隐球菌性脑膜炎患者颗粒溶素的表达及其临床意义

目的研究颗粒溶素（granulysin,GNLY）免疫效应分子在隐球菌性脑膜炎（cryptococcal meningitis）外周血单个核细胞中的表达及其临床意义。方法首先用密度梯度离心法分离得到25例隐球菌性脑膜炎患者和30例健康人外周血单个核细胞（PBMC）,其次用免疫印迹的方法检测其中的GNLY蛋白含量,用实时荧光定量（RFQ）-PCR方法测定其中GNLY的mRNA含量。并分析隐球菌性脑膜炎患者GNLY蛋白含量与一些免疫指标的相关性。结果与健康对照组比较,隐球菌性脑膜炎患者PBMC中GNLY蛋白含量（相对定量为正常对照组的0.56倍）和mRNA（相对定量为正常对照组的0.6倍）均明显降低（P〈0.01）。隐球菌性脑膜炎患者中GNLY蛋白表达水平与血清IgG水平成正相关（r=0.477,P〈0.05）。结论GNLY可能参与隐球菌性脑膜炎的疾病进程,这为探讨隐球菌性脑膜炎的病情监控和有效治疗提供了新的线索。     

骨桥蛋白mRNA在大肠癌患者外周血中的表达及其临床意义

目的检测大肠癌外周血中的骨桥蛋白（OPN）mRNA的表达,探讨其与临床病理分期及淋巴转移的关系。方法应用逆转录聚合酶链反应技术检测52例大肠癌患者（大肠癌组）外周血单个核细胞中OPN mRNA的表达,并以33例大肠腺瘤患者（大肠腺瘤组）及20例健康人（健康对照组）外周血作为对照。结果 OPN mRNA在大肠癌组外周血单个核细胞中表达的阳性率为65.4%,大肠腺瘤组OPN mRNA阳性率为33.3%,健康对照组外周血中均无靶OPN mRNA表达。大肠癌组与大肠腺瘤组OPN mRNA阳性表达率均高于健康对照组（P均〈0.01）,大肠癌组OPN mRNA阳性表达率高于大肠腺瘤组（P〈0.05）。随着大肠癌Dukes分期的升高,其外周血单个核细胞中OPN mRNA表达阳性率逐渐增高（P〈0.05）。有淋巴结转移的表达阳性率高于无淋巴结转移及对照组（P均〈0.01）;无淋巴结转移患者与大肠腺瘤组之间差异无统计学意义。结论外周血单个核细胞中OPN mRNA阳性表达对大肠癌的淋巴转移及预后判断具有一定价值。     

特发性血小板减少性紫癜患者激素敏感性与糖皮质激素受体亚型的关系研究

目的探究特发性血小板减少性紫癜（ITP）患者对糖皮质激素敏感性与其外周血单个核细胞内激素受体亚型表达的关系。方法采用实时定量RT—PCR和免疫组化技术检测不同激素敏感性ITP患者（包括糖皮质激素抵抗和敏感病人）外周血单个核细胞内α和β亚型糖皮质激素受体（GRα和GRβ）mRNA和蛋白表达，并将检测结果与正常对照组进行比较。结果糖皮质激素抵抗组患者外周血单个核细胞GRβmRNA表达量和GRβ蛋白表达阳性的单个核细胞比率明显高于激素敏感组及正常对照组（P〈0．01），而GRα mRNA和蛋白表达水平，各组之间无显著差异。结论ITP患者糖皮质激素敏感性与其GRβ表达水平密切相关。     

高危或极高危原发性高血压患者外周血单核细胞趋化因子-1基因的表达

目的：探讨高危或极高危原发性高血压（EH）患者外周血单核细胞趋化因子-1（MCP-1）表达,为寻找高危或极高危EH患者的治疗手段提供理论依据。方法：运用酶联免疫吸附（ELISA）法测定高危或极高危EH患者65例（EH1组）、低或中危EH患者35例（EH2组）和30例正常对照者外周血MCP-1蛋白含量,用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法检测外周血单个核细胞中MCP-1 mRNA的表达。结果：与对照组比较,EH1组和EH2组外周血MCP-1蛋白含量和单个核细胞中mRNA表达均显著升高,具有统计学差异（P〈0.05orP〈0.01）;与EH2组比较,EH1组患者外周血MCP-1蛋白含量和单个核细胞中mRNA表达均显著升高,具有统计学差异（P〈0.01）。结论：外周血单个核细胞中MCP-1可能参与了高危或极高危EH的病理生理过程,外周血单个核细胞的MCP-1 mRNA表达上调可能是高危或极高危EH患者外周血MCP-1蛋白含量增高的机制之一。     

肺癌患者外周血单个核细胞TLR4 mRNA的表达及意义

目的检测TLR4 mRNA在非小细胞肺癌患者外周血单个核细胞中的表达,探讨其临床意义。方法应用RTPCR方法检测TLR4 mRNA在100例非小细胞肺癌患者和60例体检健康者外周血单个核细胞中的表达,分析TLR4 mRNA在肺癌患者及体检健康者外周血单个核细胞的表达差异及TLR4 mRNA在肺癌患者外周血单个核细胞的表达与临床病理特征的关系。结果非小细胞肺癌患者外周血单个核细胞TLR4 mRNA的表达显著高于体检健康者（P〈0.05）;肿瘤最长径〉5cm的肺癌患者的TLR4 mRNA表达量高于最长径≤5cm的肺癌患者（P〈0.05）;有淋巴结转移的肺癌患者的TLR4 mRNA表达量高于无淋巴结转移的肺癌患者（P〈0.05）;TNM分期Ⅰ期、Ⅱ~Ⅲ期、Ⅳ期肺癌患者的TLR4 mRNA表达量依次升高,两两比较差异具有统计学意义（P〈0.05）。TLR4 mRNA表达量与非小细胞肺癌患者的性别、年龄、组织学类型、肿瘤分化程度及吸烟史均无关（均P〉0.05）。多元线性回归分析发现,肿瘤TNM分期是非小细胞肺癌患者外周血单个核细胞TLR4mRNA表达的独立相关因素（P〈0.05）。结论非小细胞肺癌患者外周血单个核细胞TLR4 mRNA表达增高,且TLR4 mRNA表达与肿瘤发生、发展密切相关,可作为预测肿瘤进展的重要指标,并提示运用TLR4的相关拮抗剂如Eritoran,作为免疫佐剂用于非小细胞肺癌治疗成为可能。     

尖锐湿疣患者外周血单个核细胞TLR2、4mRNA表达的研究

目的研究尖锐湿疣患者外周血单个核细胞Toll样受体2（TLR2）mRNA、TLR4mRNA的表达情况。方法运用SYBERGreenI实时定量PCR方法检测尖锐湿疣患者29例外周血单个核细胞TLR2、TLR4的mRNA表达水平,并与30例正常人作对照。结果与正常人相比,尖锐湿疣患者外周血单个核细胞TLR2mRNA的表达水平变化不明显（P〉0．05）,TLR4mRNA的表达水平有所降低,但差别无统计学意义（P〉0．05）。结论尖锐湿疣患者外周血单个核细胞中TLR2、TLR4的表达并未升高,甚至略有所降低,可能与CA患者免疫功能受到抑制有关。     

肝癌患者外周血单个核细胞TGF-β1 mRNA表达水平的检测

目的探讨外周血单个核细胞（PBMCs）转化生长因子-β1（transforming growth factorbeta1,TGF-β1）mRNA表达水平在肝癌（HCC）发病中的作用。方法分离20例肝癌患者和20例健康体检者外周血单个核细胞,提取总RNA。利用半定量RT-PCR方法逆转录并扩增TGF-β1,通过凝胶图像扫描系统对PCR产物的电泳条带进行密度扫描。结果肝癌患者组PBMCs中TGFβ1mRNA表达水平明显高于健康对照组（P〈0.01）。结论TGFβ1mRNA表达水平升高与肝癌发病相关。     

原发性高血压患者外周血单核细胞趋化因子-1基因表达及意义

目的：观察原发性高血压（EH）患者外周血单核细胞趋化因-1（MCP-1）基因表达,探讨其与EH的关系及意义。方法：用酶联免疫吸附（ELISA）法测定62例EH患者和30例正常对照者外周血MCP-1蛋白含量,用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法检测外周血单个核细胞中MCP-1 mRNA表达。结果：与对照组比较,EH组外周血MCP-1蛋白含量及外周血单个核细胞MCP-1 mRNA表达均显著增高（P〈0.01）。结论：（1）MCP-1可能参与了EH的病理生理过程;（2）外周血单个核细胞的MCP-1 mRNA表达上调可能是EH患者外周血MCP-1蛋白含量增高的机制之一。     

Caspase在原发性胆汁性肝硬化患者外周血单个核细胞的表达及其临床意义

目的检测caspase8和caspase3在原发性胆汁性肝硬化（PBC,primary biliary cirrhosis）患者外周血单个核细胞中的表达,探讨其与PBC疾病进展的相关性。方法采用实时荧光定量PCR和免疫印迹法,检测30例PBC和30例正常对照者的外周血单个核细胞（PBMCs）中caspase8和caspase3的基因和蛋白表达。结果PBC患者PBMCs中的caspase8和caspase3的mRNA和蛋白的表达明显低于健康对照组（P〈0.05）。结论PBC患者caspase8,3的表达与疾病的发生发展存在一定的相关性,可以为PBC的诊断和预防提供新线索。     

寻常性银屑病患者外周血单个核细胞TLR4mRNA表达与TNF—α相关性

目的探讨寻常性银屑病患者外周血单个核细胞（PBMC）Toll样受体4（Toll-like receptor4,TLR4）的表达变化及其与血清中TNF—Q浓度的关系。方法采用荧光定量PCR技术检测寻常性银屑病患者外周血单个核细胞TLR4mRNA的表达,并采用双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）检测血清TNF—α的浓度。另取30例正常人作为对照组。结果寻常性银屑病患者外周血中PBMC的TLR4mRNA的表达较正常人对照组明显增高（P〈0．01）,TLRdmRNA表达与血清TNF-α浓度变化呈正相关（P〈0．05）。结论通过单核吞噬系统TLR4介导的,TNF-α大量产生,激活炎症级联反应可能是银屑病发病的重要病理机制之一。     

系统性红斑狼疮患者单个核细胞（PBMC）中ITGAL的表达及意义

目的 探讨ITGAL基因在系统性红斑狼疮（SLE）患者外周血单个核细胞（PBMC）中的表达及其意义.方法 分离SLE患者及正常人群PBMC,采用Qiagen RNA/DNA mini kit提取RNA,实时-定量PCR检测ITGAL mRNA的表达,对SLE患者的ITGAL表达与红斑狼疮疾病活动指数（采用SLEDAI评分）进行相关分析.结果 活动性SLE患者中ITGAL mRNA表达较正常对照组明显升高,两组比较有统计学意义（P〈0.001）,与SLEDAI评分呈正相关（r=0.376,P〈0.05）.结论 活动性SLE患者PBMC的ITGAL mRNA表达明显上升,其变化与疾病活动程度呈正相关,ITGAL表达可能与SLE发病有关.     

早期显性梅毒患者外周血单个核细胞Toll样受体2mRNA表达的研究

目的研究早期显性梅毒患者外周血单个核细胞（PBMCs）Toll样受体2（TLR2）mRNA的表达情况,探讨其在梅毒发病机制中的作用。方法采用实时定量PCR方法检测30例显性梅毒患者外周血PBMCs中TLR2mRNA的表达水平,并与20例正常人作对照。结果早期显性梅毒患者外周血PBMCs中qZR2mRNA的表达水平升高,与正常对照组比较,差异有统计学意义（P〈0．001）;早期显性梅毒患者外周血PBMCs中IZR2mRNA的表达水平与血清RPR滴度不存在相关关系（P〉0．05）。结论TLR2可能参与了免疫细胞对梅毒螺旋体的识别和信号转导,TLR2的表达水平升高提示梅毒患者可能存在细胞免疫功能失调和细胞免疫功能抑制。     

类风湿性关节炎患者补体、CRP及免疫球蛋白水平检测

目的检测并探讨类风湿性关节炎（RA）患者血清中补体（C3、C4）、C-反应蛋白（CRP）及免疫球蛋白水平（IgA、IgG、IgM）水平的变化及其对疾病的影响。方法采用速率散射比浊法检测60例RA患者与40例健康人血清C3、C4、CRP、IgA、IgG、IgM水平,比较30例RA患者治疗前后检测结果。结果RA患者血清中C3、CRP、IgA、IgG和IgM检测水平显著高于健康对照组（P〈0．01）,补体C4明显高于健康对照组（P〈0．05）,治疗后CRP检测水平显著低于治疗前（P〈0．01）,而治疗前后C3、C4、IgA、IgG、IgM无显著变化（P〉0．05）。结论补体、CRP、免疫球蛋白均参与类风湿性关节炎的发病,CRP还参与类风湿性关节炎的发展过程,观察补体、CRP和免疫球蛋白水平变化对疾病的诊断、指导治疗和评价预后有重要意义。     

IgA肾病患者外周血单核细胞CD154表达与NF-κB活性

目的测定IgA肾病患者外周血单个核细胞（PBMC）CD154的表达与NF-κB活化水平,在IgA肾病发生发展中的作用。方法对IgA肾病组进行肾活检计算肾小球横切面细胞数、损伤肾小管百分数及肾小球损伤指数。分离PBMC,采用流式细胞仪分析检测CD154的表达水平,免疫组化染色法测定NF—κBp65亚的单位活化水平。全自动生化分析仪测定血肌酐、24h尿蛋白定量、尿NAG。结果IgA肾病组PBMC CD154的表达水平（15．1±4．7）%、NF—κB活化水平（33．8±10．5％）均明显高于对照组（5．9±2．9）％、（3．5±1．3）％,P〈0．01。患者PBMC CD154的表达水平与NF-κB活化水平、肾小球横切面细胞数,损伤的肾小管百分数及肾小球损伤指数、血肌酐、24h尿蛋白定量、尿NAG呈显著正相关（γ=0．475、γ=0．396、γ=0．538、γ=0．571（均P〈0．01）、γ=0.308、γ=0．316、γ=0．324（均P〈0．05）。结论IgA肾病患者PBMC CD154的表达水平显著升高,并与NF—κB活化水平、肾脏损伤指标密切相关,提示CD154在IgA肾病的发生发展中起到重要作用,与NF—κB的相互作用可能参与其对肾组织的作用。     

深静脉血栓患者溶栓前后血栓分子标志物的变化研究

目的观察深静脉血栓（DVT）患者溶栓前后血栓分子标志物水平的变化,以探讨凝血、纤溶活性改变与DVT患者溶栓后高血栓复发率及疗效的相关性。方法采用发色底物法、免疫比浊法和酶联免疫法分别测定55例DVT患者溶栓前后血浆标本的抗凝血酶活性（AT：A）、纤溶酶原活性（PLG：A）、组织型纤溶酶原激活物抗原性（t-PA：Ag）、纤溶酶原活性抑制剂-1抗原性（PAI：Ag）、血浆D-二聚体（D-D）、血管性血友病因子（vWF）、血浆血栓调节蛋白（TM：Ag）、VIII促凝活性（Ⅷ：c）;35例健康体检者作对照。结果AT：A、PLG：A、t-PA：Ag在溶栓前明显低于对照组（P〈0.01）,溶栓后升高（P〈0.05或P〈0.01）,其中AT：A、PLG：A仍低于对照组（P〈0.05或P〈0.01）,而t-PA：Ag无显著性差异（P〉0.05）;PAI：A、D-D、VIII：C、vWF、TM：Ag在溶栓前显著高于对照组（P〈0.01）,溶栓后下降（P〈0.05或P〈0.01）,其中PAl：A、D-D、VIII：C、vWF、TM：Ag仍明显高于对照组（P〈0.05或P〈0.01）。痊愈组AT：A、PLG：A、TM：Ag水平与正常对照组无显著性差异（P〉0.05）,D-D下降幅度最大。结论血栓分子标志物水平可反映患者疗效,凝血系统机能紊乱、纤溶-抗纤溶系统失衡与DVT患者溶栓后血栓的复发可能有密切的关系。     

急性冠脉综合征外周血单核细胞Toll样受体4、锌指蛋白A20与组织因子的表达及意义

目的：观察急性冠脉综合征（acule coronary syndrome,ACS）患者外周血单核细胞Toll样受体4（Toll—like receptor 4,TLR4）、锌指蛋白A20（zinc finger protein A20,A20）的表达与血浆组织因子、组织因子途径抑制物（tissue factor passway inhibitor,TFPI）水平的变化。方法：选择ACS患者31例和稳定型心绞痛（stable angina pectoris,SAP）患者21例为研究对象。ACS组包括急性心肌梗死（acute myocardial infarction,AMI）15例和不稳定型心绞痛（unstable angina pectoris,UAP）16例;对照组共入选20例,均为同期住院的非心血管疾病患者。根据病变血管数目将全部冠心病患者进一步分为3组：单支病变组17例;双支病变组15例;多支病变组20例。采用荧光定量PCR检测72例入选对象外周血单核细胞TLR4mRNA、锌指蛋白A20mRNA的表达;采用ELISA法测定血浆组织因子、TFPI质量浓度。结果：①ACS组患者外周血单核细胞TLR4 mRNA及A20mRNA的表达明显高于对照组和SAP组（P〈0．001）,而后两组间的差异无统计学意义（P〉0．05）。多支病变组TLR4、A20mRNA表达均明显高于单支病变组（P=0．006,P=0．000）。②ACS组血浆组织因子、TFPI水平明显高于SAP和正常对照组（P均〈0．01）;多支病变组血清组织因子含量高于单支病变组（P=0．017）。ACS外周血单核细胞TLR4mRNA表达与A20mRNA的表达呈正相关（r=0．640,P=0．002）,与血浆组织因子浓度亦呈正相关（r=0．716,P=0．000）。结论：冠心病患者冠状动脉病变程度和粥样硬化斑块稳定性与外周血单核细胞TLR4表达水平有关;TLR4炎症信号通路激活可能参与ACS冠脉粥样斑块破裂、促进凝血异常及血栓形成。     

结直肠癌患者外周血前列腺素E2水平测定的临床意义

目的：探讨结直肠癌患者外周血前列腺素E2（PGE2）在手术前后的动态变化及临床意义.方法：61例结直肠癌患者按是否有转移分成2组,远处转移组15例,无远处转移组46例;行根治性切除41例（根治组）,姑息性切除11例（姑息组）,剖腹探查9例（剖腹组）.对照组为30名健康体检者.分别检测患者手术前后外周血和肿瘤组织、正常结直肠黏膜组织PGE2及健康体检者血的PGE2含量.结果：结直肠癌患者术前外周血PGE2水平明显升高,外周血PGE2水平在DukesJD期者显著高于Dukes A、B、C期者（P＜0.01）,结直肠癌患者无远处转移组外周血PGE2水平与肿瘤大小呈正相关关系（P＜0.01）,肿瘤组织的PGE2含量显著高于正常结直肠黏膜组织（P＜0.01）.手术切除原发肿瘤后外周血PGE2显著下降,其中根治组和对照组差异无统计学意义（P＞0.05）,姑息组和剖腹组术后PGE2水平仍显著高于对照组（P＜0.01）.结论：结直肠癌患者外周血PGE2升高是肿瘤源性的,外周血PGE2动态检测可视为判断结直肠癌根治术后有否复发或转移的辅助指标.     

2型糖尿病肾病患者细胞黏附分子的表达

目的探讨2型糖尿病肾病（Diabetic nephropathy，DN）患者细胞黏附分子（Cell adhesion molecules CAMs）的表达水平与肾脏微血管病变及尿白蛋白的相关性关系。方法采用酶联免疫法、流式细胞术和放射免疫法分别测定95例2型糖尿病患者（其中65例DN）和35例健康对照者外周血中SICAM-1水平及CD11b、CD62P、CD63阳性表达率和尿微量白蛋白排泄率（Urinary Albttmin Excretion，UAER）。结果糖尿病各组SICAM-1水平和CD11b、CD62P、CD63的阳性表达率均明显高于对照组（P〈0．05及0．01）；微量蛋白尿组和临床蛋白尿组的SICAM-1水平和CD11b、CD62P、CD63阳性表达率与未并发肾病组（正常蛋白尿组）比较，均随着病情的加重而增加，差异均有显著性（P〈0．05及0．01）；相关分析SICAM-1水平和CD11b、CD62P、CD63的阳性表达率均与UAER呈正相关（r分别为0．576，0．489，0．445，0．463，P〈0．05）。结论2型糖尿病患者CAMs的高表达与肾脏微血管病变密切相关．并能反映DN严重程度，联合UAER检测对诊断、观察病情及预防肾脏微血管病变的发生发展均有意义。