应用原位免疫聚合酶链反应检测活动性巨细胞病毒感染

目的建立一种新的诊断活动性巨细胞病毒感染的方法。方法应用原位免疫聚合酶链反应(PCR)技术检测早、中、晚期孕妇宫颈脱落细胞中巨细胞病毒抗原。结果119例受检标本中有16例出现人巨细胞病毒(HCMV)抗原阳性,孕早、中、晚期孕妇活动性HCMV感染率分别为：9.37%、11.90%、17.77%;检出的HCMV抗原阳性细胞数为2～38／5万宫颈脱落细胞,平均8.5／5万细胞。常规ABC法平行检测,原位免疫PCR法检测敏感性高于ABC法。结论原位免疫PCR方法敏感性高、特异性强,可检出微量HCMV抗原,为临床诊断活动性HCMV感染提供一种新方法。     

孕妇巨细胞病毒感染及其母婴垂直传播

目的探讨孕妇巨细胞病毒（HCMV）感染及其母婴垂直传播状况。方法应用酶联免疫吸附法（ELISA）筛查11859例孕妇HCMV的特异性抗体（IgG及IgM），同时应用荧光定量PCR（FQ-PCR）技术检测其中248例具有活动性HCMV感染孕妇的羊水或胎儿脐血或产后直接抽脐血检测HCMV-DNA。结果孕妇HCMV感染率为95，3％（11306／11859），孕妇活动性HCMV感染率为3．5％（417／11859），孕中期羊水的HCMV-DNA阳性率为12．1％（12／99）；孕晚期脐血或产后直接抽脐血HCMV-DNA阳性率为6．0％（9／149），羊水的HCMV-DNA阳性率与分娩期脐血及及新生儿血相比较，差异无统计学意义（P〉0．05）。结论孕产妇孕前绝大多数已感染过HCMV，测定孕中期羊水的HCMV-DNA，对早期诊断先天性HCMV感染具有重要意义。     

习惯性流产孕妇巨细胞病毒pp65抗原检测的临床意义

目的:探讨人巨细胞病毒(HCMV)活动性感染与习惯性流产(RPL)的关系。方法:采集习惯性流产孕妇和正常产前体检孕妇外周血,分离外周血单个核细胞(PBMCs)和血浆,分别用免疫荧光法和实时定量PCR检测HCMV pp65抗原和HCMV-DNA,并比较2种方法的一致性。结果:46例RPL患者HCMV pp65抗原有14例阳性,阳性率30.4%,50例正常体检孕妇HCMV pp65抗原有4例阳性,阳性率8%,2组孕妇HCMV活动性感染率有显著性差异(2χ=6.76,P<0.01)。孕妇HC-MV pp65抗原阳性率升高,孕妇流产几率增加(2χ=6.39,P<0.01)。免疫荧光法和实时定量PCR有较好的一致性(93.5%)。结论:习惯性流产孕妇HCMV活动性感染率显著高于正常孕妇,HCMV pp65抗原检测可作为RPL早期诊断指标之一。     

合成肽检测巨细胞病毒酶联免疫方法的建立及应用

目的：应用合成肽建立检测人巨细胞病毒（HCMV）特异敏感的酶联免疫方法，并用于临床检测患者血清中HCMV－IgM。方法：根据人巨细胞病毒PP150氨基酸序列，利用计算机辅助设计。决定含HCMV PP150国强抗原决定簇的单链多肽序列，合成肽作抗原，建立检测抗HCMV－IgM的酶联免疫吸附试验（ELISA）法，并用聚合酶链反应（PCR）方法检测全血中HCMV DNA，比较ELISA与PCR两种方法的相关性。结果：本实验所建立的检测抗HCMV－IgM的ELISA方法具有较好的特异性，正常孕妇血清中抗HCMV－IgM阳性率与HCMV DNA存在相关性。结论：本研究所建立的以合成多肽作抗原检测巨细胞病毒酶联免疫方法具有较好的特异性，简单，快速，适用与临床标本的检测。     

FQ—PCR法对孕前及孕中进行HCMV检测的临床意义

目的运用荧光定量PCR（FQ—PCR）技术对孕前及孕中进行人巨细胞病毒（HCMV）检测,探讨受检者孕前及孕时感染HCMV的临床意义。方法对302例孕前妇女和620例产前孕妇均做HCMV检测,取宫颈分泌物标本用FQ—PCR法做HCMV—DNA检测,取血清标本用ELISA法做HCMV—IgM检测。结果302例孕前妇女宫颈分泌物标本HCMV—DNA阳性96例,血清标本HCMV—DNA阳性5例;620例产前孕妇宫颈分泌物标本HCMV—DNA阳性94例,血清标本HCMV—DNA阳性7例。可见用FQ—PCR法检测HCMV—DNA的阳性率远高于用ELISA法检测HCMV—IgM,ELISA法检测HCMV感染阳性率明显偏低,说明FQ—PCR法敏感性显著高于ELISA法。结论宫颈分泌物组和血清组有明显差异,运用FQ—PCR技术对孕前及孕时进行HCMV检测具有重要的临床意义。     

应用荧光定量PCR技术检测小儿尿液中人巨细胞病毒

目的：探讨荧光定量聚合酶链式反应(FQ—PCR)方法检测尿液中人巨细胞病毒(HCMV)对儿童HCMV活动性感染的检测价值。方法：对收集的175份临床标本分别用FQ—PCR方法及低基质磷酸化蛋白(pp65)抗原血症检测方法进行平行检测比较。结果：71例临床患者尿液FQ—PCR检测阳性59例；血液pp65抗原检测阳性53例。尿液中HCMV DNA检测结果与HCMVpp65抗原血症的一致性为84．2％。结论：FQ—PCR检测敏感性要高于pp65抗原血症检测，可以有效提示体内病毒的活跃程度，具有良好的应用价值。     

江门市部分孕妇人类巨细胞病毒PCR检测报告

人类巨细胞病毒（humanCytomegalovirus，HCMV）是巨细胞包涵体病的病原体，人感染后可引起肺炎、脑炎、肝炎甚至死亡。如果孕妇受到感染，则HCMV传给胎儿的危险性为40％，HCMV的传播可以使大约1％的胎儿受感染[1]，可致先天弱智、畸型、肝炎等[2]，因此，从优生优育的角度出发，对孕妇产前进行HCMV检测十分必要。我们用PCR方法对江门市1995年3月～1996年3月部分孕妇进行了产前HCMV检测，现将检测情况报告如下：卫对象与方法1．l对象1995年3月～1996年3月孕妇抗凝血153份。1．2方法采用PCR方法（PCR检测试剂盒为上海复生生物工…     

糖尿病患者外周血白细胞HCMV pp65基因表达状态研究

目的 建立检测人巨细胞病毒（HCMV）感染的聚合酶链反应／逆转录-聚合酶链反应（PCR／RT-PCR）方法，并探讨糖尿病与HCMV感染的关系。方法 在HCMV65kD低基质磷蛋白基因（pp65）内设计一对引物，建立PCR／RT-PCR法检测727例糖尿病患者及230名健康体检人员（对照组）外周血白细胞HCMVpp65DNA及其mRNA转录水平，同时应用间接免疫荧光法分析外周血白细胞HCMVPP65抗原。结果 糖尿病患者HCMVpp65DNA，mRNA及PP65抗原阳性率分别为36．04％，16．64％和10．04％，与对照组4．78％，2．17％及1．30％相比，差异均有显著性（P〈0．01）。发病年龄〈30岁患者组中HCMVpp65mRNA和PP65抗原阳性率明显高于其他年龄组（P〈0．05）。病程〈1年的糖尿病患者HCMVpp65mRNA和PP65抗原阳性检出率最高，分别为27．54％与15．94％；而HCMVpp65DNA则相反，其最高检出率分别是年龄≥60岁（42．19％）或病程≥15年患者（44．68％）。结论 糖尿病患者易发生活动性HCMV感染，外周血白细胞pp65DNA，mRNA及PP65抗原检测是临床快速诊断HCMV感染的有效手段，联合使用能更有效地提高诊断水平。     

人巨细胞病毒被膜磷蛋白pp65的检测及其应用

目的:建立一种快速简便诊断肾移植受者人巨细胞病毒(HCMV)活动性感染的方法.方法:运用免疫组织化学的催化信号扩增法检测外周血白细胞中的人巨细胞病毒被膜磷蛋白pp65,巨细胞病毒信使核糖核酸(pp67-mRNA)检.测法作比较.结果:检测105例肾移植受者中,HCMVpp65抗原阳性45例,pp67-mRNA检测阳性40例,pp65抗原阳性细胞数为(70±43)个/2×105个WBC,而有症状的CMV病25例,抗原阳性细胞指数为(85±44)个/2×105个WBC.对照组100名健康人,pp65抗原检测全为阴性.pp65的敏感性、特异性分别是100%、88.9%.结论i该法敏感,简便,可作为肾移植术后HCMV病的早期诊断并可指导抗病毒治疗.     

先天性巨细胞病毒感染与胎儿畸形

青岛医学院微生物教研室邵济钧等用间接ELISA法同时检测青岛地区孕妇血清中巨细胞病毒(HCMV)—IgM和IgA两种抗体,自1002份孕妇血清中共检出HCMV—IgM阳性149份(14.87%);HCMV—IgA阳性169份(16.87%)。若以其中一项阳性者即为阳性,则孕妇活动性HCMV总感染率为20.95%。自372份新生儿脐血血清中共检出HCMV—IgM阳性16份(4.30%),HCMV—IgA血清30份(8.06%),本地     

人巨细胞病毒对母婴的影响

为探讨人巨细胞病毒感染对母儿的影响,采用ＥＬＩＳＡ法对１８１８例早、中、晚孕期孕妇进行ＨＣＭＶ病原体血清学监测,并对部分感染者的羊水、胎盘组织、脐血等采用ＰＣＲ方法监测ＨＣＭＶ－ＤＮＡ,同时采用Ｂ超监测胎儿的生长发育及新生儿结局。结果发现早、中晚期孕妇中有７８例为活动性感染（４．３％）,并发胎膜早破和早产１７例。新生儿先天感染２２例（２８．２１％）,２例 流产、４例畸形、１３例头颅Ｂ超异常,９只耳     

荧光定量PCR在孕妇HCMV感染检测中的应用研究

目的使用荧光定量PCR检测孕妇尿液中HCMV-DNA,提高该人群中病毒检出率。方法对广西南宁和桂林两地共600名孕妇进行尿液HCMV-DNA检测,同时进行血清HCMV-IgG和HCMV-IgM检测,对比以上两种方法在产前诊断中的应用价值。结果尿液HCMV-DNA阳性率为8.50%(51/600),血清HCMV-IgG阳性率为98.8%(593/600),HCMV-IgM阳性率为1.83%(11/600)。结论相对于传统的酶联免疫检测法,荧光定量PCR可明显提高孕妇病毒检出率,并且提供定量数据,同时使用荧光定量PCR和ELISA将为临床提供更加准确的实验室诊断结果。     

湖南省婴幼儿巨细胞病毒临床株gB基因型分布研究

目的 了解湖南省临床婴幼儿巨细胞病毒(HCMV)株gB基因型的组成和分布特点,探讨HCMV gB基因型与临床婴幼儿感染HCMV后的临床症状之间的关联. 方法从临床患儿尿样中分离出巨细胞病毒后,以巢式PCR从病毒基因组中扩增gB基因,并测序分型. 结果本研究中23例分离阳性患儿来自省内不同地区,没有发现多重感染的病例.23株病毒中,gBI型所占16例(69.6%),gBⅢ型次之占4例(17.4%),另有3株病毒不属于gBI～Ⅳ型中的任何一型(13%). 结论湖南地区临床婴幼儿巨细胞病毒(HCMV)株gB基因型以gBI型为优势基因型.     

人巨细胞病毒感染跟踪调查研究

目的:探讨孕期HCMV活动性感染引起宫内传播及对胎、婴儿影响的相关因素。方法:ELISA法孕前筛查2602例育龄妇女HCMV-IgM、HCMV-IgG抗体,并根据抗体检测结果分为4组,应用ELISA和PCR两种技术,跟踪检测4组616例中444名孕妇早、中晚孕期外周血、羊水及新生儿脐带血感染情况,对新生儿行跟踪调查。对107例中发生在不同孕期的活动性感染的不良妊娠结局进行分析。结果:孕前育龄妇女活动性感染率为10.2％;4组孕期活动性感染率高达24.1％(107/444),以原发、复发组发生率最高(46.9％、41.7％)占孕期活动性感染的75％;孕期活动性感染自然流产率(17.8％)显著高于非活动性感染(10.4％);孕期活动性感染发生宫内感染的危险度为34.6％;孕期活动性感染新生儿先天性感染检出率为8.9％;发生在孕早期的活动性感染的不良妊娠结局最为严重。结论:孕前感染类型与孕后发生活动性感染危险度密切相关,且不同类型对妊娠结局影响不同;孕期活动性感染自然流产率高,能够引起宫内垂直传播;胎盘及母体的特异性IgG抗体对胎儿的保护作用不可忽视;重点预防早孕期HCMV感染。     

应用非放射性探针检测HCMV感染的研究

应用地高辛配基标记ＨＣＭＶＤＮＡＪ片断为探针,采用斑点杂交试验检测唾液及尿液中ＨＣＭＶＤＮＡ。此方法的最低检测阈值为０．５ｐｇ,与ＨＳＶ－１、ＨＳＶ－２、ＲｕＶ、ＤＮＡ无交叉反应。检测１７例患儿的唾液和尿液ＨＣＭＶＤＮＡ,其阳性率分别为５０％和１７．６％,唾液中ＨＣＭＶＤＮＡ阳性率显著高于尿液;检测１３６对正常母婴配对唾液标本,ＨＣＭＶＤＮＡ阳性率分别为４６．３％和９．６％,其相应血清用ＥＬＩＳＡ检测ＨＣＭＶ－ＩｇＭ抗体,阳性率分别为２．２％和０％。此结果提示,同时检测唾液中病毒ＤＮＡ及血清中ＩｇＭ抗体,对临床及流行病学筛检试验判断是否有激活感染及感染的早、晚期有重要意义。     

人巨细胞病毒先天性感染胎鼠大脑皮质的研究

目的 :研究先天性HCMV感染与胎鼠大脑皮质异常的关系。方法 :10周龄的ICR雌雄鼠按 1∶1配对 ,妊 7天时实验组行腹腔内接种HCMV ,对照组则接种HF细胞上清液。分别于妊 12、15、19天剖腹取胚胎大脑皮质进行病理学检查、病毒分离及原位杂交。结果 :实验组ICR胎鼠脑实质血管充血、出血等炎性改变 ,妊 19天胎鼠大脑皮质神经细胞变性坏死 ;3个时间点实验组病毒分离率分别为 10 %、40 %及 6 7% ,MIE和LA寡核苷酸探针原位杂交阳性率为 30 %、6 0 %、83%和 0 %、40 %、70 %。结论 :HCMV感染妊 7天ICR鼠后 ,不仅可在胎鼠大脑皮质神经细胞中复制且使大脑皮质损伤明显。     

PCR技术检测尿中人巨细胞病毒的方法学研究

应用ＨＣＭＶ早、晚期两对ＤＮＡ引物，建立了聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测尿中人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）的方法。肾移植术后ＨＣＭＶ感染的临床尿样检测结果表明，该方法具有快速、特异性强、灵敏度高等优点，与血清ＨＣＭＶ－ＩｇＭ检测结果符合率为８３．３％。使用早、晚期基因组的双引物分别对临床尿样进行ＰＣＲ扩增，减少了由于自然点突变所致的假阴性，且引物与ＨＣＭＶ同属其它病毒及组织ＤＮＡ间无交叉反应；以ＨＣＭＶ组织培养液作模板，灵敏度可达６２５ｆｇ。本方法为诊断肾移植受者ＨＣＭＶ感染提供了新的手段，适于临床推广。     

人类巨细胞病毒特异性IgG抗体亲和力与其感染时间关系的探讨

目的 区分初次人类巨细胞病毒感染和再感染或体病毒活性,方法 采用尿素变性酶联免疫吸附实验检测我们ＨＣＭＶ ＩｇＧ和ＨＣＭＶ ＩｇＭ抗体阳性患儿的血清。结果 １－１２岁年龄组ＨＤＭＶ ＩｇＧ亲和力指人有２．６％,小于３０％,１－１２个月婴儿组５２．５％有低亲和力ＨＣＭＶ ＩｇＧ抗体,其中７－１２个月婴儿８０％为低亲和力抗体,较１－６个月组明显增高。     

用PCR技术对人巨细胞病毒与膀胱癌关系的研究

采用一种新的定量PCR技术，对膀胱癌患者12人及正常对照5人的尿脱落细胞病理涂片标本进行人巨细胞病毒（HCMV）的定量检测，参照常规PCR，初步探讨了膀胱癌与HCMV感染的关系。结果表明，膀胱肿瘤细胞内存在HCMV基因的DNA。提示，HCMV的感染可能与膀胱癌的发生有一定的关系，也可成为判断膀胱癌患者预后的敏感指标。     

用DNA杂交技术对儿童中HCMV感染的流行病学研究

本研究用随机六聚寡核苷酸引物法，以同位素和地高辛（Ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ）标记了ＨＣＭＶＡＤ１６９ＤＮＡＨｉｎｄⅢＹ片段（３．８Ｋｂ），以此为探针，采用ＤＮＡ－ＤＮＡ斑点杂交的方法，检测了３２１例城乡１～６岁学龄前儿童ＨＣＭＶ感染情况。结果表明，这些儿童中ＨＣＭＶ阳性率为４５．８％；城市儿童为４６．１％，农村４５．５％。城市１～２岁组儿童的感染率高于３～６岁（Ｘ２＝７．２１，Ｐ＜０．０１）。而农村各年龄组无差别。对儿童ＨＣＭＶ检出情况作Ｌｏｇｉｓｔｉｃ回归分析表明，影响儿童感染ＨＣＭＶ的主要因素为幼儿园环境、儿童年龄、喂养方式等。说明幼儿园是学龄前儿童获得ＨＣＭＶ感染的重要场所，而儿童的年龄，个人卫生习惯及喂养方式也是影响儿童感染ＨＣＭＶ的重要因素，表明人获得ＨＣＭＶ感染主要在幼年期。