临床分离产AmpC β-内酰胺酶阴沟肠杆菌的耐药性分析

目的研究我院临床分离阴沟肠杆菌的产AmpC酶耐药情况及ampC基因型。方法收集临床分离的耐药阴沟肠杆菌15株；检测产AmpC酶和超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）的菌株；测定MIC值；PCR扩增检测ampC基因及序列测定。结果15株菌中8株菌（53．3％）产AmpC酶，3株菌（20．0％）产ESBLs。产AmpC酶的菌株除对亚胺培南全敏感外。对其它抗菌药不同程度耐药。ampC基因与阴沟肠杆菌ECLC074的ampC基因高度同源。结论产AmpC酶是阴沟肠杆菌对阻内酰胺类抗生素耐药的主要机制之一。阴沟肠杆菌ECLC074 ampC基因是我院主要的阴沟肠杆菌ampC基因型。产AmpC酶的阴沟肠杆菌常呈多重耐药，亚胺堵南是治疗此类菌所致感染的最有效药物。     

阴沟肠杆菌产β-内酰胺酶的研究进展

阴沟肠杆菌产β-内酰胺酶是对β-内酰胺类抗生素耐药的主要机制,所产β-内酰胺酶种类较多、特性各异,并在β-内酰胺类抗生素广泛应用的选择压力下,不断有新的β-内酰胺酶产生.文中对阴沟肠杆菌产β-内酰胺酶(EsBLs、AmpC、碳青霉烯酶)耐药性的研究进展作了简要综述.     

产AmpC酶阴沟肠杆菌耐药的基础与临床

目的 对四川大学华西医院阴沟肠杆菌产AmpC酶菌株的检出率、耐药性及ampC结构基因序列进行分析．探讨阴沟肠杆菌产AmpC酶菌株的耐药性及临床特点。方法 采用琼脂稀释法对临床标本中分离的阴沟肠杆菌进行产AmpC酶株的筛选，用酶粗提物头孢西丁三维试验结合PCR法检测AmpC酶．并测定产AmpC酶菌株对9种抗菌药物的MIC值。对3株高度耐药阴沟肠杆菌产AmpC酶的结构基因和1株敏感菌进行PCR扩增并对产物序列进行分析，测序的菌株与E。cloacae p99进行核苷酸序列比较和推导的氨基酸序列比较。结果 阴沟肠杆菌产AmpC酶株的检出率为24．6％。产AmpC酶菌株多呈多重耐药，产AmpC酶耐药菌对9种抗菌药物的耐药率由高至低为头孢西丁、头孢噻肟、阿米卡星、氨曲南、头孢他啶、头孢哌酮／舒巴坦、环丙沙星、头孢吡肟、亚胺培南。阴沟肠杆菌耐药株ampC结构基因的核苷酸序列与E.cloacae p99的同源性为99％．推导的氨基酸序列仅Ala-58→Pro发生点突变。结论 四川大学华西医院阴沟肠杆菌产AmpC酶细菌检出率较高。产AmpC酶细菌多呈多重耐药，亚胺培南是治疗产AmpC酶细菌感染的较可靠的药物。阴沟肠杆菌产AmpC酶是其对β-内酰胺类抗生素耐药的原因之一，其ampC结构基因突变可能与其耐药性有关。     

同时产CTX-M-22及TEM-1型β-内酰胺酶的阴沟肠杆菌耐药性分析

目的 了解临床分离阴沟肠杆菌株EC003产β-内酰胺酶的耐药特征和基因型。方法采用琼脂二倍稀释法对阴沟肠杆菌EC003进行MIC检测，酶提取物三维实验检测AmpC酶，双纸片法筛选及确证实验检测超广谱β-内酰胺酶（ESBLs），等电聚焦（IEF）电泳测定其等电点。以耐药质粒为模板进行PCR扩增，将β-内酰胺酶全编码基因克隆、表达，并对其扩增产物进行DNA序列测定和同源性分析。结果阴沟肠杆菌株EC003对所试多数β-内酰胺类抗生素耐药，表型检测AmpC酶为阴性。ESBLs阳性，IEF显示该菌产两种p1分别为8．7及5．4的β-内酰胺酶。PCR扩增产物DNA测序证实为CTX-M-22、TEM-1型β-内酰胺酶全编码基因，产TEM-1的克隆菌株仅对青霉素类耐药，产CTX—M-22的克隆菌株对所试多数β-内酰胺类抗生素耐药。对头孢噻肟的水解程度明显强于头孢他啶。结论临床分离阴沟肠杆菌株EC003同时产CTX—M-22和TEM-1型两种β-内酰胺酶，可导致对多数β-内酰胺类抗生素耐药。     

阴沟肠杆菌耐药性分析

<正>阴沟肠杆菌产Ⅰ型头孢菌素(AmpC)酶是导致其对新型广谱β内酰胺类抗生素产生耐药性的重要原因。AmpC酶多数由染色体介导[1],但近年来陆续发现了数十种质粒定位的AmpC酶,由于质粒介导AmpC耐药基因可在同种或不同种属细菌间广泛播散,给临床抗菌治疗带来困难,已引起广泛     

阴沟肠杆菌感染154例耐药性分析

目的分析阴沟肠杆菌耐药机理及现状,指导临床合理应用抗生素。方法收集医院分离到的154株阴沟肠杆菌,采用湖南天地人生物科技公司提供的微生物生化药敏卡进行药敏检测;用双纸片协同扩散法检测超广谱β-内酰胺酶;通过改良酶提取物头孢西丁和头孢曲松三维试验检测AmpC。结果阴沟肠杆菌对临床常用抗生素呈高度耐药;产酶株的耐药性明显高于非产酶株,耐药现象在同时产AmpC酶和ESBLs菌株中尤为严重,96%菌株对亚胺培南敏感。结论阴沟肠杆菌感染的治疗可根据药敏选用氨基糖苷类及喹诺酮类药物,感染严重者可采用碳青霉烯类抗生素。     

阴沟肠杆菌的感染部位与耐药特性

目的：研究阴沟肠杆菌的感染部位及耐药特性，指导临床合理运用抗生素。方法：用K—B纸片扩散法对从临床各部位标本中分离出的122株阴沟肠杆菌作20种抗生素的药敏试验。结果：阴沟肠杆菌的感染部位广泛，以呼吸道感染率最高，达51．6％；122株阴沟肠杆菌对头孢霉素类抗生素、β—内酰胺类抗生素、含β—内酰胺酶抑制剂类抗生素以及对氨基糖甙类抗生素等的耐药率较高，对氟喹诺酮类及四代头孢菌素等抗生素表现出较低的耐药率，对碳青霉烯类抗生素表现出极低的耐药率。结论：阴沟肠杆菌的感染部位广泛，对呼吸道的感染率最高；阴沟肠杆菌对临床常用的抗生素表现为高耐药和多重耐药；环丙沙星、左氟沙星、头孢吡肟等抗生素可作为治疗其感染的首选药物，亚胺培南可作为二线用药来治疗其混合感染及其高耐药菌株的感染。     

阴沟肠杆菌β内酰胺酶基因检测

目的 明确浙江湖州解放军第98医院临床分离的阴沟肠杆菌中β内酰胺酶基因存在状况.方法 采用ATB药敏试验板微量肉汤法测定临床分离的20株阴沟肠杆菌对20种抗菌药物的敏感性,采用聚合酶链反应技术检测质粒型AmpC MIR及DHA、TEM、SHV、CTX-M和OXA β内酰胺酶基因.结果 该20株菌对亚胺培南和美罗培南均敏感,头孢吡肟敏感率为40.0%,对其他β内酰胺类抗生素的耐药率在80.0%～100.0%之间.MIR、DHA和TEM基因的阳性株数（%）分别为17株（85.0%）、1株（5.0%）和14株（70.0%）,而SHV、CTX-M和OXA基因均阴性.结论 临床分离的阴沟肠杆菌中质粒型AmpC MIR及TEM型β内酰胺酶基因携带率很高,在阴沟肠杆菌中检出质粒型AmpC MIR基因为国内首次报道.     

产AmpC酶和ESBLs酶阴沟肠杆菌的耐药性分析

近年来随着广谱抗生素的大量使用,阴沟肠杆菌的耐药率呈上升趋势,而产AmpCβ内酰胺酶（AmpC酶）和超广谱β-内酰胺酶（ESBLs酶）是阴沟肠杆菌重要的耐药机制给。因此,笔者对唐山市工人医院2007年1月至2009年12月分离出阴沟肠杆菌的临床分布及耐药性进行分析,为临床合理应用抗生素提供依据。     

阴沟肠杆菌产超广谱β—内酰胺酶情况及耐药性监测

超广谱β-内酰胺酶是一类对包括第三代头孢菌素及氨曲南在内的β-内酰胺类抗生素具有水解作用的酶，由质粒介导的大多数肠杆菌科细菌均可产生ESBLs，常见于大肠埃希氏菌和肺炎克雷白氏菌，亦可见于阴沟肠杆菌，弗劳地枸橼酸杆菌，大多源于TEM-1，TEM-2和SHV-1的突变。为了解我院阴沟肠杆菌产超广谱β-内酰胺酶情况及耐药状     

阴沟肠杆菌去阻遏持续高产AmpC酶和超广谱β—内酰胺酶（ESBLs）的检测

目的：去阻遏持续高产AmpC酶,或产生超广谱β-内酰胺酶（ESBLs),或同时高表达这两类酶,是阴沟肠杆菌对多种β-内酰胺类抗生素耐药的主要机制。方法：建立了一种改良的酶提取物三维试验法,在常规NCCLS纸片扩散法基础上接种大肠杆菌ATCC25922,在头孢西叮药敏纸片周围放射性切出琼脂小槽,待测菌的粗酶提取物在槽内扩散,与头孢西叮纸片扩散相交。结果：由于AmpC酶水解头孢西叮,出现抑菌圈内生长细菌,这一现象能被加入槽内的邻氯活性,同样用头孢曲松取代头孢西叮纸片,用邻氯西林抑制槽内AmpC酶,可测出ESBLs,使用该法检测分别产AmpC酶、ESBLs的标准株和24株临床分离多重耐药的阴沟肠杆菌。结果各种标准株检测无误。24株阴沟肠杆菌中,14株去阻遏持续高产AmpC酶试验阳性,4相提并论产ESBLs试验阳性,5株此两类酶检测均阳性,1株此两类酶检测均阴性,原因待分析。结论：对于阴沟肠杆菌。这种改良的酶提取物三维试验法能较好地鉴别持续高产AmpC酶和ESBL的阴沟肠杆菌,并适用于临床常规检验。     

阴沟肠杆菌Amp C酶的特性研究

本文对阴沟肠杆菌ＡｍｐＣ酶进行了以下５个方面研究。其内容和结果分别为：（１）联合药敏实验：用平皿二倍稀释法研究第四代头孢菌素头孢吡肟,第三代头孢菌素头孢他啶、头孢噻肟、头孢呋辛与－β－内酰胺酶抑制剂舒巴坦联合对３４株头孢他啶耐药菌,６株头孢他啶中敏菌及１５株头孢他啶敏感菌的体外抗菌活性。结果表明舒巴坦使头孢他啶对３２．７％（１８／５５）的阴沟肠杆菌的抗菌作用有明显抗菌增效作用。９６．４％（５３／５５）的阴沟肠杆菌对第四代头孢菌素头孢吡肟敏感。（２）酶稳定性实验：紫外测定法测定４株标准菌和６株临床分离菌产生的ＡｍｐＣ酶对β－内酰胺类抗生素的水解率。结果表明阴沟肠杆菌产生的β－内酰胺酶对第一代头孢菌素头孢唑林、头孢氨苄,第二代头孢菌素头孢克洛,第三代头孢菌素头孢哌酮及青霉素、氨苄西林、哌拉西林的水解率高,对第二代头     

Thr70残基替换对阴沟肠杆菌AmpC酶底物特性的影响

目的：研究阴沟肠杆菌AmpC酶第70位苏氨酸(Thr)残基突变对其底物特性的影响。方法：PCR(聚合酶链反应)法克隆野生型ampC基因，PCR定点突变法在野生型ampC基因上构建点突变，使野生型AmpC酶的第70位Thr分别被异亮氨酸(I1e)、天冬酰胺(Asn)或丝氨酸(Ser)替换。琼脂稀释法测定β—内酰胺抗生素对各重组菌的最低抑菌浓度(MIC)，紫外分光光度法测定野生型或突变型AmpC酶对β-内酰胺抗生素的相对水解率。结果：Thr70被Asn或Ser替换对阴沟肠杆菌AmpC酶的底物特性没有明显影响，也没有改变重组菌的耐药特性；Thr70被I1e替换后，AmpC酶对头孢呋辛、头孢他啶和头孢噻肟的的相对水解率分别升高了约120倍、4倍和6倍，并使头孢呋辛对重组菌的MIC增加了16倍。结论：Thr70替换为I1e可以增强阴沟肠杆菌AmpC酶对氧亚氨基头孢菌素的水解活性，其机制可能与Thr70和G1n219之间的氢键连接因突变消失有关。     

阴沟肠杆菌AmpC酶的检测及耐药性分析

目的了解阴沟肠杆菌ESBLs和AmpC酶的产生情况及对临床常用抗生素的耐药特征,为临床治疗提供选药参考。方法应用VITEK-60型全自动细菌鉴定仪鉴定细菌,按NCCLS推荐的确证试验测定ESBLs和K-B纸片法测定药敏结果,采用头孢西丁纸片扩散法对阴沟肠杆菌进行产AmpC酶菌株筛;选,并用酶粗提物进行三维试验确证产AmpC酶菌株。结果阴沟肠杆菌产AmpC酶菌株的检出率为6.19%,并且所检测的7株产AmpC酶的阴沟肠杆菌均为同产ESBLs,目前,我们还未检测到单产AmpC酶菌株。AmpC酶阳性菌株与AmpC酶阴性菌株药敏结果显示：前者大多对头孢西丁、头孢唑啉、氨苄西林、哌拉西林、庆大霉素、阿米卡星、环丙沙星呈高度耐药,而后者大多对上述药物敏感,两者有显著性差异（均P〈0.05）。头孢他啶、头孢噻肟、氨苄西林/舒巴坦、头孢哌酮/舒巴坦呈中度耐药。两者对亚胺培南、头孢吡肟、哌拉西林/他唑巴坦均为敏感。结论玉环地区阴沟肠杆菌产AmpC酶细菌检出率较高。产AmpC酶菌株多呈多重耐药;亚胺培南、头孢吡肟、哌拉西林他唑巴坦是治疗产AmpC酶菌株感染的较可靠药物。     

阴沟肠杆菌超广谱β-内酰胺酶、AmpC酶基因检测及耐药性分析

目的了解阴沟肠杆菌超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）和AmpC酶的产生情况，研究β-内酰胺酶的基因型别，并分析产酶特性和耐药表型的相关性。方法用酶提取三维试验检测ESBLs和AmpC酶，聚合酶链反应（PCR）扩增β-内酰胺酶的基因；VITEK全自动药敏分析系统和KB法检测细菌耐药性。结果101株阴沟肠杆菌中，检出ESBLs阳性株39株，高产AmpC酶阳性株53株，其中16株ESBLs和AmpC酶均阳性，非产酶菌25株；12株AmpC酶阳性菌中，7株扩增出blaDHA。基因，8株扩增出6laMIR基因，其中5株同时携带blaDBA．和blaMIR基因，1株同时携带blaMIR和blaFOX基因，4株三维试验阴性菌株blaMIR基因阳性；16株ESBLs阳性菌中，8株扩增出blaTEM基因，2株ESBLs三维试验阴性菌株blaTEM基因阳性，未检出blaSHV基因。阴沟肠杆菌对多种抗生素高度耐药，产酶菌株的耐药性明显高于非产酶株。结论阴沟肠杆菌中ESBLs和AmpC酶检出率均很高，AmpC酶以blaDHA、blaMIR基因型为主。产ESBLs和AmpC酶是阴沟肠杆菌耐药的主要原因。     

ESBLs在大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和阴沟肠杆菌中的检出率及耐药情况比较

目的检测我国大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和阴沟肠杆菌中超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)产生及耐药情况。方法对2000-2001年中国细菌耐药监测研究所收集的来自9座城市13家医院的大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和阴沟肠杆菌采用平皿二倍稀释法测定抗菌药物对各种致病菌的MIC值，计算MIC50与MIC90，并按NCCLS2002规定的临界浓度，求出各类细菌对所测定的各种抗菌药物的耐药率(R％)。以纸片扩散法确证试验检测产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌，以三维试验检测产ESBLs和AmpC酶的阴沟肠杆菌。结果在总共341株大肠埃希菌和212株肺炎克雷伯菌中共检测到产ESBLs菌100株，检出率18．1％(100／553)。其中产ESBLs大肠埃希菌63株，检出率18．5％(63／341)；产ESBLs肺炎克雷伯菌37株，检出率17．5％(37／212)。产ESBLs菌株对β-内酰胺类抗生素的耐药率明显高于非ESBLs菌株。酶抑制剂联合制剂头孢哌酮／舒巴坦、第四代头孢菌素头孢吡肟和碳青霉烯类对产ESBLs菌株有较好作用。81株阴沟肠杆菌中，28株产ESBLs，检出率34．6％；31株产AmpC酶，检出率38．3％；14株同时产生此二类酶，检出率17．3％。在对头孢曲松中介的14株阴沟肠杆菌中，AmpC酶检出率为42．9％(6／14)，而ESBLs的检出率高达92．9％(13／14)，是AmpC酶检出率的两倍多。但在对头孢曲松耐药的27株阴沟肠杆菌中．情况刚好相反，AmpC酶的检出率为88．9％(24／27)，是ESBLs检出率(40．7％，11／27)的两倍多。头孢噻肟中介和耐药株中两酶的检出情况与头孢曲松相似。头孢他啶只有1株中介株，耐药株中AmpC酶检出率(78．4％，29／37)约是ESBLs检出率(56．8%，21／37)的1．4倍。若将敏感和中介株合并计算可见，头孢他啶敏感和中介株中两酶的检出率明显低于头孢曲松和头孢噻肟。结论①细菌耐药研究显示ESBLs在大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中的检出率为18．1％；②ESBLs在我国阴沟肠杆菌中有很高的检出率；③在阴沟肠杆菌中，对头孢曲松和头孢噻肟中介的菌株，以产ESBLs为主，而耐药菌株以产AmpC酶为主。     

AmpC酶和超广谱β-内酰胺酶研究进展及临床治疗对策

产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)和头孢菌素酶(AmpC酶)是革兰阴性杆菌对β-内酰胺类抗生素耐药的主要机制.AmpC酶是对第三代头孢菌素耐药而不能被β-内酰胺酶抑制剂所抑制,有染色体介导的AmpC酶和质粒介导AmpC酶,前者分诱导表达和非诱导表达,后者可随耐药质粒复制、接合、转化及转座子移位,在革兰阴性杆菌内或种间传播.ESBLs是由质粒介导的能水解大多数青霉素、头孢菌素和氨曲南等β-内酰胺类抗生素且活性能被酶抑制剂抑制的一类β-内酰胺酶,主要由肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌产生,也可由其它肠杆菌科细菌、不动杆菌属、铜绿假单胞菌产生.碳青霉烯类抗生素是治疗产AmpC酶和ES-BLs革兰阴性杆菌感染的首选药物.     

阴沟肠杆菌去阻遏持续高产AmpC酶和超广谱β-内酰胺酶的检测及耐药性调查

目的 检测华中科技大学同济医学院附属协和医院临床标本中分离的阴沟肠杆菌产AmpC和ESBLs的情况,同时表达这两类酶的现状及耐药性,指导医生临床用药.方法 采用改良的酶提取物三维试验法,检测该院2006年05月至2007年4月临床分离的89株阴沟肠杆菌去阻遏持续高产AmpC和ESBLs的情况.结果 在89株阴沟肠杆菌中35株单产AanpC,占39.3%,38株单产ESBLs,占42.7%;12株两酶均产,占13.5%.结论 该院临床分离的阴沟肠杆菌产耐药酶的情况不容忽视,应引起高度重视.医院感染阴沟肠杆菌在临床科室的检出主要以外科呼吸道和皮肤软组织为主,医院感染阴沟肠杆菌的耐药性明显偏高于非院内感染.医院感染阴沟肠杆菌产EsBLs的分离率高,耐药率也较高,应针对它的易感因素,合理用药,防止该菌引起的医院感染.     

阴沟肠杆菌高产AmpC酶基因检测及分子流行病学研究

目的研究医院阴沟肠杆菌高产AmpC酶及分子流行病学特征。方法采用KB法药敏试验，双纸片增效试验和酶提取物三维试验检测阴沟肠杆菌高产AmpC酶，聚合酶链反应检测AmpC酶基因、ERIC-PCR，研究昆明市第一人民医院2002年7月～2004年12月临床分离的84株阴沟肠杆菌的耐药性、AmpC酶基因型和克隆传播状况。结果表型初筛试验和ESBLs确认试验，高产AmpC酶检出率为27．38％（23／84），ESBLs检出率16．67％（14／84），同时高产AmpC酶和ESBLs检出率44．05％（37／84）。AmpC酶基因检出率43．75％（28／64）。三维试验高产AmpC酶检出率为47．62％（40／84）。克隆传播分析，结果发现菌株编号EC2和EC11、EC13和EC14、EC19和EC20分别具有相同的DNA指纹图，其余菌株间未见DNA指纹图。结论阴沟肠杆菌的耐药性较为复杂。表现出去阻遏高产AmpC酶、产ESBLs、同时产AmpC酶和ESBLs和质粒AmpC酶多种耐药表型。分子流行病学结果显示，虽然阴沟肠杆菌的传播与抗生素的诱导和选择作用、患者机体抵抗力下降及肠道内寄居菌的内源性感染等因素有关，但仍然要警惕医院感染的发生。     

呼吸内科产AmpC酶阴沟肠杆菌感染的耐药性分析

目的观察分析呼吸内科产AmpC酶阴沟肠杆菌感染的耐药性,总结其临床意义。方法选取我院2009年7月至2011年7月呼吸内科阴沟肠杆菌感染的患者,分离出阴沟肠杆菌共172株,设为观察组;再选取非呼吸内科阴沟肠杆菌感染的患者,分离出阴沟肠杆菌共238株,设为对照组,观察比较两组的药敏试验结果、感染部位及感染的病区分布情况。结果观察组172株菌株中,产AmpC酶率为47.1%(81/172);对照组238株菌株中,产AmpC酶率为17.6%(42/238),两组菌株的产AmpC酶率比较存在明显差异(χ2=19.88,P<0.01),具有统计学意义。结论呼吸内科产AmpC酶阴沟肠杆菌感染率显著高于其他科室,因此,需要给予高度重视,同时呼吸内科产AmpC酶阴沟肠杆菌感染的耐药性明显。