氯化锂通过干预肌醇磷酸通路增加黑素瘤细胞的色素沉着

氯化锂调节多种正常细胞和肿瘤细胞的生长以及生物体的发育。研究发现锂盐治疗过程中白癜风消退 ,提示氯化锂可能刺激皮肤发生色素沉着。尽管氯化锂对细胞生长和分化的作用机制尚不清楚 ,然而锂剂干预多种组织内环核苷酸水平、葡萄糖和磷脂酰肌醇的代谢 ,而且三磷酸肌醇在人黑素细胞色素沉着过程中起重要作用。为此 ,作者试图阐明氯化锂引起的色素沉着与磷脂酰肌醇的关系。材料与方法 :利用B1 6黑素瘤细胞 ,分析了不同浓度氯化锂对体外培养的黑素瘤细胞增殖、细胞内黑素含量、酪氨酸酶活性和酪氨酸酶表达量以及同时加入肌醇对其作用的影响…     

皮质类固醇对培养Cloudman S91黑素瘤细胞株黑素合成的影响

目的：观察皮质类固醇对体外培养的Cloudman S91黑素瘤细胞黑素合成和酪氨酸酶活性的影响，探讨外用皮质类固醇治疗白癜风的作用机制。方法：体外培养的Cloudman S91黑素瘤细胞分别以系列浓度的氢化可的松、醋酸曲安奈德和倍他米松作用72h，测定细胞酪氨酸酶活性，黑素含量和细胞增殖率。结果：3种药物均能促进酪氨酸酶活性、提高黑素含量，且呈浓度依赖性。作用强度顺序为倍他米松＞醋酸曲安奈德＞氢化可的松。结论：提示皮质类固醇在体外能刺激Cloudman S91黑素瘤细胞黑素合成，且与皮质类固醇的效价强度成正相关。外用皮质类固醇诱导白癜风复色可能与该作用有关。     

内皮素拮抗剂对鼠黑素瘤细胞黑素生成影响的研究

目的 研究天然提取的内皮素拮抗剂对体外培养的B16鼠黑素瘤细胞的生物学作用。方法比较观察了内皮素拮抗剂和甘草黄酮对体外培养的B16鼠黑素瘤细胞酪氨酸酶活性、黑素含量和细胞增殖率的影响,以及内皮素拮抗剂对内皮素（ET-1）引起的B16细胞酪氨酸酶活性变化的作用。结果 在实验浓度下,甘草黄酮具有浓度依赖性黑素合成抑制作用,内皮素拮抗剂对培养的B16黑素瘤细胞黑素生成没有直接的抑制作用,但能特异性抑制内皮素对黑素瘤细胞分化和酪氨酸酶的激活作用,200 μg/mL该拮抗剂即可显著拮抗0.5 μg/mL ET-1对黑素瘤细胞的刺激增殖作用,与甘草黄酮相比,细胞毒性较小。结论 内皮素拮抗剂是一种安全的皮肤美白物质,在UVB照射后内皮素增加引起的皮肤色素沉着中,具有广泛的应用前景。     

积雪草甙对酪氨酸酶活性的抑制作用及对Cloudman S91黑素瘤细胞黑素合成的影响

目的探讨积雪草甙外用脱色素的作用机制.方法体外观察积雪草甙对蘑菇酪氨酸酶活性的作用并进行酶促反应动力学分析.进一步以系列浓度的积雪草甙作用于体外培养的Cloudman S91黑素瘤细胞,测定细胞酪氨酸酶活性、黑素含量和细胞增殖率.结果积雪草甙能剂量依赖性抑制蘑菇酪氨酸酶活性,酶促动力学分析提示积雪草甙为蘑菇酪氨酸酶混合型抑制剂.进一步研究发现,积雪草甙能抑制体外培养的Cloudman S91黑素瘤细胞酪氨酸酶活性和黑素合成,但对细胞增殖无明显影响.与氢醌相比,积雪草甙抑制酪氨酸酶活性低于相同浓度的氢醌.结论积雪草甙可直接作用于黑素细胞,抑制黑素合成,是一种无细胞毒性的皮肤脱色剂.     

复方甘草酸苷注射液对B16鼠黑素瘤细胞黑素生成的影响

目的：研究复方甘草酸苷注射液对B16鼠黑素瘤细胞黑素的影响及其机制。方法：通过CCK8、流式细胞术、NaOH裂解法、多巴氧化法和Western-blotting技术检测复方甘草酸苷对B16鼠黑素瘤细胞生长,黑素合成与转运及酪氨酸酶活性和蛋白含量的影响。结果：(1) 复方甘草酸苷注射液浓度低于30μl/ml,对B16鼠黑素瘤细胞生长无明显影响;浓度大于50μl/ml,细胞生长速率减慢;浓度达到500μl/ml,细胞生长明显受抑制。(2) 浓度在10μl/ml到200μl/ml之间,黑素的合成和酪氨酸酶的活性均增加。黑素的合成在复方甘草酸苷注射液浓度为50μl/ml时增加最明显;且酪氨酸酶活性呈浓度依赖性增加,在浓度为100μl/ml和150μl/ml时达到最高。结论：复方甘草酸苷注射液有促进黑素瘤细胞黑素的合成与转运及增加酪氨酸酶活性的作用。     

中药单体芍药甙促进黑素合成的机制研究

目的:确定芍药甙(paeoniflorin)对促进黑素合成的作用.方法:MTT法测定芍药甙对黑素细胞增殖影响,多巴氧化法和NaOH法测定黑素细胞内酪氨酸酶活性和黑素合成, 定量定时RT-PCR和蛋白印迹法测定酪氨酸酶、酪氨酸酶相关蛋白-1 mRNA表达.结果:100 μg/mL芍药甙对细胞的生长有抑制作用;5～10 μg/mL浓度可促进促黑素细胞的增殖;芍药甙增强酪氨酸酶的活性,增加黑素合成;上调TYR,TRP-1 mRNA表达.结论:芍药甙可促进黑素细胞增殖,通过上调酪氨酸酶的活性促进黑素合成.     

淫羊藿苷等6种中药单体抑制Cloudman S91黑素瘤细胞株黑素合成的研究

观察淫羊藿苷、白藜芦醇苷、红景天苷等6种中药单体对体外培养的CloudmanS91黑素瘤细胞黑素合成和酪氨酸酶活性的影响。方法:选择系列浓度梯度的中药单体作用于体外培养的CloudmanS91黑素瘤细胞,测定细胞酪氨酸酶活性、黑素含量和细胞增殖率。结果:淫羊藿苷、白黎芦醇苷和红景天苷3种药物明显抑制酪氨酸酶活性和黑素的生成(P<0.05),且呈浓度依赖性,作用3d内呈时间依赖性。其中淫羊藿苷的作用与氢醌比较,差异无显著性(P>0.05),而白黎芦醇苷和红景天苷的作用明显弱于氢醌(P<0.01)。淫羊藿苷、白黎芦醇苷和红景天苷均促进细胞的增殖,其中淫羊藿苷对细胞增殖促进作用明显。结论:淫羊藿苷、白黎芦醇苷和红景天苷能抑制CloudmanS91黑素瘤细胞黑素合成和酪氨酸酶活性。     

淫羊藿苷抑制正常黑素细胞黑素合成的研究

目的:观察中药单体淫羊藿苷对体外培养的正常黑素细胞黑素合成和酪氨酸酶活性的影响。方法:选择高、中、低3个浓度的中药单体作用于体外培养的黑素细胞,测定细胞酪氨酸酶活性、黑素含量和细胞增殖率。采用间接免疫荧光染色法对药物作用的黑素细胞和对照的酪氨酸酶(tyrosinase熏TYR)、酪氨酸酶相关蛋白-1(tyrosinaserelatedprotein-1熏TRP-1)、TRP-2进行标记,然后采用激光共聚焦显微镜半定量分析淫羊藿苷作用后细胞内3种成分表达量的变化。结果:淫羊藿苷明显抑制酪氨酸酶活性和黑素的生成(P<0.01),且呈浓度依赖性,但淫羊藿苷抑制黑素生成的作用较氢醌弱(P<0.01);淫羊藿苷以浓度依赖的方式促进细胞的增殖,氢醌则抑制了细胞的增殖;淫羊藿苷对黑素细胞内TYR和TRP-2的表达没有明显影响,但是对TRP-1的表达却明显增加了。结论:淫羊藿苷能够抑制黑素合成和酪氨酸酶活性,这种抑制可能主要通过抑制酪氨酸酶活性起作用。     

CLEC2B基因过表达的Jurkat细胞培养上清液对黑素瘤细胞B16的影响

目的将CLEC2B基因过表达的Jurkat细胞培养上清液作用于黑素瘤细胞,观察其上清液对黑素瘤细胞增殖、酪氨酸酶活性、黑素合成的影响,探讨CLEC2B基因在白癜风发病中的作用。方法培养人淋巴瘤细胞Jurkat细胞和小鼠黑素瘤细胞B16,采用脂质体介导的方法瞬时转染CLEC2B重组质粒入Jurkat细胞,半定量RT-PCR法鉴定CLEC2B基因过表达;将其细胞培养上清液作用于黑素瘤细胞48 h后,MTT法检测黑素瘤细胞的增殖情况,多巴氧化法检测酪氨酸酶活性,氢氧化钠裂解法检测黑素含量。结果 CLEC2B基因过表达的Jurkat细胞培养上清液作用后的黑素瘤细胞增殖比空载体组、正常对照组降低,差异有统计学意义(均P0.05),CLEC2B过表达组黑素含量比空载体组、正常对照组减少,差异有统计学意义(均P0.05),CLEC2B过表达组、空载体组、正常对照组之间的酪氨酸酶活性比较差异无统计学意义(均P0.05),空载体组与正常对照组比较差异均无统计学意义(均P0.05)。结论 CLEC2B基因过表达的Jurkat细胞培养上清液对黑素细胞的增殖和黑素合成有一定的抑制作用,对酪氨酸酶活性影响不明显。提示CLEC2B可能通过调节淋巴细胞功能间接影响黑素细胞增殖和黑素合成,从而参与白癜风发病。     

复方中药白癜冲剂对B16黑素瘤细胞生物学特性影响的实验研究

目的：观察复方中药白癜冲剂对体外培养的B16黑素瘤细胞生物学特性的影响。方法：体外培养B16黑素瘤细胞,测定不同浓度白癜冲剂对B16黑素瘤细胞增殖、对酪氨酸酶活性和黑素含量的影响。结果：低浓度剂量组白癜冲剂对B16黑素瘤细胞较对照组有明显促增殖作用,黑素合成增多,酪氨酸酶活力增加,差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论：复方中药白癜冲剂能促进B16黑素瘤细胞的黑素合成,提高酪氨酸酶活力。     

黑素生成素对黑素瘤mel586细胞白癜风相关基因-1和酪氨酸酶表达的影响

采用MTT法测定黑素生成素对细胞增殖率的影响;多巴氧化法测定酪氨酸酶活性;半定量RT-PCR检测黑素生成素对黑素细胞白癜风相关基因-1（VIT-1）,酪氨酸酶（TYR）和酪氨酸酶相关蛋白-1（TRP1）基因表达的影响。结果：黑素生成素能促进黑素瘤细胞mel586的增殖,并与浓度呈正相关性,对TYR和TRP-1mRNA表达无明显促进作用;黑素生成素在浓度为6μg/mL和12μg/mL时对黑素瘤细胞mel586酪氨酸酶活性有促进作用（P〈0.05）。黑素生成素治疗白癜风有效的机制可能与提高VIT-1的表达量和促进细胞增殖有关。     

白芷对人黑素瘤细胞增殖及黑素生成的影响

探讨白芷对人黑素瘤细胞增殖及黑素合成的影响.采用MTT法测定白芷对人A375黑素瘤细胞活力的影响,NaOH裂解法测定黑素合成,并与8-MOP的结果进行比较.结果显示,白芷浓度在0.1～10mg/mL对人A375黑素瘤细胞增殖无影响.1、2和5mg/mL白芷对于人A375黑素瘤细胞酪氨酸酶活性及黑素生成有剂量相关性激活作用,2mg/mL及5mg/mL白芷与对照组相比有显著性差异(P＜0.01).白芷对于培养的人黑素瘤细胞酪氨酸酶活性及黑素生成有剂量相关性激活作用.     

复方木尼孜其颗粒对小鼠B16黑素瘤细胞酪氨酸酶活性及黑素合成的影响

目的 研究复方木尼孜其颗粒对小鼠B16黑素瘤细胞酪氨酸酶活性及黑素合成的影响.方法 培养小鼠B16黑素瘤细胞,采用MTT法测定不同浓度复方木尼孜其颗粒对细胞增殖的影响,采用L-DOPA氧化法测定其对细胞酪氨酸酶活性的影响,采用NaOH裂解法检测细胞黑素含量.结果 复方木尼孜其颗粒高剂量组能明显抑制小鼠B16黑素瘤细胞黑素的合成,但是对酪氨酸酶活性无影响.结论 复方木尼孜其颗粒能抑制小鼠B16黑素瘤细胞黑素的合成,在治疗色素性皮肤病中有一定前景.     

白消一号方对黑素瘤细胞与角质形成细胞混合培养模型中黑素合成的影响

目的 体外构建黑素瘤细胞与角质形成细胞直接接触的混合培养模型,观察白消一号方对此模型中黑素瘤细胞的影响,探讨其治疗白癜风的药理作用.方法 分别培养角质形成细胞、黑素瘤细胞;体外构建黑素瘤细胞与角质形成细胞直接接触的混合培养模型,大鼠中药灌胃后不同时间取血清加入此模型中,用MTT法、多巴氧化法、及NaOH法.检测含药血清对黑素瘤细胞增殖、酪氧酸酶活性以及黑素合成的影响.结果 含药血清可促进黑素瘤细胞增殖,上调酪氨酸酶活性.增加黑素合成.结论 成功构建了黑素瘤细胞与角质形成细胞直接接触的混合培养模型,白消一号方作用于此模型对黑素瘤细胞增殖、酪氨酸酶活性及黑素的合成均呈促进作用.     

Z-十八碳-9-烯-丙磺酰胺对小鼠B16细胞黑素生成的抑制作用

目的探讨Z-十八碳-9-烯-丙磺酰胺(propane-2-sulfonic acid octadec-9-enyl-amide,N15)对黑素生成的影响及机制。方法以N15为受试物,小鼠B16黑素瘤细胞为研究对象。不同浓度N15(10~140μmol/L)处理B16细胞72h,MTS检测细胞增殖情况;酶标法测定B16细胞内黑素含量和酪氨酸酶活性,免疫印迹法检测酪氨酸酶的蛋白表达。结果 10~100μmol/L浓度的N15对B16细胞的增殖没有影响; 50μmol/L和100μmol/L浓度的N15对B16细胞内黑素生成的抑制率分别为18. 69%和26. 66%,对酪氨酸酶活性的抑制率分别为11. 62%和45. 16%,对酪氨酸酶蛋白表达的抑制率分别为16. 34%和34. 34%,与α-MSH组相比差异均有统计学意义(P 0. 05)。结论 N15能有效抑制小鼠黑素瘤细胞B16黑素的生成,其机制可能与其抑制酪氨酸酶的活性有关。N15是一种高效的黑素合成抑制剂,可作为美白化妆品的添加剂。     

紫铆花素对人黑素瘤细胞A375生物活性及线粒体膜电位的影响

目的观察紫铆花素对人黑素瘤细胞A375细胞增殖、细胞周期、酪氨酸酶活性、黑素合成及线粒体膜电位的影响。方法用不同浓度紫铆花素处理人黑素瘤细胞A375 48h后,采用MTT法测定黑素细胞增殖率;流式细胞仪测定黑素细胞周期和线粒体膜电位变化;L-DOPA法测定黑素细胞酪氨酸酶活性及Na OH裂解法测定黑素含量变化。结果与对照组相比,0.1~5.0μg/m L浓度范围紫铆花素与人黑素瘤细胞A375共孵育48h后,能明显促进人黑素瘤细胞A375增殖,具有不同程度提高酪氨酸酶活性、促进黑素合成及调节细胞周期和线粒体膜电位的作用。结论紫铆花素对体外培养的人黑素瘤细胞A375起促进细胞增殖、提高酪氨酸酶活性、增加黑素合成的作用,其作用可能与紫铆花素对细胞周期和线粒体膜电位的调节有关。     

N-乙酰氨基葡萄糖对酪氨酸酶活性及小鼠B16黑素瘤细胞黑素合成的影响

目的 探讨N-乙酰氨基葡萄糖对体外酪氨酸酶活性、小鼠B16黑素瘤细胞酪氨酸酶和黑素合成的影响。方法 取对数生长期小鼠B16黑素瘤细胞,分别加入不同浓度N-乙酰氨基葡萄糖（1.5、3、6.25、25、50和100 mmol/L）共孵育,MTT法测定培养的小鼠B16黑素瘤细胞的增殖活性,NaOH法测定黑素生成量,体外氧化多巴反应方法测定酪氨酸酶活性;免疫细胞化学测定小鼠B16黑素瘤细胞中酪氨酸酶的表达。结果 与阴性对照（0.8183 ± 0.0326）相比,1.5、3、6.25、25和50 mmol/L N-乙酰氨基葡萄糖显著抑制蘑菇酪氨酸酶活性（分别为0.7380 ± 0.0254、0.7293 ± 0.0382、0.7247 ± 0.0389、0.7233 ± 0.0186、0.7043 ± 0.0166）（P < 0.05或P < 0.01）;25、50和100 mmol/L N-乙酰氨基葡萄糖显著抑制小鼠B16黑素瘤细胞增殖（分别为0.5410 ± 0.0496、0.4480 ± 0.0246、0.1273 ± 0.0137）和黑素生成（0.0070 ± 0.0008、0.0049 ± 0.0012、0.0015 ± 0.0014）,50和100 mmol/L N-乙酰氨基葡萄糖显著抑制B16黑素瘤细胞酪氨酸酶活性（分别为0.1003 ± 0.0404、0.0130 ± 0.0053）及酪氨酸酶蛋白的表达（13.2700 ± 0.9741、8.5667 ± 2.0345,P < 0.05或P < 0.01）。结论 N-乙酰氨基葡萄糖抑制培养的小鼠B16黑素瘤细胞的酪氨酸酶活性和黑素合成。     

补骨脂注射液联合NB-UVB对人黑素瘤A375细胞增殖及黑素合成的影响

目的通过观察补骨脂注射液联合窄谱中波紫外线(NB-UVB)对人黑素瘤A375细胞的增殖、黑素的合成以及酪氨酸酶活性的影响,探讨两者协同治疗白癜风的可能机制。方法选择一定浓度的补骨脂注射液(稀释后浓度为0.5%)联合一定剂量的NB-UVB(22m J/cm2)共同作用于人黑素瘤A375细胞后,通过MTT法观察其对人黑素瘤A375细胞细胞增殖的影响,Na OH裂解法测定黑素的含量,多巴氧化法测定酪氨酸酶活性的变化。结果补骨脂注射液+NB-UVB组中A375细胞培养至48h,72h后检测到的细胞增殖情况与单一补骨脂注射液组、NB-UVB组及空白组相比较,差异有统计学意义(P0.05)。补骨脂注射液+NB-UVB组均显示可上调细胞内酪氨酸酶的活性及黑素的生成量,且与各实验干预组及空白组比较,差异有统计学意义(P0.05)。结论一定浓度的补骨脂注射液(稀释后浓度为0.5%)联合一定剂量的NB-UVB(22m J/cm2)可以协同促进人黑素瘤A375细胞的增殖,上调细胞酪氨酸酶活性,从而达到促进黑素合成的效果。     

胡椒碱等6种中药单体促进黑素瘤Cloudman S91细胞株黑素合成的研究

目的研究胡椒碱、原儿茶醛、白果内脂等6种中药单体对小鼠黑素瘤细胞黑素合成的影响,初步探讨不同的中药单体影响黑素合成的作用机制。方法培养的黑素瘤CloudmanS91细胞分别以系列浓度的6种中药单体作用72h,测定细胞黑素含量、酪氨酸酶活性并与体外蘑菇酪氨酸酶活性直接测定方法(多巴速率氧化法)测定的结果进行比较。结果6种单体均能促进CloudmanS91细胞的黑素量生成。胡椒碱、原儿茶醛、白果内脂在最佳促进浓度均较100μmol/L的8-甲氧补骨脂素作用明显(P<0.05),其中0.5mmol/L胡椒碱对黑素含量促进作用最为明显。在实验浓度(0.01～1.00mmol/L)胡椒碱可促进酪氨酸酶活性,体外可直接增加蘑菇酪氨酸酶的活性;原儿茶醛对酪氨酸酶活性无明显影响,体外可直接促进蘑菇酪氨酸酶的活性;白果内脂对酪氨酸酶活性起促进作用,体外对蘑菇酪氨酸酶的活性无影响。结论中药单体胡椒碱、原儿茶醛、白果内脂可明显促进黑素瘤细胞黑素的合成,原儿茶醛的作用可能不依赖于酪氨酸酶的活化作用。     

马拉色菌在花斑癣色素改变中的作用

目的 观察引起不同临床色素表现的马拉色菌与角质形成细胞（KC）共培养液对B16F10黑素瘤细胞黑素合成的影响，及共培养液中与黑素合成相关的细胞因子产生情况。方法 将1 × 106/mL KC与分离自色素沉着区的马拉色菌（简称C株）、分离自色素减退区的马拉色菌（简称J株）按4个浓度比例（KC ∶ 马拉色菌为1 ∶ 1、1 ∶ 10、1 ∶ 20、1 ∶ 30）分别共培养，用MTT法测定KC增殖率。将C株或J株马拉色菌分别加入KC培养体系共培养，真菌孢子和KC密度均为1 × 106/mL（1 ∶ 1），制备的培养液分5组，KC单独培养液、C株或J株马拉色菌与KC共培养液、C株或J株马拉色菌单独培养后再次培养KC的二次培养液，用上述各组培养液分别培养B16F10细胞，用MTT法测量各组B16F10细胞增殖率，NaOH裂解法测量黑素含量，Western印迹法测定酪氨酸酶和β-肌动蛋白的表达，多巴氧化法测定酪氨酸酶活性。ELISA法测定各组培养液中细胞因子的浓度。结果 KC与马拉色菌在1 ∶ 10比例以下，KC的生长不受马拉色菌的影响。C株马拉色菌与KC共培养液引起B16F10细胞黑素含量、酪氨酸酶活性和酪氨酸酶蛋白表达增加，细胞增殖率无明显变化。J株马拉色菌共培养液的作用与之相反。C株马拉色菌刺激产生的内皮素1显著高于J株马拉色菌（P < 0.01）。结论 马拉色菌通过与KC相互作用，影响B16F10细胞酪氨酸酶的活性和表达，调节黑素合成。内皮素1在花斑癣色素沉着中可能起一定作用。