TNF-α)mRNA 的动态表达及其与内毒素血症的关系。方法采用大鼠35%体表面积Ⅲ度烫伤模型,实验动物随机分为正常对照组、烫伤组、多粘菌素 B 治疗组。血浆内毒素水平采用改良过氯酸预处理血浆偶氮显色法鲎试验定量测定;组织 TNF-α mRNA 含量采用逆转录聚合酶链反应检测。结果烫伤后门静脉及体循环内毒素水平均显著升高,8h 达高峰,24h 则逐渐下降。给予低剂量多粘菌素 B 治疗可显著降低门静脉内毒素峰值(P<0.05)。另一方面,烫伤后2h 肺、肝、肠、肾等组织 TNF-α mRNA 表达较伤前值即有显著升高(P<0.05～0.01),烫伤后8h 达高峰,约为伤前值的1.7～2.6倍,且一直持续至伤后24h。给予多枯菌素 B 抗内毒素治疗后可不同程度抑制 TNF-α mRNA 的表达(P<0.05～0.01)。相关分析显示,门静脉内毒素水平同肺、肠、肾组织 TNF-α mRNA 呈显著正相关关系(r 值分别为0.365,0.381,0.484,P<0.05),但与肝组织无显著相关。结论肺、肝、肠、肾等组织 TNF-α mRNA 表达在烫伤早期即显著增多,并呈一逐渐升高的趋势。创伤后内毒素血症对机体多种组织 TNF-α基因表达具有重要影响。     

选择性消化道脱污染对烫伤大鼠脏器的保护作用

目的 探讨选择性消化道脱污染对烫伤大鼠组织白细胞介素－18mRNA表达的影响及脏器保护作用。方法 采用大鼠30％体表面积Ⅲ度烫伤延迟复苏模型，肠、肺组织IL－18、IFN－γ mRNA含量采用逆转录聚合酶链式反应检测；ELISA法测定IFN－γ含量；同时检测肠、肺功能指标。结果 肠、肺组织IL－18、IFN－γ mRNA表达较伤前有显著升高，烫伤后8h达高峰，且一直持续至伤后24h，给予SDD预治疗后可不同程度抑制IL－18、IFN－γ mRNA的表达；严重烫伤后，出现广泛的脏器功能，预防性SDD处理可不同程度地保护脏器。结论 肠、肺组织IL－18、IFN－γ mRNA表达在烫伤后显著增多，并逐渐升高，后者对脏器具有重要影响。SDD预治疗后可不同程度抑制IL－18 mRNA的表达并保护脏器。     

早期肠内免疫营养对烫伤大鼠免疫功能的影响

目的了解早期肠内免疫营养对烫伤大鼠全身及肠道免疫功能的影响。方法将健康SD大鼠分为标准营养组（EN组）和免疫营养组（EIN组），每组32只。将两组大鼠制成烧伤总面积30％TBSA的Ⅲ度烫伤模型，于伤后1、4、7、10d检测其外周血T淋巴细胞亚群、肠黏膜增殖细胞核抗原（PCNA）表达水平、浆细胞数量及肠黏液分泌型免疫球蛋白A（S-IgA）含量的变化。另取8只健康大鼠检测上述指标作为正常参考值。结果（1）与正常值比较，伤后EN组CD3^＋、CD4^＋、CD4^＋／CD8^＋降低但CD8^＋升高，与各项指标大部分时相点比较，差异有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）。伤后10d与EN组（CD4^＋／CD8^＋为1．26±0．10）比较，EIN组CD3^＋、CD4^＋、CD4^＋／CD8^＋（CD4^＋／CD8^＋为1．86±0．25）升高而CD8^＋下降（P〈0．01）。（2）伤后4、7、10d，EIN组肠黏膜PCNA表达水平、浆细胞数量及肠黏液S-IgA含量较EN组明显升高（P〈0．05或P〈0．01）。结论烫伤后早期给予肠内免疫营养，可以提高全身及肠道免疫功能，效果优于标准肠内营养。     

肠内免疫营养对烫伤大鼠内毒素和CD14/肿瘤坏死因子-α mRNA表达的影响

目的研究肠内免疫营养物对烫伤大鼠内毒素和CD14 mRNA、肿瘤坏死因子 (TNF)-α mRNA表达的影响及机制。方法致64只SD大鼠总体表面积(TBSA)30％Ⅲ度烫伤, 随机分为肠内免疫营养组(EIN组,32只)和标准肠内营养组(EN组,32只),另取8只大鼠作为伤前正常对照组(N组)。EIN组和EN组均给予等热量(125 Kcal／dl)肠内营养液。分别于伤前、伤后 1、4、7、10 d抽取静脉血和肝组织,检测血清内毒素和TNF-α浓度,RT-PCR检测肝组织CD14 mR- NA、TNF-α mRNA。结果烫伤后EN、EIN组血清内毒素、TNF-α浓度比伤前血清内毒素 (0．125±0．050)和TNF-α浓度(0．85±0．27)显著升高(P<0．01),且肝组织CD14 mRNA、TNF-α mRNA的表达明显增多;在伤后4、7、10 d,EIN组血清内毒素和TNF-α浓度以及肝组织CD14 mR- NA、TNF-α mRNA的表达均比EN组显著降低(P<0．05或P<0．01)。结论肠内免疫营养与标准肠内营养相比,可明显降低烫伤后血清内毒素水平,减少肝组织CD14 mRNA、TNF-α mRNA的表达,从而降低血清TNF-α浓度,改善烫伤后机体炎症反应。