肽和蛋白质类药物的给药系统(Ⅱ)

<正>3 蛋白质─聚合物共轭体 重组蛋白因缺乏糖基而使其溶解性和稳定性较差,并且有抗原性,与以聚乙二醇（PEG）为代表的水溶性聚合物通过共价键形成轭合物后,轭合物的性质较之未经修饰的原物质有很大改善,溶解度提高,稳定性增强,生物半衰期延长,毒副作用（免疫原性和过敏反应）降低甚至消除,疗效提高,因此在临床上得到应用。 白细胞介素-2经PEG修饰后的轭合物以适当的剂量和方式给药,可以延长血液中IL-2活性达到最大值的时间,延长循环寿命,减轻免疫原性,提高治疗指数和疗效。PEG-天冬酰胺酶轭合物的半衰期较之天然酶延长了17倍,免疫原性也有所降低,治疗指数得以提高。用PEG修饰,在临床上得到应用的酶还有:SOD（超氧化物歧化酶）、ADA（腺苷脱氨酶）、尿酸酶等,都表现出相似的特性。     

超氧化物歧化酶的化学修饰进展

超氧化物歧化酶是生物体内能清除超氧阴离子自由基的一类重要酶,具有重要的生理功能和广泛的应用前景。化学修饰的方法可以提高其稳定性,改善酶的药学性质。本文简要综述了超氧化物歧化酶活性部位酪氨酸,组氨酸的化学修饰;重点综述了生物活性物质,药用辅料,二酶缀合物对非活性部位的化学修饰,以及相关病理研究。评价了这些修饰反应的特点和结果 ,并对其研究前景进行了展望。     

单甲氧聚乙二醇化学修饰药物酶的研究进展

用单甲氧基聚乙二醉(1)化学修饰药物酶是生化药物研究开发的重要手段之一。本文综述了1化学修饰药物酶的一般方法及修饰后酶在生物和理化性质方面的变化，同时对1研究前景进行展望，并指出了尚待解决的问题。     

胰岛素与药用多聚物的相互作用问题

根据许多研究证明,在医药实践中应用水溶性药用多聚物作为解毒剂、血浆代用品以及药物的延效剂是无害的,而且具有显著效果;同时在一定条件下由于多聚物的存在,可使胰岛素的降血糖作用得以延长,而且多聚物的浓度并不大(每100单位胰岛素用1.4～2.1毫克)。胰岛素的延长效果不仅是多聚物中分子量部份、即使是低分子量部份均可保证。值得注意,多聚物从机体排出速度是与其浓度及分子量成反比。经研究创制了以多聚物为母体的长效胰岛素如“Insulindez”(作用延续时间为10～14小时)和“Insulincridez”(作用延续时间为     

聚乙二醇前药设计原理与应用研究进展

聚乙二醇（polyethylene glycol,PEG）目前被广泛应用于肿瘤药物的修饰,当与药物分子偶联时,可以将其优良性质赋予修饰后的药物分子,改变药物的溶解性,在其修饰的药物周围产生空间屏障,减少药物的酶解,避免药物在肾脏的代谢中很快被消除,同时能被动靶向肿瘤细胞,降低药物毒性。聚乙二醇是中性、无毒且具有独特理化性质和良好生物相容性的高分子聚合物,也是经美国食品药物管理局（FDA）批准的极少数能作为体内注射给药的合成聚合物之一,已得到市场的认可。该文综述了近几年聚乙二醇修饰的前药研究进展,且就聚乙二醇修饰的原理、设计、运用及面临的挑战进行了论述。     

蛋白质和多肽类药物分子化学修饰的研究进展

目的蛋白质、多肽等药物分子免疫原性和毒副反应的存在及体内作用时间短等问题限制了其应用 ,这可以通过化学修饰部分或全部加以克服。随着生物大分子构效关系逐步得到揭示 ,生物大分子化学修饰的研究迅速发展。此文对蛋白质、多肽等药物分子化学修饰的国内外研究现状和发展动态加以评述 ,包括化学修饰原理、化学修饰方法、修饰后药物分子的应用等     

蚯蚓纤溶酶化学修饰的研究

以三聚氰氯为活化剂，采用活化聚乙二醇(PEG)对环毛蚯蚓纤溶酶进行化学修饰，优化了修饰条件，得到了PEG-EFE的加合物(修饰酶)，并研究了PEG-EFE的部分酶学性质。修饰酶的活力为天然酶的85％，结果表明酶的活性中心基本保持不变。对修饰酶的残留氨基测定表明，70％的可滴定氨基参加了反应，且EFE的活性改变较小，可以推测PEG是连接在蛋白质表面上的。     

不同分子量美沙拉嗪PEG修饰物的大鼠在体肠吸收研究

目的对系列分子量的美沙拉嗪PEG修饰物(5-ASAm PEG)的大鼠肠道吸收动力学特征进行考察。方法采用单向灌流技术考察5-ASA-m PEG的大鼠在体肠吸收性质,以高效液相色谱法测定灌流液中药物的浓度。结果考察范围内药物浓度及药物吸收部位对药物吸收速率常数(K_a)和表观吸收系数(P_(app))无显著性影响。灌流速度及5-ASAm PEG分子量在考察范围内对K_a及P_(app)具有明显影响。结论5-ASA-m PEG修饰物在全肠道均有吸收,无明显吸收特定部位,初步判定其吸收机制为被动扩散;随5-ASA-m PEG分子量提高,其肠道吸收呈下降趋势,表明PEG修饰能够抑制5-ASA的肠道吸收过程。     

聚乙二醇化学修饰的重组L-门冬酰胺酶对小鼠白血病细胞P388的抑制作用

目的 :考察聚乙二醇 (polyethyleneglycol,PEG)化学修饰的重组L 门冬酰胺酶 (recombinantL asparaginase ,rL ASP)的抗肿瘤活性。方法 :PEG化学修饰rL ASP ,获得的化学修饰酶 (polyethylenegly colmodifiedrecombinantL asparaginase ,rL ASP PEG)利用十二烷基硫酸钠 聚丙烯酰胺凝胶电泳法 (sodi umdodecylsulfatepolyacrylamidegelelectrophoresis ,SDS PAGE)观察其分子大小变化 ,四甲基偶氮唑盐(3 (4 ,4 dimcthylthioazol 2 yl) 2 ,5 diphenyl tetrazoliumbromide ,MTT)法和流式细胞仪 (flowcytometer,FCM )检测rL ASP PEG对体外培养的小鼠白血病细胞P3 3 8增殖作用的抑制作用 ,腹腔给药考察rL ASP PEG对小鼠移植性实体瘤P3 3 8抑瘤效果 ,透射电镜(transmissionelectronmicroscopy ,TEM )观察rL ASP PEG引起的肿瘤组织超微病理变化。结果 :SDS PAGE显示 ,rL ASP PEG的分子量大于rL ASP ;MTT实验表明 ,rL ASP PEG能抑制体外培养的小鼠P3 88白血病细胞的增殖 ,半数有效浓度 (inhibitoryconcen tration 5 0 % ,IC50 )为 2 .0 5 6IU·ml-1。FCM结果表明 ,rL ASP PEG主要将肿瘤细胞P3 88抑制在G0 G1期 ,S期细胞减少。DBA 2荷瘤小鼠的抑瘤实验表明rL ASP PEG对移植性实体瘤P3 3 8有显著抑制作用 ,P值     

聚乙二醇修饰小分子药物的研究进展

聚乙二醇修饰技术是目前药物化学修饰的研究热点,它能够显著提高药物分子水溶性,同时改善药物的药动学和药效学特性,增加了药物临床应用的范围和疗效,具有较好的开发应用前景;但同时也存在诸多问题,有待改进,目前在国内研究相对较少,值得进一步研究开发。本文从聚乙二醇修饰技术被修饰的小分子药物种类、连接臂类型、聚乙二醇载体以及修饰后药物药动学性质和药效学性质改变等方面进行系统综述。     

壳聚糖-半胱氨酸轭合物对胰岛素酶降解和降血糖作用的影响

目的研究壳聚糖-半胱氨酸轭合物对胰岛素消化酶降解的抑制作用,及其对胰岛素口服降血糖的促进作用.方法合成壳聚糖-半胱氨酸轭合物,体外实验考察其对α-糜蛋白酶和胰蛋白酶降解胰岛素的抑制作用.O1/O2乳化溶剂挥发法制备胰岛素肠溶微球,考察壳聚糖-半胱氨酸轭合物对胰岛素溶液和肠溶微球大鼠灌胃后降血糖作用的影响.结果所合成的壳聚糖-半胱氨酸轭合物巯基含量为200μmol·g-1polymer,体外实验对酶降解胰岛素有明显的保护作用:不加壳聚糖-半胱氨酸轭合物的对照组胰岛素溶液可分别在1 h和5 h内被α-糜蛋白酶和胰蛋白酶完全降解;含4mg·mL-1轭合物的同浓度的胰岛素溶液在相同浓度的酶溶液中经过相同时间,胰岛素剩余量均大于75%.所制备的胰岛素肠溶微球载药量7%,大鼠灌胃给予壳聚糖-半胱氨酸轭合物85 mg·kg-1,可增强胰岛素溶液或肠溶微球的口服降血糖作用.结论壳聚糖-半胱氨酸轭合物对胰岛素口服制剂降血糖作用的增强可能与其酶抑制作用有关.     

几种因素在L-天冬酰胺酶化学修饰中对酶活力及抗原性的影响

为了寻求在较好地保持酶活力的同时解除L-天冬酰胺酶抗原性的方法,采用不同分子量的乙酸酐、右旋糖酐和单甲氧基聚乙二醇,作为修饰剂和不同的修饰方法对该酶进行了化学修饰。结果表明在保持酶活性和降低抗原性方面,大分子修饰剂右旋糖酐、单甲氧基聚乙二醇优于小分子乙酸酐,底物保护修饰优于直接修饰;活化PEG,优于活化PEG₁。在底物保护下的PEG,修饰酶其抗原性完全解除的同时,酶活力保持在30%以上。     

聚乙二醇-聚左旋赖氨酸共聚物生物降解性的研究

目的:研究非病毒基因载体聚左旋赖氨酸(PLL)及其聚乙二醇(PEG)修饰共聚物的生物降解性。方法:将合成的不同分子量的PLL及PEG-PLL共聚物,采用体外酶解试验,用乌氏黏度计测定不同分子量的PLL及其共聚物在不同浓度胰蛋白酶作用下的增比黏度(ηsp)并考察其变化以评价聚合物结构与其生物降解性之间的关系。结果:所合成的PEG-PLL共聚物在胰蛋白酶作用下能有效地催化其生物降解,酶解反应速度与酶浓度成线性关系(R2=0.9775)。另随着PLL分子量的增加,酶解速度降低;而随着PEG含量的增加,酶解速度加快。结论:PLL的分子量及用于修饰的PEG的量对PEG-PLL共聚物生物降解性具有一定的影响。     

重组L-门冬酰胺酶的聚乙二醇化学修饰及修饰后酶的稳定性研究

目的单甲氧基聚乙二醇 (mPEG)化学修饰大肠杆菌重组L 门冬酰胺酶 (L ASP) ,考察经过修饰的酶的稳定性。方法N 羟基琥珀酰亚胺 (NHS)活化酯法活化mPEG ,生成的单甲氧基聚乙二醇琥珀酰琥珀酸亚胺酯 (SS mPEG)按不同摩尔比例与L ASP偶联 ,确定适合的反应时间和反应pH值。通过聚乙二醇化学修饰后的酶 (L ASP PEG) ,酶活力和纯度通过奈氏法和丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)检测 ,高效液相色谱检测L ASP PEG相对分子质量并考察了L ASP PEG体外稳定性等。结果SDS PAGE显示mPEG已经偶联到L ASP分子上 ,以两者摩尔比 1 0∶1为最佳 ,反应pH条件为 8.5 ,获得的L ASP PEG平均比活单位为 6 4 .8IU/mg ,相对分子质量为 30 1 80 0 ,体外稳定性高于L ASP。结论此实验确定了mPEG化学修饰L ASP最佳反应条件为 2 5℃反应 30min ,两者投料摩尔比为 1 0∶1 ,获得的L ASP PEG比L ASP稳定性高     

多聚物-药物偶合物的研究及应用进展

多聚物-药物偶合物由含有功能基团、具有较大相对分子质量的药物修饰多聚物与药物,包括蛋白质类药物、寡核苷酸类药物及化学抗癌药物通过化学键定点相连而形成。由于药物修饰多聚物的介入及参与,多聚物-药物偶合物与所连接的原药物相比,可显示抗酶解能力增强、稳定性提高、体内代谢半衰期延长、对肿瘤细胞膜的透过性增加、在肿瘤部位浓集、药性释放平缓、毒副作用降低等特点。多聚物-药物偶合物的研发正成为高效低毒新型药物研发的重要方向。     

高效氨茶碱栓剂的设计

作者发现,用脂溶性基质制备的氨茶碱或其水溶性衍生物的栓剂,在治疗过程中很难达到有效的血药浓度(10～20μg/ml)。本文目的是设计一种释药迅速和完全的氨茶碱栓剂。实验测得无水氨茶碱和含有1分子结晶水的氨茶碱的溶解速度分别为1.158和1.091mg/cm~(-2)/min~(-1);无水氨茶碱于37°时在水中溶解度为11.03mg/ml~(-1)。由于脂溶性基质的氨茶碱生物利用度低,作者乃选用PEG等水溶性基质。选择PEG的原则为:①能溶解药物;②能使药物很易释放。为达到这个目的,作者测定不同分子量的PEG和可可豆脂的介电常数,得出PEG分子量愈高,介电常数愈低,分子量低介电常     

可逆性硅烷键前药

Harper 用术语“药物潜伏化”描述前药的原理,后由Kupchan 等修改其定义为:一种生物活性化合物通过化学修饰形成的新化合物,在体内经酶促或非酶促攻击,释出母体化合物而产生药理反应。Von Daehme 等证实,特戊酰氧甲基氨苄青霉素在体内可吸收和迅速重新     

酶疗法的疑难问题和解决办法

酶是很好的治疗药物。只要极少量就能在生理 pH 及体温下迅速产生巨大的、非常专一的效应。至今已有许多应用。起初是蛋白水解酶和其他水解酶的局部应用或粗制品口服。后来用高纯度的酶治疗癌、凝血紊乱、遗传病、炎症、消化障碍、药物中毒和肾功不良。近十年来,已发展了许多技术来改进酶的治疗性质,如:1.可溶性化学修饰;2.不溶性化学修饰或固定在表面上;3.将酶包埋入生物可降解的或惰性物质的胶囊中。辅因     

HPLC法测定5-氟尿嘧啶-甲酰-果胶轭合物的载药量

采用HPLC测定5-氟尿嘧啶-甲酰-果胶轭合物载药量,对5-氟尿嘧啶-甲酰-果胶轭合物进行质量控制.色谱柱:Inertsil ODS-3,流动相:水(含0.15%三乙胺和0.15%乙酸)-甲醇(95∶5,v/v),紫外检测波长:265nm.线性范围为0.1～150μg·mL-1,r=0.9999(n=5).平均回收率为99.9%,RSD=1.1%.5-氟尿嘧啶-甲酰-果胶轭合物经碱水解酸中和后测定的载药量为4.82%.本方法简单、快速,准确性高,重现性好,能初步确证5-氟尿嘧啶-甲酰-果胶轭合物的结构,并快速有效的测定轭合物的载药量.     

预测药物毒性的药物基因组生物标志物

人类基因组变异正应用于个体化用药的发展,目的是减少药物不良反应的发生并提高疗效。大量药物基因组研究侧重于了解药物不良反应的分子机制,并寻找生物标志物,而寻找药物基因组生物标志物往往侧重于对编码药物代谢酶基因变异的研究。改变酶活性可提高酶底物即药物水平或增加反