华蟾酥毒基诱导人骨肉瘤细胞 U-2OS 凋亡的实验研究

目的：观察华蟾酥毒基对人骨肉瘤细胞 U-2OS 增殖和凋亡的影响,从而探讨华蟾酥毒基诱导骨肉瘤凋亡的可能机制。方法：应用四甲基偶氮唑蓝比色法检测华蟾酥毒基对人骨肉瘤细胞 U-2OS 增殖的影响;应用流式细胞术检测华蟾酥毒基及华蟾酥毒基联合泛 Caspase 抑制剂 Z-VAD-FMK 对人骨肉瘤细胞 U-2OS 细胞凋亡的影响;应用蛋白质印迹法检测华蟾酥毒基对凋亡通路相关蛋白表达的影响。结果：四甲基偶氮唑蓝比色法实验结果表明,华蟾酥毒基以时间和浓度依赖的方式抑制 U-2OS 细胞生长。流式细胞术结果显示,100 nM华蟾酥毒基干预后,U-2OS 细胞凋亡率为（46．87±11．23）％,但当华蟾酥毒基与泛 Caspase 抑制剂 Z-VAD-FMK 共同干预后,细胞凋亡率仅为（2．34±0．98）％,与空白对照组及华蟾酥毒基联合 Z-VAD-FMK 组相比,华蟾酥毒基能显著提高细胞凋亡率（P ＜0．01）。蛋白质印迹法结果显示,华蟾酥毒基能够显著提高促凋亡蛋白Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-8、Cleaved Caspase-9的表达。结论：华蟾酥毒基对人骨肉瘤细胞 U-2OS 的生长有显著抑制作用,并能够促使肿瘤细胞凋亡,其作用机制可能与激活 Caspase 依赖的凋亡途径有关。     

华蟾酥毒基抑制人前列腺癌PC3细胞体外增殖研究

目的探讨华蟾酥毒基对人前列腺癌PC3细胞体外增殖和凋亡的影响及其可能存在的作用机制。方法细胞分为不加药对照组,5、50、100、500 nmol/L华蟾酥毒基组,共5组。各组作用于PC3细胞24、48 h后,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测华蟾酥毒基对人前列腺癌PC3细胞增殖的影响。不同浓度华蟾酥毒基作用于PC3细胞48 h后,光学显微镜观察PC3细胞形态变化;克隆形成实验检测华蟾酥毒基对前列腺癌PC3细胞克隆形成能力的影响;流式细胞术检测华蟾酥毒基作用48 h后各组PC3细胞凋亡情况;蛋白质印迹法检测华蟾酥毒基对髓样细胞白血病-1(MCL-1)蛋白表达的影响。结果 24 h后华蟾酥毒基可在体外抑制PC3细胞增殖(P 0. 01),48 h后华蟾酥毒基对PC3细胞增殖抑制作用更为明显(P 0. 05),华蟾酥毒基对PC3细胞增殖能力有较好的抑制作用,且呈剂量和时间依赖性。细胞克隆形成实验发现,0. 5 nmol/L华蟾酥毒基即可抑制细胞克隆形成(P 0. 05),并且此种抑制作用与药物浓度呈正相关(P 0. 05)。流式细胞术结果显示,0. 5nmol/L以上华蟾酥毒基均可诱导PC3细胞凋亡,随浓度增加凋亡率显著增加(P 0. 01),50 nmol/L华蟾酥毒基干预48 h后,PC3细胞凋亡率为39. 667%;同时光学显微镜下细胞增殖抑制明显,并呈凋亡形态改变。蛋白质印迹法结果显示,不同浓度华蟾酥毒基均可下调抗凋亡蛋白MCL-1蛋白表达(P 0. 01),以50 nmol/L华蟾酥毒基作用于PC3细胞48 h下调MCL-1蛋白表达更为显著(P0. 01)。结论华蟾酥毒基可抑制前列腺癌PC3细胞的体外增殖,并可诱导肿瘤细胞凋亡,其机制可能与抗凋亡蛋白MCL-1表达下调有关。     

薯蓣皂苷元诱导人骨肉瘤U-2OS细胞凋亡的发生机制

目的探讨薯蓣皂苷元诱导人骨肉瘤U-2OS细胞凋亡的发生机制。方法用透射电镜、AO/EB染色法观察U-2OS细胞的形态学变化,用蛋白印迹法检测Caspase-8表达水平。结果经薯蓣皂苷元处理的U-2OS细胞呈典型的凋亡形态学改变,其Caspase-8蛋白表达增强。结论薯蓣皂苷元通过Caspase-8途径诱导U-2OS细胞凋亡而抑制其增殖。     

姜黄素诱导人骨肉瘤U2OS细胞凋亡的实验研究

目的 探讨姜黄素对人骨肉瘤 U2OS 细胞凋亡的诱导作用及其分子机制,为姜黄素应用于骨肉瘤治疗提供实验依据.方法 以不同浓度的姜黄素处理骨肉瘤 U2OS 细胞,应用 MTT 法检测细胞活性,用 Bliss 法计算 IC50 值,通过流式细胞术和 Hoechst 33258 荧光染色检测细胞凋亡,比色法检测 Caspase-3、8、9活性.结果 2.5、5.0、10.0、20.0、40.0、80.0μmol/L的姜黄素明显抑制骨肉瘤 U2OS 细胞生长并呈剂量依赖关系,48 h的 IC50 值为 21.63 μmol/L;20μmol/L 姜黄素作用 12、24、48 h 诱导 U2OS 细胞的凋亡率分别为:12.5%、23.1%和46.2%,细胞出现明显的凋亡特征性形态变化;姜黄素处理 U2OS 细胞 48 h后 Caspase-3、8、9的活性明显增强.结论 姜黄素可通过激活 Caspase 级联活化而抑制骨肉瘤 U2OS 细胞生长并诱导其凋亡.     

三种蟾毒单体对SMMC-7721和BEL-7402人肝癌细胞生长的抑制作用

目的：探讨蟾蜍中主要蟾毒内酯类成分蟾毒灵、华蟾酥毒基、酯蟾毒配基的抗肝癌作用及机制。方法：以SMMC—7721、BEL—7402人肝癌细胞为靶细胞，以丝裂霉素为阳性对照药物，应用四甲基偶氟唑盐比色法、锥虫蓝染色和DNA染色分析法观察这3种蟾毒单体对肝癌细胞的生长抑制和诱导凋亡作用。结果：蟾毒灵和华蟾酥毒基对上述肝癌细胞具有明显生长抑制作用，华蟾酥毒基较蟾毒灵作用略弱，但两者达到相同生长抑制效果所需浓度均低于丝裂霉素，酯蟾毒配基只有在较高浓度下才显示对肝癌细胞的生长抑制作用；不同浓度蟾毒灵、华蟾酥毒基对人肝癌细胞细胞膜具有破坏作用；可使人肝癌细胞阻止于G2／M期，使处于S期的细施比例降低，并有明显诱导肝癌细胞凋亡作用。结论：蟾毒灵、华蟾酥毒基对上述人肝癌细胞具有明显生长抑制作用，具有对肝癌细胞膜的直接破坏作用和诱导凋亡作用；酯蟾毒配基抗肿瘤作用较弱。     

PDTC影响骨肉瘤U-2 OS细胞凋亡的研究

目的:观察在NF-KB抑制剂PDTC诱导骨肉瘤细胞发生凋亡的过程中,NF-KB活性抑制后,Livin和aspase-3表达水平变化.方法:以不同浓度(0、50、100、200、400 μmol/L)PDTC作用于骨肉瘤U-2 OS细胞不同时间(24小时,48小时)后,采用MTT法和流式细胞仪测定U-2 OS细胞凋亡,采用Western Blot检测U-2 OS细胞Livin和caspase-3蛋白表达.结果:①不同浓度PDTC作用24小时、48小时后对U-2 OS细胞生长有明显抑制作用,并呈时间、剂量依赖性.②50、100、200和400μmol/L PDTC作用24小时后的凋亡率与对照组相比差异有显著性,且各浓度组之间差异均有显著性(P＜0.01).③PDTC作用于U-2 OS细胞后可降低Livin蛋白的表达,增加caspase-3蛋白表达,呈现剂量依赖性.结论:PDTC可明显抑制人骨肉瘤U-2 OS细胞,并使细胞周期受到阻滞,进一步诱导肿瘤细胞凋亡,抑制细胞与诱导凋亡呈剂量依赖关系.     

蛋白酶体抑制剂硼替佐米诱导髓系白血病细胞株HL60凋亡的机制研究

目的 探讨蛋白酶体抑制剂硼替佐米诱导髓系白血病细胞HL60凋亡的机制。方法 四甲基偶氮唑盐（MTT）法、Hoechst33342染色形态学观察及流式细胞仪证实细胞凋亡,Western印迹检测B细胞淋巴瘤／白血病-2（Bcl-2）、Caspase-9、Caspase-3、多聚ADP-核糖聚合酶（PARP）蛋白表达。结果 硼替佐米对HL60细胞的增殖抑制作用呈浓度和时间依赖关系,30nmol/L的硼替佐米作用24h能明显抑制HL60细胞增殖,抑制率为76％,形态学观察可见明显的胞核凝聚、固缩及碎裂;流式细胞仪检测可见明显的凋亡峰凋亡率为62．6％;Western印迹检测显示Bcl-2表达下降,Caspase-9、Caspase-3、PARP蛋白均裂解激活。结论 硼替佐米能诱导髓系白血病细胞HL60凋亡,其机制与Bcl-2蛋白的抑制及Caspase凋亡信号途径的激活有关。     

哇巴因诱导Jurkat细胞凋亡与Caspase-3及Bcl-2基因家族的关系

目的：探讨哇巴因凋亡诱导Jurkat细胞凋亡的机制。方法：四甲基偶氮唑盐(MTT)法观察哇巴因对Jurkat细胞生长的抑制作用；应用流式细胞术、原位末端标记技术(TUNEL)等观察细胞凋亡；应用Western—blot测定Caspase-3的活性亚单位及Bcl-2、Bax蛋白表达水平；比色法检测Caspase-3活性。结果：哇巴因能诱导Jurkat细胞凋亡，细胞凋亡过程中，Bax蛋白表达增加，Caspase-3活性明显升高。结论：结论：哇巴因可能通过调节Bcl-2、Bax蛋白表达从而激活Caspase途径诱导Jurkat细胞凋亡。     

华蟾酥毒基对神经胶质瘤细胞增殖、迁移侵袭及凋亡的影响

目的 探讨华蟾酥毒基对人神经胶质瘤增殖、迁移侵袭及凋亡的影响及机制。方法 以人胶质母细胞瘤U251作为主要研究对象,在不同浓度(0、0.25、0.5、1、2.5、5μmol/L)华蟾酥毒基作用24h后,采用MTT法检测其增殖能力;利用细胞克隆形成实验检测华蟾酥毒基对U251克隆形成能力的影响;通过伤口愈合实验和Transwell实验检测华蟾酥毒基对U251迁移和侵袭能力的影响;运用Western blot技术检测经华蟾酥毒基处理的U251细胞中Bax、Bcl-2蛋白表达水平的变化。结果 华蟾酥毒基呈剂量依赖性抑制U251的增殖、迁移和侵袭;U251细胞中抗凋亡相关蛋白Bcl-2呈剂量依赖性下调趋势,促凋亡蛋白Bax表达呈剂量依赖性增高趋势。结论 华蟾酥毒基能够明显抑制U251细胞的增殖、克隆形成及迁移侵袭能力,并通过调控Bax、Bcl-2蛋白的表达促进神经胶质瘤细胞的凋亡。     

大麻素受体激动剂WIN55,212-2联合金诺芬对人肝癌细胞HepG2增殖与凋亡的影响

目的 探讨大麻素受体激动剂WIN55,212-2(WIN)联合金诺芬(AF)对人肝癌细胞HepG2增殖和凋亡的影响,并对其机制进行初步研究.方法 分别用5 μmol/L WIN、0.25 μmol/L AF、5μmol/L WIN联合0.25μmol/L AF处理HepG2细胞24h和48 h后,MTS法检测细胞活力;采用AnnexinV-FITC和PI双染色法并通过流式细胞仪分析细胞凋亡;Western blot检测凋亡相关蛋白(Bcl-2、Bip、ATF4、PARP、Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9)表达的变化.分别用5μmol/L WIN联合0.25 μmol/L AF、Z-VAD-FMK以及Z-VAD-FMK预处理1h后再用5 μmol/L WIN联合0.25 μmol/L AF处理HepG2细胞24 h,Western blot检测蛋白PARP、Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9的变化.结果 与两药单独使用相比,WIN联合AF明显抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡,可以引起Bcl-2蛋白表达水平下调,内质网应激反应相关蛋白Bip、ATF4蛋白表达水平上调,以及活化Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9,引起PARP蛋白的切割.加入Caspase广谱抑制剂Z-VAD-FMK处理细胞后,能部分逆转联合用药的细胞凋亡比例.结论 大麻素受体激动剂WIN联合AF能有效诱导肝癌细胞凋亡,其机制可能与Bcl-2表达下调、内质网应激反应和Caspase系统活化相关.     

脱氧紫色杆菌素抑制结肠癌TH29细胞增殖及诱导凋亡作用与机制

目的探讨脱氧紫色杆菌素(Deoxyviolacein)对人结肠癌HT29细胞增殖抑制和诱导凋亡及其可能机制。方法用不同浓度的脱氧紫色杆菌素处理HT29细胞,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法,检测脱氧紫色杆菌素对HT29细胞的抑制率;流式细胞术检测细胞周期和凋亡;Western Blot法检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和Caspase9表达的变化。结果脱氧紫色杆菌素对HT29细胞有明显的增殖抑制作用;可提高G0/G1期细胞比例,降低S期细胞比例;细胞凋亡率升高,Bax和Caspase9蛋白表达升高,Bcl-2蛋白的表达降低。结论脱氧紫色杆菌素抑制结肠癌HT29细胞增殖并诱导凋亡,其凋亡机制可能作用于线粒体介导的内源性通路。     

毛酸浆内酯诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的机制研究

[目的] 探讨毛酸浆活性成分毛酸浆内酯（PPB）诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的机制。[方法] 采用噻唑蓝法（MTT法）检测PPB对MCF-7细胞及人外周血单核细胞（hPBMC）增殖的影响;克隆形成实验考察PPB对MCF-7细胞克隆形成的影响;MTT法考察泛半胱天冬氨酸蛋白酶（Caspase）抑制剂Z-VAD-fmk对PPB诱导MCF-7细胞死亡的作用;Western Blot法考察PPB处理后凋亡相关蛋白PARP、Caspase-7/8/9、Cytochrome c、Bax、Bcl-2、Fas及FADD的表达水平。[结果] PPB时间、剂量依赖性抑制MCF-7细胞生长,且对hPBMC无明显细胞毒性;PPB呈剂量依赖性地抑制MCF-7细胞克隆形成;PPB处理后,凋亡特征性蛋白PARP、原型Caspase-7蛋白表达量显著减少,而Cleaved PARP、Cleaved Caspase-7显著增加;同时内源性凋亡途径相关蛋白Bax、Cleaved Caspase-9、Cytochrome c表达量显著上调,而Bcl-2及Caspase-9原型形式显著下调。外源性凋亡相关蛋白Fas、Cleaved Caspase-8及FADD表达量上调,而Caspase-8原型形式显著下调;加入Z-VAD-fmk可显著逆转PPB诱导的MCF-7细胞死亡。[结论] 毛酸浆活性成分PPB可以诱导MCF-7细胞发生内源性和外源性凋亡。     

环氧合酶-2选择性抑制剂对乳腺癌细胞株生长及凋亡的影响

目的观察环氧合酶-2(COX-2)的特异性抑制剂NS-398对乳腺癌MCF-7细胞的生长抑制和凋亡作用,及其对阿霉素(ADM)诱导的MCF-7细胞凋亡作用的影响。方法应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法分析NS-398对MCF-7细胞的生长抑制作用,进一步用NS-398和ADM单独及联合作用于MCF-7细胞,流式细胞术检测细胞的凋亡,免疫印迹法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Pax的表达。结果40μg／ml的NS-398就可抑制MCF-7细胞生长、诱导其凋亡,下调Bcl-2蛋白表达;和ADM联用凋亡率显著增高。结论NS-398可抑制MCF-7细胞生长、诱导其凋亡,并且和阿霉素有协同作用,其诱导凋亡与Bcl-2表达下调有关。     

Caspase 8在TRAIL诱导神经母细胞瘤细胞凋亡中的作用

目的探讨Caspase8在TRAIL（肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体）诱导神经母细胞瘤细胞株CHP212细胞凋亡中的作用及机制。方法应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法及流式细胞仪（FCM）检测TRAIL、Caspase8抑制剂（zIETD—FMK）＋TRAIL对CHP212细胞生长及凋亡的影响；应用比色法测定caspase8相对活性；应用透射电镜对凋亡细胞进行形态学观察。结果CHP212细胞对TRAIL的诱导凋亡作用敏感，存在时间和剂量依赖性；随TRAIL作用时间的延长，Caspase8活性逐步升高。于作用16h达高峰。zIETD-FMK能阻断Caspase8的活化而抑制TRAIL对CHP212细胞的诱导凋亡作用。透射电镜可见到典型的细胞凋亡特征。结论TRAIL通过Caspase8信号传导通路诱导CHP212细胞凋亡并伴随Caspase8活性增高。     

吴茱萸碱对胶质瘤SHG-44细胞凋亡的促进作用及其机制

目的研究吴茱萸碱对人胶质瘤SHG-44细胞凋亡的促进用及其机制。方法将体外培养的胶质瘤SHG-44细胞分为对照组、吴茱萸碱组(根据吴茱萸碱浓度不同分为3个亚组),CCK-8法观察细胞活性,流式细胞仪测定细胞凋亡率,Hoechst 33258核染色法观察细胞核凋亡,透射电镜观察细胞形态学的变化,Western blot法检测胶质瘤SHG-44细胞内Cleaved Caspase-3及Cleaved Caspase-9的蛋白表达。结果吴茱萸碱对胶质瘤SHG-44细胞增殖有抑制作用。流式细胞仪及Hoechst 33258核染色法的检测结果表明,随着吴茱萸碱作用浓度的递增,胶质瘤SHG-44细胞凋亡率呈剂量依赖性递增;吴茱萸碱作用后可使Cleaved Caspase-3及Cleaved Caspase-9蛋白的表达升高。结论吴茱萸碱通过改变Cleaved Caspase-3及Cleaved Caspase-9蛋白的表达,抑制胶质瘤SHG-44细胞增殖并促进其凋亡。     

Caspase依赖的氧化应激对脓毒症肾小管上皮细胞损伤的作用及机制

目的：观察不同活性氧（reactive oxygen species,ROS）及氧化应激水平对脓毒症肾小管上皮细胞增殖、凋亡、周期等生物学效应的影响,探索氧化应激水平和线粒体?Caspase途径能否作为脓毒症肾小管上皮损伤的治疗靶点。方法：用终浓度为10 μg/mL的脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）处理人肾小管上皮HK?2 细胞 12 h建立脓毒症细胞模型,将细胞模型随机分为H2O2组（H2O2,300 μmol/L）、Caspase 抑制剂组（Ac?DEVD?CHO,15 μmol/L）、Caspase抑制剂+H2O2组（H2O2,300 μmol/L+Ac?DEVD?CHO,15 μmol/L）和阴性对照组（不处理）;另以正常培养的HK?2细胞为空白对照组。Western blot检测Cleaved?Caspase 3和Cleaved?多聚ADP核糖多聚酶（poly ADP?ribose polymerase,PARP）蛋白表达,MTT 检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞 ROS水平、细胞凋亡和细胞周期。结果：阴性对照组细胞ROS水平、凋亡率、凋亡相关蛋白Cleaved?Caspase 3和Cleaved?PARP水平以及G1期细胞比例均较空白对照组升高（P均 < 0.05）,增殖率较空白对照组降低（P < 0.05）。H2O2组细胞ROS水平、凋亡率、Cleaved?Caspase 3和Cleaved?PARP水平以及G1期细胞比例均较阴性对照组升高（P均 < 0.05）,而增殖率较阴性对照组降低（P < 0.05）。Caspase抑制剂+H2O2组细胞ROS 水平、凋亡率、Cleaved?Caspase 3和 Cleaved?PARP水平以及G1期细胞比例均较 H2O2组降低（P均 < 0.05）,但均高于阴性对照组（P均 < 0.05））;增殖率较H2O2组升高（P <0.05）,但仍低于阴性对照组（P < 0.05）。结论：脓毒症细胞模型中存在异常升高的氧化应激反应。ROS能通过线粒体?Caspase凋亡途径抑制脓毒症肾小管上皮细胞增殖,促进细胞凋亡和引起细胞周期G1期阻滞。抑制Caspase对ROS引起的脓毒症肾小管上皮细胞损伤有一定保护作用。     

氯化镧经Caspase-3途径诱导子宫颈癌细胞凋亡

目的探讨氯化镧体外诱导人子宫颈癌细胞凋亡的作用和分子机制,为探索稀土化合物的药用价值提供理论依据。方法采用形态学观察、四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定氯化镧对HeLa细胞的抑制率;流式细胞术分析细胞周期和细胞凋亡率,蛋白质印迹技术分析Caspase-3蛋白表达的改变,并以分光光度法测定其活性。结果形态学分析和MTT法显示氯化镧能够抑制HeLa细胞生长并诱导其凋亡(P<0.05),其作用呈明显的量效关系。细胞周期实验结果说明,氯化镧可令细胞大多阻滞于G1期,并呈一定的浓度依赖性;氯化镧诱导细胞凋亡亦有剂量依赖性,在5μmol/L剂量下,细胞开始凋亡,随着药物浓度的增加,凋亡率不断增高,各浓度与对照组相比差异都具有统计学意义(P<0.01)。蛋白质印迹实验显示氯化镧亦可上调活化的Caspase-3蛋白表达水平及活性且呈浓度依赖性。结论一定浓度的氯化镧可抑制人子宫颈癌HeLa细胞的增殖并通过激活Caspase途径诱导HeLa细胞凋亡。     

Caspase8在实验性神经母细胞瘤细胞凋亡中作用的研究

目的探讨Caspase8表达对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（rumor necrosis factor related apoptosis inducing ligand,TRAIL）诱导神经母细胞瘤（neuroblastoma,NB）细胞株SH—SY5Y（SY5Y）细胞凋亡的影响及其发生机制。方法应用RT—PCR方法和免疫组化法检测IFN-γ作用前后SY5Y细胞Caspase8的表达：应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法及流式细胞仪（FCM）检测IFN-γ、TRAIL、IFN-γ＋TRAIL及IFN-γ＋Caspase8抑制剂＋TRAIL对SY5Y细胞生长及凋亡的影响。结果SY5Y细胞不表达Caspase8,IFN-γ作用48h后的SYSY细胞Caspase8表达明显增加;SY5Y细胞对TRAIL不敏感,经IFN-γ诱导表达Caspase8的SY5Y细胞对TRAIL敏感,且与TRAIL浓度有关,Caspase8抑制剂可明显降低TRAIL对表达Caspase8的SY5Y细胞的杀伤作用。结论IFN-γ通过诱导Caspase8表达而逆转SY5Y细胞对TRAIL诱导凋亡的耐受。     

顺铂联合蛋白酶体抑制剂杀伤骨肉瘤细胞的研究

目的:观察顺铂和蛋白酶体抑制剂对骨肉瘤细胞的杀伤作用.方法:用四甲基偶氮唑盐法检测细胞存活率,电镜观察细胞凋亡形态,流式细胞仪分析凋亡率,逆转录聚合酶链反应检测切除修复基因-1(ERCC-1)的转录水平.结果:骨肉瘤细胞存活率蛋白酶体抑制剂与顺铂联合作用比单独顺铂作用低,细胞显示出更特征性的凋亡形态,凋亡率高从(14.37±2.37)%上升到(50.93±4.84)%(P<0.01).顺铂单独作用能增加ERCC-1的转录水平,顺铂和蛋白酶体抑制剂联合作用后ERCC-1转录水平有所下降.结论:蛋白酶体抑制剂能增强顺铂杀伤骨肉瘤细胞和诱导骨肉瘤细胞的凋亡.这可能与降低ERCC-1转录有关.     

NS398通过环氧合酶-2非依赖途径诱导胰腺癌BxPC-3细胞凋亡

目的探讨选择性环氧合酶-2(COX-2)抑制剂NS398对人胰腺癌BxPC-3细胞增殖和凋亡的影响及其分子机制.方法采用四甲基偶氮唑蓝(MTY)比色法观察不同浓度的NS398对BxPC-3细胞增殖的影响;流式细胞术、悬浮细胞/贴壁细胞比值测定BxPC-3细胞凋亡的改变,并检测Caspase-3活化情况;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测不同浓度NS398作用下BxPC-3细胞COX-1、COX-2 mRNA水平的变化,Western blot法检测COX-1、COX-2及Caspase-3蛋白水平的改变.结果MTT及流式细胞术结果显示,NS398呈剂量依赖性地抑制BsPC-3细胞增殖,并可诱导其凋亡;随着NS398处理浓度的增加,悬浮细胞/贴壁细胞比值显著上升,Caspase-3活性上调,在高浓度时尤为明显.RT-PCR和Western blot结果显示,COX-1 mRNA及蛋白表达不受NS398药物作用影响,COX～2 mRNA及蛋白表达在各浓度组中亦无明显变化,Caspase-3蛋白水平在高药物浓度时表达上调.结论选择性COX-2抑制剂NS398对胰腺癌BxPC-3细胞有显著的增殖抑制和凋亡诱导作用,这种效应与COX-2表达无明显相关,而与Caspase-3的活化密切相关.