帕金森病炎症/免疫异常细胞模型的建立

目的 观察小胶质细胞激活后形态和功能的变化。以探讨活化的小胶质细胞对多巴胺能神经元产生损伤作用的可能机制。阐明帕金森病发病的免疫机制。方法 建立原代小胶质细胞培养。筛选和鉴定的方法，以细菌细胞壁脂多糖为工具药激活小胶质细胞，通过免疫组化，MTT，ELISA等方法观察小胶质细胞形态，数量和功能的文化。结果 LPS激活的小胶质细胞体积增大，OX-42表达上调，释放一氧化氮（NitricOxide,NO)，合成超氧阴离子（O2）及分泌细胞因子TNF-α量显著增多，而细胞数量无明显改变。结论 激活的小胶质细胞对多巴胺能神经元的损伤作用。可能与释放NO，O2^-及细胞因子TNF-α等细胞毒性物质有关。     

Aβ1—40海马注射对大鼠脑内一氧化氮合酶表达的影响

目的探讨一氧化氮合酶(NOS)在β淀粉样蛋白(Aβ)神经毒性及阿尔茨海默病(AD)病理机制中的作用.方法应用免疫组化方法,观察大鼠海马齿状回Aβ1-40注射后神经元型一氧化氮合酶(nNOS)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达变化.结果正常大鼠海马齿状回区含nNOS神经元计数为8.96±0.35个/视野;生理盐水注射后局部含nNOS神经元无明显变化(8.97±0.29个/视野);Aβ1-40注射后,注射区周围含nNOS神经元数目显著减少(2.98±0.24个/视野).正常及生理盐水注射组脑内未见iNOS表达;Aβ1-40注射后2d、10d和30d,注射区持续出现大量含iNOS的胶质细胞(主要为星形胶质细胞),反应面积分别为0.905±0.082、0.962±0.161、0.935±0.125mm2.结论Aβ1-40海马注射可损伤局部含nNOS神经元及诱导胶质细胞iNOS表达,NOS在Aβ神经毒性和AD发病中有重要作用.     

Aβ_(1-40)海马注射对大鼠脑内一氧化氮合酶表达的影响

目的　探讨一氧化氮合酶 (NOS)在 β淀粉样蛋白 (Aβ)神经毒性及阿尔茨海默病 (AD)病理机制中的作用。方法　应用免疫组化方法 ,观察大鼠海马齿状回Aβ1 4 0 注射后神经元型一氧化氮合酶 (nNOS)和诱导型一氧化氮合酶 (iNOS)表达变化。结果　正常大鼠海马齿状回区含nNOS神经元计数为 8 96± 0 35个 /视野 ;生理盐水注射后局部含nNOS神经元无明显变化 (8 97± 0 2 9个 /视野 ) ;Aβ1 4 0 注射后 ,注射区周围含nNOS神经元数目显著减少 (2 98± 0 2 4个 /视野 )。正常及生理盐水注射组脑内未见iNOS表达 ;Aβ1 4 0 注射后 2d、10d和 30d ,注射区持续出现大量含iNOS的胶质细胞 (主要为星形胶质细胞 ) ,反应面积分别为 0 90 5± 0 0 82、0 96 2± 0 16 1、0 935± 0 12 5mm2 。结论　Aβ1 4 0 海马注射可损伤局部含nNOS神经元及诱导胶质细胞iNOS表达 ,NOS在Aβ神经毒性和AD发病中有重要作用。     

脑室内注射乙酰胆碱受体抗体IgG对大鼠神经元凋亡及一氧化氮合酶表达的影响

目的研究乙酰胆碱受体抗体(AchRab)对大鼠脑内神经元的损害及一氧化氮合酶(NOS)在损害中所起的作用，探讨重症肌无力(MG)中枢神经系统损害的机制。方法将AchRab IgG或健康人的IgG注入大鼠侧脑室。HE染色、TUNEL法检测细胞凋亡；免疫组化方法观察大鼠皮质、海马及杏仁核神经元型一氧化氮合酶(nNOS)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达变化。结果2周后实验组皮质、海马及杏仁核凋亡细胞明显增多，对照组仅见少量凋亡。实验组皮质、海马及杏仁核nNOS神经元数目明显减少。实验组及对照组脑内细胞均来见iNOS表达。结论AchRab脑内注射可诱导神经元凋亡；损伤皮质。海马及杏仁核nNOS神经元；但未能诱导脑内细胞iNOS表达。神经元凋亡损害参与了AchRab对中枢神经损害的机制；nNOS神经元的减少，可能与MG认知功能障碍有密切关系；而神经元的损伤可能与NO的毒性作用无关。     

Aβ25-35激活小胶质细胞机制的研究

目的以Aβ25-35为工具药，观察小胶质细胞激活后形态和功能的变化，以探讨阿尔茨海默病发病过程中活化的小胶质细胞对神经元损伤作用的可能机制。方法用Aβ25-35处理体外培养的大鼠小胶质细胞，采用倒置相差显微镜观察细胞形态，RT-PCR方法检测炎性因子肿瘤坏死因子（TNF）-α、白介素（IL）-1β、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）mRNA表达，Griess反应检测一氧化氮（NO）生成量，超氧化物岐化酶可抑制的WST-1还原法检测细胞外超氧化物产生量。结果Aβ25-35作用后，小胶质细胞形态发生明显变化，细胞胞体延长，由胞体伸出一个或多个树枝状突起，变为类巨噬样细胞；细胞外超氧化物产生量明显增加；但TNF—α、IL-1β、iNOS mRNA表达及NO释放量无明显改变。结论Aβ25-35激活小胶质细胞以活性氧类物质产生为主，活性氧类物质在介导Aβ诱导的神经毒性中起了关键作用。     

雷公藤氯内酯醇对大鼠海马注射β淀粉样蛋白后诱导型一氧化氮合酶的影响

目的：研究雷公藤氯内酯醇（T4）对阿尔茨海默病（AD）大鼠脑内诱导型一氧化氮合酶（iNOS）表达及NO产生的影响。方法：通过大鼠海马注射Aβ1-40建立AD大鼠模型,以腹膜腔注射T4作为干预措施,免疫组化方法检测iNOS,硝酸还原酶法检测硝酸盐／亚硝酸盐水平。结果：AD组大鼠海马iNOS表达和NO产生较假手术组明显增加,Aβ＋T4组大鼠海马iNOS表达和NO产生较Ap组减少。结论：T4可以抑制Aβ1-40诱导的iNOS表达和NO产生。     

一氧化氮及其合成酶与脑创伤性损害

一氧化氮(NO)是一种具有生物活性作用的小分子,它分布于人体多种组织中。NO内源合成的关键酶是一氧化氮合成酶(NOS)。脑损伤能诱导局部神经元和传入到损伤区域的神经元表达NOS,伤口内反应性的星形细胞和相关的胶质细胞聚集并有较高的NOS活性。NO发挥神经毒性作用的中心环节是损伤DNA,使细胞内能量储备耗竭而引起细胞死亡。     

大鼠实验性变态反应性脑脊髓炎中一氧化氮的变化

目的　观察外周和中枢一氧化氮 (NO)在大鼠实验性变态反应性脑脊髓炎 (EAE)中的动态变化 ,探讨EAE大鼠发病的相关生物学机制。方法　 采用免疫组化法和硝酸还原酶法 ,观察豚鼠全脊髓匀浆诱导的Wistar大鼠EAE的过程中 ,脊髓内表达iNOS胶质细胞与外周NO代谢物NO 2 和NO 3的变化。 结果　 对照组脊髓内未发现表达iNOS阳性细胞 ,表达iNOS的CNS胶质细胞可能是小胶质细胞 ,而且它的变化与EAE大鼠的病情一致 ,评分 2分和 3分EAE大鼠脊髓表达iNOS的小胶质细胞比评分 1分大鼠明显增多 (P <0 .0 1) ,恢复期EAE大鼠表达iNOS的小胶质细胞明显减少 (P <0 .0 1)。EAE大鼠外周血清NO值随症状程度加重而升高 ,但在EAE恢复期时仍保持较高水平。未发病大鼠血清NO值明显增高 ,与对照组之间具有显著性差异 (P <0 .0 1)。 结论　 小胶质细胞产生的NO可能在急性期EAE大鼠的发病中起重要作用     

iNOS在颅内囊性动脉瘤瘤壁中的表达及意义

目的探讨诱导性一氧化氮合酶（iNOs）在颅内囊性动脉瘤瘤壁中的表达及其意义。方法应用免疫组化染色和原位杂交染色技术检测iNOS在颅内囊性动脉瘤和正常动脉血管壁组织中的表达。结果所有脑动脉瘤标本中均可见iNOS表达，而正常脑动脉标本中则未见其表达：iNOS阳性表达部位主要在动脉瘤壁外膜和中膜的炎症浸润区的炎症细胞（如淋巴细胞、单核巨噬细胞）的胞浆内。结论动脉瘤的发生可能与局部iNOS过度表达，继而合成大量的NO有关。     

凝血酶诱导的小胶质细胞激活促进多巴胺能神经元变性

目的探讨凝血酶（Thrombin）诱导小胶质细胞（Micoglia）激活与黑质多巴胺能神经元变性的关系。方法采用立体定向术注射凝血酶至大鼠黑质,在不同时间点观察酪氨酸羟化酶（tyrosine hydroxylase,TH）神经元的表达及小胶质细胞的激活情况;同时检测黑质NO量及iNOS mRNA表达。结果（1）凝血酶注入大鼠黑质导致明显的黑质多巴胺能神经元变性,呈时间依赖性,TH阳性细胞数在第3d开始下降,第7d有大量的TH阳性细胞丢失,与对照侧相比下降达约53％（P〈0．01）;高倍镜下可见胞体皱缩、突起明显缩短或减少;14d时细胞数下降至21％,30d时下降至12％（P〈0．01）。（2）凝血酶注射入黑质4h后小胶质细胞开始呈现为“灌木丛样”或少量呈现“阿米巴样”：12h后小胶质细胞数目明显增加且绝大部分呈现“阿米巴样”;24h后细胞已完全激活,“阿米巴样”细胞达高峰;3d维持高峰;14d后小胶质细胞染色变淡,体积变小,“阿米巴样”细胞数目下降。（3）与对照组相比,iNOSmRNA表达明显上调及NO合成增加（P〈0．05）,并且有iNOS在小胶质细胞表达。结论凝血酶对多巴胺能神经元具有一定的损毁作用,小胶质细胞的激活先于多巴胺能神经元变性,其激活后释放的NO有可能参与多巴胺能神经元变性。     

小胶质细胞与帕金森病

帕金森病是常见神经系统变性疾病,以中脑黑质多巴胺(DA)神经元变性坏死和患者脑内出现Lewy小体为主要病理特点。神经元缺失的同时伴胶质细胞反应,尤其是小胶质细胞激活,近年来诸多证据显示小胶质细胞激活可以介导活性氧产物,致炎性细胞因子、一氧化氮等相关产物的神经毒性作用,干预小胶质细胞激活有助于阻止PD进程。本文综述小胶质细胞在PD中的神经破坏作用以及目前药物干预治疗的进展。     

Alzheimer病与NO/NOS

Alzheimer病(AD)时神经元、脑血管内皮细胞,特别是胶质细胞可产生大量的一氧化氮(NO)。NO通过介导和放大氧化应激、炎性级联、兴奋性毒性反应,选择性损伤与学习记忆有关的神经元、促进老年斑和神经原纤维缠结形成,并使AD的病理变化进行性发展。有关研究的不断深入,不仅有助于进一步阐明AD的病理机制,也将为其治疗提供新途径。     

重症肌无力患者IgG对大鼠脑内NOS不同时间表达的影响

目的观察重症肌无力(myasthenia gravis,MG)患者IgG(AchRab)对大鼠脑内一氧化氮合酶(NOS)表达的影响,探讨NOS在MG中造成中枢神经系统损害的机制.方法将AchRab IgG或健康人的IgG注入大鼠侧脑室,1次/d,连续4次.免疫组化方法观察不同时间点大鼠脑皮质、海马及杏仁核神经元型一氧化氮合酶(nNOS)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达变化.结果侧脑室注射后1周实验组大鼠皮质、海马神经元nNOS表达量明显减少,后2周实验组皮质、海马神经元nNOS表达下降更为明显,同时杏仁核神经元nNOS表达量也减少;实验组及对照组脑内细胞均未见iNOS表达.结论AchRab侧脑室内注射可引起大鼠皮质、海马及杏仁核神经元nNOS表达量减少,且2周内这种减少效应随时间延长而增强,但未能诱导脑内细胞iNOS表达,提示AchRab尚可通过抑制大鼠中枢神经系统nNOS表达,降低脑内正常的一氧化氮浓度,减弱一氧化氮对脑组织的保护作用,增加神经元的易损性.     

亚低温对大鼠局灶性脑缺血再灌注后半暗带区iNOS诱导细胞凋亡的影响

目的通过研究亚低温对大鼠局灶性脑缺血再灌注后诱导型一氧化氮合酶（iNOS）表达和细胞凋亡的影响，探讨亚低温脑保护的可能机制。方法雄性SD大鼠54只随机分为假手术组、常温缺血组和亚低温组。线栓法制备大脑中动脉闭塞再灌注模型。于缺血后48h取脑组织，邻片行HE染色，检测各组不同脑区iNOS蛋白表达和细胞凋亡情况，免疫双重染色研究iNOS蛋白表达与细胞凋亡间的关系，同时行NO含量测定。结果常温缺血组皮质缺血半暗带（IP）区iNOS免疫反应较强，TUNEL阳性细胞也主要位于皮质IP区，免疫双重染色发现TUNEL阳性细胞中存在着iNOS蛋白表达。亚低温组IP区iNOS蛋白表达明显下调，NO产生减少．IP区细胞凋亡的数目也减少。结论亚低温可能通过抑制IP区iNOS蛋白表达，减少NO产生．阻遏细胞凋亡，从而起到脑保护作用。     

一氧化氮的神经毒性与保护作用

在脑缺血、兴奋毒性、创伤和退行性疾病等中枢神经损伤后一氧化氮(NO)及其合酶明显增加 NO具有神经毒性与保护的双向作用,ncNOS和iNOS均与神经损伤机制有关,而ecNOS可能有助于防护神经损伤。     

内皮素-1、一氧化氮和一氧化氮合成酶在蛛网膜下腔出血中的作用机制探讨

继发性脑血管痉挛是蛛网膜下腔出血(SAH)患者死亡和致残的重要原因.内皮素(ET-1)通过收缩脑血管、介导脑血管和脑组织损伤引发脑损伤;而一氧化氮(NO)和内皮型一氧化氮合成酶(eNOS)对脑组织可以起到减少损伤作用;另一方面NO的过量生成以及诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)的表达可直接对细胞产生强大的毒性作用,或者通过诱导细胞凋亡来损伤脑组织;在蛛网膜下腔出血整个病理过程中ET-1和NO的失衡也在脑组织损伤过程中起着至关重要的作用.     

急性脑血管病患者血清一氧化氮和一氧化氮合酶变化规律及临床意义

1980年Furchgott等首先在哺乳动物血管层发现一氧化氮（NO），1992年NO被美国科学杂志评为“年度分子”。一氧化氮合酶（nitric oxide synthease，NOS）分结构型（cNOS）和诱生型（iNOS）。NO与脑血管疾病的关系是近几年国内外研究热点，但关于临床急性缺血性和出血性脑血管病NO及NOS浓度变化规律，以及NO与急性缺血性和出血性脑血管病诊断的相关性研究罕见报道。我们旨在通过观察急性脑血管病患者血清NO、iNOS、cNOS浓度变化，探讨NO浓度对于鉴别诊断急性脑血管疾病的临床意义。     

脂多糖促进星形胶质细胞增殖和释放致炎因子

近十年来的研究表明胶质细胞激活介导的炎症反应在帕金森病（Parkinson disease，PD）及其他神经系统退行性疾病的发病和进展过程中起到重要作用。目前对于胶质细胞在PD中作用的研究多侧重小胶质细胞，而对星形胶质细胞（astrocyte，AC）激活的作用研究则很少。因此，在2005年2-6月期间，我们采用经典的致炎剂脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）作用于AC，观察AC内游离钙离子的动态变化和释放致炎因子，如活性氧、一氧化氮（NO）的水平，来研究AC被LPS激活后的反应和变化。     

一氧化氮和一氧化氮合酶在鼠脑内形成吗啡依赖的作用研究

目的：研究一氧化氮（NO）和一氧化氮合酶（NOS）在吗啡依赖形成中的作用。方法;对吗啡依赖和戒断大鼠脑内NO含量和NOS活力进行测定。结果：未发现吗啡依赖和戒断大鼠脑内NO含量和NOS活力有改变。结论：对NO／NOS与吗啡依赖的关系还有待进一步研究。     

一氧化氮合酶在脑缺血再灌注中的双重作用

目的 探讨短暂脑缺血再灌注后大鼠脑内3型一氧化氮合酶(nitric oxide synthase，NOS)的表达及作用，为脑缺血治疗提供理论依据。方法 采用免疫组织化学方法，用3型NOS的多克隆抗体检测大鼠局灶性脑缺血2h再灌注15min及22h NOS在脑内的表达情况。结果 大鼠脑缺血2h再灌注15min，在脑缺血边缘区的血管壁及神经细胞出现内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase，eNOS)上调表达；脑缺血2h再灌注22h，在脑梗死区内表达神经元型一氧化氮合酶(neuronal mitric oxide synthase，nNOS)的神经细胞减少，并出现表达诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase，iNOS)的胶质细胞，同时梗死边缘区血管及神经细胞出现eNOS及iNOS的上调表达。结论 在短暂脑缺血再灌注早期，缺血区周围可能有eNOS相关的保护机制；亚急性期eNOS及iNOS的保护及损伤机制并存；因此，在短暂脑缺血早期恢复灌注后予选择性iNOS抑制剂及促进eNOS活性有可能减少迟发性神经损伤。