大黄酸对高糖所致肾小球系膜细胞Wnt/β-catenin信号通路的影响探讨

目的 观察高糖对人肾小球系膜细胞(HMC) Wnt/β-catenin信号通路的影响及大黄酸的干预作用.方法 体外培养人肾小球系膜细胞,同步化后采用加有高浓度葡萄糖(30 mmol/l)联合不同浓度大黄酸的无血清培养基培养.应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)测量高糖(HG组)及大黄酸高浓度组(高糖十大黄酸10-4 mol/L,HG+R1组)、大黄酸中浓度组(高糖+大黄酸10-5 mol/L,HG+R2组)、大黄酸低浓度组(高糖十大黄酸10-6 mol/L,HG+R3组)干预后肾小球系膜细胞增殖活力.应用RT-PCR法检测正常培养及高糖作用后人肾小球系膜细胞Wnt/β-catenin基因的表达及大黄酸对其表达的影响.结果 ①对系膜细胞的抑制作用:与正常对照组(NG)组24h、48 h、72 h (OD值分别为0.169±0.051、0.228±0.074、0.285±0.075)比较,HG组(OD值分别为0.307±0.074、0.507±0.038、0.711±0.075)、HG+R1组(OD值分别为0.241±0.027、0334±0.015、0.499±0.063)、HG+R2组(OD值分别为0.244±0.081、0.386±0.033、0.531±0.011)、HG+R3组(OD值分别为0.277±0.036、0.407±0.057、0.594±0.042)细胞增殖均明显上升,差异均有统计学意义(P＜0.05、P＜0.01);与HG组各时点相比,HG+R1组、HG+R2组、HG+R3组在24 h呈下降趋势,48 h、72 h下降趋势显著,表现为时间、浓度依赖性(P＜0.05、P＜0.01).②在基础状态下,系膜细胞表达一定量的Wnt/β-catenin经高糖刺激后,Wnt/β-catenin基因表达上调(P＜0.05),HG+R1组、HG+R2组、HG+R3组均可明显下调高糖刺激引起的系膜细胞Wnt/β-catenin基因表达(P＜0.05).结论 大黄酸可能通过下调Wnt/β-catenin基因的表达抑制高糖引起的HMC增殖.     

通芪方对胃癌MGC803细胞周期和Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的:从mRNA和蛋白水平阐明通芪方对胃癌MGC803细胞周期和Wnt/β-catenin信号通路的影响作用。方法:MGC803细胞常规体外培养24 h,加入6个质量分数的通芪方,分别于24、48和72 h用MTT染色法检测细胞增殖变化;流式细胞术分析细胞周期;实时荧光定量RT-PCR检测PCNA和Cyclin-D1 mRNA表达变化;western blot法检测Wnt/β-catenin信号通路蛋白表达。结果:通芪方抑制MGC803细胞增殖24 h的IC50浓度约为6.75 g·L~(-1);48 h的IC50浓度约为3.17 g·L~(-1);72 h的IC50浓度约为2.71 g·L~(-1)。通芪方可抑制细胞于G1期,48、72 h时S期细胞比率显著下降,与阴性对照组比较差异有统计学意义(P0.05);实时荧光定量RT-PCR检测显示48、72 h通芪方组细胞PCNA和Cyclin-D1 mRNA表达水平显著下降,与阴性对照组比较差异有统计学意义(48 h,P0.05;72 h,P0.01)。western blot检测显示,通芪方作用细胞72 h,Wnt、β-catenin、PCNA和Cyclin-D1蛋白表达水平显著下降,与阴性对照组比较差异有统计学意义(P0.05)。结论:通芪方抑制MGC803细胞增殖,具有明显量效、时效性;可调节细胞周期,分子机制与下调Wnt/β-catenin信号通路分子的mRNA和蛋白表达有关。     

黄芪、大黄、雷公藤多苷对大鼠MsC增生及表达TGF-β_1的影响

目的：通过观察黄芪、大黄、雷公藤多苷对体外培养的大鼠肾小球系膜细胞（glomerular mesangial cells,MsC）增生及对MsC表达转化生长因子β1（Transforming growth factor-β1,TGF-β1）的影响,探讨黄芪、大黄、雷公藤多苷对肾小球系膜细胞增生的抑制效果。方法：在细胞培养的基础上,利用脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱发的大鼠肾小球系膜细胞增生模型,将系膜细胞分为控制组、模型组、对照组、黄芪组、大黄组、雷公藤多苷组。通过四甲基偶氮唑盐比色分析法（MTT）检测黄芪、大黄、雷公藤多苷对MsC增殖的影响,采用ELISA法检测黄芪、大黄、雷公藤多苷对MsC表达TGF-β1的影响。结果：模型组MsC增生活跃,OD值明显高于控制组（P〈0.01或P〈0.05）;模型组TGF-β1含量明显升高,与控制组相比差异有统计学意义（P〈0.01）,说明造模成功。中药黄芪、大黄、雷公藤多苷均能抑制MsC的增殖,降低TGF-β1过表达,而且在12 h黄芪抑制作用较强,24 h大黄抑制作用较强,48 h三者相比无显著性差异。结论：中药黄芪、大黄、雷公藤多苷三者均能够抑制体外培养的大鼠肾小球系膜细胞的增生,抑制其对TGF-β1过表达,但在作用时间上有所差异。     

鳖甲-莪术药对含药血清对MCF-7人乳腺癌细胞的影响

目的基于Wnt/β-catenin信号通路探讨鳖甲-莪术药对含药血清对乳腺癌细胞增殖的抑制作用。方法细胞悬液加入不同剂量的鳖甲含药血清、莪术含药血清、鳖甲-莪术药对含药血清孵育48、72 h后,用MTT法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术检测细胞周期,Western blot法检测β-Catenin、c-Myc、cyclin D1蛋白表达。结果与空白血清组比较,各含药血清组处理48、72 h均可抑制细胞增殖(P0.05,P0.01);处理48 h后,其G0/G1期细胞比例增加(P0.05,P0.01)、S期细胞比例降低(P0.05,P0.01),β-Catenin、c-Myc、cyclin D1蛋白表达均降低(P0.05,P0.01)。结论各组含药血清对MCF-7细胞的增殖均有抑制作用。此外,鳖甲-莪术药对抑制作用高于单独用药,其抗乳腺癌的机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin的表达,下调β-catenin以及β-catenin下游靶基因cyclin D1,c-Myc蛋白表达有关。     

丹参多酚酸盐对人肾小球系膜细胞TGF-β/Smad信号转导通路的影响

目的:探讨丹参多酚酸盐对血管紧张素Ⅱ诱导的人肾小球系膜细胞TGF-β/Smad信号传导通路的影响。方法:培养人肾小球系膜细胞,分为正常组;模型组;丹参多酚酸盐高剂量(200μmol/L);中剂量(20μmol/L);低剂量(2μmol/L)组。经预实验筛选结果,采用10-8mol/L血管紧张素Ⅱ诱导模型组及丹参多酚酸盐各组人肾小球系膜细胞增殖,采用MTT法检测各组及各时间点的细胞活性。收集培养48 h时间点各组细胞,采用Western blot法及Real-timePCR法分别检测Smad2、Smad3蛋白及TGF-β及Smad7 mRNA的表达情况。结果:模型组与正常组比较,在培养24 h,48 h,72 h内系膜细胞的增值活性增强、丹参多酚酸盐各组能够抑制其增殖,于48 h达到稳定;模型组与正常组比较,系膜细胞中Smad2、Smad3蛋白及TGF-βmRNA的表达显著上升(P0.05),而Smad7mRNA的表达则明显降低(P0.05);丹参多酚酸盐各组与模型组比较,均能逆转上述变化(P0.05)。结论:血管紧张素Ⅱ能够有效刺激肾小球系膜细胞增殖,丹参多酚酸盐可能通过多靶点抑制TGF-β/Smad信号通路的传导,从而抑制延缓肾小球硬化及纤维化。     

槲皮素抑制人前列腺癌PC-3细胞增殖及与Wnt/β-catenin信号通路的机制

目的:观察槲皮素对人前列腺癌PC-3细胞增殖和Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路的调控作用,探讨其抗前列腺癌的可能机制。方法:体外培养PC-3细胞,以不同终浓度槲皮素进行处理,设空白组。采用噻唑蓝比色法(MTT)观察槲皮素对PC-3细胞增殖抑制作用,计算半数抑制浓度(IC50);采用流式细胞仪检测槲皮素对PC-3细胞凋亡的影响;采用免疫印迹法(Western blot)和逆转录-PCR(RT-PCR)分析检测槲皮素对β-catenin和下游靶基因细胞周期素D1(Cyclin D1),原癌基因(c-Myc)蛋白表达和转录水平;采用免疫荧光分析检测槲皮素对β-catenin表达的影响;利用荧光酶报告基因分析检测槲皮素对Wnt/β-catenin信号通路的影响。结果:与空白组比较,槲皮素对PC-3细胞增殖具有明显抑制作用(P0.05),并诱导PC-3细胞凋亡(P0.05)。与空白组比较,槲皮素可显著抑制PC-3细胞β-catenin的蛋白表达和转录活性,从而阻断Wnt/β-catenin信号通路的传导,抑制下游靶基因的表达水平(P0.05,P0.01)。结论:槲皮素可显著抑制PC-3细胞增殖,其机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。     

芪蓟肾康汤对血管紧张素Ⅱ诱导的人肾小球系膜细胞FN、TGF-β_1影响的研究

目的观察芪蓟肾康汤对AngⅡ诱导人肾小球系膜细胞FN及TGF-β_1表达,探讨不同剂量芪蓟肾康汤改善肾小球硬化作用机制。方法用酶联免疫法吸附试验(ELISA)法检测空白组,模型组,替米沙坦组及低、中、高剂量组芪蓟肾康汤含药血清培养AngⅡ诱导人肾小球系膜细胞株FN、TGF-β_1的表达。结果 24 h和48 h的FN、TGF-β_1含量表达,模型组高于正常组(明显)(P0.01);低、中、高剂量组芪蓟肾康汤较模型组减少,作用时间越长抑制效果越好(P0.01);中、高剂量组芪蓟肾康汤低于西药组,中药组间剂量芪蓟肾康汤越高抑制效果越好(P0.05)。结论芪蓟肾康汤可有效抑制FN、TGF-β_1的表达,从而抑制AngⅡ诱导人肾小球系膜细胞增殖,潜在改善肾小球硬化程度。     

灵芝三萜通过Wnt/β-catenin信号通路对肝癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 灵芝三萜通过Wnt/β-catenin信号通路对肝癌细胞增殖和凋亡的影响.方法 灵芝三萜(10、50、100 μg/mL)作用HepG2人肝癌细胞24、48、72 h,MTT和流式细胞仪检测细胞增殖和凋亡.100 μg/mL灵芝三萜作用HepG2细胞24、48、72 h,Western blot检测c-myc、cyclinD1、caspase-3、caspase-8、β-catenin、p-GSK-3β蛋白表达.分别以20 μmol/L XAV-939、20 mmol/L LiCl及100 μg/mL灵芝三萜联合20 mmol/L LiCl干预HepG2细胞,MTT和流式细胞仪分别检测细胞增殖和凋亡.结果 灵芝三萜(10、50、100 μg/mL)抑制HepG2细胞增殖(P<0.05),诱导细胞凋亡(P<0.05).100 μg/mL灵芝三萜作用HepG2细胞24、48、72 h,细胞caspase-3、caspase-8蛋白表达上调(P<0.05),而c-myc、cyclinD1、β-catenin、p-GSK-3β蛋白表达下调(P<0.05).20 μmol/L XAV-939干预能抑制细胞增殖并诱导细胞凋亡(P<0.05),20 mmol/L LiCl则能在一定程度上减弱灵芝三萜对HepG2细胞增殖的抑制和细胞凋亡的诱导作用(P<0.05).结论 灵芝三萜能够通过Wnt/[β-catenin信号通路调节c-myc、cyclinD1、caspase-3、caspase-8蛋白表达,抑制肝癌细胞增殖并诱导细胞凋亡.     

通络益肾方对高糖培养大鼠肾小球系膜细胞MMP-9/TIMP-1和TGF-β1表达的影响

目的观察通络益肾方对高糖培养下大鼠肾小球系膜细胞增殖、细胞外基质调控系统MMP-9/TIMP-1、TGF-β1表达的影响,探讨其防治糖尿病肾病的可能机制。方法以体外培养的大鼠肾小球系膜细胞为研究对象,将培养的肾小球系膜细胞分为空白对照组、高糖培养组(高糖组)、通络益肾方高、中、低剂量组及西药对照组,用大鼠含药血清给药,分别给予相应处理48 h后,采用四甲偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖,ELISA法检测细胞培养上清液TGF-β1、MMP-9和TIMP-1的水平。结果与空白对照组比较,高糖组肾小球系膜细胞增殖明显(P<0.01),上清液中TGF-β1和TIMP-1水平显著增加,MMP-9水平减少(均P<0.01);通络益肾方高、中、低剂量均能明显抑制肾小球系膜细胞增殖(P<0.01或P<0.05),下调TGF-β1和TIMP-1表达,上调MMP-9表达(P<0.05或P<0.01),尤以高剂量组效果最佳,呈剂量依赖性;西药对照组上述指标表达水平和中药中剂量组相当(P>0.05)。结论通络益肾方可能通过抑制肾小球系膜细胞增殖和下调TGF-β1、促进细胞外基质的降解而拮抗糖尿病肾病肾小球硬化,发挥其肾保护作用。     

臭牡丹总黄酮对A549细胞增殖迁移侵袭力及Wnt通路相关蛋白的影响

目的:观察臭牡丹总黄酮对β-catenin过表达A549细胞增殖、迁移、侵袭力以及Wnt通路相关蛋白的影响。方法:选取构建β-catenin真核过表达载体并转染A549细胞,将其分为6组,分别为未转染细胞、未转染细胞+臭牡丹总黄酮、空载组、空载+臭牡丹总黄酮、β-catenin过表达组、β-catenin过表达+臭牡丹总黄酮。MTT法检测各组细胞的相对存活率,划痕实验检测各组细胞迁移能力,Transwell小室侵袭实验检测各组细胞的侵袭力。Western Blot检测各组Wnt通路相关蛋白β-catenin、GSK-3β、P-GSK-3β、c-myc、CyclinD1的表达。结果:转染β-catenin过表达的A549细胞增殖能力、迁移能力、侵袭力均明显增强(P0.05),并显著上调wnt通路相关因子β-catenin、C-Myc,CyclinD的蛋白表达,下调P-GSK-3β的蛋白表达(P0.05)。采用臭牡丹总黄酮干预后,能明显降低各组细胞的存活率,降低细胞向划痕区域迁移的能力,减少侵袭小室穿过基膜的细胞数(P0.05)。并下调β-catenin、C-Myc、CyclinD1表达(P0.05),上调P-GSK-3β表达(P0.05)。臭牡丹总黄酮的干预作用对转染β-catenin过表达细胞尤为明显。结论:转染β-catenin过表达的A549细胞其增殖、迁移、侵袭力均明显增强,能激活Wnt/β-catenin通路。臭牡丹总黄酮可抑制A549细胞的增殖、迁移、侵袭力,其机制可能是通过抑制细胞中β-catenin的高表达从而调控下游的一系列因子而起到抑制Wnt/β-catenin通路的作用。     

冬凌草甲素对人肝癌SMMC-7721细胞增殖侵袭的抑制作用及细胞Wnt2/β-catenin表达的影响

目的:探讨冬凌草甲素对人肝癌SMMC-7721细胞增殖侵袭的抑制作用及细胞Wnt2/β-catenin表达的影响。方法:培养人肝癌SMMC-7721细胞,实验分为阴性对照组,冬凌草甲素低剂量组(10μmol/L),冬凌草甲素中剂量组(20μmol/L),冬凌草甲素高剂量组(40μmol/L)。MTT检测肝癌细胞存活率;流式细胞仪检测肝癌细胞凋亡;RT-PCR检测肝癌细胞Wnt2、β-catenin mRNA的表达;Western Blot检测肝癌细胞内Wnt2、β-catenin蛋白的表达。结果:冬凌草甲素进行剂量干预后,肝癌细胞存活率显著降低(P0.05)。冬凌草甲素以20μmol/L的浓度进行干预后,人肝癌SMMC-7721细胞凋亡高于阴性对照组(P0.05),冬凌草甲素浓度40μmol/L时,人肝癌SMMC-7721细胞凋亡显著高于阴性对照组(P0.01)。冬凌草甲素干预肝癌细胞后,显著降低肝癌细胞内Wnt2、β-catenin mRNA的表达(P0.05)。同时,冬凌草甲素干预后,肝癌细胞内Wnt2、β-catenin蛋白的表达也得到显著降低(P0.05)。结论:冬凌草甲素对人肝癌SMMC-7721细胞增殖侵袭具有明显的抑制作用,其机制可能与抑制Wnt2/β-catenin经典通路上的Wnt2、β-catenin的表达有关。     

槲皮素对高糖诱导肾小球系膜细胞增殖及TGF-β1/Smads信号通路的影响

目的:研究槲皮素在高糖环境下对大鼠肾小球系膜细胞增殖槲皮素对照组及TGF-β1表达的影响。方法:将体外培养的大鼠系膜细胞分为正常组、高糖组、槲皮素对照组及槲皮素低、中、高剂量组6组,MTT法检测槲皮素对肾小球系膜细胞增殖的影响,Western-blot法检测肾小球系膜细胞TGF-β1、P-Smad2、FN的表达。结果:槲皮素能够显著抑制高糖诱导的肾小球系膜细胞增殖及TGF-β1、P-Smad2、FN表达。结论:槲皮素可通过降低TGF-β1水平抑制高糖诱导的肾小球系膜细胞增殖,并通过抑制Smad2磷酸化部分影响TGF-β1/Smads信号通路的激活,降低FN的表达,对肾脏起到保护作用。     

丹参酮ⅡA对高糖诱导肾小管上皮细胞转分化中Wnt/β-catenin信号途径的影响

目的 探究高糖诱导肾小管上皮细胞转分化过程中Wnt/β-catenin信号途径的表达及丹参酮ⅡA对其影响。方法 将人近端肾小管上皮细胞(HK-2),分为正常糖组（NG组）、高糖组（HG组）、高糖+丹参酮ⅡA干预组（HG+T组）。采用免疫细胞化学观察β-catenin表达情况;Western印迹检测β-catenin、上皮细胞标志性蛋白E-钙粘蛋白(E-cadherin)、间充质细胞标志性蛋白α-SMA的表达;RT-PCR检测β-catenin、E-cadherin mRNA表达水平。结果 与NG组比较,HG组β-catenin蛋白及mRNA表达显著增强（P<0.01),E-cadherin表达显著降低（P<0.01),β-catenin蛋白在胞浆与胞核表达增强。终浓度为100 μmol/L的丹参酮ⅡA可显著减少β-catenin的异位表达;在该浓度下,β-catenin在胞核蛋白及mRNA的表达量显著下降, 而E-cadherin蛋白及mRNA的表达水平上升,同时间充质细胞标志性蛋白α-SMA的表达明显下降。结论Wnt / β-catenin信号途径参与了高糖诱导肾小管上皮细胞转分化过程,丹参酮ⅡA可能通过下调Wnt / β-catenin信号途径的活性而抑制转分化过程,进而发挥保护肾脏的作用。     

过表达性别决定区Y框蛋白7基因对骨肉瘤细胞生长及免疫逃逸相关因子表达的影响

目的:探讨过表达性别决定区Y框蛋白7(SOX7)基因对骨肉瘤MG-63细胞活力、周期、凋亡、Wnt/β-catenin信号及免疫逃逸相关VEGF和TGF-β1表达的影响。方法:将人骨肉瘤MG-63细胞分为空白组、pcDNA3.1组和pcDNA3.1-SOX7组,pcDNA3.1转染参照Lipofectamine 2000试剂盒说明书。通过CCK-8法检测pcDNA3.1-SOX7转染MG-63细胞24～72 h的细胞活力;流式细胞仪检测pcDNA3.1-SOX7转染MG-63细胞48 h的细胞周期和凋亡率。Western Blot检测SOX7、β-catenin、cyclinD1、Survivin、VEGF和TGF-β1蛋白表达。结果:pcDNA3.1-SOX7转染MG-63细胞后,细胞中SOX7蛋白表达明显高于空白组,差异有统计学意义(P0.05)。与空白组比较,pcDNA3.1-SOX7组细胞活力明显降低,凋亡率明显升高,G_0/G_1期细胞百分比明显升高,G_2/M期和S期百分比明显降低,β-catenin、CyclinD1、Survivin、VEGF和TGF-β1蛋白表达明显降低,差异有统计学意义(P0.05)。结论:过表达SOX7基因可抑制骨肉瘤MG-63细胞活力,阻碍细胞周期进程,诱导细胞凋亡,抑制免疫逃逸相关VEGF和TGF-β1表达,其机制与抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。     

丹参对血管紧张素Ⅱ致肾小球系膜细胞Wnt/β-catenin信号通路活化干预的影响

目的:基于Wnt/β-catenin信号通路,探讨丹参对血管紧张素Ⅱ(AngiotensinⅡ,AngⅡ)刺激肾脏系膜细胞后的影响。方法:浓度为(0~10-5mol/L)AngⅡ刺激系膜细胞,以及浓度为10-6mol/L的AngⅡ在不同时间(0 min~24 h)刺激系膜细胞,分别用氯沙坦和丹参注射液干预。用实时定量PCR与Western Blot方法分别检测细胞Wnt-1、β-catenin、PAI-1mRNA与蛋白水平,用ELISA方法测定细胞上清中纤维连接蛋白(fibronectin,FN)的含量。结果:AngⅡ使系膜细胞Wnt-1、β-catenin、PAI-1表达增加,FN水平升高,呈现剂量、时间依赖性。浓度为150 mg/mL的丹参注射液干预后,Wnt-1、β-catenin、PAI-1表达以及FN水平明显下降,与ARB作用相当。结论:AngⅡ通过刺激Wnt/β-catenin信号途径活化致肾小球硬化,而丹参能通过抑制AngⅡ诱导的系膜细胞Wnt/β-catenin信号途径活化进而下调PAI-1表达与FN合成而发挥抗肾小球硬化的作用。     

低剂量雷公藤甲素抑制Wnt3α/β-catenin信号通路活性改善高剂量D-葡萄糖诱导的足细胞转分化

探讨雷公藤甲素（triptolide,TP）改善高剂量D-葡萄糖（高糖）诱导的足细胞上皮-间充质转分化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）的作用和分子机制。将体外培养的小鼠永生化足细胞分为正常组（normal group,N）、高剂量D-葡萄糖组（high dose of D-glucose group,H-TP）、低剂量TP组（low dose of TP group,L-TP）、高剂量TP组（high dose of TP group,H-TP）以及甘露醇组（mannitol group,MNT）,分别进行不同的干预：N组加入D-葡萄糖（D-glucose,DG,5 mmol·L^-1）;HG组加入HG（25mmol·L^-1）;L-TP组加入HG（25 mmol·L^-1）＋TP（3μg·L^-1）;H-TP组加入HG（25 mmol·L^-1）＋TP（10μg·L^-1）;MNT组加入DG（5 mmol·L^-1）＋MNT（24.5 mmol·L^-1）。在干预后的各时间点（24,48,72 h）,首先,观察TP对足细胞增殖活性的影响;其次,检测足细胞上皮细胞标志性分子（nephrin和podocin）、间充质细胞标志性分子（desmin和Ⅰ型胶原）以及EMT相关介质snail的蛋白表达水平;最后,检测足细胞Wnt3α/β-catenin信号通路关键信号分子Wnt3α和β-catenin蛋白表达水平。结果表明,HG不仅能引起足细胞nephrin和podocin蛋白低表达,desmin,Ⅰ型胶原和snail蛋白高表达,诱导足细胞EMT,而且,能促使足细胞Wnt3α和β-catenin蛋白高表达,激活Wnt3α/β-catenin信号通路。此外,L-TP对足细胞增殖能力没有影响,与HG联合干预不仅能明显恢复足细胞nephrin和podocin蛋白表达水平,抑制其desmin,Ⅰ型胶原和snail蛋白表达水平,改善足细胞EMT,而且,能明显降低HG诱导的足细胞Wnt3α和β-catenin蛋白高表达,抑制Wnt3α/β-catenin信号通路活性。总之,HG在体外能激活Wnt3α/β-catenin信号通路而诱导足细胞发生EMT;L-TP在体外能明显抑制Wnt3α/β-catenin信号通路活性而改善足细胞EMT,这可能是其干预足细胞EMT的作用和分子机制之一。     

白藜芦醇对糖尿病肾病大鼠Wnt/β-catenin和TGF-β1-Smad2/3信号通路的影响

目的探究白藜芦醇对糖尿病肾病大鼠Wnt/β-catenin和TGF-β1-Smad2/3信号通路的影响。方法利用链脲佐菌素一次性注射制作糖尿病肾病模型,40只SD大鼠随机分成白藜芦醇组(5 mg/kg)、氯沙坦组(30 mg/kg)、白藜芦醇联合氯沙坦组(5 mg/kg藜芦醇联合30 mg/kg氯沙坦)和模型组,每组小鼠10只,1次/d,均持续作用8周。检测尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)、24 h尿蛋白及空腹血糖水平,计算肾脏指数,实时荧光定量PCR、Western blot法及免疫组化法检测Wnt4、β-catenin及TGF-β1、Smad2/3表达。结果与模型组比较,白藜芦醇组、氯沙坦组、白藜芦醇联合氯沙坦组的BUN、Scr、24 h尿蛋白和空腹血糖水平显著降低(P0.05),肾脏指数降低(P0.05),Wnt4、β-catenin、TGF-β1、Smad2/3 mRNA及蛋白表达明显降低(P0.05);与白藜芦醇联合氯沙坦组比较,白藜芦醇组以上指标差异无统计学意义(P0.05),而氯沙坦组以上指标明显增加(P0.05)。结论白藜芦醇能够降低Wnt/β-catenin和TGFβ1-Smad2/3信号通路的表达水平,改善DN肾脏病理进程,减少肾脏受到的损害。     

隐丹参酮调控Wnt/β-catenin 信号通路对胃癌细胞抑制作用的研究

目的：探究隐丹参酮调控Wnt/β-连环蛋白（β-catenin） 信号通路对胃癌细胞的抑制作用。方法：将人胃癌BGC-823 细胞株分为对照组,隐丹参酮低、中、高剂量组（以下简称低、中、高剂量组）,高剂量+SKL2001 组,高剂量+XAV939 组。低、中、高剂量组在培养过程中加入20、40、80 μmol/L 的隐丹参酮;高剂量+SKL2001 组中加入80 μmol/L 隐丹参酮与20 μmol/L SKL2001;高剂量+XAV939 组中加入80 μmol/L 的隐丹参酮与1 μmol/L 的XAV939。采用MTT 法、Transwell 小室法、细胞划痕实验分别检测细胞的增殖能力及迁移侵袭能力。采用RT-PCR 与蛋白免疫印迹法检测细胞中蓬乱蛋白DSH 同源物2（Dvl2）、糖原合成酶激酶-3（GSK-3β）、β-catenin 和G1/S-特异性周期蛋白-D1（Cyclin D1） 表达水平。结果：与对照组比较,低、中、高剂量组处理24 h、48 h、72 h 后细胞增殖抑制率、GSK-3β 蛋白及mRNA 表达上升（P＜0.05）,Dvl2、β-catenin、Cyclin D1 蛋白及mRNA 表达降低（P＜0.05）,且呈剂量依赖性（P＜0.05）。细胞划痕48 h 后,低、中、高剂量组细胞迁移能力、过膜细胞数及划痕愈合率均降低（P＜0.05）,且随着剂量增加而降低（P＜0.05）;与高剂量组比较,高剂量+SKL2001 组迁移能力、过膜细胞数及划痕愈合率均增高（P＜0.05）;与高剂量+SKL2001 组比较,高剂量+XAV939 组迁移能力、过膜细胞数及划痕愈合率均降低（P＜0.05）。结论：隐丹参酮能通过抑制Wnt/β-catenin 信号通路的活性对胃癌细胞起抑制作用。     

大黄酚调控Wnt/β-catenin 通路对胶质瘤U87细胞增殖、凋亡、侵袭能力及EMT 的影响

目的：探讨大黄酚调控Wnt/β-catenin 信号通路抑制胶质瘤细胞的作用机制。方法：体外培养人脑 胶质瘤细胞U87,用不同浓度（0、50、100、200 μmol/L） 的大黄酚处理后,采用CCK-8 法检测U87 细胞增 殖能力;划痕法检测细胞迁移能力;Transwell 法检测细胞侵袭能力;流式细胞术检测细胞凋亡;蛋白质 印迹法检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2 以及Wnt 通路上皮细胞-间充质转化（EMT） 相关蛋白β-catenin、 E-cadherin、vimentin、MMP-9 蛋白表达。结果：大黄酚能抑制U87 细胞增殖、迁移及侵袭,诱导凋亡（P＜ 0.05）,下调Bcl-2、β-catenin、vimentin 与MMP-9 的表达水平,上调Bax 与E-cadherin 的表达水平（P＜ 0.05）,并呈浓度依赖关系。结论：大黄酚能抑制胶质瘤细胞U87 增殖、迁移及侵袭能力,其机制可能与抑制 Wnt/β-catenin 信号通路有关。     

汉黄芩素对胃癌细胞SGC7901凋亡、侵袭迁移及Wnt/β-catenin信号通路的影响研究

目的:探讨汉黄芩素对胃癌细胞SGC7901凋亡、侵袭迁移及Wnt/β-连接素(β-catenin)信号通路的影响。方法:常规培养3种常见胃癌细胞株(SGC7901、BGC-823及MKN-45)至对数生长期,采用终浓度0、20、50、100、200μmol/L汉黄芩素处理24、48、72、96 h后采用四甲基偶氮唑盐比色法检测细胞增殖情况,分别采用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术、划痕实验及Transwell细胞侵袭实验检测各浓度汉黄芩素作用24、48 h后SGC7901细胞的凋亡率及迁移、侵袭能力,Western blotting检测各浓度汉黄芩素作用48 h后SGC7901细胞Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin及下游靶分子C-myc、细胞周期素D1(Cyclin D1)的蛋白水平。结果:汉黄芩素在20~200μmol/L范围内可呈浓度和时间依赖性抑制SGC7901、BGC-823及MKN-45细胞增殖。与汉黄芩素0μmol/L组比较,各浓度汉黄芩素作用24、48 h后SGC7901细胞凋亡率均升高,迁移距离和穿膜细胞数均降低(P0.05);除汉黄芩素20μmol/L组的β-catenin水平外,其余浓度SGC7901细胞β-catenin、C-myc及Cyclin D1蛋白水平均低于0μmol/L(P0.05),其作用呈量-效关系。结论:汉黄芩素对胃癌细胞的增殖有抑制作用,同时可诱导凋亡和抑制细胞侵袭和迁移,其机制可能与抑制Wnt/β-catenin通路激活有关。