基于性状—显微—DNA条形码联用的巴西牛至属植物药HORTELA基原鉴定研究

目的利用性状—显微—DNA条形码联用的方法对巴西牛至属植物药HORTELA进行基原鉴定研究。方法应用性状鉴定的方法初步对药材进行真伪鉴别;再应用显微鉴定的方法验证性状鉴定结果;最后提取样品DNA,扩增ITS序列,利用NCBI数据库中的BLAST功能分析相似度,对样品品种进行DNA条形码鉴定。结果性状—显微—DNA条形码综合分析结果表明,该样品为牛至属植物Origanum elongatum(Bonnet)Emb.Maire.的干燥地上部分。结论 HORTELA可能为多基原植物类药材,其来源为牛至属Origanum elongatum(Bonnet)Emb.Maire.和薄荷属Mentha rotundifolia(Linn.)Huds.干燥地上部分。     

基于DNA条形码—产地—形态分析联用的巴西马钱属植物药QUINA基原鉴定研究

目的通过DNA条形码—产地—形态分析联用的方法对巴西马钱属植物药QUINA进行基原鉴定研究,为这种药材的开发利用提供依据。方法通过提取样品DNA、PCR扩增及双向测序,获得样品的内转录间隔区(internal transcribed spacer,ITS)序列,利用NCBI数据库中的BLAST功能计算相似度,对其基原进行DNA条形码鉴定;根据其产地信息对DNA条形码鉴定结果进行筛选和分析;依据其形态特征验证鉴定结果。结果本次收集的植物类药材QUINA来源于马钱科马钱属植物Strychnos pseudo quina A.St.-Hil.的根皮。结论 DNA条形码—产地—形态三者联用的方法可弥补单一鉴定方法的不足,能够快速、准确的对未知样品进行基原鉴定。     

基于DNA条形码—产地—形态分析联用的巴西草药PICO(鬼针草)的鉴定及生药学研究

目的对巴西鬼针草药材进行基原鉴定及生药学研究,为药材质量控制和开发应用提供依据。方法提取样品总DNA,扩增ITS基因序列,利用相似度搜索法进行分子鉴定。利用通过DNA条形码—产地—形态分析方法鉴定巴西鬼针草。按照2010版《中华人民共和国药典》(一部)中方法分析样品性状、显微特征。结果 DNA条形码—产地—形态分析联用的鉴定方法鉴定巴西鬼针草药材来源于菊科植物鬼针草Bidens pilosa。结论巴西鬼针草药材来源于菊科植物鬼针草Bidens pilosa,生药学特征可以作为药材鉴定的依据。     

基于DNA条形码—产地—形态分析联用的巴西草药DENTEDE LEO(蒲公英)的混伪品鉴定及生药学研究

目的对巴西市场上销售的药用蒲公英的混伪品进行鉴定及生药学研究。方法通过提取样品DNA、PCR扩增及双向测序,获得样品的ITS序列。采用相似度分析法进行分子鉴定;根据植物产地分布特征和形态特征验证结果,三种方法联用获得鉴定结果;分析混伪品的性状和显微特征。结果 DNA条形码研究表明巴西药用蒲公英的混伪品来源于菊科植物假蒲公英猫儿菊Hypochaeris radicata的全草,产地分析和形态分析验证了DNA条形码鉴定结果。结论巴西药用蒲公英的混伪品来源于菊科蒲公英属植物假蒲公英猫儿菊Hypochaeris radicata的全草。混伪品的生药学特征能够为巴西草药DENTE DE LEO的真伪鉴别提供依据。     

基于DNA条形码—产地—形态分析联用的巴西草药CENTELHA ASITICA(积雪草)的生药学研究

目的对巴西草药CENTELHA ASITICA进行生药学研究。方法采用DNA条形码技术对巴西草药的叶片提取DNA、扩增ITS序列、双向测序,采用相似度法进行物种鉴定,再结合产地信息和性状特征核对DNA条形码鉴定结果进行验证。结果巴西草药CENTELHA ASITICA与NCBI核酸数据库积雪草ITS序列达到最高相似度,相似度为99%,鉴定其为伞形科植物积雪草Centella asiatica(L.)Urban。在地理分布上,巴西草药CENTELHA ASITICA符合积雪草的分布特征;从形态分析上,样品与积雪草特征相符合。结论基于DNA条形码-产地-形态分析的鉴定方法能够对巴西草药CENTELHA ASITICA进行鉴定,鉴定该物种来源于伞形科植物积雪草Centella asiatica(L.)Urban的干燥全草。生药学研究能够为CENTELHA ASITICA品种鉴定及质量标准研究提供依据。     

桑白皮基原物种的DNA条形码鉴定研究

目的：基于DNA条形码技术，采用ITS2片段对采集至山东烟台的10个桑白皮样品进行基原鉴定研究，以确定样本的基原物种。方法：对采集的桑白皮样品提取DNA，然后进行PCR扩增和测序，应用CodonCode Aligner 2.06(CondonCode Co,USA)软件进行序列拼接及校对，根据GenBank数据库进行BLAST鉴定以及DNA条形码鉴定系统鉴定。结果：DNA条形码鉴定系统鉴定结果显示与系统内物种序列相似度100%，结合GenBank数据库BLAST鉴定结果，所采集的桑白皮样品皆为桑属。结论：DNA条形码技术可作为物种基原的鉴定方法。     

DNA条形码技术在新疆进口民族民间药材基原考证中的应用

目的:采用DNA条形码技术,研究探索新疆进口民族民间药材基原考证。方法:使用试剂盒法提取药材总DNA,采用ITS2序列、psbA-trnH序列对30份进口维吾尔药材样品进行PCR扩增并双向测序,利用MEGA7.0等软件分析序列信息,将序列在DNA条形码基原植物鉴定数据库及GenBank数据库中进行比对,搜索相似性最高的植物,判定药材可能的基原。结果:综合ITS2及psbA-trnH实验结果,30份药材中有28份样品测序成功并得到有效的鉴定序列,相似性对比结果显示有15种药材与文献记载基原植物一致,7份与基原植物为近缘种,6种药材与文献记载基原植物不同属。结论:进口维吾尔药材的基原调查与考证工作迫在眉睫。     

基于DNA条形码—产地—形态分析联用的巴西草药BARDANA(牛蒡)的品种鉴定及高效液相色谱研究

目的对巴西草药牛蒡的品种进行鉴定,同时研究其中的牛蒡苷含量,为其品种整理和药理研究提供依据。方法利用DNA条形码—产地—形态分析联用技术鉴定巴西草药牛蒡的基原,高效液相色谱法测定其牛蒡苷含量。结果 DNA条形码初步鉴定巴西草药牛蒡为菊科牛蒡属植物,且与牛蒡达到最高相似度99%,产地及形态分析进一步确证其为牛蒡的地上部分;巴西牛蒡草中牛蒡苷平均含量为0.281%,明显低于中国牛蒡草牛蒡苷平均含量3.72%。结论巴西草药牛蒡来源于牛蒡Arctium lappa L.的干燥地上部分,其牛蒡苷含量极低。     

建立对生药进行准确鉴定和全面质量评价的二元条形码系统

由于很多常用生药来源繁多,导致市场上品种混乱,药材质量参差,需要准确、快速、可靠的鉴定与质量评价体系。本文提出建立生药鉴定与质量评价的二元条形码系统的解决方法,即基于小片段基因序列的DNA条形码和基于代谢谱的化学条形码数据库：分子条形码可准确鉴定物种基原,化学条形码可弥补其在质量评价方面的欠缺;待检测生药分别提取分子条形码和化学条形码,输入数据库进行数据处理,即可获得其准确的基原、产地、质量等全面信息。按DNA条形码技术规程采集植物标本和生药样品;测定matK、trnH-psbA、ITS等序列,确定适合作为条形码的区域,在BOLD平台建立DNA条形码数据库;以UPLC-MS检测样品的代谢谱,建立可用MZmine或CASE等程序进行分析的化学条形码数据库。二元条形码系统可望为生药的准确鉴定与全面质量评价提供新途径,并可用于探讨植物间的亲缘关系及系统发育。     

建立对生药进行准确鉴定和全面质量评价的二元条形码系统

由于很多常用生药来源繁多,导致市场上品种混乱,药材质量参差,需要准确、快速、可靠的鉴定与质量评价体系。本文提出建立生药鉴定与质量评价的二元条形码系统的解决方法,即基于小片段基因序列的DNA条形码和基于代谢谱的化学条形码数据库：分子条形码可准确鉴定物种基原,化学条形码可弥补其在质量评价方面的欠缺;待检测生药分别提取分子条形码和化学条形码,输入数据库进行数据处理,即可获得其准确的基原、产地、质量等全面信息。按DNA条形码技术规程采集植物标本和生药样品;测定marK、trnH—psbA、ITS等序列,确定适合作为条形码的区域,在BOLD平台建立DNA条形码数据库;以UPLC—MS检测样品的代谢谱,建立可用MZmine或CASE等程序进行分析的化学条形码数据库。二元条形码系统可望为生药的准确鉴定与全面质量评价提供新途径,并可用于探讨植物间的亲缘关系及系统发育。     

黄芩ITS2条形码数据库构建及其种子的DNA条形码鉴定方法建立

目的:通过构建黄芩核糖体DNA内转录间隔区2(ITS2)条形码数据库,建立黄芩种子DNA条形码鉴定新方法,保障黄芩种子基原准确。方法:收集黄芩对照药材、基原植物、生药材、公共数据库及其常见代用品的ITS2序列,构建黄芩DNA条形码数据库;收集62份市售黄芩种子样品,每份种子获取3~4条ITS2序列,基于BLAST方法、遗传距离法和邻接(NJ)系统发育树法进行物种鉴定。结果:共获得101条黄芩及其代用品的ITS2序列。黄芩的种内序列变异小于种间序列变异,黄芩、甘肃黄芩和粘毛黄芩在NJ系统发育树上分别聚为独立的支,可相互区分。共获得195条黄芩种子的ITS2序列,DNA条形码鉴定结果表明193条为黄芩序列,2条为真菌序列。结论:黄芩ITS2条形码数据库稳定可靠,可满足黄芩种子DNA条形码鉴定的需求。DNA条形码技术可用于黄芩种子的物种鉴定。     

基于ITS2序列的维吾尔药材神香草鉴定研究

目的:采用DNA条形码技术建立维吾尔药材神香草鉴别的方法。方法:使用DNA条形码ITS2序列,建立了维吾尔药材神香草基原植物DNA条形码ITS2序列标准数据库,对市售11份"神香草"药材进行鉴定。结果:市售神香草药材仅有2份为维吾尔药材标准中收录的硬尖神香草,1份为神香草属植物,1份为鼠尾草属植物,其余7份来源于荆芥属植物。结论:DNA条形码ITS2序列可作为鉴定维吾尔药材神香草及其伪品药材的有效工具。     

用DNA条形码技术对市售花胶进行基原鉴定

目的:运用DNA条形码技术确定广州市售花胶的物种来源。方法:用自行设计的COⅠ引物对11份市售花胶样品进行PCR扩增、测序,将所得序列构建UPGMA系统发育树,进行聚类分析;用BOLD(The Barcode of Life Data Systems)系统的物种鉴定引擎,与数据库中已有鱼类序列进行比对,鉴定出各样品的基原。结果:11份市售花胶样品用自行设计的引物均可实现扩增,条带清晰、稳定,扩增和测序成功率均为100%;BOLD鉴定结果显示,11份样品来源于3科5种鱼类,UPGMA聚类分析对结果进行了确证。结论:DNA条形码技术与BOLD鉴定系统相结合,可对市售花胶进行准确的基原鉴定。     

全蝎DNA条形码分子鉴定研究

目的:本研究通过COI序列对全蝎及其混伪品进行DNA条形码鉴别,为全蝎药材分子鉴定提供科学依据。方法:通过野外采集东亚钳蝎正品,对采集样品形态学鉴定、DNA提取、PCR扩增COI序列,测序建立东亚钳蝎的正品COI数据库,通过比对确定东亚钳蝎正品和伪品的DNA条形码。结果:实验共获取310份东亚钳蝎样本。通过序列分析,确定东亚钳蝎COI序列长度为658 bp。采用MEGA 6.0软件对东亚钳蝎样品及混伪品进行序列比对,构建邻接(NJ)树。结果表明东亚钳蝎COI序列扩增成功,与混伪品COI序列明显区分。结论:本研究运用COI条形码序列可准确鉴定全蝎的基原动物及其混伪品,为后续全蝎药材的分子鉴定提供了新的可行性方法。     

基于“二维特征鉴别法”的巴西草药GENGIBRE真伪鉴别

目的对巴西草药GENGIBRE进行真伪鉴别。方法利用"二维特征鉴别法",即DNA条形码技术联用HPLC技术的方法,鉴定巴西草药GENGIBRE的基原,并测定其6-姜辣素的含量,对样品进行遗传学与化学两方面的鉴别。结果通过DNA条形码初步鉴定巴西草药GENGIBRE为芸香科植物,且与芸香科吴茱萸植物相似度最高,相似度范围为97%~99%;巴西草药GENGIBRE中6-姜辣素的含量远低于中国干姜,分别为1.12 mg/g和7.61 mg/g。结论本试验应用"二维特征鉴别法",在遗传学和化学两方面均证明所用巴西草药GENGIBRE相对于中国干姜是伪品。该方法在对未知样品进行某品种的定向真伪鉴别方面具有潜在的应用价值。     

基于DNA条形码技术的新疆民族药材天山堇菜基原研究

目的：明确市售药材天山堇菜的植物基原,为药材鉴定提供方法依据。方法：使用DNA条形码ITS2序列,建立了民族药材天山堇菜及同属126份基原植物的DNA条形码ITS2序列标准数据库,分析市售18份“天山堇菜”药材的基原。结果：成功建立了堇菜属126份植物的ITS2序列数据库,通过此数据库对18份市售药材的鉴定结果表明,8份为天山堇菜（44.4%）,3份为香堇菜（16.7%）,6份为堇菜属植物（33.3%）,1份为非堇菜属植物（5.6%）。结论：市售民族药材天山堇菜来源于多种植物,其中不足一半与标准中基原一致,多数为混伪品,其是否均能作为天山堇菜使用,还有必要结合用药历史考证。     

中药材北沙参种子DNA条形码鉴定研究

目的：本研究旨在建立鉴定北沙参种子的新方法,确保药材生产种植中种质基原准确。方法：对北沙参不同产地种子经初步形态特征鉴定后,取单粒种子为一份样品,提取基因组DNA、PCR扩增、双向测序拼接获得ITS2序列,结合序列比对、变异位点分析,基于中药材DNA条形码鉴定系统（http://www.tcmbarcode.cn）,系统地完成种子样品的分子鉴定。结果：研究表明66份种子样品中,64份与《中国药典中药材DNA条形码标准序列》中北沙参序列特征一致,2份样品序列中各有一处SNP位点,为北沙参暂未发现过的遗传多样性信息,鉴定结果显示为北沙参。结论：DNA条形码技术能准确鉴定北沙参种子,并为中药材种子鉴定提供新方法,同时SNP位点的发现为后续研究北沙参品种多样性问题提供参考。     

中国动物药材DNA条形码数据库

课题组联合相关研究者开展动物药材DNA条形码分子鉴定研究,并结合分析GenBank序列,采用BLAST分析防错、系统树分析防错和Barcoding Gap检验防错等方法核验序列的可靠性,构建了中国动物药材DNA条形码数据库。该库由样品数据库、序列数据库和文献数据库组成,包含800余种动物药材和大量动物药材混伪品及密切相关物种。中国动物药材DNA条形码数据库可以通过中药材DNA条形码鉴定系统（www.tcmbarcode.cn）进行网络访问并实现未知动物样本的DNA条形码鉴定。该研究首次构建统一的中国动物药材DNA条形码数据库,对动物药材鉴定、资源可持续利用和濒危物种保护均有重要意义。     

基于ITS2序列的中药材桔梗种子DNA条形码鉴定

目的：桔梗为中国常用大宗药食兼用中药材,种植面积广,建立基于DNA 条形码技术的桔梗种子鉴定方法具有重要意义。方法：本研究共收集29份中药材桔梗基原植物和种子样品;利用体式显微镜、X射线影像工作站观察种子的形态特征及种子成熟度;优化DNA提取方法;基于中药材DNA条形码鉴定系统（http://www.tcmbarcode.cn）和《中国药典中药材DNA条形码标准序列》对种子物种进行鉴定。结果：不同群体来源或同一群体来源桔梗种子形态特征存在较大差异,识别困难;本实验可以实现单粒桔梗种子（约1mg）的DNA提取、PCR扩增和序列测定;5份样品同一群体内种子ITS2序列存在差异;中药材DNA条形码鉴定系统和《中国药典中药材DNA条形码标准序列》可以作为种子物种鉴定的依据。结论：DNA条形码分子鉴定法可以对中药材桔梗种子进行鉴定,同时为中药材种质资源鉴定提供了新方法,对中药材种子质量标准的建立提供依据。     

基于DNA条形码技术的知母种子基原鉴定

目的:建立基于中药材DNA条形码技术的知母种子基原鉴定方法,保障知母种子基原的真实性。方法:收集知母的30份基原植物样品和9份生药材样品,获取其参考DNA条形码序列,采用克隆测序方法验证参考序列的准确性。收集51份待检测知母种子样品,获取其DNA条形码序列,基于BLAST法、遗传距离法和邻接(NJ)系统发育树法进行物种鉴定。结果:对于基原植物和生药材样品,由于基因组内存在异质性,核糖体DNA第2内部转录间隔区(ITS2)序列无法稳定获得,但可成功获得psbA-trnH序列。知母psbA-trnH序列分为6个单倍型,有3个变异位点,2处插入/缺失,种内变异最大值0.003 5,种间变异最小值0.1,在NJ系统发育树上聚为独立的支。共获得153条知母种子的psbA-trnH序列,经BLAST法、遗传距离法和NJ系统发育树法鉴定均为百合科植物知母Anemarrhena asphodeloides。结论:psbA-trnH是知母种子鉴定的适合条形码序列,可用于知母种子的真实性鉴定。所收集51份知母种子样品的基原均符合2015年版《中国药典》(一部)相关项下规定,未发现伪品。