洛伐他汀对血管内皮细胞与平滑肌细胞增殖调节作用的对比实验研究

目的探讨洛伐他汀对人血管内皮细胞与平滑肌细胞的调节作用及其调节差异性。方法配制含不同浓度洛伐他汀的培养基f0、0．001、O．01、0,1、1、10μmol／L）,分别于96孔板中进行人脐静脉内皮细胞（HUVECs）与血管平滑肌细胞（VSMCs）培养,在培养24、72、120h后以MTT法对两种细胞进行细胞活性及增殖情况评估。结果培养24h,0．1μmol／L的洛伐他汀对HUVECs存在明显的促进增殖作用;培养72h,1斗mol／L的洛伐他汀对HUVECs存在明显的促进增殖作用;培养120h后,O．001、0．01、0．1、1μmol／L的洛伐他汀与对照组相比HUVECs增殖活性无明显差异,10μmol／L的洛伐他汀表现出明显的增殖抑制作用。培养24h和120h,各浓度组洛伐他汀对VSMCs的增殖无显著调节作用;培养72h,0．001、0．01、1、10μmol／L的洛伐他汀对VSMCs的增殖存在部分抑制作用,未发现剂量相关规律性。结论洛伐他汀对人血管内皮细胞增殖存在双向调节作用,与浓度相关。体外浓度0.1、1μmol／L时可以表现出明显的促进增殖作用,浓度达10μmol／L时则表现出抑制作用。相同浓度下,洛伐他汀无促进VSMCs增殖的作用,并且存在部分抑制VSMCs增殖的作用。     

三氧化二砷诱导人骨髓瘤细胞RPMI8226发生Caspase非依赖性细胞凋亡的实验研究

本研究探讨三氧化二砷(As2O3)作用于骨髓瘤细胞RPMI8226引起非Caspase依赖性细胞凋亡。用MTT法检测细胞增殖率,流式细胞术检测RPMI8226细胞的凋亡率,Western blot方法检测细胞BCL-2及Caspase-3蛋白表达水平。结果表明,As2O3(0.1-20μmol/L)作用于人骨髓瘤细胞RPMI8226 24,48,72 h显示出明显的增殖抑制作用(P<0.05),呈浓度和时间依赖性。与As2O3(10μmol/L)单独处理组相比,zVAD-fmk(20μmol/L)与As2O3联合处理组的凋亡率未见明显变化。与As2O3(10μmol/L)单独处理组比较,zVAD-fmk与As2O3联合处理组Caspase-3、BCL-2蛋白表达明显升高。结论:As2O3对RPMI8226细胞的增殖有明显的抑制作用。As2O3可诱导RPMI8226细胞发生凋亡,其凋亡过程中可能存在Caspase非依赖性细胞凋亡程序。     

三氧化二砷对转化生长因子β1诱导的大鼠肺成纤维细胞增殖的影响

目的探讨三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)对转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)诱导的成纤维细胞增殖的影响。方法实验采用分离培养正常健康SD大鼠肺组织的成纤维细胞。取对数生长期的细胞随机分为空白组(正常成纤维细胞)、模型组(加入0.5μg/L浓度的TGF-β1的成纤维细胞)、以及干预组(在TGF-β1诱导的成纤维细胞中分别加入浓度为0.5、1、2μmol/L的As2O3),取12、24、48小时为观察时间点。用活细胞动态分析系统(Cell-IQ)观察各组细胞的形态和生长情况。用四甲基偶氮唑蓝(MTT)方法观察各组细胞的增殖抑制率。结果不同浓度As2O3干预组中大鼠肺成纤维细胞的增殖均受到抑制,抑制程度具有明显的剂量—时间依赖性,细胞增殖抑制率以各浓度As2O3干预组48小时观察时间点和2μmol/L干预组最为明显(P<0.01)。不同浓度As2O3干预组在48小时观察时间点的细胞增殖抑制率分别为(14.76±2.16)%、(32.55±2.80)%、(57.41±3.25)%(均P<0.01);2μmol/L干预组12小时、24小时、48小时的细胞增殖抑制率分别为(30.53±2.38)%、(41.29±2.67%)%、(57.41±3.25)%(均P<0.01),并且分别与0.5μmol/L及1μmol/L干预组在这3个时间点的细胞增殖抑制率相比,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论 As2O3能抑制TGF-β1诱导的大鼠肺成纤维细胞增殖,从而可能起到减轻肺纤维化的作用。     

三氧化二砷对K562细胞血管内皮生长因子及受体和MMP-2、9的影响

目的探讨三氧化二砷（As2O3）对K562细胞的血管内皮生长因子（VEGF）及其受体（VEGFR）表达水平和基质金属蛋白酶2、9（MMP-2、9）活性的影响。方法用MTT法测定As2O3对K562细胞的毒性，酶联免疫吸附试验测定细胞上清中VEGF含量，流式细胞术检测细胞的VEGFR表达率，明胶酶谱法半定量测定细胞上清中MMP-2、9的活性。结果①Mar法检测K562细胞的，IC50为（2．12±0．11）μmol／L，0．4～6．4μmol／LAs2O3可显著抑制K562细胞的增殖（P＜0．05）。②0．05μmol／L As2O3对VEGF无明显影响（P＞0．05）；0．4和3．2μmol／LAs2O3可明显下调VEGF表达（P＜0．05）；As2O3对VEGFR的表达无明显影响（P＞0．05）。③MMP-2、9经0．05μmol／L As2O3处理72h、0．4和3．2μmol／L As2O3处理24、48和72h均可显著抑制K562细胞MMP-2、9的活性（P＜0．05），这种抑制作用随As2O3浓度增加和作用时间延长而逐渐增强。结论As2O3可下调K562细胞VEGF的表达和抑制MMP-2、9的活性。     

柚皮素缓解高糖对雪旺细胞损伤的作用机制分析

目的 分析柚皮素缓解高糖对雪旺细胞损伤的作用机制。方法 使用Bockes改良法从新生3 d的Wistar乳鼠的坐骨神经组织内分离纯化雪旺细胞,将其随机分为5组,A组细胞使用DMEM培养基培养72 h,B组细胞使用含5.6 mmol/L葡萄糖的DMEM培养基培养72 h,C组细胞使用含5.6 mmol/L葡萄糖和20μmol/L柚皮素的DMEM培养基培养72 h,D组细胞使用含5.6 mmol/L葡萄糖和40μmol/L柚皮素的DMEM培养基培养72 h,E组细胞使用含5.6mmol/L葡萄糖和80μmol/L柚皮素的DMEM培养基培养72 h。对各组细胞培养不同时间的细胞活力和细胞凋亡率、培养72 h后培养液内炎症因子和氧化应激指标水平、培养72 h后NF-κB相关蛋白表达及其mRNA水平进行比较。结果与A组相比,B组、C组、D组、E组细胞培养24、48、72 h的吸光度（A）值均降低;与B组相比,C组、D组、E组细胞24、48、72 h的A值均升高;且随着柚皮素剂量的升高细胞24、48、72 h的A值升高,差异均有统计学意义（P <0.05）。与A组相比,B组、C组、D组、E组...     

As2O3对慢性粒细胞白血病原代细胞BCR-ABL蛋白水平及信号转导的影响

目的：阐述As2O3对慢性粒细胞白血病（CML）原代细胞BCR－ABL及信号转导的影响。方法：采用免疫沉淀、蛋白酪氨酸激酶（protein tyrosine kinase,PTK)活性测定和Western印迹、实时定量PCR等方法。结果：1．0μmol/L和2．0μmol/L As2O3作用48h,CML患者骨髓单个核细胞BCR／ABL蛋白含量下调,0．5μmol/L时无明显改变。在0．5μmol/L As2O3作用下STAT1蛋白下调,1．5μmol/L和2．0μmol/L时下调更明显。P27蛋白无变化。As2O3作用60h,可使CML患者骨髓单个核细胞BCR－ABL蛋白PTK活性轻度下降。As2O3对bcr-abl融合基因的mRNA表达无明显影响。结论：As2O3下调BCR－ABL蛋白STAT1蛋白水平,减弱BCR－ABL信号的下传。As2O3下调PTK活性。     

丙泊酚对食管癌细胞增殖、侵袭、凋亡的影响及机制研究

目的探讨丙泊酚对食管癌细胞增殖、侵袭、凋亡的影响及机制。方法 CCK8实验检测5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L、80μmol/L的丙泊酚处理人食管癌细胞EC9706 48 h及80μmol/L的丙泊酚处理细胞12h、24 h、48 h、72 h的细胞增殖情况;80μmol/L的丙泊酚处理细胞72 h后,Transwell小室和流式细胞仪分别检测细胞的侵袭及凋亡情况;Western blot检测基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、MMP-13、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase 3)、β-catenin、细胞周期蛋白(Cyclin D1)蛋白表达。结果 40μmol/L、80μmol/L的丙泊酚处理组细胞存活率显著低于0μmol/L组(P0.05),在24 h、48 h、72 h的细胞存活率显著低于对照组0 h(P0.05);丙泊酚组细胞侵袭数及MMP-2、MMP-13、β-catenin、Cyclin D1蛋白表达显著低于对照组,细胞凋亡率和Cleaved caspase 3蛋白显著高于对照组(P0.05)。结论丙泊酚可通过下调Wnt/β-catenin信号通路抑制食管癌细胞增殖及侵袭能力,诱导细胞的凋亡。     

地西他滨联合三氧化二砷对急性髓系白血病MV4-11细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨地西他滨(DAC)单用或联合三氧化二砷(As2O3)对人类急性髓系白血病(AML)MV4-11细胞的增殖和凋亡的影响,为寻找治疗MLL重排的AML的有效方法提供实验依据。方法:应用CCK8法检测DAC和As2O3单药对MV4-11细胞增殖的抑制情况,以低于50%抑制浓度(IC_(50))的DAC与低于20%抑制浓度(IC_(20))的AS_2O_3联合用药,检测联合用药对MV4-11细胞增殖时的抑制情况。用流式细胞术检测两药单用及联合应用时M V4-11细胞的凋亡情况。结果:DAC和AS_2O_3单独用药时,随着药物浓度的增加对MV4-11细胞的增殖抑制作用逐渐增强(P0.01)。DAC和As_2O_3对MV4-11细胞的IC_(50)分别为2.409和2.364μmol/L。与DAC单独用药比较,低于(IC_(50))值各浓度(0.01、0.1、0.5、1μmol/L)DAC与As_2O_3(0.25μmol/L)分别联合用药,对MV4-11细胞增殖抑制率均明显升高(P0.05)。DAC(5.0μmol/L)作用MV4-11细胞48 h的凋亡率为13.50%±1.87%,As_2O_3(2μmol/L)作用MV4-11细胞48 h的凋亡率为12.60%±2.33%,两药联合采用的凋亡率增高为51.13%±4.97%。结论:DAC和As_2O_3能显著抑制MV4-11细胞增殖并诱导其凋亡,两药联合应用对MV4-11细胞增殖抑制及诱导凋亡有协同作用。     

三氧化二砷联合硼替佐米对K562细胞增殖和凋亡的影响及其机制的实验研究

本研究探讨三氧化二砷（As2O3）单独或联合硼替佐米（Bor）对髓系白血病细胞系K562细胞增殖、凋亡的影响及其可能的作用机制。不同浓度的As2O3、Bor处理细胞24、48h,采用MTT比色法检测细胞增殖活性,流式细胞术检测单用As2O3、Bor及二者联用的细胞凋亡率及细胞周期的变化;免疫组织化学法分析各组核转录因子（NF-κB）的表达水平。结果表明,As2O3（0．1-0．8μmol／L）和Bor（5-50nmol／L）均能抑制K562细胞的增殖,且与作用时间和药物浓度有关,时间越长,浓度越大,抑制越明显（P〈0．05）;Bor和As2O3作用48h的IC50值分别为20nmol／L和0．6μmol／L。As2O3（0．5μmol／L）或Bor（10nmol／L）分别单独处理细胞24h,K562细胞凋亡增加,联合用药组的细胞凋亡率高于单药组（P〈0．01）。As2O3或Bor处理K562细胞6h时细胞周期分布显示：As2O3组细胞阻滞于G0／G1期,Bor组细胞阻滞于G2／M期。As2O3或Bor分别单独处理细胞24h,NF-κB表达阳性率及积分较对照组明显降低（P〈0．05）,联合用药组的NF-κB表达阳性率及积分较As2O3及Bor单用组均明显降低（P〈0．01）。结论：As2O3及Bor单药均可以直接抑制K562细胞增殖,促进凋亡,两药小剂量联合作用后,细胞增殖抑制及促凋亡作用较单药明显增强。细胞周期阻滞点的不同及NF-κB表达的下降可能是As2O3和Bor联用后协同作用的机制之一。     

三氧化二砷对HL-60细胞增殖、分化和凋亡的影响及其作用机制探讨

目的:观察三氧化二砷(As2O3)对HL-60细胞增殖、分化和凋亡的影响,并探讨其相关作用机制。方法:不同浓度As2O3处理HL-60细胞,应用MTS/PES方法检测细胞增殖,NBT实验测定细胞分化,流式细胞术检测细胞凋亡和分化相关抗原CD11b的表达,SYBR Green real-time RT-PCR方法检测C-FES、BCL-2、BAX、Survivin、P21和P27 mRNA水平变化。结果:As2O3能明显抑制HL-60细胞增殖,其效应呈剂量依赖和时间依赖性(r=-0.967;r=-0.954);低浓度(0.1、0.5和1.0μmol/L)As2O3能明显促进细胞分化,NBT阳性率和CD11b表达水平均有不同程度的增高;较高浓度As2O3(2.5和5.0μmol/L)能明显诱导细胞凋亡,抑制细胞分化。HL-60细胞经1.0和5.0μmol/L浓度As2O3处理后,C-FES mRNA表达均明显上调,但以1.0μmol/L组更为明显,证实C-FES mRNA表达水平与细胞分化程度成正比。此外,5.0μmol/L浓度As2O3显著下调了HL-60细胞BCL-2和Survivin的表达,相反明显上调了BAX、P21和P27的表达。结论:As2O3能明显抑制HL-60细胞增殖、促使细胞分化成熟及诱导细胞凋亡,其机制可能涉及C-FES以及细胞周期和凋亡相关基因的调控。     

白藜芦醇通过调控Wnt/β-catenin信号通路抑制体外胃癌细胞生长的研究

目的探讨白藜芦醇(Res)对胃腺癌细胞(AGS)生长的影响及其与Wnt/β-catenin信号通路的关系。方法体外培养胃癌细胞株AGS,并以不同浓度Res(25、50、100μmol/L)干预24、48、72 h后,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞抑制率;不同浓度Res干预24 h流式细胞仪检测细胞周期,细胞免疫组化检测Wnt1、β-catenin、Lgr5的表达情况。实验数据以x±s表示,采用SPSS13.0软件进行统计分析,多组间比较采用单因素方差分析,两两比较采用t检验。P<0.05表示差异有统计学意义。结果不同浓度Res(25、50、100μmol/L)干预24、48、72 h后,AGS细胞的状态变差,细胞形态变圆密度及数量减少,贴壁较差,细胞增殖抑制率分别为:25μmol/L Res作用24 h组(0.2033±0.0207)、48 h组(0.3949±0.0199)、72 h组(0.5102±0.0155);50μmol/L Res作用24 h组(0.3554±0.0207)、48 h组(0.5157±0.0321)、72 h组(0.6167±0.0248);100μmol/L Res作用24 h组(0.5005±0.0199)、48 h组(0.6251±0.0299)、72 h组(0.7271±0.0147),细胞增殖抑制率呈时间依赖性与剂量依赖性(P<0.05);不同浓度Res作用24 h后,检测G1期细胞所占比分别为空白组(48.33±0.21)%、25μmol/L Res作用组(52.61±0.41)%、50μmol/L Res作用组(58.53±0.48)%、100μmol/L Res作用组(71.16±0.20)%,细胞周期阻滞在G0/G1期(P<0.05);不同浓度Res干预24 h后100μmol/L组(207.36±0.52)、50μmol/L组(202.65±0.53)、25μmol/L组(197.13±1.07)Wnt1灰度值均高于对照组(191.40±0.28)(P<0.05);100μmol/L组(206.51±0.68)、50μmol/L组(200.49±0.30)、25μmol/L组(196.53±0.59)β-catenin灰度值均高于对照组(191.98±0.30)(P<0.05),100μmol/L组(209.22±0.51)、50μmol/L组(204.53±0.92)、25μmol/L组(195.7±60.90)Lgr5灰度值均高于对照组(188.16±0.86)(P<0.05)。结论 Res可抑制胃癌细胞AGS的生长作用,其机制可能通过减少Wnt/β-catenin信号通路的活化而产生的。     

西达本胺联合地西他滨对霍奇金淋巴瘤细胞株增殖及凋亡的影响

目的探讨西达本胺联合地西他滨对霍奇金淋巴瘤(HL)细胞株Hs445和L428细胞增殖及凋亡的影响。方法采用MTT法检测西达本胺单用或联合使用地西他滨对Hs445和L428细胞的增殖与抑制作用,流式细胞术检测细胞凋亡情况及线粒体膜电位变化,Western blot检测细胞内cleaved PARP蛋白的表达。结果西达本胺作用24、48、72 h可抑制Hs445和L428细胞增殖,且呈现浓度和时间依赖性,对2种细胞的IC50(μmol/L)分别为1.91和3.46。西达本胺(μmol/L)(对Hs445为0.25、0.5,对L428为1、2)与地西他滨(μmol/L)(0.5、2)分别联合作用72h,对2种细胞的增殖抑制率(%)分别为35.76±0.97、54.20±1.32、54.12±1.24、73.13±0.45,41.05±0.67、56.40±0.39、67.80±0.89、82.35±1.45,对应浓度的西达苯胺单药组的增殖抑制率(%)为12.02±1.41、31.00±0.90,18.03±0.91、36.00±0.21(P0.05),且均为两药相互作用的协同指数(CI)1。0.5μmol/L西达本胺单用或其与2μmol/L地西他滨联合作用48 h后Hs445细胞凋亡率(%)分别为13.22±3.12 vs 67.26±7.87(P0.01);2μmol/L西达本胺单用或其与2μmol/L地西他滨联合作用48 h后L428细胞凋亡率(%)分别为34.03±4.67 vs 70.58±5.76(P0.01);联合用药组cleaved PRAP蛋白表达和线粒体膜电位的下降也明显高于单药组。结论西达本胺可抑制HL细胞株增殖并诱导其凋亡,与地西他滨联用对HL细胞株的增殖抑制及诱导凋亡具有明显著的协同效应。     

三氧化二砷联合5-杂氮脱氧胞苷对K562细胞SHP-1、JAK3、TYK2基因表达的影响

本研究旨在探讨甲基化抑制剂三氧化二砷（As2O3）及5-杂氮脱氧胞苷（5-aza-CdR）对JAK-STAT信号转导通路中JAK家族成员JAK3、TYK2和造血细胞磷酸酶SHP-1在慢性髓系白血病细胞株K562中表达的影响及它们在白血病发病中的作用。K562细胞分为单药组、联合用药组及不加药物组（空白对照）。5-aza-CdR单用浓度为0．5、1、2μmol/L,As2O3单用浓度为1、2．5、5μmoL／L,As2O3 1μmol/L＋5-aza-CdR0．5μmol/L、As2O3 2．5μmoL／L＋5-aza-CdR1μmol/L。As2O3联合用药浓度为5μmol/L＋5-aza-CdR2μmol/L。对细胞分别处理24、48、72h后提取细胞总RNA,应用荧光实时定量PCR（Real-timequantitativepolymerasechainreaction,RQ-PCR）检测JAK3、TYK2及SHP-1的表达。结果表明,As2O3和5-aza-CdR单独作用及两药合用时,SHP-1 mRNA在K562细胞中的表达呈剂量及时间依赖性升高,JAK3mRNA的表达呈剂量及时间依赖性降低,TYK2mRNA的表达呈剂量及时间依赖性降低,sHP-1与MK3、TYK2呈负相关,JAK3所受影响较TYK2更为显著。结论：As2O3 和5-aza-CdR单独及联合应用时,随着浓度增高和作用时间延长,SHP-1 表达上调,JAK3和TYK2表达下调,且两药有协同去甲基化作用;SHP-1基因可能通过抑制JAK／STAT通路发挥作用,以船所受影响较TYK2更为显著。在JAK／STAT通路中,JAK3可能发挥更为重要的作用。     

三氧化二砷联合丁硫氨酸亚砜胺对K562/ADM细胞的作用及其机制研究

目的 研究三氧化二砷（As2O3）联合γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶抑制剂丁硫氨酸亚砜胺（BSO）对肿瘤多药耐药细胞株K562／ADM细胞的诱导凋亡效应，及对P糖蛋白（P—gp）和mdr1mRNA表达的抑制作用，探讨谷胱甘肽（GSH）的含量变化与As2O3作用效果的关系。方法As2O3（0．5、2．0、5．0μmol／L）单独及联合100μmol／LBSO作用于K562／ADM细胞，应用MTT比色法检测K562／ADM细胞的增殖活性；膜联蛋白V／碘化丙锭（AnnexinV／PI）标记法观察K562／ADM细胞的凋亡效应；分光光度法检测K562／ADM细胞内GSH含量变化；流式细胞术（FCM）检测P—gp水平变化；RT—PCR方法检测mdr1mRNA的表达变化。结果 K562／ADM细胞内的GSH含量为（81．13±3．91）mg／g蛋白，在BSO降低GSH含量后，临床剂量（0．5、2．0μmol／L）As2O3联合BSO（100μmol／L）24h内即可抑制K562／ADM细胞的增殖活性，诱导K562／ADM细胞发生凋亡，处理48h凋亡率分别为（59．29±6．01）％，（65．06±8．29）％；72h凋亡率分别为（82．15±9．28）％，（92．72±9．41）％；其诱导凋亡效果均明显强于单用As2O3，临床剂量和高剂量（5．0μmol／L）组。K562／ADM细胞P—gp表达阳性率为98．1％，mdr1mRNA的相对表达水平为1．85±0．13，临床剂量As2O3联合BSO处理48h，其抑制mdr1mRNA表达的作用效果以及处理72h对P—gP的抑制作用均明显强于单用高剂量As2O3组。结论 GSH的含量变化与As2O3的作用效果密切相关，As2O3联合BSO可有效诱导K562／ADM细胞发生凋亡，有效抑制P—gP及mdr1mRNA的表达。     

黑色素瘤细胞株对盐霉素的敏感性及其细胞周期变化研究

目的探讨不同黑色素瘤细胞株对盐霉素的敏感性,及盐霉素对敏感细胞株细胞周期的影响。方法 8种不同黑色素瘤细胞株,采用不同浓度盐霉素(40、20、10、5、1.25、0.625、0.312 5μmol/L)作用3d,计算盐霉素对8种黑色素瘤细胞株的半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50),挑选对盐霉素敏感的黑色素瘤细胞株;将敏感黑色素瘤细胞株分为对照组、0.1μmol/L盐霉素组、0.3μmol/L盐霉素组和1.0μmol/L盐霉素组,分别给予0、0.1、0.3、1.0μmol/L盐霉素处理细胞,处理48h时采用流式细胞仪观察各组细胞周期变化情况,1.0μmol/L盐霉素组处理24、48h后观察细胞形态的变化情况。结果 SK-MEL-19细胞对盐霉素的IC50[(0.82±0.60)μmol/L]最低,低于其他7种细胞株,SK-MEL-19细胞对盐霉素最敏感;作用48h后,1.0μmol/L盐霉素组SK-MEL-19细胞G0G1期[(39.90±3.43)%]、G2M期[(4.03±1.51)%]、S期[(33.99±1.09)%]细胞比例明显低于对照组[(48.92±1.14)%、(6.39±0.77)%、(44.69±1.36)%]、0.1μmol/L盐霉素组[(44.65±1.13)%、(8.23±0.96)%、(47.12±1.18)%]和0.3μmol/L盐霉素组[(46.18±2.88)%、(8.20±2.17)%、(45.62±1.83)%](P0.05),对照组及0.1、0.3μmol/L盐霉素组细胞周期比例两两比较差异均无统计学意义(P0.05);1.0μmol/L盐霉素组作用24h后部分SK-MEL-19细胞出现空泡,作用48h后细胞出现明显死亡,且细胞周期有小凋亡峰(subG1峰)出现,有细胞凋亡存在。结论盐霉素对SK-MEL-19黑色素瘤细胞株有较强杀伤作用,此杀伤作用可能是通过诱导细胞凋亡实现的。     

姜黄素对3T3-L1前脂肪细胞增殖分化的影响

目的:脂肪细胞分化障碍是肥胖引发胰岛素抵抗的途径之一,观察中药姜黄提取物姜黄素对3T3-L1前脂肪细胞增殖分化的影响,在细胞水平分析姜黄素防治糖尿病可能的机制。方法:实验于2005-12/2006-03在哈尔滨医科大学营养与食品卫生学教研室完成。以3T3-L1前脂肪细胞为靶细胞,在常规培养时,分别加入0,5,10,15,20,25,30,35,40,50,80和100μmol/L浓度的姜黄素(购自美国Sigma公司),每个剂量设12个平行孔,培养3d,在此期间,分别在24,48,72h时,于姜黄素各剂量组中分别选取4个平行孔,以MTT法测定其增殖情况。在诱导分化时,设一组空白对照,实验组与诱导液同步加入0,2.5,5,10,15和20μmol/L的姜黄素,于诱导分化的第6天,采用油红O染色方法测定3T3-L1前脂肪细胞分化程度。结果:①姜黄素作用3T3-L1前脂肪细胞48h,5,10μmol/L剂量组的细胞吸光度值与空白对照相比显著增加(0.67±0.01,0.69±0.02,0.57±0.01,P<0.01),15μmol/L剂量组细胞吸光度值与空白对照相比差异无显著性意义(0.54±0.01,P>0.05),其余剂量组(20,25,30,35,40,50,80和100μmol/L)细胞吸光度值显著降低(0.53±0.01,0.47±0.01,0.42±0.03,0.45±0.03,0.18±0.01,0.2±0.01,0.16±0.04,0.44±0.05,P<0.01)。②姜黄素作用细胞48h时,促进或抑制细胞增殖的作用最强,40μmol/L以上浓度的姜黄素出现细胞毒性作用,大部分细胞成片脱落死亡。72h时,15～35μmol/L姜黄素组细胞的生长率有所增加,而40μmol/L以下姜黄素处理组细胞生长率仍维持在较低水平。③脂肪细胞油红O染色分光光度法结果显示2.5,5,10,15和20μmol/L姜黄素剂量组的细胞吸光度值与空白对照相比显著增加(0.38±0.05,0.49±0.04,0.56±0.06,0.75±0.06,0.77±0.1,0.83±0.06,0.38±0.05,P<0.05～0.01)。结论:不同浓度姜黄素对3T3-L1前脂肪细胞具有促进增殖和抑制增殖双重作用,低浓度姜黄素促进细胞增殖,高浓度姜黄素抑制细胞增殖。姜黄素通过促进3T3-L1前脂肪细胞的分化,从而增加脂肪细胞对胰岛素的敏感性,这可能是其防治糖尿病的机制之一。     

三氧化二砷对骨髓瘤细胞周期及其调节蛋白表达的影响

目的 研究三氧化二砷(As2O3)对骨髓瘤细胞周期及其调节蛋白表达的影响，探讨As2O3的药理机制。方法 利用流式细胞仪DNA含量分析法探讨As2O3对骨髓瘤细胞系HS—Sultan周期的影响；用RT—PCR方法进一步研究As2O3对细胞周期负性调控因子P5、P16和P21mRNA表达的影响。结果 As2O3使HS-Sultan细胞主要阻滞于C0／G1期，少部分阻滞于G2／M期，诱导S期细胞凋亡；未经As2O3处理的HS-Sultan细胞P15和P16mRNA均无表达，在1．0μmol/L As2O3作用24h后P15 mRNA出现弱的阳性条带，48h和72h后变为强阳性，P16mRNA则在48h后见弱的阳性条带，72h后呈强阳性，距P21mRNA在原有表达的基础上明显增强。结论 As2O3的药理作用之一是使细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子P15、P16和P21重新表达或表达增强，从而影响细胞增殖周期。     

地西他滨对全反式维甲酸耐药细胞株NB4-R2的增殖抑制及诱导凋亡作用研究

本研究探讨地西他滨(DAC)对全反式维甲酸耐药细胞株NB4-R2的增殖抑制及诱导凋亡作用。应用细胞增殖及毒性检测法(新型四唑单钠盐法)观察0.01-0.5μmol/L DAC作用于NB4-R2细胞24、48及72 h后的细胞增殖活力变化;PI单染及AnnexinⅤ-FITC/PI双染流式细胞术观察不同浓度DAC(0.05-5μmol/L)对NB4-R2处理48 h后的细胞凋亡率;RT-PCR法检测编码P糖蛋白(P-gp)的多药耐药基因1(MDR1)转录水平的变化。结果表明,0.01-0.5μmol/L DAC可抑制NB4-R2细胞增殖,并呈现明显的量-效与时-效关系;作用48及72 h后的IC50分别为0.089和0.064μmol/L;0.05-5μmol/L DAC以浓度依赖的方式诱导NB4-R2细胞凋亡,下调MDR1基因表达。结论:低浓度DAC(<0.5μmol/L)对NB4-R2细胞有增殖抑制作用,较高浓度DAC(1、5μmol/L)可以诱导NB4-R2细胞凋亡,同时使MDR1表达下调。     

整合素受体介导bcl-2反义核酸联合化疗药物对大肠癌细胞的增殖抑制作用

目的:评价以整合素配体-聚乙烯亚胺复合物(RGD-PEI)为载体携带bcl-2反义核酸(ASODN)分别联合化疗药物三氧化二砷(As2O3)和羟喜树碱(HCPT)对大肠癌细胞caco-2增殖抑制的作用。方法:改良MTT法检测bcl-2ASODN联合化疗药物对细胞的半数抑制率(IC50),金正均Q值法判断化疗药物与反义核酸联合使用的效果,并计算化疗药物的增敏倍数。结果:单用As2O3和HCPT的IC50分别是3.478μmol/L及0.771μg/mL;0.75μmol/LASOND联合As2O3和HCPT的IC50分别为3.393μmol/L和0.726μg/mL,与单用As2O3和HCPT的IC50相似;而相同浓度的RGD-PEI-ASODN联合As2O3及HCPT的IC50分别为0.119μmol/L和0.071μg/mL,将caco-2细胞对化疗药物的敏感性分别提高29.2倍及10.8倍。结论:在整合素受体介导时可以有效提高反义核酸对caco-2细胞的增殖抑制率,与化疗药物联用能明显提高细胞对化疗药物的敏感性。     

不同浓度尿酸对体外培养人脐静脉血管内皮细胞增殖过程的影响

背景:近年对尿酸特别是其与心血管疾病的研究较多,但多集中在流行病学领域,从细胞学角度探讨尿酸对内皮细胞影响的研究并不多见。目的:观察不同浓度的尿酸对体外培养的人脐静脉内皮细胞株(ECV304)丙二醛,一氧化氮及3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐的影响。设计:以人脐静脉内皮细胞为观察对象,随机对照实验。单位:解放军第四军医大学西京医院内分泌科。材料:脐静脉内皮细胞株ECV304由解放军第四军医大学免疫教研室提供;DMEM低糖培养基,美国Gibco公司生产;胎牛血清,北京元亨圣马生物技术研究所生产;胰蛋白酶,美国Gibco公司生产;3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐,华美公司生产;二甲基亚砜(DM-SO),分析纯,天津博迪化工有限公司生产;尿酸,Sigma公司生产。一氧化氮测试盒,丙二醛测试盒,南京建成公司生产。普通倒置显微镜、酶联免疫检测仪IX70型倒置显微镜,日本Olympus生产;酶联免疫检测仪,华东电子管厂生产。方法:实验于2003-12/2004-04在第四军医大学内分泌科和烧伤科进行。内皮细胞的复苏、培养、传代、接种均参考司徒镇强等主编的《细胞培养》中的方法进行。用无血清DMEM培养24h使细胞同步化于G0/G1期,分4组实验,分别为对照组,低浓度尿酸组,中浓度尿酸组和高浓度尿酸组,每组分为24h,48h和72h3个时间点,每个时间点8个样本。对照组,低浓度尿酸组,中浓度尿酸组和高浓度尿酸组分别加入含有0mmol/L,0.1mmol/L,0.2mmol/L,0.4mmol/L尿酸的5%的血清培养液,然后将培养板放入37℃,体积分数为0.05的CO2孵箱中孵育。在24h后检测丙二醛,一氧化氮及3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐,48h及72h分别再检测3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐。主要观察指标:各组人脐静脉内皮细胞增殖情况及一氧化氮和丙二醛的含量。结果:随尿酸浓度增高,ECV304产生丙二醛的含量逐渐下降,分别为(2.97±0.05),(2.89±0.09),(2.78±0.10),(2.44±0.03)μmol/L。ECV304产生一氧化氮的量分别为(6.86±1.41),(12.5±2.7),(18.9±1.8),(21.1±1.4)μmol/L,ECV304产生一氧化氮的量和3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐吸光度逐渐增加,细胞增殖以48h增加最为明显。结论:尿酸有抗氧化性,可促进血管内皮细胞的增殖及一氧化氮的释放。