山茱萸环烯醚萜总苷对AGEs培养肾小球系膜细胞的影响

目的观察山茱萸环烯醚萜总苷(ICO)对糖化终产物(AGEs)培养肾小球系膜细胞(GMC)形态学、细胞周期及氧化应激的影响。方法用含AGEs的培养液配制ICO、氨基胍,同时设对照。GMC培养48h后,加混合荧光染液进行染色,并立即进行荧光显微观察。另用流式细胞仪分析GMC的周期。试剂盒测定细胞上清液MDA含量与SOD和GSH-Px活性,流式细胞仪检测细胞内ROS含量。结果形态学显示,正常GMC形态结构正常。而GMC在AGEs的刺激下,细胞数量明显增多,细胞结构不甚清晰,细胞S期延长,G0/G1缩短,细胞内SOD、GSH-Px下调,ROS、MDA上调。在系统中加入ICO后细胞异常增殖明显减少,细胞形态趋于正常,使S期细胞减少,SOD、GSH-Px活力提高,ROS、MDA含量降低。结论ICO能对抗AGEs对GMC的损伤作用。其可能是通过抑制氧化应激来保护GMC免受AGEs的损害,从而达到防治糖尿病肾病的目的。     

大黄素对高糖培养的GMC增殖、FN表达及p38MAPK的影响

目的本研究旨在观察大黄素对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞(GMC)的增殖与细胞外基质的主要成分——纤维连接蛋白(FN)表达的影响,观察大黄素对高糖培养的p38MAPK信号转导通路的影响,以探讨大黄素调节p38MAPK信号通路抗糖尿病肾脏纤维化的分子作用机制。方法 MTT比色法检测细胞活力;流式细胞仪检测细胞周期分布;Western blot方法检测FN、p-p38MAPK蛋白表达情况。结果高糖能够诱导大鼠GMC增殖、上调FN的表达以及促进p38MAPK活化,与正常培养组相比差异有统计学意义(P<0.05);大黄素可以抑制高糖诱导的大鼠GMC增殖、FN表达与p38MAPK活化,与高糖组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论大黄素抗糖尿病肾脏纤维化的作用可能与大黄素抑制p38MAPK信号通路密切相关。     

银杏叶提取物对AGEs诱导的大鼠HSC增殖的抑制作用

目的：探讨不同浓度晚期糖基化终产物（AGEs）对体外培养的大鼠肝星状细胞（HSC）增殖的影响,并观察不同浓度银杏叶提取物（EGb）对其增殖有无抑制作用。方法体外合成AGEs,MTT法观察不同浓度的AGEs对HSC增殖的影响及不同浓度EGb对AGEs促HSC增殖的抑制作用。结果当培养液中AGEs浓度≥50mg/L时,12～48h内检测发现HSC较正常对照组增殖明显并呈时间及剂量依赖性（P＜0.05）,而6h内及低浓度AGEs组未观察到其对HSC增殖有明显影响。EGb在培养48h时对AGEs刺激的HSC的增殖有显著抑制作用（P＜0.05）,且呈明显的剂量依赖性。结论 AGEs可以促进HSC增殖,呈时间、剂量依赖性;在作用时间充分的前提下,EGb可抑制AGEs诱导的HSC增殖,呈剂量依赖性。     

普伐他汀联合二甲双胍对大鼠肾小球系膜细胞增殖的影响

目的 探讨普伐他汀联合二甲双胍对肾小球系膜细胞（GMC）增殖的影响.方法 通过体外培养GMC,用高浓度葡萄糖刺激GMC增殖,选择最佳刺激浓度,并在普伐他汀联合二甲双胍不同剂量的条件下,比较GMC在不同剂量、不同时间的增殖情况.结果 葡萄糖最佳刺激浓度为0.6 g/L;普伐他汀联合二甲双胍高剂量组对葡萄糖刺激的GMC增殖抑制作用最明显,与低剂量组比较差异有统计学意义（P〈0.05）,但与中剂量组比较差异无统计学意义（P〉0.05）.结论 普伐他汀联合二甲双胍对GMC增殖具有抑制作用,可治疗糖尿病肾病.     

高糖环境下脂联素对人心肌细胞增殖的影响

目的 体外高糖培养人心肌细胞(HCM)及运用脂联素(ADPN)干预以探讨HCM增殖的影响,以揭示脂联素对高糖环境中的心肌细胞的可能保护作用.方法 将HCM分为正常对照组(5.5 mmol/L葡萄糖)、高糖组(30.0 mmol/L葡萄糖)、脂联素组 (30.0 mmol/L+2.5 μg/mlADPN),分别培养24 h、48 h、72 h,运用MTT测定HCM的增殖情况.结果 ①在24 h高糖组与正常组比较人心肌细胞增殖有促进作用(P<0.05),而高糖组与脂联素组比较没有统计学差异(P>0.05).48、72 h高糖组与正常对照组比较细胞增殖受抑制(P<0.05).在加入脂联素后48、72 h脂联素组与高糖组比较细胞增殖增加,随时间的延长细胞增殖增加明显,有统计学差异(P<0.05).结论 脂联素可以促进HCM增殖,对高糖环境下心肌细胞有保护作用.     

糖基化终产物诱导血管平滑肌细胞增殖及药物的拮抗作用

目的 研究糖基化终产物（AGES）对大鼠血管平滑肌细胞（VSMCs）增殖的影响,观察氨基胍、吡格列酮、伊贝沙坦三种药物对AGEs诱导的VSMCs增殖的拮抗作用。方法 组织块贴壁法培养大鼠主动脉VSMCs,6～10代用于实验,0、50、100、200、400ml／L的AGEs,与VSMCs孵育不同时间（0、8、16、24、48h）;并用上述三种药物与200ml／LAGEs共同孵育24h,四甲基偶氮唑盐（MTT）微量酶比色法检测VSMCs增殖。结果 各浓度的AGEs对VSMCs作用8h,细胞增殖不明显,浓度200ml／L作用48h,细胞增殖最明显;三种药物均能抑制AGES诱导的VSMCs增殖（P〈0．05）。结论 氨基胍、吡格列酮、伊贝沙坦可明显抑制AGEs诱导的VSMCs增殖,在防治糖尿病血管并发症方面可有较好的应用前景。     

灯盏花素对高糖环境肾系膜细胞c-fos、c-jun蛋白表达的影响

目的　观察高葡萄糖环境中 ,蛋白激酶C(PKC)抑制剂灯盏花素对肾小球系膜细胞 (GMC)c fos、c jun蛋白表达和Ⅳ型胶原 (C Ⅳ )合成的影响 ,探索糖尿病肾病防治的新途径。方法　原代培养大鼠GMC ,分别置于正常葡萄糖 (对照组 )、高葡萄糖 (高糖组 )和高葡萄糖加灯盏花素 (高糖加灯盏花素组 )环境中 ,观察干预 2 4h、4 8h和 1wk后GMCc fos、c jun蛋白表达、C Ⅳ合成和PKC活性的变化。结果　与对照组比较 ,高糖组干预 2 4h后c fos、c jun蛋白表达同时明显增高 ,4 8h后c fos开始下降 ,而c jun 1wk后仍保持高水平 ,高糖组C Ⅳ合成 1wk后增加 ,各观察时点PKC活性均较对照组明显增高 ;而高糖加灯盏花素组各时点c fos、c jun蛋白表达、C Ⅳ合成和PKC活性均低于高糖组。结论　高葡萄糖可促使GMC中c fos、c jun蛋白表达和C Ⅳ合成增加 ,此可能为PKC活化所介导 ,灯盏花素可通过抑制PKC活化而有效阻止高葡萄糖引起的上述变化。     

脂联素对高糖环境下人肾小球系膜细胞增殖及氧化应激水平的影响

目的 探讨脂联素(Adiponectin,ADPN)对高糖环境下人肾小球系膜细胞(HMCs,human Mesangial Cells) 增殖及氧化应激水平的影响,揭示脂联素在糖尿病肾病中的保护作用.方法 ①体外培养HMCs:①将HMCs随机分为正常对照组(5.5 mmol/L 葡萄糖)、高糖组(30.0 mmol/L葡萄糖)、脂联素组(30.0 mmol/L葡萄糖+2.5 μg/ml脂联素),分别培养24、48、72 h后,运用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定3组不同时间点HMCs的增殖情况.②将HMCs随机分为上述3组细胞,分别培养24、48、72 后运用硫代巴比妥酸法(TBA法)测定细胞上清液中MDA及SOD的含量.③再将HMCs随机分为上述3组细胞,分别培养24、48、72 h,运用实时荧光定量PCR(RT-PCR)测定HO-1 mRNA的表达,观察细胞氧化应激指标变化.结果 ①24 h高糖组与正常对照组比较细胞增殖无统计学差异(P>0.05),48、72 h两组比较,高糖组细胞增殖明显受抑制(P<0.05).加入脂联素促进细胞增殖,与高糖组比较差异有统计学意义(P<0.05);②24、48、72 h高糖组MDA含量均升高,SOD含量及HO-1 mRNA的表达均下降,与正常组比较差异有统计学意义(P<0.05).加入脂联素后,观察上述氧化应激指标均得到明显改善,差异有统计学意义(P<0.05).结论长期高糖刺激抑制人肾小球系膜细胞增殖,外源性加入脂联素可促进细胞增殖.高糖组均引起氧化应激指标升高,加入脂联素可降低系膜细胞氧化应激水平,提示其对细胞起保护作用.     

高糖环境早期对血管内皮细胞的作用之商榷

目的:探讨高糖环境在48 h内对人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)的增殖以及粘附分子表达的影响,并观察在炎性刺激下高糖作用的改变。方法:用不同浓度的葡萄糖作用于HUVEC,用噻唑蓝法(MTT法)检测48 h内高糖对细胞增殖的影响。采用流式细胞术及细胞酶联免疫吸附法(cell ELISA)测定高糖作用下HUVEC表达的细胞间粘附分子(ICAM-1)的水平。脂多糖(LPS)与高糖联合刺激HUVEC后,比较其与只用LPS刺激情况下的ICAM-1的表达之间的差异。结果:25、45 mmol.L-1的葡萄糖在48 h内无抑制HUVEC增殖的作用,对其表达粘附分子的水平也无显著影响。但在LPS刺激条件下,高糖组HUVEC的增殖明显被抑制,ICAM-1水平也较正常糖浓度组显著增加。结论:在短期内高糖对HUVEC的增殖及粘附分子的表达无明显影响,而在炎症刺激存在下,高糖显著抑制其增殖、增加粘附分子的表达。     

糖尿病肾病的研究进展

糖尿病肾病(diabetic nephrathy,DN)是糖尿病(DM)的微血管并发症之一,近年来发病率逐渐增高。在美国,DN已成为终末期肾病(ESRD)的首位病因。在国内,DN所导致的肾功能衰竭亦日益增多。同时,由于DN伴有糖代谢紊乱以及常合并严重的心血管等并发症,其治疗远比一般的肾衰复杂,且部分患者血糖控制良好,仍然出现糖尿病肾病。因此,全面而系统的认识DN的发病机制、病理改变、临床特点、早期诊断以及防治方法具有重要意义。本文就近年来国内外DN的研究进展综述如下。1发病机制1.1糖代谢异常1.1.1晚期糖基化终末产物(AGEs)的生成高糖状态下,蛋…     

AGEs对胰腺癌细胞株表面PD-L1表达的影响及生物学意义

目的研究糖基化终产物(AGEs)对人胰腺癌细胞株Patu8988表面程序性死亡配体1(PD-L1)表达的影响,探讨AGEs诱导的肿瘤细胞对T细胞增殖的作用。方法以糖基化牛血清白蛋白(AGE-BSA)干预细胞株Patu8988为实验组,以牛血清白蛋白(BSA)为对照组,孵育72h后用流式细胞术分析各组细胞表面PD-L1表达的变化;AGE-BSA诱导的Patu8988细胞与人T细胞共培养,72h后用细胞增殖和细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测T细胞增殖。结果 AGE-BSA诱导72h后,Patu8988细胞表面PD-L1的表达呈浓度依赖性升高(P<0.05)。肿瘤细胞经AGEs诱导后抑制T细胞增殖能力增强(P<0.05),用抗PD-L1单抗阻断后抑制作用减弱(P<0.05)。结论 AGEs通过上调Patu8988细胞表面PD-L1的表达抑制T细胞增殖。     

糖基化终末产物调节氧化应激影响脐血间充质干细胞增殖及普罗布考保护作用

目的探讨糖基化终末产物(AGEs)对人脐血来源的间充质干细胞(MSCs)增殖的影响及普罗布考的保护作用。方法体外分离培养脐血MSCs,应用流式细胞术对细胞表面抗原CD34、CD45、CD105进行表型鉴定。将MSCs分为白蛋白(BSA)对照组、糖基化修饰的牛血清白蛋白(AGE-BSA)浓度效应组和普罗布考干预组。应用WST法检测各组细胞增殖情况。应用二氯醋酸荧光素探针和氧化应激检测试剂盒检测各组细胞活性氧(ROS)、超氧化物岐化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)含量。结果流式细胞鉴定显示,脐血MSCs不表达CD34、CD45,表达CD105。与对照组相比,AGE-BSA组增殖能力下降,ROS含量增加,SOD和GSH-Px活性下降。与AGE-BSA组相比,普罗布考在10、20、50、100μmol/L范围内促进细胞增殖,降低细胞ROS含量,增加SOD和GSH-Px活性。结论 AGEs能够调节氧化应激,抑制脐血MSCs增殖。普罗布考的作用机制可能是通过抑制ROS生成和提高抗氧化酶活性来保护脐血MSCs增殖能力。     

糖基化终产物对小鼠成骨样细胞基质金属蛋白酶2分泌的影响

目的 探讨糖基化终产物(AGEs)对小鼠成骨样细胞基质金属蛋白酶2(MMP-2)分泌的影响.方法 用不同浓度的AGEs(50、100、200、400 mg/L)干预培养的小鼠成骨样细胞(MC3T3-E1)24 h和用200 mg/L的AGEs干预MC3T3-E1不同时间(12、24、48 h),以无血清培养基(α-MEM)和相应浓度的牛血清白蛋白(BSA)为对照.用Western blot法检测小鼠成骨样细胞上清中MMP-2蛋白的表达.结果 不同浓度和不同时间的AGEs干预的MMP-2分泌水平明显高于对照组(P<0.01).结论 AGEs以时间及浓度依赖的方式增加小鼠成骨样细胞MMP-2分泌,AGEs可能通过调节成骨细胞MMP-2的分泌参与骨质疏松的发病.     

高糖通过miR-192调控CAV-1/EGF影响肾小球系膜细胞增殖、迁移及细胞外基质形成的机制研究

目的 探讨高糖条件下miR-192对肾小球系膜细胞增殖、迁移及细胞外基质形成的影响及可能的作用机制。方法 体外培养人肾小球系膜细胞并分为6组：正糖（NG,5.6 mmol/L葡萄糖）组、高糖（HG,25 mmol/L葡萄糖）组、正糖加miR-192模拟物（NG+mimics）组、高糖加miR-192模拟物（HG+mimics）组、正糖加miR-192抑制剂（NG+inhibitor）组、高糖加miR-192抑制剂（HG+inhibitor）组。干预24 h后,CCK-8法检测细胞增殖活性,划痕实验检测细胞迁移能力,实时荧光定量PCR（qPCR）技术检测miR-192、小窝蛋白1（CAV-1）、表皮生长因子（EGF）、1型胶原蛋白（COLⅠ）、纤连蛋白（FN）mRNA水平,Western blot检测相关蛋白表达。结果 与NG组相比,HG组细胞增殖率和划痕愈合率增加,EGF、FN、COLⅠ mRNA和蛋白表达升高,CAV-1 mRNA和蛋白表达降低（均P<0.05）。在NG组和HG组分别加入miR-192 inhibitor后,细胞增殖率和划痕愈合率减少,EGF、FN、COLⅠmRNA和蛋白表达降低,CAV-1 mRNA和蛋白表达升高（均P<0.05）,HG组加入miR-192 inhibitor变化更加明显。在NG组和HG组分别加入miR-192 mimics后,细胞增殖率和划痕愈合率增加,EGF、FN、COLⅠ mRNA和蛋白表达升高,CAV-1 mRNA和蛋白表达降低（均P<0.05）。结论 高糖通过miR-192-CAV-1-EGF途径增加肾小球系膜细胞增殖和迁移,导致细胞外基质的形成。     

吡格列酮和厄贝沙坦对糖基化终产物诱导血管平滑肌细胞增殖的影响

目的：观察吡格列酮和厄贝沙坦对糖基化终产物诱导的血管平滑肌细胞增殖的影响。方法：组织块贴壁法培养大鼠主动脉血管平滑肌细胞,6～10代的细胞用于实验,糖基化终产物(50,100,200,400 mg·L~(-1))干预血管平滑肌细胞不同时间(0,8,16,24,48 h)后,分别用氨基胍(阳性对照组)、吡格列酮、厄贝沙坦与200 mg·L~(-1)基化终产物共同孵育24 h,四甲基偶氮唑盐微量酶比色(MTT)法检测血管平滑肌细胞增殖。结果：各浓度的糖基化终产物对血管平滑肌细胞作用8 h,细胞增殖不明显,200 mg·L~(-1)糖基化终产物作用48 h,细胞增殖最明显；氨基胍、吡格列酮、厄贝沙坦均能抑制糖基化终产物诱导的血管平滑肌细胞增殖(P＜0．05)。结论：吡格列酮与厄贝沙坦可明显抑制糖基化终产物诱导的血管平滑肌细胞增殖。     

Selective inhibition by grape seed proanthocyanidin extracts of cell adhesion molecule expression induced by advanced glycation end products in endothelial cells

The interaction of advanced glycation end products (AGE) with their cell surface receptors for AGEs (RAGE) has been causally implicated in the pathogenesis of diabetic vascular complications and has been shown to stimulate cell adhesion molecule expression in endothelial cells via induction of reactive oxygen species (ROS). Alternatively, grape seed proanthocyanidin extracts (GSPE), which are naturally occurring polyphenolic compounds, have been reported to possess potent radical scavenging and antioxidant properties and to display significant cardiovascular protective action. In this study, we investigated whether GSPE could inhibit AGE-induced cell adhesion molecule expression through interference with ROS generations in human umbilical vein endothelial cells. AGE-modified bovine serum albumin (AGE-BSA) was prepared by incubating BSA with a high concentration of glucose. Stimulation of cultured human umbilical vein endothelial cells with 200 microg/mL of AGE-BSA significantly enhanced intracellular ROS formation and subsequently upregulated the expression of vascular cell adhesion molecule-1 (VCAM) and intercellular adhesion molecule-1 (ICAM-1), whereas both unmodified BSA and GSPE alone were without effect. However, preincubation of different concentrations of GSPE markedly downregulated AGE-BSA-induced VCAM-1 expression at the surface protein and mRNA level in a concentration-dependent manner, but the increased ICAM-1 expression was not affected by GSPE treatment. Meanwhile, the inhibition by GSPE of intracellular ROS generation was also observed at defined time periods. These results demonstrate that GSPE can inhibit the enhanced VCAM-1 expression but not ICAM-1 in AGE-exposed endothelial cells by suppressing ROS generation. Hence, GSPE may have therapeutic potential in the prevention and treatment of vascular complications in patients with diabetes.     

Comparison of results of the CellTiter Blue, the tetrazolium (3-[4,5-dimethylthioazol-2-yl]-2,5-diphenyl tetrazolium bromide), and the lactate dehydrogenase assay applied in brain cells after exposure to advanced glycation endproducts.

Advanced glycation endproducts (AGEs) arise in vivo from the reaction of proteins with sugars or dicarbonyl compounds. They are thought to be involved in the pathogenesis of several diseases such as atherosclerosis, diabetes mellitus, renal failure, and Alzheimer's disease (AD). Several binding molecules for AGEs have been described and it is assumed that many of the effects of AGEs are mediated by receptors like the receptor for AGEs (RAGE). AGEs are known to induce the release of inflammatory cytokines from activated glia in the AD brain and thus AGEs affect the cell viability of neurons and glia. In cell culture experiments controversial effects of AGEs on cell growth and viability were reported by different research groups ranging from stimulation to inhibition of the cell viability. In the present study, the effect of in vitro prepared highly modified AGEs on the viability and the membrane integrity of cultured brain cells was investigated. Three different brain cell lines were treated with glucose human serum albumin AGEs (Glc-AGEs) and methyl glyoxal human serum albumin AGEs (MG-AGEs). To investigate the effect of these model AGEs on cell viability the CellTiter Blue (CTB) and the tetrazolium (3-[4,5-dimethylthioazol-2-yl]-2,5-diphenyl tetrazolium bromide) (MTT) were used. The membrane integrity after exposure to AGEs was assayed using the lactate dehydrogenase (LDH) assay. When using the CTB assay for evaluation all AGEs were found to reduce the viability compared with the native protein in all three cell lines. Additionally, all AGEs were found to affect the membrane integrity compared with the native protein in all cell lines. When using the MTT assay for evaluation only MG-AGEs were found to cause a decrease in the viability in all cell lines used. The results of the MTT assay in Glc-AGEs treated cells varied between the cell lines. To gain a deeper understanding of the cellular responses after exposure of cells to AGEs, the present study compares results obtained when using the CTB, the MTT or the LDH assay in identically AGE treated cells.     

PPARγ-mediated advanced glycation end products regulate neural stem cell proliferation but not neural differentiation through the BDNF-CREB pathway

Aims

To investigate the roles of PPARγ in advanced glycation end product (AGE)-mediated characteristics of neural stem cells (NSCs) and the molecular mechanisms of action.

Methods

We prepared pLentiLox3.7 lentiviral vectors expressing short hairpin RNA (shRNA) against PPARγ and transduced NSCs. MTT absorbance and cell counts were used to assay cell growth, and cell differentiation was analysed by confocal laser-scanning and western blots for the expression of MAP2/nestin. The protein and gene expression of the BDNF-CREB pathway components were examined by western blotting and real-time PCR.

Results

Immunoblot analysis indicated that shRNA delivered by lentiviral vectors silenced PPARγ expression in NSCs. The proliferation of NSCs and expression of BDNF pathway components dropped in AGE-BSA culture medium (400 mg/L and 200 mg/L) on Day 3 and Day 7, respectively (all P < 0.001). PPARγ-silenced NSCs exhibited a significant increase in cell growth and expression of BDNF pathway components compared with NSCs incubated with AGE-BSA (all P < 0.001). Immunocytochemistry and western blotting analysis showed that AGE-BSA (400 mg/L) induced a significant decrease in the expression of MAP2 both in NSCs and PPARγ-silenced NSCs, as standardised by nestin. There was no significant difference between NSCs and PPARγ-silenced NSCs in the presence of AGE-BSA.

Conclusions

PPARγ plays roles in the AGE-mediated regulation of NSC proliferation but not neural differentiation through the BDNF-CREB pathway.     

糖尿病大鼠肾组织AGEs、MDA等生化指标变化与糖尿病肾病的关系研究

目的探讨糖尿病大鼠血糖及肾组织中糖基化终末产物（AGEs）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）等生化指标的变化与糖尿病肾病（DN）的发生关系。方法采用腹腔注射链脲佐茵素建立糖尿病大鼠模型,观察其血糖、肾功能和肾组织中AGEs、MDA、SOD等的变化。结果糖尿病大鼠空腹血糖、尿蛋白、血肌酐、尿素氮及AGEs、MDA明显增高,而体重、肌酐清除率、肾组织SOD活力显著下降。结论糖尿病大鼠的持续高血糖,引起肾脏的氧化应激和非酶糖基化反应增强,与DN的发生和发展密切相关。