二甲基甲酰胺致心肌细胞氧化损伤的体外实验研究

目的 探讨二甲基甲酰胺(dimethylformamide,DMF)对小鼠心肌细胞(H9c2)的氧化损伤作用及维生素C(vitamin C,VitC)的保护效应.方法 使用不同剂量梯度DMF作用心肌细胞24 h、48 h、72 h,同时分别用含有DMF(100 mM)和0.025 mM、0.050 mM、0.100 mM、0.250 mM的VitC培养液培养心肌细胞24 h、48 h、72 h,采用试剂盒测定细胞内超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽(glutathione,GSH)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)的含量以观察细胞氧化应激状态和VitC的保护效应.结果 不同浓度的DMF分别作用于心肌细胞24h、48 h和72 h后使SOD和GSH含量降低,MDA含量升高,产生了明显脂质过氧化并呈现一定的剂量-时间效应关系.保护组VitC在低浓度(0.025 mM、0.050 mM、0.100 mM)时对DMF对心肌细胞的氧化损伤具有保护作用,使SOD和GSH含量升高,MDA降低.保护组VitC在高浓度(0.250 mM)时反而加重DMF对心肌细胞的氧化损伤.结论 二甲基甲酰胺(DMF)对小鼠心肌细胞细胞(H9c2)产生了明显的氧化损伤,从而证实DMF所致的氧化应激是其引起细胞毒性的重要机制.小剂量VitC对DMF致心肌细胞的氧化损伤具有明显的保护作用.     

二甲基甲酰胺致心肌细胞凋亡线粒体通路的体外实验研究

目的 探讨二甲基甲酰胺（dimethylformamide,DMF）致H9c2心肌细胞凋亡线粒体通路相关蛋白的影响。方法 采用蛋白免疫印迹法（western blot,WB）检测不同剂量DMF（0 mM、50 mM、100 mM、200 mM）染毒24 h后胞浆内活化的Caspase-3（cleaved caspase-3）、Bax、Bcl-2以及细胞色素C（Cyt-c）水平的改变。结果 不同剂量DMF（0 mM,50 mM,100 mM,200 mM）染毒24 h后胞浆Cleaved caspase-3、Bax和Cyt-c水平升高,Bcl-2水平降低,组间差异均有统计学意义（Cleaved caspase-3：F=23.33,P<0.001;Bax：F=60.31,P<0.001;Bcl-2：F=577.8,P<0.001;Cyt-c：F=104.0,P<0.001）。Cleaved caspase-3和Cyt-c水平在100 mM、200 mM染毒组较对照组升高,差异均有统计学意义（均有P<0.05）。Bax在50 mM、100 mM染毒组较对照组升高,差异均有统计学意义（均有P<0.05）,200 mM染毒组与对照组相比差异无统计学意义（P=1.000）。Bcl-2水平在50 mM、100 mM、200 mM染毒组较对照组均降低,差异均有统计学意义（均有P<0.05）。Bax/Bcl-2比值增加,100 mM,200 mM组较对照组差异均有统计学意义（均有P<0.05）。结论 DMF染毒后可上调H9c2心肌细胞Cleaved caspase-3、Cyt-c以及Bax/Bcl-2水平,下调Bcl-2水平。线粒体通路参与了DMF诱导的H9c2心肌细胞凋亡的过程。     

二甲基甲酰胺对心肌细胞的毒性作用

目的探讨二甲基甲酰胺（dimethylformamide,DMF）对正常心肌细胞（H9C2）的细胞毒性作用。方法采用CCK-8法检测不同浓度梯度（0 mmol/L,50 mmol/L,100 mmol/L,150 mmol/L,200 mmol/L,250 mmol/L,300 mmol/L）DMF作用心肌细胞24 h、48 h、72 h后的细胞毒性,并用Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测不同时间（24 h、48 h、72 h）和浓度（24 h的染毒剂量为0 mmol/L,100 mmol/L,140 mmol/L,180 mmol/L,220 mmol/L,250 mmol/L;48 h的染毒剂量为0 mmol/L,100 mmol/L,140 mmol/L,180 mmol/L,200 mmol/L,220 mmol/L;72 h的染毒剂量为0 mmol/L,100 mmol/L,125 mmol/L,140 mmol/L,180 mmol/L,200 mmol/L）的细胞凋亡率。结果不同浓度DMF作用于心肌细胞24 h,48 h和72 h后产生了明显的细胞毒性。同一...     

二甲基甲酰胺通过活性氧介导线粒体通路诱导H9c2心肌细胞凋亡研究

目的 初步探讨二甲基甲酰胺（dimethylformamide,DMF）是否通过线粒体通路致H9c2心肌细胞凋亡及可能机制。方法 H9c2心肌细胞体外培养,分组给予不同处理：正常对照组,N-乙酰半胱氨酸（N-acetyl-L-cysteine,NAC）（4 mmol/L）组,DMF（200 mmol/L）组,NAC（4 mmol/L）+DMF（200 mmol/L）组,24 h后使用免疫荧光细胞化学法（immune-fluorescence cytochemistry,IFC）检测细胞内细胞色素C（cytochrome C,Cyt-c）定位,蛋白免疫印迹法检测胞浆Cyt-c、Bcl-2、Cleaved caspse-3水平。结果 IFC观察发现,正常对照及NAC组Cyt-c呈点状或斑块状分布于胞浆,DMF作用24 h导致Cyt-c弥散分布于胞浆,而NAC可抑制DMF的这种作用;蛋白免疫印迹结果表明,Cyt-c蛋白水平组间差异具有统计学意义（F=26.14,P<0.001）,与对照组相比,DMF组Cyt-c水平升高,NAC+DMF组较DMF组Cyt-c水平降低,差异均有统计学意义（均有P<0.001）;Bcl-2蛋白水平组间差异具有统计学意义（F=28.92,P<0.001）,与对照组相比,DMF组Bcl-2蛋白水平降低,与DMF组相比,NAC+DMF组Bcl-2蛋白水平升高,差异均有统计学意义（均有P<0.001）;Cleaved caspase-3蛋白水平组间差异具有统计学意义（F=28.98,P<0.001））,与对照组相比,DMF组Cleaved caspase-3水平上升,NAC+DMF组较DMF组Cleaved caspase-3水平降低,差异均具有统计学意义（均有P<0.001）。结论 DMF可以通过线粒体通路诱导H9c2心肌细胞凋亡,氧化应激可能参与该通路的发生。     

二硫化碳致血管内皮细胞损伤及维生素C干预作用的实验研究

目的　观察不同剂量二硫化碳 (CS2 )对血管内皮细胞的损伤作用及维生素C的拮抗作用。方法　分别以不同浓度CS2 对培养的人脐带静脉内皮细胞进行染毒实验 ,同时以不同浓度维生素C预处理进行干预试验。采用MTT法分析细胞增殖活性 ,用二苯胺法进行细胞DNA断裂的定量分析。结果　CS2 可抑制脐静脉内皮细胞增殖活性 ,随着CS2 染毒浓度升高 ,内皮细胞增殖活性逐步下降 ,呈剂量反应关系 ;CS2 可致内皮细胞DNA损伤 ,使DNA双链发生断裂。浓度为 2 0 μmol ml时即可产生明显影响 ,浓度达到 16 0 μmol ml,细胞DNA完整率下降至 4 8.2 6 %。经维生素C预处理后 ,内皮细胞DNA完整率高于未经预处理组 ,差异有显著性 (P <0 .0 1) ,增殖活性也有明显改善。结论　CS2对脐静脉内皮细胞有直接的损伤作用 ,而维生素C可拮抗CS2 致脐静脉内皮细胞损伤作用。     

VitC对二甲基甲酰胺致人肝细胞DNA损伤的保护作用

目的探讨二甲基甲酰胺(DMF)致人肝细胞DNA的损伤情况及不同剂量VitC的干预作用。方法取正常成人肝细胞DMF染毒,DMF剂量为1.56、6.25、25、100 mmol/L、同时设阴性组与H2O2阳性组;100mmol/L DMF染毒后VitC的干预剂量为0.025、0.05、0.10、0.25mmol/L,应用单细胞凝胶电泳技术观察肝细胞DNA的损伤。结果同一处理时间组内各DMF染毒组与阴性对照组间MTL值与MTM值差异均有统计学意义(P0.05)。不同剂量DMF处理肝细胞后,随着染毒剂量增加MTL值亦增加,最大MTL值出现于100mmol/LDMF组。各染毒组MTL值与MTM值与阴性对照组比较,差异有统计学意义(P0.05)。结论高浓度DMF能引起肝细胞DNA损伤,小剂量VitC对DMF致肝细胞DNA损伤具有明显的拮抗作用。     

维生素E对二甲基甲酰胺致小鼠急性肝损伤的拮抗作用

目的 探讨维生素E( Vitamin E,VE)对二甲基甲酰胺(N,N-dimethylformamide,DMF)致急性肝损伤的拮抗作用.方法 将50只健康SPF级雄性昆明小鼠随机分为5组,分别为正常对照组、VE( 10 mg/kg)对照组、DMF中毒模型组及低(5 mg/kg)、高(10 mg/kg)剂量VE保护组,每组10只.VE对照组和低、高剂量VE保护组采用灌胃方式染毒VE溶液,正常对照组和DMF中毒模型组分别染毒等体积玉米油,每天1次,连续5d;最后1次染毒VE后0.5 h,DMF中毒模型组及各剂量VE保护组一次性灌胃染毒2g/kg的DMF溶液,同时,正常对照组和VE对照组给等体积蒸馏水.检测小鼠血清丙氨酸氨基转氨酶(ALT)、天冬氨酸氨基转氨酶(AST)和黄嘌呤氧化酶(XOD)活力,肝脏匀浆中谷胱甘肽(GSH)和脂质过氧化产物丙二醛(MDA)的含量.结果 与DMF中毒模型组比较,VE保护组小鼠血清ALT、AST 、XOD活力显著降低(P＜0.05),肝脏GSH含量明显升高(P＜0.05),MDA含量显著下降(P＜0.05).结论 VE对DMF引起的小鼠肝损伤具有拮抗作用.     

二甲基甲酰胺致人肝细胞DNA的损伤效应

目的 探讨不同染毒剂量二甲基甲酰胺(DMF)在不同染毒时间下对人正常离体肝细胞DNA损伤的影响.方法 肝细胞染毒分别以PBS阴性对照组、1.56、6.25、25.00、100.00 mmol/L的DMF和100μmol/L的H2O2,染毒时间为0.5、3.0、6.0、12.0和24.0 h,用γH2AX免疫荧光法观察肝细胞DNA的损伤情况.结果 不同剂量的DMF和H2O2诱导形成γH2AX焦点的细胞数量多于PBS阴性组,差异有统计学意义(P＜0.01),并且随着DMF染毒剂量的增加,形成γH2AX焦点细胞数有增多趋势;在不同染毒时间处理后,γH2AX焦点细胞数的形成除3.0 h组和0.5 h组比较,差异无统计学意义(P＞0.05),余处理时间组与0.5 h比较,差异均有统计学意义(P＜0.01),并且形成γH2AX焦点细胞数有减少趋势.结论 不同剂量DMF可引起DNA的损伤,并且损伤程度与剂量呈正相关,与染毒时间呈负相关,γH2AX可作为检测细胞DNA损伤程度的良好指标.     

维生素C对大鼠肌肉拉伤所致过氧化损伤的保护作用

目的建立骨骼肌拉伤动物模型,观察维生素C对肌肉拉伤导致的过氧化损伤的保护作用.方法将大鼠随机分为维生素C组、生理盐水(NS)组及对照组.利用大鼠建立骨骼肌拉伤动物模型,将维生素C组及NS组造成大鼠右侧腓肠肌拉伤.维生素C组经灌胃给予维生素C(2 g·kg-1·d-1),NS组给予同体积生理盐水,观察损伤后3、7、14 d大鼠血浆中肌肉损伤标志物肌酸激酶(CK)活力和丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力以及总抗氧化能力(T-AOC)的变化.结果维生素C组血浆CK活力在伤后3、7、14 d[分别为(325.36±28.29)、(147.06±27.40)、(80.47±13.50)U/L]均低于NS组[分别为(403.67±25.17)、(193.03±26.31)、(92.98±8.93)U/L],差异均有显著性(P＜0.05).维生素C组血浆MDA含量在伤后3、7d[分别为(8.03±2.22)、(5.33±1.54)μmol/L]低于NS组[分别为(13.81±3.17)、(7.55±2.20)μmol/L].维生素C组SOD活力较NS组有升高趋势,且在第7天明显高于NS组[维生素C组为(104.33±11.56)NU/ml,NS组为(86.85±14.25)NU/ml],差异有显著性(P＜0.05);维生素C组GSH-Px活力、T-AOC在伤后3、7、14 d均高于NS组,差异亦有显著性(P＜0.05).结论本研究所用剂量的维生素C减低了腓肠肌拉伤所引起的氧化性损伤程度,并使两种抗氧化酶(SOD、GSH-Px)活力明显升高,且血浆总抗氧化能力明显增强.     

二甲基甲酰胺作业工人健康监护及维生素C干预研究

目的探讨二甲基甲酰胺(DMF)致作业工人肝功能损伤的影响情况、职业健康监护方案;研究维生素C对DMF作业工人肝功能损伤的干预效果。方法选择男性DMF作业工人240名,分为高浓度组A、高浓度组B、低浓度组和安慰剂组,非DMF作业男性工人60名,为空白对照组;处理对象服用一定剂量的维生素C或淀粉,连续用药3个月,每隔1个月,测定1次血清若干生化指标和班末尿中甲基甲酰胺(NMF)含量,测3次。结果服药3个月后,各组消化道症状出现率:空白对照组为6.7%,低浓度组为8.3%,安慰剂组为20.0%,高浓度组A为11.7%,高浓度组B为10.0%;低浓度组、高浓度组B低于服药前(P<0.05),其余差异无统计学意义(P>0.05)。各组班后尿中NMF含量分别为:空白对照组0 mg/L,低浓度组5.4 mg/L,安慰剂组15.5 mg/L,高浓度组A 16.3 mg/L,高浓度组B 8.8 mg/L;低浓度组、高浓度组A、B低于服药前,差异有统计学意义(P<0.01);各组肝功能异常率:空白对照组6.7%,低浓度组8.3%,安慰剂组28.3%,高浓度组A16.7%,高浓度组B 8.3%;低浓度组、高浓度组A、B低于服药前,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 DMF致作业工人急性肝损伤与尿中NMF含量呈线性相关,慢性肝损伤可能与A/G有关;班末尿中NMF含量可以用作DMF作业工人生物接触限值;适当补充维生素C可以有效预防DMF引起的肝功能异常。     

幽门螺杆菌和维生素C与胃黏膜病变关系的研究

目的 研究Hp感染和胃液中维生素C浓度与胃黏膜病变的关系,探讨Hp致病、致癌机制.方法 用高铁还原法测定胃液中维生素C浓度,用快速尿素酶试验、病理Giemsa染色和细菌培养检测Hp.对部分Hp阳性的胃部良性病变患者进行Hp根除治疗,并比较治疗前后胃液中维生素C浓度的变化.结果 Hp阳性各胃部病变组患者胃液中维生素C浓度分别为:慢性浅表性胃炎组(18.3±4.5)mg/L、萎缩性胃炎伴肠上皮化生组(9.1±3.3)mg/L、异型增生组(8.2±2.7)mg/L、胃癌组(5.2±1.6)mg/L,与对照组[(35.2±7.2)mg/L]比较差异均有统计学意义(P＜0.05);经Hp根除治疗后,Hp根除患者胃液中维生素C浓度恢复正常,而Hp未根除患者其胃液中维生素C浓度治疗前后无明显变化.结论 Hp感染可导致胃液中维生素C浓度降低,这可能是Hp致病、致癌机制之一;根除Hp可以恢复胃液中维生素C浓度,这有利于预防胃癌的发生.     

体外诱导成人脂肪干细胞向心肌细胞分化的研究

目的 诱导成人脂肪干细胞（ADMSCs）分化为心肌细胞,为心肌再生提供良好的干细胞来源.方法 培养人脂肪来源的间充质干细胞,采用10 μmol/L的5-氮杂胞苷（5-Aza）诱导ADM-SCs 24 h,分别在第7、14、21天用免疫细胞荧光染色鉴定心肌细胞α-横纹肌肌动蛋白、MHC表达,PT-PCR法检测心肌相关基因心房钠尿肽（ANP）的表达.结果 10μmol/L 5-Aza诱导后7 d进行免疫细胞荧光染色,未见有α-横纹肌和MHC表达.14 d少量细胞α-横纹肌和MHC阳性表达,21 d表达α-横纹肌和MHC的细胞数量增多,并且RT-PCR结果显示ANP呈阳性表达.结论 经过5-Aza的诱导可以分化为心肌细胞,为心肌再生提供了更多的选择.     

维生素C在低密度脂蛋白氧化修饰中作用的体外实验

目的：研究维生素C（VC）在预防低密度脂蛋白（LDL）氧化修饰中的作用。方法：在Cu^2 介导的无细胞体系中分别加入VC10,50,100,200μmol/L,巨噬细胞体中分别加入VC50,100,200μmol/L,以维生素（200μmol/L）为阳性对照,不添加维生素C组（VC0）为阴性对照,测定荧光物质（lipofusin),硫代巴比妥酸反应物质（TBARS）,LDL电泳迁移率（Rf),氧化型低密度脂蛋白（Ox-LDL),LDL氧化过程中的停滞时间等LDL的氧化修饰情况。结果：Cu^2 介导的无细胞体系中,高剂量VC（100,200μmol/L）在3,6,9h均能发挥其抗氧化作用,抑制TBARS,Ox-LDL生成,而VC低剂量（10,50μmol/L）则无此作用,相反在3h表现出促Ox-LDL生成作用,在巨噬细胞体系中,高剂量组（100,200μmol/L)能显著降低荧光物质,TBARS和LDL电泳迁移率（Rf),延长LDL氧化过程中的停滞时间,并存在剂量反应关系。结论：VC在LDL氧化修饰中具有双重作用,低剂量时能促进LDL氧化,高剂量时表现出抗氧化作用。     

隧道作业人员脂质过氧化水平及口服维生素C和维生素E的防护效果

目的探讨隧道作业人员脂质过氧化水平,以及口服维生素C、维生素E降低脂质过氧化危害的效果。方法检测某在建铁路50名隧道作业人员(实验组)和50名桥梁作业人员(对照组)体内血浆维生素C、维生素E、过氧化脂质(PLPO)含量及红细胞过氧化脂质(ELPO)含量、红细胞超氧化物歧化酶(ESOD)活力、红细胞过氧化氢酶(ECAT)活力、红细胞谷胱甘肽过氧化物酶(EGSHPx)活力。结果实验组血浆维生素C、维生素E、ESOD、ECAT、EGSHPx的含量或活力分别为(40.320±4.699)、(11.174±1.558)μgml和(22996.77±2933.08)UgHb、(13.005±1.751)UmgHb、(65.193±8.531)UgHb,较对照组[分别为(43.596±5.080)、(13.165±2.901)μgml和(24321.05±2178.12)UgHb、(14.722±2.760)UmgHb、(69.000±8.452)UgHb]明显降低,差异有统计学意义(P<0.05),实验组PLPO、ELPO含量分别为(5.514±0.579)、(11.059±2.940)nmolml,较对照组[分别为(5.014±0.957)、(9.232±2.695)nmolml]明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。隧道作业人员服用维生素C、维生素E后,其体内ESOD、ECAT、EGSHPx活力分别较服用前明显升高,PLPO、ELPO含量分别较服用前明显降低,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论隧道作业人员体内氧化和抗氧化平衡失调,过氧化和脂质过氧化加剧;补充一定剂量的维生素C、维生素E能有效降低隧道作业人员体内过氧化和脂质过氧化危害。     

血小板生成素抑制阿霉素大鼠心肌细胞氧化损伤的实验研究

目的研究血小板生成素（TPO）对大鼠阿霉素（ADM）心肌细胞损伤的拮抗作用并探讨其机制。方法32只Wistar大鼠被随机分成4组,分别为对照组、ADM组、ADM＋TPOL组、ADM＋TPOH组。对照组给予生理盐水,其余各组给予ADM20mg／kg腹腔内注射,TPO干预组则加用不同剂量的TPO（10μg／kg或30μg/kg,隔天1次,共3次）。采用ELISA法测大鼠血清CK—MB及cTNI;观察电子显微镜下心肌细胞超微结构的变化;利用免疫组织化学染色观察心肌细胞组织学改变及DNA氧化损伤产物8-羟基脱氧乌苷（8-OHdG）表达情况,应用IPP6．0软件,计算累积光密度（IOD）及8-OHdG index。结果加用TPO干预后CK—MB、cTN1的活力较ADM组明显下降（P〈0．01）;电子显微镜下ADM组心肌细胞超微结构损害较TPO干预组严重;TPO干预组心肌组织病理损伤减轻,IOD、8-OHdG index值较其他各组明显降低（P〈0．01）上述指标在ADM＋TPOL组及ADM＋TPOH组间差异无统计学意义（P〉0．05）。结论TPO通过拮抗阿霉素对心肌的氧化损伤来发挥心脏保护作用。