冰冻甘油法在谱细胞保存中的应用

目的:延长谱细胞的有效期。方法:采用冰冻甘油保存法,并对谱细胞进行冰冻前、甘油冰冻后1年抗原稳定性和完整性比较试验。结果:保存1年,抗原稳定性和完整性未见改变。结论:谱细胞的冰冻甘油保存法延长了谱细胞的保存时间。     

冰冻甘油法在谱细胞保存中的应用

目的：延长谱细胞的有效期。方法：采用冰冻甘油保存法，并对谱细胞进行冰冻前、甘油冰冻后1年抗原稳毫性和完整性比较试验。结果：保存1年，抗原稳定性和完整性未见改变。结论：谱细胞的冰冻甘油保存法延长了谱细胞的保存时间。     

谱细胞冰冻甘油保存的应用价值分析

目的分析谱细胞冰冻甘油保存的应用价值。方法用普通方法保存的谱细胞与冰冻甘油法保存的谱细胞对8例患者血清及19种已知抗血清进行不规则抗体鉴定的对比试验。结果两种方法均27例阳性,符合率100%。结论谱细胞冰冻甘油保存后,质量未见改变,能鉴定出常见的不规则抗体,值得推广。     

全自动与手工洗涤制备冰冻解冻去甘油红细胞效果比较

用甘油做冷冻保护剂把红细胞冷冻保存到很低温度,降低或完全停止细胞代谢活动,延长红细胞体外保存时间和存活率,需要时通过解冻去甘油化处理后提供给临床病人使用,是目前将稀有血型Rh(-)的血液长期保存、以满足Rh(-)血型患者临床急需的主要方式。过去血站采用传统手工方法制备冰冻     

全自动细胞处理系统制备冰冻红细胞的关键控制点及效果评价

目的 应用ACP 215全自动细胞处理系统制备冰冻红细胞和冰冻解冻去甘油红细胞,观察冰冻解冻去甘油红细胞的质控指标,就其制备过程中的关键控制点、制备工艺及制备效果进行评价.方法 随机取40袋2～6℃保存6d以内的悬浮红细胞用ACP 215全自动细胞处理系统制备冰冻红细胞,-80℃冰箱保存,37℃融化,再用ACP 215全自动细胞处理系统制备冰冻解冻去甘油红细胞.解冻红细胞洗涤前后留取样本检测冰冻解冻去甘油红细胞质量.结果 红细胞回收率(86±5)%,游离血红蛋白浓度(0.27±0.16)g/L,体外溶血试验(6.76±6.9)%,甘油残余量(0.12±0.08)g/L,残留血小板量(0.03±0.02)%,残留白细胞量(0.24±0.25)%,细菌培养试验阴性.结论 ACP 215全自动细胞处理系统可全程自动化无菌制备冰冻红细胞和冰冻解冻去甘油红细胞,方法操作简便,高效,产品质量稳定,更有效地保障了临床输血安全.     

冰冻解冻去甘油红细胞的制备方法及效果评价

目的用ACP215全自动细胞洗涤仪制备冰冻红细胞和冰冻解冻去甘油红细胞,观察冰冻解冻去甘油红细胞的质控指标,评价制备方法和制备效果。方法随机取2-6℃保存第6天的红细胞悬液,用ACP215甘油化红细胞悬液,-65℃以下深低温保存后取出,快速放入38℃水浴箱中融化,再用ACP215洗涤去甘油制备冰冻解冻去甘油红细胞。结果冰冻解冻去甘油红细胞平均红细胞回收率（84.06±2.07）,游离血红蛋白浓度（0.49±0.11）g/L,体外溶血实验（11.59±2.69）%,甘油残余量（3.51±1.27）g/L,残留白细胞（0.48±0.22）%,残留血小板（0.37±0.16）%,细菌培养阴性,满足国标《全血及成分血质量标准》的要求。结论 ACP215制备冰冻红细胞,低温保存并洗涤去甘油,操作方法标准化,快速简便,产品质量稳定可靠,可用于稀有血型及自体储血的保存,缓解供血紧张,保证临床输血的安全性。     

不同保存时间的悬浮红细胞制备冰冻红细胞质量分析

目的检测贮存期7-9d的血液,制备冰冻解冻去甘油虹细胞是否能达到GB18469的标准与贮存期为6d以内的血液制备的冰冻解冻去甘油虹细胞质量差异。方法报废悬浮缸细胞（以ALT及anti-TP阴性制品为主）,（4±2）℃保存期6d内及7-9d的虹细胞悬液各20U制备冰冻虹细胞及去甘油化解冻虹细胞进行质量检测,并做质量比较,观察缸细胞回收率、游离血缸蛋白、残留甘油、体外溶血试验等指标。结果贮存期6d和贮存期7-9d红细胞悬浮制备冰冻解冻去甘油虹细胞质量检测结果无差别,无统计学意义,质量均达到GB18469标准。结论本站对缸细胞悬液贮存期延长制备冰冻解冻去甘油缸细胞,能减少浪费Rh（D）血液资源,满足临床患者急诊需求,减轻工作人员的工作强度。     

血站优化单采血小板品种的可行性探讨

目的:采用冰冻保存的方法探讨血站优化单采血小板品种的可行性。方法:将用细胞分离机采集到的单采血小板养样本在采集后3 d和7 d制备成冰冻血小板制剂,对冰冻保存前后的单采血小板制剂进行血小板计数(PLT)、血小板第Ⅲ因子有效性(PF3A)、聚集强度、血小板黏附性、血块收缩试验的检测。结果:采集后3 d和7 d制备成的冰冻血小板制剂的各体外指标间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:冰冻保存明显延长了血小板保存时间,并且经冰冻保存的单采血小板仍然具有较好体外活性,建议血站采用冰冻保存单采血小板品种的方式优化血小板保存。     

乳腺癌患者外周血RNA提取方法的探讨

目的：建立外周血RNA的提取方法，为用逆转录－聚合酶链反应检测乳腺癌外周血中微转移打好基础。方法：从30例乳腺癌患者的冰冻保存和新鲜全血标本，用两种不同方法分离外周血有核细胞，提取RNA，测定RNA产量及RNA的完整性。结果：从冰冻保存和新鲜全血标本，提取的总RNA的OD值有显著性差异。从新鲜全血中提取RNA的产量高于从冰冻保存的全血中提取的RNA的产量。但是，电泳时均有28S与18S的条带。结论：用逆转录－聚合酶链反应时，以从新鲜全血中提取RNA为宜，但为留取标本的方便，也可用冰冻保存的全血标本，该实验中所采用的两种分离外周血有核细胞提取RNA的方法都切实可行。     

影响冷冻红细胞质量的若干因素研究

目的探讨甘油滴速、甘油化后是否经速冻处理再放入-70℃以下冰箱保存、洗涤剂滴速、采血时血流速度等对红细胞深低温保存后的红细胞回收率、上清游离血红蛋白、细胞碎片聚集的影响。方法采用2～6℃冰箱保存采集后6d内的血液作原料，分别对红细胞甘油化后经速冻成冰状再放入-70℃以下冰箱保存与甘油化后直接放入-70℃以下冰箱保存比较；快速滴加甘油和洗涤剂与慢速滴加甘油和洗涤剂比较；采血流速慢（200ml流速〉5min）与正常流速比较。结果红细胞甘油化后经速冻成冰状再放入-70℃以下冰箱保存与甘油化后直接放入-70℃以下冰箱保存相比，其红细胞回收率、上清游离血红蛋白、细胞碎片聚集差异无统计学意义；甘油化时快速滴加甘油和解冻时快速滴加洗涤剂与慢速滴加相比，其红细胞回收率、上清游离血红蛋白、细胞碎片聚集差异有统计学意义。采血流速慢与正常流速相比，其红细胞回收率、上清游离血红蛋白、细胞碎片聚集差异有统计学意义。结论在保存条件相同的情况下，影响冷冻红细胞质量的因素主要是甘油和洗涤剂的滴加方法以及全血采集时的血流速度。     

蔗糖磷酸缓冲液对组织标本中RNA的保护作用

目的探讨蔗糖磷酸缓冲液作标本保存剂对组织标本中核酸的影响。方法分别用25％蔗糖磷酸缓冲液，10％中性甲醛(40℃-100~C)固定保存小鼠组织4—48h后，检测其组织结构及RNA完整性和特异性扩增产物。结果组织经25％蔗糖磷酸缓冲液保存，冰冻切片HE染色后组织结构清晰；从中提取的RNA完整性与立即冰冻保存的组织无明显区别。结论25％蔗糖磷酸缓冲液固定标本48h，既能保持组织结构完整又不影响组织标本的RNA提取和扩增。     

深低温保存Rh阴性RBC的质量控制

目的:确保深低温保存Rh阴性红细胞(RBC)解冻后的质量。方法:用ACD抗凝,4℃保存6 d内Rh阴性RBC悬液加入57.1%(g/v)甘油处理后,置-80℃冰冻保存,可以保存10年。临床需要时在39℃水浴中解冻复苏RBC,M115型红细胞洗涤系统洗涤,用生理盐水悬浮RBC。结果:33袋冰冻解冻RBC去甘油后RBC回收率为(80.24±6.19)%,游离血红蛋白浓度为(0.71±0.23)g/L,甘油残留量平均为3.79g/L,体外溶血实验血红蛋白增加率为21.66%。结论:冰冻解冻去甘油红细胞各项指标均达到国家规定的质量标准,临床输用效果良好。     

冰冻保存对浓缩血小板细胞炎性因子水平影响

目的观察浓缩血小板在冰冻保存前后细胞因子IL-1β、IL-6、IL-8、INF-γ水平的变化。方法取30份浓缩血小板标本，将每份平均分为4等份。其中的2份进行白细胞过滤为过滤组，另2份不进行白细胞过滤为非过滤组，将过滤组和非过滤组的PCs分别置血小板保存箱中20～24℃振荡保存和加冰冻保护剂冰冻保存，采用ELISA法检测2组浓缩血小板在常规保存0，1，3d和冰冻保存3个月解冻后0，1，3d的IL-1β、IL-6、IL-8、INF-γ的水平，用配对t检验进行统计分析。结果过滤组与非过滤组冰冻保存前0d与解冻后0d细胞因子含量均无显著变化；非过滤组解冻后1，3d细胞因子的水平比冻存前1，3d有显著升高；过滤组在冰冻保存前后细胞因子的含量无显著变化。结论经冰冻保存后的PCs解冻后比常规条件保存的PCs炎性细胞因子（IL-1β、IL-6、IL-8、INF-γ）的水平随时间的延长有更强的增加趋势，经白细胞过滤后PCs细胞因子的含量变化没有显著性。     

ACP215机洗涤冰冻红细胞与手工洗涤的对比探讨

目的探讨全自动洗涤冰冻红细胞的质量及临床应用情况。方法采用Haemonetics公司的ACP215型细胞洗涤机进行洗涤冰冻红细胞并检测洗涤后红细胞回收率、甘油残留量、白细胞残留量等。结果应用ACP215机全自动洗涤冰冻红细胞获得的红细胞各项指标均能达到国家标准，甘油及白细胞残留量明显低于手工洗涤组，临床输注无不良反应发生。结论全自动洗涤冰冻红细胞是一个安全、有效的方法，可以为临床提供较高质量的去甘油冰冻红细胞，值得推广应用。     

冰冻切片制作及免疫组化的改进

与石蜡切片相比,冰冻切片在抗原完整性的保存上有其不可取代的优势,尤其在科研实验的免疫组化方面,可以标记不能在石蜡切片上显示的抗原.我们对制作冰冻切片及免疫组化操作细节上进行改进,取得了较满意的效果.现将实验操作过程报告如下.     

抗冻缓冲液保存冰冻切片的研究

目的: 研究抗冻缓冲液（anti-freeze buffer, AFB）对冰冻切片的长期保存作用。方法：4只12~15月龄的雌性C57BL/6NIA小鼠常规灌注取脑，50 μm冰冻切片，将切片于-20℃保存于抗冻缓冲液中，分别于切片的当日、切片后３个月、６个月和12个月, 行β-NADPH酶组织化学和GFAP免疫组织化学染色。 结果: 于-20℃冰箱保存在AFB内的冰冻切片，至6个月时,β-NADPH 酶组织化学显示的含一氧化氮合酶(nitric oxide synthase, NOS) 的神经元和毛细血管与新鲜标本没有区别；至12个月时，GFAP免疫组织化学染色显示的星形胶质细胞与新鲜标本没有区别。结论: AFB可较长时间保存组织切片的抗原成份和酶活性，是形态学研究领域较好的保存冰冻切片的方法。     

深低温保存Rh阴性红细胞冰冻解冻的质量控制

目的探讨深低温保存Rh阴性红细胞冰冻、解冻的质量控制措施。方法使用高浓度甘油添加到Rh阴性血红细胞中,置-65℃以下冰柜冰冻保存。临床需要时37℃水浴复苏红细胞,洗涤过程采用9%／6Nacl洗涤溶液、羟乙基淀粉盐溶液、0．9％Nacl溶液,遵循梯度洗涤方法。结果质控抽检60U冰冻解冻去甘油红细胞回收率（84．4±4．6）％,悬浮红细胞上清血红蛋白含量（O．68±0．26）g／L,体外溶血试验（22．19±4．2）％。残留甘油含量（4．96±0．86）g／L。结论冰冻解冻去甘油洗涤红细胞各项指标均达到国家规定的质量标准,临床输用效果良好。     

冷冻保存连续冰冻切片在免疫组化染色中的应用

[目的]探讨科研工作中使用连续冰冻切片进行免疫组化染色时切片的保存方法。[方法]将不能马上完成染色的连续冰冻切片采用干燥、密封的方法置于-80℃保存,需要时取出自然干燥后进行常规免疫组化染色。[结果]使用冷冻保存的冰冻切片进行免疫组化染色,组织结构清晰完整,细胞境界分明,染色对比度好,特异性抗原标记明显,与未经冷冻的新鲜切片比较各项观察指标无明显差异。[结论]-80℃冷冻保存冰冻切片的方法是可行的。     

间接荧光抗体试验诊断实验性旋毛虫病的研究

本文应用间接荧光抗体试验比较了４种方法制备的旋毛虫幼虫抗原诊断实验性旋毛虫病的效果。结果表明，旋毛虫纯净幼虫冰冻切片抗原优于完整幼虫抗原、超声粉碎幼虫抗原及膈肌幼虫冰冻切片抗原。用此抗原检测感染旋毛虫的大鼠血清时，抗体阳性率为１００％（１３／１３），而１０份正常大鼠血清均为阴性反应。小鼠感染旋毛虫后２周即可检测到抗旋毛虫抗体，阳性率为１１．１１％（１／９），感染后５周抗体阳性率已升到１００％（８／８），升高的抗体滴度可一直持续至感染后第１５周。此抗原在－２０℃至少可保存２．５年而不丧失其活性和特异性。应用滤纸血也可取得满意的检测结果。     

冰冻保存三糖铁琼脂的质量效果评价

目的：评价冰冻（-20℃）保存三糖铁琼脂的质量效果。方法：将预先制好并经灭菌后的三糖铁琼脂置于-20℃保存，在1、3、6、12、24月后取出，隔水加热重融，用质控菌株做质量鉴定。结果：用三种不同的菌株，鉴定各期限冰冻保存的三糖铁琼脂的质量，显示均与新鲜培养基一致，符合质量控制标准。结论：-20℃冰冻保存三糖铁琼脂不影响质量，可保存2年。