孕期亚临床维生素A缺乏对胎鼠肺形态发育的影响

【目的】 探讨孕期亚临床维生素A(vitamin A,VA)缺乏对胎鼠肺形态发育的影响。 【方法】 建立孕期VA正常(vitamin A normal,VAN)和亚临床缺乏(marginal vitamin A deficiency,MVAD)动物模型,每组均于孕19 d剖宫取胎鼠,比较其体重、肺重、肝重和肺组织VA含量及其肺视黄酸受体(retinoic acid receptor,RAR)mRNAs的表达,HE染色光镜观察胎鼠肺的形态结构。 【结果】 1)胎鼠基本情况的比较 体重、肺重和肝重三个指标VAN组均显著高于MVAD组(P<0.05);2)胎肺大体形态比较 低倍镜(×200)与高倍镜(×400)下观察结果显示,VAN组肺泡样结构分布较规则,肺泡间隔较薄,肺实质发育较好,肺间质毛细血管较丰富,肺泡2型细胞较明显,大多处于小管期;而MVAD组上述指标均相对较差,发育幼稚,局部为小管期,大多为假腺体期;3)胎鼠肺单位组织VA水平 VAN组>MVAD组,差异均有统计学意义(P<0.05);4)胎鼠肺RAR-α、RAR-γ和RAR-β mRNAs表达水平VAN组P<0.05)。 【结论】 孕期VA水平不同能影响胎鼠基本发育、胎肺形态结构、肺单位组织VA水平及其RAR mRNAs的表达;孕期MVAD时其胎肺发育相对较差。     

边缘性维生素A缺乏及干预对幼鼠海马神经元形态与功能的影响

目的了解胚胎期开始的边缘缺乏(MVAD)对幼鼠海马神经元的形态及功能造成的损害,以及从新生儿期开始维生素A干预,能否使这种损害得以恢复。方法 11只健康母鼠于交配前3 w开始喂饲含VA 400 IU/kg的MVAD饲料,随机抽取其子鼠19只于断乳后继续喂饲同样的MVAD饲料为VAD组。另外随机抽取13只子鼠于出生0 d开始喂饲其母鼠含VA 6500 IU/kg的正常饲料,断乳后继续饲正常饲料为干预(VAI)组。随机抽取7只健康母鼠的10只子鼠作为正常对照(control,C)组,其饲料为含VA 6500 IU/kg的正常饲料。各组幼鼠均于7 w龄处死。用高效液相色谱法(HPLC)检测血清VA浓度。对海马切片进行HE染色,了解其神经元形态及细胞核大小的改变。运用电生理技术检测幼鼠离体海马脑片CA1区长时程增强(LTP),并在VAD组人工脑脊液(ACSF)中直接加入视黄酸(RA)后检测LTP。用透射电镜观察强直刺激前后,海马CA1区突触超微结构的变化。结果 MVAD孕鼠交配时血清VA浓度明显低于对照组。VAD组血清VA浓度明显低于C组,VAI组的血清VA浓度低于C组水平,但明显高于VAD组。海马CA1区锥体细胞层神经元细胞核的面积,VAD组明显小于C组,VAI组大于VAD组,与C组比较无明显差别。C组海马CA1区群峰电位增长幅度明显大于VAD组,VAI组小于C组,大于VAD组(P<0.05);VAD组脑片的ASCF中加入RA,其群峰电位增长幅度由(22.86±3.26)%上升到(59.08±7.22)%(P<0.01),与C组无显著差异。强直刺激后的C组与空白对照组(BC)比较,其海马CA1区突触的活性区长度和突触后致密物(PSD)厚度均明显增加,突触界面模拟圆半径明显减小,突触间隙宽度没有明显差异;强直刺激后,C组突触活性区长度明显大于VAD组,与VAD+RA组比较无显著差异,C组和VAD+RA组的突触界面模拟圆半径小于VAD组。结论 MVAD可导致少量CA1区神经元缺失和坏死,并减小了海马神经元细胞核的面积。同时直接影响海马神经元LTP的诱发,以及减小了LTP诱发后突触超微结构变化的程度。新生儿期开始的VAI可使MVAD对海马神经元的影响得到部分恢复。     

边缘VA缺乏对大鼠胚胎骨骼发育及视黄酸受体表达的影响

目的研究边缘性维生素A(VA)缺乏及补充对大鼠胚胎骨骼发育的影响,及其与视黄酸受体(RARs)基因表达的关联性。方法初断乳SD雌性大鼠30只,按体重随机分为边缘性VA缺乏组(AM),边缘性VA缺乏妊娠0d(E0d)补充组(AS)和正常对照组(AN)。AM和AS组喂饲边缘性VA缺乏饲料(含VA0.4IU/gdiet),AN组喂饲VA充足饲料(含VA4IU/gdiet)。60d后与正常雄鼠交配。AS组自E0起改喂VA补充饲料(含VA10IU/gdiet)。于E12.5d和E19.5d将孕鼠处死,取胚胎。观测E19.5d胚胎骨骼发育指标;用荧光定量PCR及Westernblot检测E12.5d胚胎组织视黄酸受体的表达。结果AM组97.2%的E19.5d胚胎骨骼发育明显迟缓并出现多种骨骼畸形;E12.5d胚胎RARβ、RARγ表达水平明显下降。AS组胚胎各指标较AN组无异。结论视黄酸受体参与介导边缘性VA缺乏导致的大鼠胚胎骨骼发育异常,孕早期补充VA可有效预防骨骼畸形的发生。     

维生素A缺乏对肠粘膜细胞因子免疫应答的影响

目的研究维生素A缺乏(vitamin A deficiency,VAD)对大鼠肠粘膜细胞因子免疫应答的影响,探讨VAD降低粘膜免疫力的机制。方法在建立VAD大鼠模型的基础上,给予鼠伤寒沙门氏菌灌胃诱导肠道感染。取新鲜回肠组织,采用ELISA和RT-PCR法,从蛋白和基因水平测定IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-6、IL-10和IL-12的变化。结果VAD大鼠肠粘膜主要由树突状细胞产生的细胞因子IL-12的表达显著增高,[蛋白(lg ng/g mucosal tissue)VA正常组4.07±0.15,VAD4.41±0.02,基因(lg copies/50ng total RNA)VA正常组4.99±0.18,VAD5.53±0.15,伴有肠道感染时IL-12的产生进一步升高,蛋白和基因两者分别为:4.59±0.15和5.78±0.26];Th1细胞因子:IFN-γ降低两者分别为蛋白:VA正常组3.15±0.34,VAD2.67±0.15;基因:VA正常组3.15±0.34,VAD2.67±0.15,和VA正常组5.36±0.26,VAD5.19±0.27,均(P<0.01);Th2细胞因子IL-4在肠道感染后显著降低(蛋白VAD组为2.29±0.13,VA正常组2.39±0.20),尤其是VAD大鼠IL-4水平更低(蛋白2.13±0.17);IL-6mRNA在肠道感染时都明显下降(感染后VA正常组5.45±0.3,感染后VAD组5.44±0.3,VA正常组5.85±0.31)(P<0.01),IL-10mRNA在未感染VAD大鼠也降低(VAD5.10±0.14,VA正常组5.78±0.26)(P<0.01),在肠道感染时降低更为显著(4.56±0.33)(P<0.01)。结论对肠粘膜局部细胞因子产生水平的调节可能是VAD影响粘膜免疫功能的重要机制。     

VA对小鼠胚胎中Hox-3.5表达的影响

目的 观察小鼠胚胎组织中Hox-3．5 mRNA的表达及VA缺乏和补充对其表达的影响。方法 初断乳的昆明小鼠，雌鼠60只随机分为正常对照组(N)、VA缺乏组(A)、妊娠第0d丰h充VA组(B)和妊娠第7d补充VA组(C)。N组饲含VA4000 U／kg饲料，A组饲VA缺乏饲料，B、C组在交配前饲VA缺乏饲料，在交配后分别于妊娠第0d或妊娠第7d饲含10000U／kg饲料。雄鼠饲以普通饲料。在妊娠第12d。剖腹取出胎鼠，采用原位杂交方法探测小鼠胚胎Hox-3．5 mRNA的表达，同时检查孕鼠血清VA水平。结果 在正常情况下，小鼠妊娠第12d胚胎组织Hox-3．5mRNA有表达，孕鼠血清VA缺乏时，妊娠第12d胚胎组织Hox-3．5mRNA的含量明显减少；妊娠第0d补充VA，Hox-3．5mRNA的含量与N组无差异；妊娠第7d补充，Hox-3．5mRNA的含量虽比A组增加，但仍明显低于N组。结论 VA可能在转录水平调控Hox-3．5的表达．     

维生素A缺乏及补充对大鼠胚胎存活及后脑Hoxa-2和Hoxb-2基因表达的影响

目的:研究维生素A(VA)缺乏及补充对大鼠胚胎后脑Hoxa-2和Hoxb-2mRNA表达的影响。方法:初断乳SD雌性大鼠60只,按体重随机分为VA缺乏组(A),VA缺乏妊娠0d(E0)补充组(B)和正常对照组(N)。A组和B组喂饲VA缺乏饲料,B组自E0天起改喂VA补充饲料(含VA10000IU/kg饲料),N组喂饲VA充足饲料(含VA4000IU/kg饲料),雄鼠饲以普通饲料。喂饲7w后采集尾血,将雌雄大鼠2︰1合笼交配,分别于妊娠D12.5(E12.5)和妊娠D19.5(E19.5)将孕鼠处死,留取血标本,剖腹取出胚胎。用微量荧光法测定母鼠血清中VA含量;观察E12.5和E19.5胚胎存活情况,记录活胎数、死胎数及吸收胎数;并用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测E12.5胚胎组织Hoxa-2、Hoxb-2mRNA的表达。结果:与N组相比,A组孕鼠血清VA水平下降;E12.5和E19.5胚胎的存活率显著降低,死胎及吸收胎的发生率增加,E12.5胚胎Hoxa-2、Hoxb-2mRNA表达水平明显下降;B组孕鼠各项指标同正常组相比无显著性差异。结论:胚胎后脑发育基因Hoxa-2、Hoxb-2可能介导VA对大鼠胚胎存活的影响。     

维生素A缺乏对初生大鼠脑发育的影响

目的 :　探讨维生素 A缺乏 (VAD)对初生大鼠脑发育的影响及其分子生物学机制。方法 :　建立不同程度 VAD母鼠模型。仔鼠出生后测定其血清维生素 A(VA)水平、脑组织 VA含量、体重、脑重、脑组织蛋白质含量、脑细胞增殖周期和脑内视黄酸受体 α、β(RARα、RARβ)、视黄醇X受体 β(RXRβ)和多巴胺受体 - 2 (D2 R) m RNA表达。结果 :　 (1 )初生鼠血清 VA水平和脑组织VA含量三组间有显著性差异 (P<0 .0 1 ) ,重度维生素 A缺乏 (SVAD)组明显低于对照组和边缘型维生素 A缺乏 (MVAD)组 ,MVAD组也明显低于对照组。 (2 ) SVAD组初生鼠体重和脑重明显低于对照组和 MVAD组 (P<0 .0 1 ) ,MVAD组与对照组相比无显著性差异。 (3 )全脑蛋白质含量、每克脑组织蛋白质含量和脑细胞增殖指数 (PI) SVAD组均明显低于对照组 (P<0 .0 1 ) ,MVAD组仅全脑蛋白质含量明显低于对照组 (P<0 .0 1 ) ,其它指标与对照组相比也有降低但无统计学意义。(4)脑细胞 RARα、RARβ、RXRβ 和 D2 R m RNA表达 SVAD组仅 RARα和 D2 R有微弱表达 ,MVAD组与对照组相比除 RARβ外均有不同程度降低。结论 :　VAD会导致初生大鼠脑发育受损 ,其作用可能是通过降低脑细胞内视黄酸受体表达而产生的     

孕鼠维生素A边缘缺乏对仔鼠海马长时程增强的影响

目的:研究孕期维生素A边缘缺乏(MVAD)对仔鼠海马长时程增强的直接影响。方法:将6只健康雌性Wistar大鼠随机分为MVAD和对照组,从交配前3w开始分别饲予维生素A(VA)缺乏饲料(含VA400IU/kg)和VA充足饲料(含VA6500IU/kg)。仔鼠断乳后,继续饲予与其母鼠相同的特殊饲料至生后7w。高效液相技术检测血清VA浓度,运用电生理技术测试7w龄幼鼠海马脑片的长时程增强(LTP),电镜观察海马脑片突触的形态学改变。结果:MVAD组孕鼠及仔鼠血清VA浓度均显著低于对照组;MVAD7w龄幼鼠海马脑片诱发LTP,场兴奋性突触后电位(fEPSP)斜率增加的百分比(25.4±2.01)%明显低于对照组[(57.5%±8.63)%,P<0.01]。MVAD组孵育脑片的人工脑脊液中加入视黄酸(RA)后,fEPSP斜率的改变明显增大(P<0.01),加入铁剂或锌剂后fEPSP斜率的改变没有显著差异(P>0.05)。对照组孵育脑片的人工脑脊液中加入RA受体拮抗剂(Ro41-5253)后,fEPSP斜率的改变明显减小;电镜观察,强直刺激后1h,脑脊液中补充RA的比没有补充RA的MVAD组脑片的突触界面曲率增大。结论:孕期VA边缘缺乏能直接损害幼鼠海马的LTP。     

维生素A缺乏对雌性大鼠生长发育及胚胎影响

目的建立维生素A（VA）完全及边缘缺乏的雌性大鼠模型,观察维生素A缺乏（VAD）对雌性大鼠及胚胎的影响。方法将初断乳SD雌性大鼠60只,随机分为VA缺乏组（AD）、VA边缘缺乏组（AM）、正常对照组（AN）,喂饲VA含量不同的饲料,耗竭性喂养后交配。将交配后的雌鼠在各组内随机分为VA缺乏组（A）、VA缺乏妊娠0d补充组（B）、VA边缘缺乏组（C）、VA边缘缺乏妊娠0d补充组（D）。B、D组于妊娠第0d喂饲补充饲料。于妊娠第19.5d将所有孕鼠处死并观察胚胎发育情况。结果发生AD组雌鼠出现明显的生长发育抑制。A组胚胎全为吸收胎,C组胚胎生长发育明显低于AN及B、C组,而畸胎死胎出现率明显高于AN及B、C组。结论VAD可明显影响雌性大鼠及其胚胎的生长发育,孕期补充VA可有效降低VAD对胚胎的发育毒性。     

孕期膳食锌缺乏下向调控胎盘氨基酸转运体mRNA的表达

目的:探讨孕期膳食锌缺乏对胎盘、母鼠小肠及肝脏中氨基酸转运蛋白Slc7a9 mRNA表达的影响。方法:27只SD孕鼠随机分为正常对照组(ZC)、锌缺乏组(ZD)及对喂组(PF)。分别于孕9.5d、孕13.5d和孕17.5d取孕鼠血清、肝脏、小肠及胎盘,以半定量聚合酶链反应测定Slc7a9mRNA及肝脏金属硫蛋白1(MT-1)mRNA的相对表达量,以原子吸收法测定血清锌浓度。结果:孕9.5d和孕13.5d时,ZD组血清锌浓度和母鼠肝脏MT-1mRNA的相对表达量显著低于PF组和ZC组。各时间点ZD组胎盘和小肠中Slc7a9mRNA相对表达量均显著低于ZC组和PF组,孕17.5d时PF组与ZC组胎盘之间差异显著。孕9.5d、孕13.5d时PF组与ZC组小肠之间差异显著。各时间点ZD组和PF组孕鼠肝脏Slc7a9mRNA的相对表达量与ZC组相比均显著减低。结论:孕期膳食锌缺乏显著下调胎盘及母鼠肝脏和小肠Slc7a9mRNA的表达。     

Vitamin A repletion in rats with concurrent vitamin A and iodine deficiency affects pituitary TSHbeta gene expression and reduces thyroid hyperstimulation and thyroid size

Concurrent vitamin A (VA) deficiency (VAD) and iodine deficiency (ID) are common in developing countries. VAD has effects on thyroid metabolism that may be dependent on iodine status. The aim of this study was to investigate the effect of VA supplementation (VAS) and/or dietary iodine repletion, alone and in combination, on the thyroid-pituitary axis in rats with concurrent VAD and ID. Weanling rats (n = 96) were fed diets deficient in VA and iodine or sufficient in both (control), for 30 d. Subsequently, deficient rats were repleted with iodine and/or single VAS or remained deficient for 10 d. Serum retinol (SR), thyroid hormones, serum thyrotropin (TSH), pituitary TSHbeta mRNA expression level, and thyroid weight were measured. High-dose VAS restored SR concentrations to normal in both iodine-deficient and iodine-sufficient rats. Despite continuing VAD, provision of the iodine-sufficient diet entirely reversed the abnormalities of the pituitary-thyroid axis produced by VAD and ID. In iodine-sufficient rats, VAS had no discernible effects on the pituitary-thyroid axis; in iodine-deficient rats, VAS reduced pituitary production of TSH and thyroid stimulation but had no discernible effects on circulating thyroid hormone concentrations. Primary hypothyroidism in rats with concurrent VAD and ID does not reduce the efficacy of VAS, nor does VAD reduce the efficacy of dietary iodine to correct pituitary-thyroid axis dysfunction due to ID. In concurrent VAD and ID, VAS, independent of iodine repletion, reduces thyroid hyperstimulation and size, an effect likely mediated through the effects of VA on pituitary TSHbeta gene expression.     

维生素A缺乏对小鼠胚胎Hox基因表达的影响

目的：观察维生素Ａ（ＶＡ）缺乏对小鼠胚胎ＨｏｘＣ４（３．５）和ＨｏｘＤ１０（４．５）基因表达量的影响。方法：初断乳的昆明小鼠,雌鼠４０ 只均分为正常对照组（Ａ）和维生素Ａ缺乏组（Ｂ）,分别饲含ＶＡ４０００ ＩＵ／ｋｇ 饲料和ＶＡ ０ ＩＵ／ｋｇ 饲料。雄鼠饲以普通饲料。在饲养的第１７ 周按雌∶雄＝ ２∶１ 合笼交配。在怀孕的第１２ 天和第１４ 天,分别对孕鼠颈椎脱臼处死,立刻剖腹取出胎鼠,迅速置于液氮中速冻后置于－ ７０℃冰箱保存。用地高辛标记的探针,采用原位杂交方法探测小鼠胎儿ＨｏｘＣ４（３．５）和ＨｏｘＤ１０（４．５）基因ｍ ＲＮＡ含量。结果：ＶＡ缺乏时,ｍ ＲＮＡ的含量明显减少。结论：ＶＡ缺乏导致Ｈｏｘ 基因表达量下降,从而影响小鼠胚胎的正常发育。     

维生素A缺乏对大鼠十二指肠DMT1,FPN1 mRNA表达的影响

目的研究维生素A(VA)缺乏对大鼠十二指肠二价金属离子转运蛋白(DMT1),膜铁转运蛋白(FPN1)mRNA表达的影响,为进一步研究维生素A缺乏影响铁代谢的相关机制提供基础。方法雄性SD大鼠52只,按体重随机分为4组,每组13只,Ⅰ组VA正常对照组,Ⅱ组VA完全缺乏组,Ⅲ组VA轻度缺乏组,IV组VA和铁轻度缺乏组。实验动物喂饲8w后处死,测定血清VA、血红蛋白、血清铁、血清铁蛋白,并用逆转录—聚合酶链反应(RT—PCR)法检测各组大鼠十二指肠二价金属离子转运蛋白(DMT1),膜铁转运蛋白(FPN1)mRNA表达的情况。结果 VA缺乏可使血清铁、血清铁蛋白含量显著降低。VA缺乏时十二指肠二价金属离子转运蛋白(DMT1)、膜铁转运蛋白(FPN1)mRNA的表达显著增强。结论 VA缺乏可能通过多种途径使大鼠十二指肠DMT1、FPN1 mRNA的表达增强,需要进一步研究证实。