幽门螺杆菌空泡毒素、毒素相关蛋白的表达及分型

目的：分析分离自我国临床患者的幽门螺杆菌（Hp）毒力因子空泡毒素（VacA)和毒素相关蛋白(CagA)的表达状况及其分型分布。方法：从临床分离培养19株Hp，用细胞测毒法检测VacA，用Western blot法分析CagA，根据毒力因子表达情况进行分型。结果：VacA阳性率为57．9％，CagA表达阳性率为89．48％；I型，Ⅱ型,中间型Hp分别占52．63％，5．27％，42．10％。结论：所研究的临床分离Hp菌株的毒力因子属高表达。     

CagA 阳性Hp培养滤液诱导转化的胃上皮细胞表达泛素活化酶E1基因

目的 研究CagA阳性Hp培养滤对人胃粘膜上皮细胞（GES－1）作用的机制。方法 将CagA阳性Hp培养滤液诱导恶性转化的GES－1细胞与CagA阴性Hp培养滤液处理的GES-1细胞进行mRNA差异显示，以寻找Hp致胃癌发病的相关基因。结果 mRNA差异显示片断之一命名为PFN1，仅在Hp(CagA^ )培养滤液处理的GES－1细胞中表达，斑点杂交结果与之一致。与Gene Bank资料序列同源性比较分析提示PFN1与泛素活化酶E1同源性99％，即为人类泛素活化酶E1基因的一部分。结论 泛素－蛋白水解酶复合体通路中的泛素活化E1在与了Hp的CagA诱导的胃上皮细胞恶化转化过程。     

幽门螺旋杆菌细胞毒素相关蛋白A真核表达载体的构建与表达

目的构建幽门螺旋杆菌（Helieobaeterpylori,Hp）细胞毒素相关蛋白A（cytotoxin—associatedprotein,CagA）基因表达载体并表达其编码蛋白。方法从胃黏膜活检标本中分离Hp,提取核酸,采用RT—PCR技术扩增CagA基因,将其克隆至pEGFP真核表达载体中,构建HpCagA基因真核表达载体并转染293-T细胞表达其编码蛋白。结果通过PCR、双酶切、测序鉴定证实CagA基因的真核表达载体构建成功,免疫印迹法证实CagA蛋白的表达。结论成功构建了HpCagA基因真核表达载体并表达其编码蛋白,为后期功能研究提供了材料和基础。     

幽门螺杆菌空泡毒素、毒素相关蛋白的表达及分型

目的 :分析分离自我国临床患者的幽门螺杆菌 (Hp)毒力因子空泡毒素 (VacA)和毒素相关蛋白 (CagA)的表达状况及其分型分布。方法 :从临床分离培养 19株Hp ,用细胞测毒法检测VacA ,用Westernblot法分析CagA ,根据毒力因子表达情况进行分型。结果 :VacA阳性率为 5 7 9% ,CagA表达阳性率为 89 48% ;Ⅰ型 ,Ⅱ型 ,中间型Hp分别占 5 2 6 3% ,5 2 7% ,42 10 %。结论 :所研究的临床分离Hp菌株的毒力因子属高表达。     

不同表型幽门螺杆菌对幽门螺杆菌相关性胃炎和胃癌组织p53表达的影响

目的：探讨不同表型幽门螺杆菌（Hp）对Hp相关性胃炎和胃癌病变及其p53表达的影响。方法：对137例Hp（＋）慢性胃炎（CG）、消化性溃疡及胃癌患者和34例Hp（-）患者用Western blot检测Hp细胞毒素相关蛋白（CagA）、空泡毒素（VacA）、尿素酶（Urease）及其亚型。评价Hp（＋）CG中慢性炎症（CI）、多形核活动性（PA）、Hp定植密度（DH）的组织学等级。用免疫组化检测p53表达，以H-score方法评价。结果：①Hp128ku CagA、116ku CagA、95ku VacA、91ku VacA、30ku UreA表达在轻度CI组的比例低于中、重度CI组（P均〈0．05），95ku VacA、91ku VacA和30ku UreA表达在无PA组的比例低于有PA组（P均〈0．05）。②Hp（＋）组P53 Hscore均高于Hp（-）CG组（P=0．002）。在Hp＋CG中，中重度CI组P53 Hscore均高于轻度组（P=0．025），而在Hp（-）CG组中，差异无显著性。③Hp＋胃癌中，未发现任何独立表型与CG和胃癌的53 Hscore有关（P〉0．05）。结论：Hp多种毒力因子对胃黏膜CI程度加重、PA的发生和发展起促进作用，Hp感染及DH增加均促进p53表达无关；未见Hp任何独立表型与53表达有关，提示Hp可能通过多种毒力因素及此研究未提及的其他因素的综合作用促进p53过度表达。     

CagA阳性幽门螺杆菌感染与中年无症状人群CIMT相关性研究

目的 探讨细胞毒素相关蛋白A(cytotoxin-associated protein A,CagA)阳性Hp感染与中年无症状人群颈动脉粥样硬化(carotid atherosclerosis, CAS)的相关性。方法 选取在我院就诊的CAS患者578例作为CAS组,选取无CAS患者578例作为对照组,比较2组CagA阳性Hp感染比例,并作Logistic回归分析。比较CagA阳性Hp感染患者与CagA阴性患者颈动脉内-中膜厚度(carotid intima-media thick-ness, CIMT)。结果 CAS组CagA阳性Hp感染患者比例高于对照组(P<0.05)。CagA阳性Hp感染是CAS的独立危险因素(OR=1.813,95%CI:1.379～2.384,P<0.05)。CagA阳性Hp感染患者CIMT大于CagA阴性患者(t=28.046,P<0.05)。结论 在中年无症状人群中,CagA阳性Hp感染是CAS的独立危险因素,CagA阳性Hp感染患者CIMT大于CagA阴性Hp感染患者。因此,CagA阳性Hp感染与CAS的发生、发展有关。     

CagA~ Hp与溃疡边缘上皮细胞增殖的关系

目的 :研究CagA Hp与消化性溃疡边缘上皮细胞增殖的关系。方法 :粘膜涂片Giemsa染色及RUT确定Hp感染 ,SP免疫组织化学方法检测溃疡边缘PCNA阳性表达情况 ,对Hp阳性者抽取静脉血 1ml按HpCa gAIgG检测盒说明操作检测CagA抗体。结果 :GU患者CagA Hp的检出率为 72 .72 % ,DU患者CagA Hp的检出率为 6 8.18%。溃疡边缘上皮PCNA阳性表达明显高于无显著病变者 ;Hp阳性溃疡边缘PCNA阳性表达显著高于Hp阴性者 (P <0 .0 0 1) ;但CagA阳性溃疡边缘PCNA阳性表达与阴性者相比无统计学差异。结论 :在Hp相关溃疡CagA Hp菌株占优势 ,且Hp感染可导致溃疡边比上皮细胞增殖加速 ,但CagA可能不是导致细胞增殖加速的原因     

幽门螺杆菌及其CagA基因感染与胃癌关系的研究

目的:通过检测胃癌和浅表性胃炎组织幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)和细胞毒素相关蛋白基因(CagA),探讨Hp 及CagA基因与胃癌相关性及Hp形成胃癌的可能机制.方法:应用快速尿素酶试验和组织切片革兰染色和血清Hp CagA抗体检测Hp,用PCR检测Hp CagA基因.结果:慢性浅表性胃炎、胃癌组织中Hp检出率分别为45.9%和54.8%,两者差异无显著性(P>0.05),两种组织中Hp CagA检出率分别为35.3%和77.5%,两者差异有显著性(P<0.005).结论:胃癌组织与浅表性胃炎组Hp感染相比差异无显著性,胃癌组织中Hp CagA基因检出率明显高于浅表性胃炎组,Hp CagA基因与胃癌有一定相关性,Hp CagA基因可能涉及胃癌的形成机制.     

应用PCR技术检测胃炎患者Hp的Ure基因和CagA基因

目的：探讨浅表性胃炎、胃溃疡，萎缩性胃炎与幽门螺杆菌（Hp)的尿素酶（Ure）基因和细胞毒素蛋白（CagA）基因的关系。方法：应用PCR技术，选择与Hp的Ure基因和CagA基因3’末端核苷酸互补的两对引物，进行PCR扩增，检测不同胃炎患者的Ure基因和CagA基因。结果：胃溃疡患者Ure阳性率45．7％，CagA阳性率28．5％，浅表性胃炎Ure阳性率31．4％，CagA阳性率20．0％，萎缩性胃炎Ure阳性率20．0％，CagA阳性率53．3％，结论：幽门螺杆菌的不同菌株会引起胃炎的不同临床表现。     

探讨红斑痤疮患者外周血中幽门螺杆菌尿素酶及细胞毒索相关蛋白抗体的发生率及临床意义

目的探讨幽门螺杆菌（Hp）感染在红癍痤疮（ROSACEA）发病机制中的作用。方法采用Hp抗体蛋白蕊片检测系统对39例临床进展型ROSACEA患者外周血的Hp尿素酶（Urase）及细胞毒素相关蛋白（CagA）抗体发生率进行观察，并联系消化症状及皮损情况进行分析。结果有消化道症状的ROSACEA患者中Hp Urase IgG和Hp CagA IgG发生率分别为86．7％和80％；而无消化道症状的ROSACEA患者Hp Urase和CagA IgG发生率分别为16．7％和0％，两者有显著性差异（P〈0．05）。在Hp Urase-IgG和Hp CagA—IgG阳性的ROSACEA患者中，红斑皮损的发生率分别为35．3％和33．3％，而丘疹皮损的发生率分别达64．7％和66．7％，丘疹皮损的发生率显著高于红斑皮损发生率（P〈0．05）。结论系统性红斑痤疮作为一种多因素致病疾病，Hp尤其是Hp毒力株可能作为致病因素之一，参与了该病的消化道症状及皮肤损伤的发生与发展。     

幽门螺杆菌CagA及其致病作用的研究进展

CagA是幽门螺杆菌最重要的毒力因子之一，CagA阳性的Hp菌株同胃炎、萎缩性胃炎、十二指肠疾病和胃癌等消化道疾病相关。本文综述了Hp的毒力因子CagA的基因组、CagA定植于胃上皮细胞、CagA酪氨酸磷酸化位点、CagA入胞的靶向以及CagA多态性、毒性与胃癌的关系的近年研究状况。     

检测CagA Hp—IgG在上消化道疾病中的意义

细胞毒素相关蛋白(CagA)是幽门螺杆菌(H．pylori)的毒力标志，我们检测了238例Hp阳性患者血中的Hp细胞毒素相关蛋白A免疫球蛋白G(CagA Hp—IgG)，旨在探讨CagA在上消化道疾病中的作用，为临床治疗提供依据。     

幽门螺杆菌cagA基因片段原核表达载体的构建及其cagA基因和CagA蛋白及感染者血清抗体的检测

目的:构建幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)cagA基因片段的原核表达系统,建立ELISA检测CagA及其抗体,了解表达CagA的Hp菌株(CagA Hp)感染与所致疾病种类的关系.方法:从快速尿素酶试验阳性的156例患者胃黏膜活检标本中分离Hp.采用PCR检测109株Hp cagA基因,并从临床菌株Y06中扩增2 148 bp的cagA基因片段(cagA1).构建cagA1原核表达系统,用SDS-PAGE检查目的重组蛋白(rCagA1)的表达情况,用Western blot和免疫双扩散试验鉴定rCagA1的免疫反应性和抗原性.建立ELISA,检测109株Hp CagA表达和相应患者血清中CagA抗体.分析CagA Hp感染与胃炎和消化性溃疡的关系.结果:80.8%胃黏膜活检标本中分离出Hp(126/156),97.2%的Hp菌株(106/109)cagA基因阳性.与文献报道比较,所克隆的cagA1片段核苷酸和氨基酸序列同源性分别为94.83%和93.30%.所构建的原核表达系统表达的rCagA1量约为细菌总蛋白的30.0%.rCagA1能与Hp全菌抗体发生结合反应,免疫家兔产生双扩散效价为1∶4的抗体.92.6%菌株(101/109)可表达CagA,88.1% 患者(96/109)血清CagA抗体阳性.消化性溃疡标本中CagA Hp菌株分离阳性率(97.9%)高于胃炎标本(88.5%),但无统计学差异(χ2=3.48,P>0.05).结论:本实验构建的原核表达系统表达的rCagA1有良好的免疫反应性和抗原性,建立的ELISA可用于Hp CagA及其抗体的检测,分离的Hp菌株cagA基因携带率和CagA表达率均很高.消化性溃疡和胃炎与其感染的Hp是否表达CagA无明显关系.     

不同表型幽门螺杆菌对胃黏膜ki-67表达的影响

目的：探讨不同表型的幽门螺杆菌（Hp）对胃黏膜ki-67表达的影响。方法：对137例经胃镜及组织学检查确诊的Hp（＋）慢性胃炎（CG）、消化性溃疡及胃癌患者和34例Hp（-）患者，用Western blot检测Hp细胞毒素相关蛋白（CagA）、空泡毒素（VacA）、尿素酶（Urease）及其亚型。评价Hp（＋）CG中慢性炎症（CI）、多形核活动性（PA）、Hp定植密度（DH）的组织学等级。用免疫组化检测ki-67的表达。结果：①Hp相对分子质量为128000 CagA、116000 CagA、95000 VacA、91000 VacA、30000 UreA的表达在轻度CI组的比例低于中、重度CI组（P〈0．05），95000VacA、91000VacA和30000UreA表达在无PA组的比例低于有PA组（P〈0．05）。②ki-67标记指数（LI）在慢性胃炎Hp（＋）组高于Hp（-）组（P=0．041）；在中、重度DH组高于轻度组（P=0．014）；在Hp（＋）CG中重度CI组高于轻度组（P=0．039），而在Hp（-）CG组则无此关系（P〉0．05）。Hp（＋）CG中，128000CagA、95000VacA、30000UreA表达组ki-67LI高于相应不表达组（P〈0．05）；Hp（＋）胃癌者中，128000CagA表达组ki-67LI高于相应不表达组（P=0．02）。结论：Hp多种毒力因子对加重胃黏膜CI程度、PA的发生和发展起促进作用，Hp感染及DH增加均促进慢性胃炎胃黏膜上皮细胞增殖，但可能对胃黏膜良恶性病变的促细胞增殖作用有差异，更多毒力因子对慢性胃炎而不是胃癌的细胞增殖起作用。     

幽门螺杆菌毒力因子与胃癌前变化的研究

目的　研究胃癌前状态和癌前病变伴幽门螺杆菌 (Hp)感染的患者 ,其Hp毒力因子细胞毒素相关蛋白A(CagA)、空泡细胞毒素VacA的表达。方法　常规胃镜检查和活检取得的胃黏膜标本做组织病理检查 ,根据所得结果 ,慢性萎缩性胃炎、胃息肉、残胃、胃溃疡、完全型 /不完全型、大肠 /小肠化生为癌前状态组 (82例 ) ,胃黏膜上皮异型增生为癌前病变组 (2 5例 ) ,单纯慢性浅表性胃炎伴Hp感染患者为对照组 (3 0例 )。用蛋白印迹法 (WesternBlot)测定Hp的CagA、VacA因子。结果　癌前状态组和癌前病变组中 ,CagA、VacA因子的检出率显著高于对照组 (P <0 .0 5 )。结论　幽门螺杆菌CagA、VacA因子与胃癌前状态和癌前病变密切相关     

胃癌患者幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白的检测

<正>多数研究证实幽门螺杆菌(Hp)感染与人胃癌的发生有关,细胞毒素相关蛋白(CagA)基因在胃癌、胃炎中有较高的检出率,然而单纯通过PCR方法检测CagA基因作为筛选高危人群是没有实际临     

血清学检测CagA阳性幽门螺杆菌感染及其与胃肠疾病的关系

目的　研究血清抗细胞毒素相关蛋白A(CagA)抗体在幽门螺杆菌 (Hp)感染者中的分布。方法　采用酶联免疫吸附法检测 198例Hp相关性疾病患者的血清CagA IgG抗体。结果　在Hp感染患者中血清CagA抗体总阳性率 6 9 2 % ,其中慢性浅表性胃炎为 6 7 2 % ,慢性萎缩性胃炎为 72 4% ,胃溃疡为 5 6 8% ,十二指肠球部溃疡为79 2 % ,胃癌为 71 4% ;各疾病间CagA抗体阳性率差异无显著性 (P >0 .0 5 )。结论　血清CagA抗体检测不能作为区分Hp感染致不同胃肠疾病的单一指标     

细胞毒素相关蛋白与幽门螺杆菌相关胃肠病的关系及其机制初探

目的:为探讨细胞毒素相关蛋白(CagA)与幽门螺杆菌(Hp)相关胃十二指肠疾病的关系及其可能的机制.方法:应用间接ELISA法定性检测170例胃镜受检查者CagAHpIgG抗体,用双抗体夹心ELISA法检测其中76例患者胃粘膜匀浆上清液中的白细胞介素-8(IL-8)含量.结果:170例受检者中,Hp感染者106例,其中CagA阳性69例,阳性率为65.09%,Hp感染的DU、GU、GCa患者CagA阳性率明显高于Hp感染的CG患者(P＜0.05),DU、GU、GCa组间无明显差异(P＞0.05);活动性胃炎CagA阳性率与非活动性胃炎相比较无显著性差别(P＞0.05);血清CagA阳性的Hp感染者胃粘膜IL-8含量显著高于CagA阴性者(P＜0.05),后者又显著高于非Hp感染者(P＜0.005);活动性胃炎胃粘膜IL-8含量明显高于非活动性胃炎(P＜0.05).结论:CagA与Hp相关的严重胃十二指肠疾病密切相关,其机制可能与CagA介导胃粘膜IL-8的产生,后者参与Hp相关性活动性胃炎的病理过程有关.     

细胞毒素相关蛋白与儿童幽门螺杆菌相关性胃十二指肠疾病的关系

目的探讨幽门螺杆菌(Hp)细胞毒素相关蛋白(CagA)与儿童胃十二指肠疾病的种类以及胃粘膜炎症程度之间的关系.方法采用免疫印迹法测定88例Hp相关性慢性胃炎、46例Hp相关性消化性溃疡患儿血清CagA抗体.结果 CagA抗体总检出率为85.1%,在慢性胃炎与消化性溃疡患儿中的检出率分别为84.1%与87.0%,两者差别无显著性意义(X2=0.20,P＞0.05);胃粘膜中重度炎症患儿血清CagA抗体阳性率为90.9%,轻度炎症患儿血清CagA抗体阳性率为58.3%,两者差别有非常显著性意义(X2=14.00,P＜0.01).结论 CagA与慢性胃炎、消化性溃疡的发病均有关,但不能作为区分Hp感染致不同胃十二指肠疾病的特异性标志物.CagA阳性Hp菌株感染能引起胃粘膜较重的炎症.     

人类线粒体tRNAs基因在CagA阳性Hp培养滤液诱导转化的胃上皮细胞中表达

目的 研究CagA阳性Hp培养滤液对人胃粘膜上皮细胞（GES－1）作用的机制。方法 将CagA阳性Hp培养滤液诱导恶性转化的GES－1细胞与CagA阴性Hp培养滤液处理的GES－1细胞进行mRNA差异显示,以寻找Hp致胃癌发病的相关基因。结果 mRNA差异显示片断之一命名为PFN2,仅在Hp(CagA^ )培养滤液处理的GES－1细胞中表达,斑点杂交结果与之一致。与Gene Bank资料序列同源性比较分析提示PFN2与人类线粒体tRNAs同源性100％,即为人类线粒体tRNAs基因的一部分。结论 人类线粒体tRNAs基因可能参与了Hp的CagA诱导的胃上皮细胞恶性转化过程。