脑缺血预适应大鼠脑内p38丝裂原激活蛋白激酶磷酸化水平和蛋白表达量的测定

目的初步探讨p38丝裂原激活蛋白激酶(p38 MAPK)在大鼠脑缺血预适应(IPC)形成中的作用。方法选用成年雄性Sprague-Dawley大鼠复制整体脑缺血预适应模型。将大鼠随机分为空白对照(control)、假手术(SI)、缺血预适应或缺血耐受(IT)、外周伤害对照(PNC)、外周伤害耐受(PNT)5组。应用SDS-PAGE、Western blot等实验方法,借助Gel Doc和Versa Doc凝胶成像系统,半定量检测脑躯体感觉皮层、海马组织内p38 MAPK的磷酸化水平和蛋白表达量。结果经脑IPC后,大鼠躯体感觉皮层和海马组织内p38 MAPK磷酸化水平和蛋白表达量与各自对照组相比均未见显著性差异(P>0.05,n=6)。结论大鼠大脑躯体感觉皮层和海马组织内p38 MAPK可能未以磷酸化水平和蛋白表达量改变的形式参与脑缺血预适应的形成。     

大承气汤对脓毒症大鼠p38MAPK信号转导通路的影响

目的 观察大承气汤对脓毒症大鼠肝脏p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)表达水平的影响,进一步揭示大承气汤治疗脓毒症的机制.方法 将60只健康雄性SD大鼠随机分为假手术组(n=20)、脓毒症组(n=20)、大承气汤组(n=20),应用大鼠盲肠结扎穿孔(CLP)复制脓毒症模型.假手术组开腹轻扰肠管后关腹,脓毒症组、大承气汤组均为脓毒症模型.大承气汤组在术前2 h和术后每4 h予以大承气汤灌胃.分别于术后2、6、12、24 h每组取5只大鼠,腹主动脉采血,用ELISA方法 检测大鼠血浆IL-6、TNF-α浓度,取肝组织进行免疫组化检测及观察p38MAPK表达.结果 与脓毒症组比较,大承气汤组大鼠肝脏p38MAPK表达水平受到抑制,炎症因子释放减少(P<0.05).结论 大承气汤对脓毒症大鼠的肝脏产生保护作用,可能是由于抑制大鼠肝脏p38MAPK表达来实现的.     

p38信号通路对单侧输尿管结扎大鼠RANTES的影响

目的探讨p38有丝分裂素激活蛋白激酶(MAPK)在单侧输尿管结扎(UUO)大鼠肾组织的表达及活化状态。方法采用免疫组织化学法和Western印迹分析法检测UUO大鼠肾组织p38MAPK的磷酸化水平和RANTES蛋白水平,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测RANTES mRNA的表达。结果RANTES蛋白和RANTES mRNA随着梗阻时间的延长,表达明显上调,同时p38MAPK蛋白活性增高,两者呈显著正相关(P＜0．05)。结论UUO大鼠肾组织中p38MAPK的活化可上调RANTES的表达。     

高血糖状态对大鼠骨骼肌和心肌C-Jun氨基末端激酶和p38信号转导系统的影响

目的：探讨高血糖状态对大鼠骨骼肌和心肌C-Jun氨苯末端激酶(C-JunN-terminalkinase，JNK)和p38激酶活性的作用，进一步了解糖尿病的发病机制，为糖尿病的临床康复治疗提供一些理论依据。方法：12周龄、体质量200～230g的SD大鼠12只，根据是否注射链脲佐菌素(streptozotocin，STZ)随机分为高血糖组(n=6)和正常血糖组(n=6)。高血糖组大鼠腹腔内注射STZ(65mg／kg)建立持续高血糖模型(血糖&;gt;16mmol／L)。正常血糖组大鼠不注射STZ，维持正常血糖。运用化学发光法测定骨骼肌和心肌JNK和p38活性。结果：骨骼肌和心肌JNK活性在高血糖组明显增高。分别高于正常血糖组1．8倍和1．4倍。骨骼肌和心肌p38活性在高血糖组分别高于正常血糖组的2．O倍和1．6倍。结论：高血糖状态可以激活骨骼肌和心肌JNK和p38信号转导通道。提示细胞信号转导系统参与了糖尿病的发病机制。     

恐吓应激对SD大鼠胃GnRH受体表达的影响

目的观察恐吓应激状态下SD大鼠胃内促性腺素释放素受体（GnRHR）的分布和表达变化。方法建立SD大鼠恐吓应激模型,分别取急性应激组（2～12h）、慢性应激组（1d～4w）和相应对照组大鼠的胃,利用免疫组织化学和western blotting（WB）法检测GnRHR在各组大鼠胃中的的分布和表达变化。结果免疫组织化学显示：胃底腺壁细胞、胃小凹上皮细胞呈GnRHR阳性。阳性反应物质定位于胞膜和胞质中,胞核呈阴性。WB结果表明：应激从2h到2w时,GnRHR的表达量与对照组相比P〈0．01,应激从3w到4w时,GnRHR的表达量与对照组相比P〈0．01,差异均有统计学意义。结论GnRHR随着恐吓应激时间的延长,在大鼠胃中表达量改变。提示在恐吓应激中,GnRH对消化功能具有潜在的生理调节功能。     

大黄对重症急性胰腺炎大鼠丝裂原激活蛋白激酶活性的影响

目的 研究大黄对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠胰腺组织中丝裂原激活蛋白激酶(NAPK)家族中的细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)、c-J un氨基末端激酶(,JINK)和p38mAPK活性的影响,探讨大黄治疗SAP的机制. 方法 由南京大学动物中心提供100只SD大鼠,采用胆胰管逆行注射5%牛磺胆酸钠法建立大鼠SAP模型.将大鼠随机分为假手术组(n=33)、SAP组(n=33)、大黄治疗组(n=34),大黄治疗组在制成SAP模型后予10%大黄汤剂灌胃,剂量为2 ml/100g;制模后1、3 6 12 h时点分别处死相应大鼠,取血及胰腺组织.用Western blot检测各组大鼠胰腺组织中MAPK活性,RT-PCR方法检测胰腺组织中TNF-αa、IL-6的mRNA的变化.所有数据用SPSS 13.0统计软件进行统计,组间比较用q检验,以P<0.05为差异具有统计学意义. 结果 与假手术组相比,SAP组胰腺组织中MAPK活性明显增强(1 h,3 h,6 h,12 h两组p-ERK,p-p38和p-JNK比较,P值均<0.01).大黄治疗后各时间点胰腺组织中MAPK活性与SAP组相比均明显下降(1 h,3 h,6 h,12 h两组p-ERK,p-p38和p-JNK比较,P<0.01).与假手术组相比,SAP组胰腺组织中TNF-α、IL-6 mRNA水平明显增加(两组1h,3 h,6 h,12 h TNF-αmRNA和IL-6 mRNA比较,P<0.01);大黄治疗组与SAP组相比,TNF-α、IL-6 mR-NA水平均明显降低(P均<0.01). 结论 大黄治疗SAP的机制可能是通过抑制MAPK激活而减轻SAP的炎症反应.     

应激对大鼠空间记忆发育的影响

目的研究应激刺激对发育期大鼠空间记忆发育的影响. 方法采用发育期 Wistar大鼠 22只,按随机抽签法分为应激 1组 (30 V)、应激 2组 (45 V)、对照组.电刺激大鼠 10次 /d,连续 1周;采用血清放免法检测生长激素含量变化;通过 Morris水迷宫检测应激对大鼠空间记忆能力的影响. 结果应激 2组水迷宫空间学习记忆逃逸时间较应激 1组 [训练第 1～ 5天应激 1, 2组分别为( 23.61± 16.06) ,(14.19± 5.01) s],较对照组 [训练第 1～ 5天为( 26.86± 9.89) s],差异有显著性意义( t=2.35～ 3.02,P< 0.05) ; 应激 2组的生长激素 [(2.24± 0.49) μ g/L]含量偏低 ,应激 1组的生长激素含量 [(3.26± 0.82) μ g/L]有明显增高趋势 (t=2.83,P< 0.05). 结论应激刺激可提高幼年大鼠空间记忆能力的发育;达到 45 V应激刺激可以影响幼年大鼠的体格发育 ,而 30 V应激刺激则不会妨碍甚至可以促进幼年大鼠的体格发育.     

阿托伐他汀对心肌梗死大鼠心肌纤维化和细胞外信号调节激酶表达的影响

目的观察阿托伐他汀对大鼠急性心肌梗死后心室重塑和心肌组织中细胞外信号调节激酶(ERK)1/2蛋白表达的影响。方法 20只雄性SD大鼠通过前降支动脉结扎法建立大鼠急性心肌梗死模型后随机分为心肌梗死组(AM I),心肌梗死阿托伐他汀组(ATV),另设假手术组(sham),每组n=10。阿托伐他汀组每天给予阿托伐他汀(10 mg/kg)灌胃,持续4周。假手术组和心肌梗死组每天给予同等量的0.9%氯化钠注射溶液灌胃。应用real-tim e PCR法检测梗死周边区心肌组织中Ⅰ型、Ⅲ型胶原mRNA表达,应用westernb lot方法检测p-ERK1/2、ERK1/2蛋白的表达。结果与假手术组比较,心肌梗死组和阿托伐他汀组中Ⅰ型、Ⅲ型胶原表达高于假手术组(P<0.01),阿托伐他汀组Ⅰ型、Ⅲ型胶原表达显著低于心肌梗死组(P<0.01)。心肌梗死组和阿托伐他汀组中p-ERK1/2表达高于假手术组(P<0.01),阿托伐他汀组p-ERK1/2表达低于心肌梗死组(P<0.01)。结论阿托伐他汀可以改善大鼠心肌梗死后心室重塑,其机制可能与下调心肌组织中p-ERK1/2表达有关。     

丹参酮ⅡA对大鼠血管平滑肌细胞的增殖作用

目的:观察丹参酮ⅡA对高糖诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖的作用,分析该作用与丝裂原活化蛋白激酶信号传导通路的关系。方法:实验于2004-01/2005-06在东南大学医学院发育与疾病相关基因实验室完成。①取大鼠胸主动脉,用组织贴壁法原代培养大鼠血管平滑肌细胞并传代,实验使用第4～8代细胞。②按实验分组干预细胞,正常对照组,培养液含5mmol/L葡萄糖;高糖组,培养液含30mmol/L葡萄糖;高糖对照组,培养液含30mmol/L葡萄糖 10g/L二甲亚砜;丹参酮ⅡA组,培养液含30mmol/L葡萄糖 0.5mg/L丹参酮ⅡA;U0126组,培养液含30mmol/L葡萄糖 25μmol/LU0126。③用二步法测定0.125,0.25,0.5,1.0,2.0,5.0,10.0mg/L丹参酮ⅡA对血管平滑肌细胞的毒性。④BrdU掺入DNA的ELISA法测定细胞内DNA合成水平。⑤同位素示踪法测定丝裂原活化蛋白激酶活性。结果:①高糖诱导的大鼠血管平滑肌细胞呈现快速增殖状态。②当丹参酮ⅡA剂量大于1.0mg/L时,有一定的细胞毒性。四甲基噻唑蓝法测定结果表明1.0,2.0,5.0,10.0mg/L丹参酮ⅡA组血管平滑肌细胞线粒体脱氢酶活性明显低于正常对照组(分别为0.654±0.023,0.580±0.032,0.465±0.041,0.376±0.053,0.840±0.085,P<0.01),表明此浓度可造成细胞功能障碍,有明显的细胞毒性。③随着丹参酮ⅡA作用浓度的增加,细胞内BrdU掺入DNA的量逐渐下降,0.03125mg/L丹参酮ⅡA与高糖对照组相比差异有显著性意义(分别为0.958±0.086,1.059±0.047,P<0.05),0.0625,0.125,0.25,0.5mg/L丹参酮ⅡA与高糖对照组相比差异有非常显著性意义(分别为0.865±0.058,0.781±0.099,0.738±0.071,0.616±0.028,1.059±0.047,P<0.01)。④高糖组血管平滑肌细胞内丝裂原活化蛋白激酶的活性相对于正常对照组显著升高[分别为(1048.59±94.78),(395.82±43.53)μkat/g,P<0.01],丹参酮ⅡA组和U0126组丝裂原活化蛋白激酶活性低于高糖组[分别为(450.55±50.47),(417.30±62.96),(1048.59±94.78)μkat/g,P<0.01]。结论:丹参酮ⅡA对高糖诱导的血管平滑肌细胞增殖具有明显抑制作用的机制可能是其部分阻断了丝裂原活化蛋白激酶信号传导通路。     

热应激预处理对梗阻性黄疸大鼠肝功能的影响

目的:研究热应激预处理对梗阻性黄疸大鼠肝功能的影响。方法:将30只Wistar大鼠随机分为3组,胆总管结扎组开腹分离并结扎大鼠的胆总管,假手术组只开腹分离但不结扎大鼠的胆总管,热应激预处理组在胆总管结扎手术前12h对大鼠行热应激预处理。术后1周处死大鼠穿刺心脏取血,检测各份血液标本的肝功能及胆红素含量。结果:胆总管结扎后1周,大鼠血胆红素明显升高,AST与ALT也随之明显升高,但热应激预处理组的AST与ALT升高幅度较小,与胆总管结扎组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:热应激预处理可减轻梗阻性黄疸对大鼠肝脏的损害。     

p38 MAPK信号转导通路与椎间盘退变

p38 MAPK信号通路是丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)介导的信号转导通路的重要分支,它在炎症、细胞应激、凋亡、细胞周期和生长等多种生理和病理过程中起重要作用.既往在骨关节炎的研究中发现,p38参与炎性因子的激活、软骨细胞的凋亡等,与骨关节炎的病理过程密切相关.椎间盘退变也存在炎性反应、细胞凋亡等病理变化,这其中p38 MAPK信号转导通路发挥的作用尚不明确.现将既往此类文献加以综述.     

p38MAPK对甲胎蛋白诱导的树突细胞凋亡的影响

目的探讨p38丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）在甲胎蛋白（AFP）诱导树突状细胞凋亡过程中的作用。方法联合细胞因子体外诱导培养人外周血来源树突状细胞。Western Blot检测树突状细胞caspase-3及p38MAPK的表达情况。结果AFP诱导树突状细胞凋亡的过程中伴随caspase-3及p38MAPK的表达增加,SB203580能够明显抑制Cas-pase-3及p38MAPK的表达,DEVD-fmk未能阻断p38MAPK的高表达。结论p38MAPK信号转导通路可能是AFP诱导树突状细胞凋亡的上游信号,并起到促进树突状细胞凋亡的作用。     

p38MAPK与新生大鼠成骨细胞的增殖、分化和凋亡

背景:p38MAPK是MAPK信号转导途径的通道之一.但是,p38MAPK如何参与成骨细胞增殖、分化的调控,是否与成骨细胞的凋亡有关,目前尚未见相关文献报道.目的:观察p38MAPK对新生大鼠成骨细胞增殖、分化和凋亡的影响.设计、时间及地点:单一样本观察,细胞学体外对比观察,于2007-05/2008-03在解放军兰州军区总院骨科研究所细胞培养室完成.材料:新生24 h SD大鼠9只用于分离成骨细胞;SB203580(p38MAPK的阻断剂)为Sigma公司产品.方法:取新生SD大鼠头盖骨成骨细胞.药物刺激组分别加入不同浓度(1×10-6,1×10-7,1×10-8mol/L)的17β-雌二醇、葛根素;含阻断剂组提前30 min添加10 μmol/LSB203580阻断信号转导通路,再加药物;设空白对照组.主要观察指标:作用72 h后用四甲基偶氮唑盐法与对硝基苯磷酸法测定细胞的增殖能力和碱性磷酸酶活性,AnnexinV-FITC/P1双标记流式细胞仪分析细胞早期凋亡.结果:加入17β-雌二醇或葛根素药物后,成骨细胞的增殖、分化明显增强,与空白对照组比较差异有显著性意义(P<0.05);阻断p38MAPK信号转导通路后,细胞增殖未受明显抑制(P>0.05);分化受到明显抑制,与未阻断组比较差异具有非常显著性意义(P< 0.01).流式细胞仪分析结果显示,与对照组相比,药物组细胞早期凋亡率明显降低(P< 0.05);与药物刺激组相比,含阻断剂组细胞早期凋亡率无明显变化(P>0.05).结论:17β-雌二醇、葛根素能促进成骨细胞的增殖和分化并抑制其凋亡;p38MAPK在成骨细胞分化过程中发挥重要作用,对成骨细胞的增殖、凋亡无明显影响.     

p38MAPK和JNK在大鼠肾缺血-再灌注损伤模型中的表达及意义

目的 观察p38MAPK、JNK在肾缺血-再灌注损伤大鼠肾组织中的表达和活化,从而探讨p38MAPK、JNK信号转导通路与肾缺血-再灌注损伤的关系.方法 用缺血1 h再灌注1 h 制备缺血-再灌注模型,20只健康雄性SD大鼠[体质量(200±20)g]随机分为假手术组(n=10)、缺血-再灌注损伤组(n=10).检测肾组织丙二醛(MDA)浓度、超氧化物歧化酶(SOD)活性及血尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)浓度.观察肾组织光镜、电镜下的形态学变化,用RT-PCR技术检测两组肾组织p38MAPK、JNK mRNA的表达情况,Western印迹法观察p38MAPK、JNK的活化情况.结果 缺血-再灌注损伤后,大鼠肾功能和肾小管上皮细胞明显受损,BUN、Cr、MDA浓度均高于假手术组(P<0.01),SOD活性低于假手术组(P<0.01),p38MAPK、JNK磷酸化蛋白在假手术组呈少量散在表达或不表达,缺血-再灌注损伤后磷酸化p38MAPK、JNK呈阳性表达(P<0.01).p38MAPK、JNK mRNA在缺血-再灌注损伤组的表达较假手术组显著增高(P<0.01).结论 肾缺血-再灌注可增加p38MAPK、JNK的磷酸化水平及p38MAPK、JNK mRNA的转录水平,p38MAPK、JNK可能在肾缺血-再灌注损伤中起到至关重要的作用.     

p38 MAPK抑制剂对脓毒症大鼠肝损伤的保护作用

目的探讨脓毒症肝损害的原因及p38 丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)抑制剂的保护作用.方法采用盲肠结扎并穿刺 (CLP)来制作脓毒症模型.在不同时相点观察大鼠肝功能[谷丙转氨酶(ALT)]、血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)浓度.结果 CLP术后血清TNF-α、IL-1β进行性升高,ALT也显著升高.血清ALT、TNF-α、IL-1β呈显著正相关.应用p38MAPK抑制剂SB203580后,血清TNF-α、IL-1浓度显著降低,同时血ALT减低.结论 TNF-α、IL-1的大量释放是脓毒症肝损害的原因之一,通过调控p38MAPK信号通路可对脓毒症鼠肝损害起保护作用.     

应激后大鼠下丘脑磷酸化p38MAPK的变化及电针足三里穴的调节作用

目的 观察应激对大鼠下丘脑磷酸化p38MAPK的影响及电针足三里穴的调节作用。方法将28只Wistar大鼠随机分为对照组、束缚应激组和束缚应激 电针组，后2组再根据束缚解除后及电针足三里穴位治疗后不同时间点分别分为3个亚组。电针治疗采用频率为5～12Hz的疏密波，治疗总时间30min。于相应时间点处死各组大鼠，采用Western印迹杂交法观察其下丘脑内磷酸化p38MAPK的变化。结果束缚应激组大鼠下丘脑内p38MAPK磷酸化水平明显高于对照组，且在束缚应激解除后3h仍保持在较高水平；应激大鼠经电针足三里穴处理后，下丘脑内磷酸化p38MAPK与束缚应激组相比明显回落，这种调节作用可持续到电针治疗结束后3h。结论束缚应激能引起下丘脑应激信号转导系统中p38MAPK的磷酸化，这可能是应激活动过程中的重要事件之一。电针足三里穴对下丘脑内磷酸化p38MAPK的调节作用可能与下丘脑-垂体-肾上腺轴的活动有关。     

p38 MAPK抑制剂对急性肺损伤的治疗作用

目的 观察p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)抑制剂SB203580对LPS诱导的兔急性肺损伤(ALI)的保护作用及其机制.方法 用大肠杆菌内毒素(LPS)制备兔ALI模型;测定不同时间点的动脉血气分析、血清TNF-α和ICAM-1浓度;测量肺干/湿质量比值(肺D/W)及观察肺组织病理学改变.结果 动物注射内毒素1 h后P_(A-a)O_2、血浆TNF-α和ICAM-1水平、肺损伤评分均明显升高(P＜0.05),肺D/W下降(P＜0.05);应用SB203580治疗后,P_(A-a)O_2、血浆TNF-α和ICAM-1水平、肺损伤评分均明显下降(P＜0.05),肺D/W升高(P＜0.05).结论 本研究结果 表明,p38 MAPK抑制剂SB203580对内毒素诱导的ALI,可以明显减轻低氧血症、减轻肺水肿、改善组织病理学和减轻炎症反应.     

Simvastatin Attenuates Formalin-Induced Nociceptive Behaviors by Inhibiting Microglial RhoA and p38 MAPK Activation

Several recent studies have revealed that statins exert anti-inflammatory effects in addition to their lipid-lowering property in vivo and in vitro. Recently, statins were shown to alleviate pain associated trauma in a neuropathic pain model. The aim of the present study was to investigate the underlying mechanisms of analgesia caused by the lipophilic statin simvastatin in an animal model of formalin-induced pain in the rat. Intrathecal pretreatment with simvastatin significantly attenuated the second phase of the acute nociceptive response to formalin injection, and daily administration of simvastatin for 7 days inhibited the long-term mechanical hyperalgesia caused by formalin injection. Spinal microglial activation (detected by Iba-1 and CD11 b immunohistochemistry and Western blot), and phosphorylated-p38 mitogen-activated protein kinase (detected by immunohistochemistry and Western blot) were significantly inhibited by simvastatin treatment at day 7 after formalin injection. In addition, peripheral formalin injection induced a significant increase in microglial RhoA activation (detected by membrane RhoA translocation ratio using Western blot) in the spinal cord. The spinal RhoA activation in microglia was reversed by simvastatin treatment. These findings suggest that simvastatin attenuates formalin-induced nociceptive behaviors, at least in part, by inhibiting microglial RhoA and p38 mitogen-activated protein kinase activation.