日本血吸虫免疫核糖核酸佐剂作用的研究

本实验研究了日本血吸虫免疫核糖核酸（ＳｉＲＮＡ）的佐剂作用。用ＥＬＩＳＡ检测结果表明，用ＳｉＲＮＡ加日本血吸虫成虫抗原（ＳＷＡ）免疫的小鼠的抗体水平显著高于仅用ＳｉＲＮＡ或ＳＷＡ免疫的小鼠。尾蚴攻击感后，用ＳｉＲＮＡ＋ＳＷＡ或ＳｉＲＮＡ免疫的小鼠有较高的减虫率，两组间减虫率无显著性差异。这些结果表明，ＳｉＲＮＡ能增强宿主的体液免疫反应，但未能增强宿主保护性免疫力。     

日本血吸虫核糖体制剂的佐剂作用的探讨

目的 :探讨日本血吸虫核糖体制剂用作血吸虫抗原佐剂的可能性 ,以及日本血吸虫核糖体制剂的保护作用。方法 :小鼠用日本血吸虫核糖体制剂 ( SRP)、日本血吸虫成虫抗原( SWA)和日本血吸虫核糖体制剂加日本血吸虫成虫抗原 ( SRP SWA)免疫后 ,用 ELISA检测体液免疫水平 ,用减虫率表示保护性免疫力。结果 :用 SRP或 SRP SWA免疫小鼠均产生较高滴度的特异性抗体 ,然而均未能诱导比 SWA组小鼠高的减虫率。结论 :SRP可以增强小鼠的体液免疫应答反应 ,但未能使小鼠产生保护性免疫力。     

日本血吸虫磷酸丙糖异构酶小鼠免疫试验

目的：探讨从日本血吸虫大陆株成虫分离的天然磷酸丙糖异构酶抗原（ＳｊｃＴＰＩ）免疫小鼠后对尾蚴攻击感染的保护性作用。方法：采用丙酮沉淀法从日本血吸虫大陆株成虫中提取天然的ＴＰＩ抗原，并以所提纯的ＳｊｃＴＰＩ抗原加福氏佐剂经皮下和肌肉注射免疫ＮＩＨ小鼠，攻击感染后６ｗｋ收集小鼠血清并计数成虫负荷及肝、肠组织虫卵数。同时设有日本血吸虫成虫抗原（ＳＷＡＰ）免疫对照组和攻击感染对照组。结果：天然ＳｊｃＴＰＩ抗原免疫小鼠后减虫率为２１．４％－２５．０％，肝组织减卵率达５７．８％－６０．３％；ＥＬＩＳＡ法检测ＴＰＩ免疫小鼠血清抗ＴＰＩ抗体ＯＤ值明显高于对照组小鼠的ＯＤ值（Ｐ＜０．０５）。结论：天然的ＳｊｃＴＰＩ抗原具明显的免疫原性和抗原性，可以继续进行编码ＴＰＩ基因的克隆与表达。     

旋毛虫肌蚴抗原诱导小鼠抗日本血吸虫保护性免疫的研究

目的：探讨旋毛虫幼虫抗原免疫小鼠对日本血吸虫攻击感染的交叉保护作用。方法：用４种不同的旋毛虫幼虫抗原制剂经颈部皮下多点免疫小鼠，然后用日本血吸虫尾蚴３０条或１００条攻击感染，攻击后４５ｄ剖杀小鼠，收集成虫、肝组织和粪便中的虫卵，并计数。结果：４种不同制剂均可诱导不同程度的保护性免疫效应，以旋毛虫幼虫匀浆上清可溶性抗原（ＴｓＳＡ）效果较好，减虫率为２１．３％，加用福氏佐剂时，其减虫率为２９．３％，肝组织和粪便中的虫卵减少率分别达４８％和５８．５％，平均每鼠肝组织和粪便中的虫卵ＥＰＧ减少率分别为４１．７％和４８．９％；当抗原剂量为１００００条旋毛虫并加用福氏佐剂时，其减虫率达３９．６％。结论：旋毛虫抗原免疫小鼠能诱导抗日本血吸虫攻击感染的免疫效应     

重组IFN—γ作用reSj26kDaGST佐剂的实验观察

目的 探讨重组ＩＦＮ－γ用作血吸虫抗原佐剂的可能性。方法 用ｒｅＳｊ２６ＧＳＴ 加鼠重组ＩＦＮ－γ，ｒｅＳｊ２６ＧＳＴ加福氏佐剂以及ＩＦＮ－γ分别免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，攻击感染后４５ｄ解剖小鼠，比较各上鼠成虫检获数及克肝数。结果 ＩＦＮ－γ／ＧＳＴ组小鼠的减虫率和减卵率均略高于ＦＣＡ／ＧＳＴ组。结论 ＩＦＮγ可以增强ｒｅＳｊ２６ＧＳＴ保护性免疫效果，初步提示ＩＦＮ－γ可作为血吸虫抗原佐剂使用。     

UV致弱日本血吸虫尾蚴诱导C57BL/6小鼠免疫保护作用的研究

目的 研究紫外线（UV）致弱日本血吸虫尾蚴诱导C57BL／6小鼠的免疫保护作用。方法分别观察不同UV强度（300、400和500μW／cm。照射的日本血吸虫尾蚴经腹部皮肤免疫）、不同免疫剂量（8、24和300条uV致弱尾蚴经腹部皮肤免疫）、不同免疫位点（300条UV致弱尾蚴经腹部和耳廓皮肤免疫）和不同免疫次数（100条UV致弱尾蚴经腹部皮肤免疫3次）诱导C57BL／6小鼠抗血吸虫攻击感染（40条正常尾蚴经腹部皮肤感染）的保护力。同时观察免疫后小鼠的体液免疫应答变化。结果 300、400和500μW／cm。UV照射的日本血吸虫尾蚴免疫C57BI。／6小鼠诱导产生的减虫率分别为2．72％、11．37％和10．38％；8、24和300条致弱尾蚴免疫小鼠诱导产生的减虫率分别为38．67％、7．54％和16．36oA；300条致弱尾蚴经腹部和耳廓皮肤免疫诱导小鼠产生的减虫率分别为16．36％和16．14％；100条致弱尾蚴免疫3次，诱导小鼠产生减虫率为4．88％。对300条uV照射尾蚴免疫后小鼠的体液免疫应答动态观察显示，与感染对照组相比，免疫组血清中可溶性成虫抗原（SWA）和可溶性虫卵抗原（SEA）特异的IgG于免疫后2周开始升高，正常尾蚴抗原（SCA）特异的IgG于免疫1周后开始升高，SWA和SCA特异的IgG随免疫次数的增加而升高。结论 UV致弱日本血吸虫尾蚴免疫C57BL／6小鼠能诱导其产生高水平的体液免疫应答，但保护力水平较低，提示C57BL／6小鼠为对UV致弱日本血吸虫尾蚴的低应答品系。     

日本血吸虫 26 kDa 谷胱甘肽S-转移酶DNA疫苗的研究及其保护性免疫效果观察

本文对大陆株日本血吸虫２６ｋＤａ谷胱甘肽Ｓ－转移酶（Ｓｊ２６ＧＳＴ）的ＤＮＡ疫苗进行研究，并观察了其免疫保护效果。分别构建含Ｓｊ２６ＧＳＴ基因的重组质粒ｐＣＤ－Ｓｊ２６和ｐＢＫ－Ｓｊ２６，采用脂质体介导的基因转移将ｐＣＤ－Ｓｊ２６和ｐＢＫ－Ｓｊ２６分别导入ＮＩＨ３Ｔ３成纤维细胞，用免疫荧光法（ＩＦＡ）证实Ｓｊ２６ＧＳＴ在真核细胞中的表达。分别将ｐＣＤ－Ｓｊ２６和ｐＢＫ－Ｓｊ２６及ｐＢＫ－ＣＭＶ肌注ＢＡＬＢ／ｃ小鼠。免疫３次后，免疫鼠产生一定水平的抗血吸虫抗体。用日本血吸虫尾蚴攻击感染免疫小鼠，结果ｐＣＤ－Ｓｊ２６和ｐＢＫ－Ｓｊ２６免疫鼠减虫率分别为３７．１９％和４４．４４％，肝组织减卵率为７３．８０％和４７．２０％，每对成虫产卵减少５６．８８％和１５．６７％。实验结果表明，日本血吸虫Ｓｊ２６ＤＮＡ疫苗免疫小鼠后能诱生一定水平的抗血吸虫抗体，免疫鼠可形成一定水平的保护性免疫力，预防血吸虫尾蚴感染。同时可减轻宿主肝组织血吸虫卵所致的病理损害作用     

重组IFN-γ用作reSj26kDaGST佐剂的实验观察

目的探讨重组ＩＦＮ－γ用作血吸虫抗原佐剂的可能性。方法用ｒｅＳｊ２６ＧＳＴ加鼠重组ＩＦＮ－γ,ｒｅＳｊ２６ＧＳＴ加福氏佐剂以及ＩＦＮ－γ分别免疫ＢＡＬＢ／ｃ 小鼠,攻击感染后４５ｄ解剖小鼠,比较各组小鼠成虫检获数及克肝卵数。结果ＩＦＮ－γ／ＧＳＴ组小鼠的减虫率和减卵率均略高于ＦＣＡ／ＧＳＴ组。结论ＩＦＮ－γ可以增强ｒｅＳｊ２６ＧＳＴ保护性免疫效果,初步提示ＩＦＮ－γ可作为血吸虫抗原佐剂使用。     

旋毛虫机蚴抗原诱导小鼠抗日本血吸虫保护性免疫的研究

目的：探讨旋毛虫幼虫抗原免疫小鼠对日本血吸虫攻击感染的交叉保护作用。方法：用4种不同的旋毛虫幼虫抗原制剂经颈部皮下多点免疫小鼠，然后用日本血吸虫尾蚴30条或100条攻击感染，攻击后45d剖杀小鼠，收集成虫、肝组织和粪便中的虫卵，并计数。结果：4种不同制剂均可诱导不同程度的保护性免疫效应，以旋毛虫幼虫匀浆上清可溶性抗原（TsSA）效果较好，减虫率为21．3％，加用福氏佐剂时，其减虫率为29．3％，肝组织和粪便中的虫卵减少率分别达48％和58．5％，平均每鼠肝组织和粪便中的虫卵EPG减少率分别为41．7％和48．9％；当抗原剂量为10000条旋毛虫并加用福氏佐剂时，其减虫率达39．6％。结论：旋毛虫抗原免疫小鼠能诱导抗日本血吸虫攻击感染的免疫效应。     

日本血吸虫及其中间宿主原肌球蛋白免疫小鼠的保护作用

目的：探讨从日本血吸虫大陆株成虫及其中间宿主湖北钉螺头足部分离的天然原肌球蛋白（分别称为ＳｊｃＴＭ和ＯｈＴＭ）免疫小鼠后对日本血吸虫尾蚴攻击感染的保护作用。方法：参照Ｃｏｔｅ和Ｓｍｉｌｉｅ文献改进的方法从日本血吸虫大陆株成虫及其中间宿主湖北钉螺头足部分别提取天然原肌球蛋白（ＴＭ）抗原，用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析其纯度和分子量，并以所提纯之ＴＭ抗原加福氏佐剂皮下多点注射免疫Ｃ５７ＢＬ／６雌性小鼠，共免疫３次，攻击感染后６ｗｋ解剖小鼠，门脉灌注收集成虫，并分类计数小鼠肝脏和肠组织内的未成熟和成熟虫卵。同时设立佐剂对照组。结果：日本血吸虫大陆株成虫和湖北钉螺ＴＭ分子量相似约４０ｋＤａ。与佐剂对照组相比，日本血吸虫和湖北钉螺ＴＭ免疫组：减虫率分别为２１．１％和２８．２％；平均每对成虫肝脏减卵率分别为２０．１％和５２．２％，肠组织减卵率分别为３２．８％和２８．１％；肝脏成熟虫卵减少率分别为２５．９％和４６．８％，在肠组织的减少率分别为３９．７％和６６．８％。结论：日本血吸虫和湖北钉螺ＴＭ抗原具明显的免疫原性，免疫小鼠后具有抗感染和抗血吸虫病免疫的作用。可作为血吸虫病候选疫苗分子作进一步研究。     

Investigation on immunity induced by Schistosoma spindale against S. mekongi in experimental mice

An investigation on immunity induced by Schistosoma spindale cercariae (cattle and swamp buffalo schistosome) against S. mekongi (human schistosome) was conducted in Swiss albino mice. The studies comprised the development patterns of homologous immunity of S. spindale and heterologous immunity induced by S. spindale against S. mekongi. The development pattern of homologous immunity was studied in mice with an immunization of 100 S. spindale cercariae. At one week intervals, between 2 to 16 weeks after immunization, they were each challenged with 500 S. spindale cercariae. Significant homologous immunity, as judged by lung recovery assay five days after challenge, occurred from week 5 to week 16 with week 8 giving the highest homologous immunity (68.1% of schistosomular reduction). Using the above information mice, with an eight-week immunization period of 100 S. spindale cercariae, were tested for resistance to heterologous S. mekongi infection. The criteria used to evaluate their immune status was schistosomular lung recovery, daily egg output, worm recovery and tissue egg count. The results showed that mice immunized with S. spindale cercariae could develop heterologous immunity against S. mekongi infection. Manifestation of immunity was demonstrated by significant reduction in mean schistosomular recovery (31.4%), in mean daily egg output per female worm (16.7%), in mean worm recovery (64.2%) and in mean egg deposition in the liver tissue and intestines per female worm (37.05%).     

诱变剂NTG致弱的日本血吸虫尾蚴免疫效果的进一步观察

为了进一步了解诱变剂(NTG)致弱尾蚴的免疫效果,以NTG(30μg/ml)致弱15min后,经皮感染免疫小鼠两次,间隔一周,观察免疫后不同时间攻击感染(2、4、6、8和10wk)对免疫鼠存活时间,减虫率,肝、脾肿大及肝、脾虫卵肉芽肿程度的影响。同时,还对免疫鼠体内血吸虫进行虫体表面皮层的电镜扫描观察。实验结果表明:NTG致弱尾蚴初次免疫后,8wk攻击感染时减虫率最高(77％),且肝、脾肿大及虫卵肉芽肿病变程度最轻.小鼠存活时间也长。从而提示NTG致弱尾蚴免疫小鼠后,对攻击感染确产生免疫力。但免疫后不同时间所产生的免疫力不同,初次免疫后8wk可能是最适攻击感染时间。对免疫后不同时间所产生的免疫力不同的原因进行了讨论,NTG致弱尾蚴诱导保护性免疫力产生的机制尚待进一步研究阐明。     

日本血吸虫97kDa DNA疫苗与致弱尾蚴疫苗诱导免疫应答特征的比较研究

目的　对比观察日本血吸虫大陆株副肌球蛋白基因疫苗(Sjc97DNA)与紫外线致弱尾蚴(UVC)疫苗免疫C57BL6小鼠诱导的抗感染保护力及免疫应答特征。　方法　以Sjc97DNA核酸疫苗经后腿胫前肌免疫C57BL6小鼠共2次,每次间隔3wk,末次免疫后3wk攻击感染日本血吸虫尾蚴;UVC疫苗接种同种小鼠后5wk攻击感染上述等量尾蚴。均于攻击感染后7wk计数虫负荷及肝卵负荷。并设空质粒对照及感染对照组。用ELISA分析免疫鼠攻击感染前后血清特异性IgG、IgA及亚型抗体水平,以及脾淋巴细胞体外诱生的细胞因子水平。　结果　Sjc97DNA疫苗及UVC疫苗免疫小鼠均诱生出以Th1型免疫应答为主的IL2、IFNγ及特异性抗AWA、SEAIgG2a、IgG2b亚型及IgA抗体,UVC疫苗组小鼠各细胞因子及抗体水平均显著高于Sjc97DNA疫苗组,但两疫苗组均未测及IL4。攻击感染后,Sjc97DNA疫苗组的减虫率36.3%、减卵率42.4%,明显低于UVC疫苗组的66.9%和75.6%。攻击感染后7wk,两疫苗组小鼠Th2型免疫应答虽有所增强,但仍以Th1型免疫应答占优势;而空质粒对照组和感染对照组小鼠则以Th2型免疫应答为主。　结论　核酸疫苗与紫外线致弱尾蚴疫苗均能诱导产生抗感染免疫保护力,致弱尾蚴疫苗的免疫保护力高于Sjc97DNA。两疫苗诱导的抗感染     

日本血吸虫极低密度脂蛋白结合蛋白重组抗原的免疫保护性研究

目的?摇探讨日本血吸虫极低密度脂蛋白结合蛋白（SVLBP）重组抗原的免疫保护性及其作为候选疫苗的潜在价值。 方法 用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导克隆菌大量表达SVLBP重组抗原，以镍-次氮基三乙酸琼脂糖树脂（Ni-NTA）亲和层析法纯化制备SVLBP重组抗原；将纯化的重组抗原加福氏佐剂经皮下免疫C57BL/6小鼠，每隔2周免疫1次，在第3次免疫后10 d，经腹部皮肤攻击感染日本血吸虫尾蚴35±1条，感染后45 d剖杀，计数检获虫数和每克肝虫卵数（LEPG）。小鼠在免疫前和攻击感染后分别采眶窦血，用ELISA测定特异性IgG及其亚群抗体水平。 结果 相对于佐剂对照组，免疫组小鼠的减虫率为33.4%，减卵率为47.6%；免疫后小鼠产生高水平的特异性IgG（>1:6 400）；抗体亚类检测结果显示，免疫组小鼠 IgG2a、IgG2b、IgG1明显高于免疫前和佐剂对照组。 结论 日本血吸虫皮层蛋白SVLBP重组抗原能诱导小鼠产生一定的保护性免疫，是潜在的疫苗候选抗原分子。     

日本血吸虫重组硫氧还蛋白小鼠保护性免疫研究

目的 观察日本血吸虫（大陆株）硫氧还蛋白重组抗原在小鼠诱导抗血吸虫感染的免疫保护作用。 方法 30只雌性C57BL/6小鼠随机分为3组，reSjcTrx免疫组：reSjcTrx（15mg/鼠）和ISA720佐剂乳化后采用小鼠相背部多点皮下注射，共免疫3次，间隔2周；ISA720佐剂对照组：小鼠仅注射ISA720佐剂和生理盐水；感染对照组不作任何处理。于末次免疫后3周，各组小鼠经腹部皮肤感染（30±1）条日本血吸虫尾蚴，感染后6周剖杀，门静脉灌注法收集成虫，计成虫数和每克肝组织虫卵数。在免疫前、攻击感染前和小鼠剖杀前分别采血并分离血清，用ELISA检测重组抗原特异性IgG抗体。并对reSjcTrx 进行十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和蛋白质印迹（Western blotting）分析。 结果 ELISA检测表明，reSjcTrx免疫组小鼠产生特异性IgG抗体应答，并诱导小鼠产生对攻击感染的减虫率和肝组织减卵率分别为22.8%和29.5%，与ISA720佐剂对照组和感染对照组相比，差异均有统计学意义（P﹤0.05）。SDS-PAGE和Western blotting的结果表明，该重组抗原相对分子质量（Mr）约14 000（含载体的6个氨基酸），可被日本血吸虫感染兔血清和reSjcTrx免疫小鼠血清所识别。 结论 reSjcTrx免疫小鼠可产生一定的抗血吸虫感染的保护作用。     

保护性免疫大鼠感染华支睾吸虫后吡喹酮化疗效果

[目的 ]研究吡喹酮与宿主保护性免疫对华支睾吸虫感染的协同作用。 [方法 ]用粗成虫抗原 (AWAg)和排泄分泌抗原 (ESAg)免疫大鼠或感染 2 0条华支睾吸虫囊蚴获得保护性免疫 ,用 5 0个华支睾吸虫囊蚴感染大鼠 ,用亚致死量吡喹酮(5 0 mg/ kg)治疗 ,以回收虫体数观察疗效。统计学上显著性差异用 PC- SAS系统的 ANOVA和 Nparlway Kruskal- Wallis检验法。 [结果 ]1在对照组 ,ESAg免疫接种组和 AWAg免疫接种组吡喹酮杀幼虫效果明显高于成虫 ,3组均为 P<0 .0 1。2感染后的减虫率 ,与对照组比较 ,ESAg免疫接种组 (35 .6 % ,P<0 .0 1)和华支睾吸虫囊蚴感染组 (97.5 % ,P<0 .0 1)较高 ,而在 AWAg免疫接种组 (2 3.4% )较低。吡喹酮的疗效在 ESAg免疫接种组显著增高。 [结论 ]吡喹酮对华支睾吸虫的疗效在大鼠具有获得性免疫的情况下相协性的提高。     

不同免疫途径对Sj童虫细胞型免疫原诱生的保护性效果及抗体应答差异

目的比较研究小鼠经不同途径接种日本血吸虫(Schistosoma japonicum,Sj)童虫原代细胞(primary juvenile worm cells,pJCs)后所诱导的免疫保护效果,寻找其合适的免疫途径。方法将pJCs经皮下或静脉注射途径免疫昆明小鼠,间隔2w共免疫3次,末次免疫后第4w,与对照组同时经腹部皮肤感染尾蚴30±2尾/鼠,比较三组小鼠的肝脏虫卵数及虫卵肉芽肿的大小、成虫数、虫体大小。同时在第2、3次免疫前及攻击感染前1d,小鼠尾静脉采血,用ELISA法检测抗pJCs-IgG水平。结果 pJCs免疫小鼠后,与PBS对照组比,静脉免疫组的减虫率为48.53%、肝卵减少率为54.54%、虫体平均重量减少率为29.62%(P0.01)、虫卵肉芽肿面积减少率为36.8%,而皮下免疫组分别为41.28%、43.19%、23.08%、31.2%。IgG抗体水平也是静脉注射组高(PBS组,P0.01;皮下注射组,P0.05)。结论日本血吸虫童虫细胞免疫原通过皮下和静脉注射均可诱导小鼠产生对日本血吸虫的免疫保护力,其中静脉注射诱导的免疫保护效应最强,提示通过静脉注射日本血吸虫童虫细胞是可行有效的免疫途径。     

旋毛虫肌肉期幼虫分泌排泄物中46-58kD抗原诱发小鼠保护性免疫的研究

为探讨旋毛虫肌肉期幼虫分泌排泄物（ＴｓＬ１ＥＳ）中４６５８ｋＤ抗原的保护性免疫作用，本文用该纯化抗原组分加福氏完全佐剂（ＦＣＡ）腹腔注射免疫昆明小鼠３次，继以旋毛虫感染性幼虫３００条攻击感染，感染后第７天计数小鼠肠道成虫数、第３０天肌肉幼虫数和血清抗体ＩｇＧ滴度。结果：４６５８ｋＤ抗原免疫鼠的肠道成虫减虫率、肌肉幼虫减虫率和血清抗体ＩｇＧ的几何平均倒数滴度分别为４１８％、４６１％和２８４１２；与ＴｓＬ１ＥＳ诱导的保护性免疫力（４８３％、５０２％和３４５８６）水平接近；显著高于佐剂对照组（４８％、８３％和７４８６）。表明：ＴｓＬ１ＥＳ中４６５８ｋＤ抗原组分可产生明显的保护性免疫作用