阻断自分泌性胃泌素对胃癌SGC-7901细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨胃癌组织中是否存在胃泌素／胆囊收缩素（CCK）-B受体自分泌环及其在胃癌的发生发展中的作用。方法 采用人胃癌细胞系SGC-7901在含10％新生小牛血清RPMI-1640培养基中培养于37％、5％CO：的培养箱中。SGC-7901细胞中胃泌素／CCK-B受体自分泌环的检测分别用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）、免疫细胞化学及放射免疫分析法。抗胃泌素单克隆抗体阻断自分泌环对细胞生长与凋亡的影响采用SGC-7901细胞与不同浓度的抗胃泌素单克隆抗体共同孵育72h后,搜集细胞,分别用四甲基偶氮唑盐比色法及流式细胞术检测细胞生长率、细胞周期及凋亡细胞,以不加抗体孵育作为阴性对照。结果 SGC-7901细胞复合表达CCK-B受体和胃泌素基因,其序列已被测序证实。胃泌素蛋白主要在SGC-7901细胞的胞质中表达,且培养液中的胃泌素浓度随培养时间的延长和细胞数的增加而增加。用抗胃泌素单克隆抗体阻断此自分泌环后,细胞的生长率从正常对照的100％降至31．4％（抗体浓度为2μg／ml）,而S期细胞数从正常对照的27．8％降至9．5％（抗体浓度为1．2μg／ml）,且细胞凋亡率分别从正常对照的0．9％（亚G1峰法）和1．1％（膜联蛋白-V／碘化丙啶双染法）升至6．5％（亚G1峰法）和7．5％（膜联蛋白-V／碘化丙啶双染法）。结论 胃癌细胞系SGC-7901中存在胃泌素／CCK-B受体自分泌环,阻断此自分泌环后能抑制细胞增殖,促进细胞凋亡。     

阻断胃泌素受体对胃癌细胞增殖和凋亡及其信号通路的影响

目的 探讨阻断胃泌素受体对胃癌细胞增殖、凋亡及其相关通路中关键蛋白表达的影响.方法 试验组使用终浓度为5mmol/L的丙谷胺(胃泌素受体阻断剂)处理胃癌细胞SGC-7901和AGS6d,以不加丙谷胺培养的胃癌细胞SGC-7901和AGS为对照组.四甲基偶氮唑蓝比色(MTT)法检测各组细胞的生长并绘制细胞生长曲线;流式细胞术检测各组细胞的细胞周期,Annexin V-FITC/PI 双染法检测各组细胞的凋亡;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)方法检测典型Wnt/β-catenin通路、核因子κB、磷脂酰肌醇3激酶-丝氨酸-哺乳动物雷帕霉素靶蛋白中关键蛋白β-连环蛋白(β-catenin)、核转录因子RelA、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白、糖原合酶激酶3β mRNAs的表达;免疫蛋白印迹检测β-catenin蛋白质的表达.结果 用丙谷胺处理后,试验组细胞的生长速度低于对照组细胞,细胞周期中S期细胞百分数也低于对照组细胞,而G0/G1期细胞百分数高于对照组细胞(P<0.05);试验组的细胞凋亡数高于对照组(P<0.05); RT-qPCR结果显示:丙谷胺处理后,胃癌细胞中β-catenin的 mRNA表达量降低(P<0.05).Western blot结果显示丙谷胺处理后,β-catenin蛋白质的表达量降低(P<0.05).结论 阻断胃泌素受体能下调胃癌细胞中β-catenin的表达,抑制细胞增殖,同时促进细胞凋亡.     

利用RNA干扰技术抑制环氧合酶-2表达对人胃癌细胞系SGC-7901增殖和凋亡影响的实验研究

目的研究环氧合酶(COX)-2表达与肿瘤细胞增殖和凋亡的关系,探讨利用RNA干扰技术作为肿瘤基因治疗的方法。方法构建靶向COX-2的短发夹状双链RNA(shRNA)的真核表达质粒WBH1转染人胃癌细胞系SGC-7901,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western印迹分别从mRNA和蛋白质水平检测抑制效果。四甲基偶氮唑蓝(MTT)和流式细胞仪检测COX-2表达被抑制后细胞的增殖和凋亡情况。15只裸鼠随机分为3组,每组5只,皮下接种胃癌细胞。抑制组接种转染抑制质粒的胃癌细胞;正常对照组接种未转染的胃癌细胞;阴性对照组接种转染阴性对照质粒的胃癌细胞。4周后观察比较各组裸鼠皮下形成瘤体的大体和病理情况并计算抑瘤率。结果WBH1高效特异地抑制了人COX-2的表达,抑制率达70.42%。COX-2表达被抑制后,细胞增殖受到明显抑制(P=0.002),细胞凋亡率明显增高,与未转染和转染阴性对照质粒的胃癌细胞的凋亡率相比有统计学意义(52.28%±17.91%、0.52%±0.27%、0.54%±0.16%,P=0.009,实验重复5次)。正常对照组和阴性对照组所有裸鼠均有瘤体形成,平均瘤重分别为(0.490g±0.017g,5只)和(0.490g±0.013g,5只)。抑制组仅2只有瘤体形成平均瘤重0.050g±0.003g,与正常对照组相比差异有统计学意义(P<0.01),抑瘤率为89.8%。结论COX-2与肿瘤细胞的增殖和凋亡密切相关,抑制细胞中COX-2的表达可以抑制肿瘤细胞增殖,促进肿瘤细胞凋亡。通过构建靶向COX-2的shRNA真核表达载体导入细胞可以高效特异地抑制人胃癌细胞中COX-2的表达。     

环氧化酶-2、Fas、FasL表达与胃癌细胞凋亡的关系

目的　研究环氧化酶 - 2 (Cox- 2 )、Fas与 Fas L在胃癌中的表达及与细胞凋亡之间的关系。　方法　采用 SP免疫组织化学法检测胃癌及癌旁组织各 6 0例标本 Cox- 2、Fas与 Fas L的表达 ,用脱氧核糖核酸末端转移酶介导的 d UTP缺口末端标记法 (TUNEL )检测胃癌及癌旁组织的凋亡率。　结果　胃癌组织的 Cox- 2及 Fas L的表达明显高于癌旁组织 (P<0 .0 5 ) ,而 Fas的表达低于癌旁组织 (P<0 .0 5 )。胃癌组织的凋亡率明显低于癌旁组织 (P<0 .0 5 )。　结论　 Cox- 2、Fas及 Fas L的异常表达与胃癌细胞的凋亡有关     

胃泌素受体拮抗剂对胃癌细胞株NKN45裸鼠移植瘤生长的抑？…

探索应用胃泌素受体拮抗剂调控胃癌胞自分泌生长的作用及其机制。方法建立胃癌细胞株ＭＫＮ４５移植瘤的动物模型，观察胃泌素受体拮抗剂丙谷胺对移植瘤的面积，重量，胃癌细胞ＤＮＡ及血清促胃液素含量的影响。结果第１６天丙谷胺组移植瘤面积（６１．４１±１８．５７）ｍｍ＾２     

pshRNA-DNMT1介导的胃癌AGS细胞凋亡的体内外研究

目的构建沉默DNMT1基因的重组体pshRNA-DNMT1,研究其体内外对胃癌AGS细胞增殖凋亡的影响.方法设计短发夹RNA（shRNA）的寡核苷酸片断,克隆到载体pTZU6＋1中,构建重组体pshRNA-DNMT1,转染胃癌细胞株AGS,用Western 印迹检测DNMT1蛋白质水平变化,用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法评估mRNA水平,四甲基偶氮唑盐比色法（MTT法）动态监测活细胞数,电镜和原位末端标记技术（TUNEL）观察其体外的促凋亡作用.构建裸鼠胃癌模型,经pshRNA-DNMT1处理后观察瘤体大小,绘制生长曲线;用苏木素伊红（HE）染色法、电镜和TUNEL检测细胞凋亡,用增殖细胞核抗原（PCNA）法评价细胞的增殖能力.结果成功构建重组质粒pshRNA-DNMT1后,进行序列分析得到确证.pshRNA-DNMT1转染AGS细胞后24 h出现DNMT1蛋白质表达量减少,抑制率为28.24%,48 h为68.54%,72 h为81.47%,重组质粒pshRNA-DNMT1对胃癌AGS细胞中DNMT1基因的转录有着明显抑制作用,转染后24 h抑制率为21.63%,48 h为52.97%,72 h为72.06%.转染后24、48和72 h细胞数存活率为PBS组的79.49%、51.63%和39.16%.pshRNA-DNMT1能抑制肿瘤生长,呈一定的时间和剂量依赖性.结论重组质粒pshRNA-DNMT1能特异有效地抑制胃癌细胞株AGS内DNMT1基因的表达.在胃癌细胞株AGS的体内外实验中均能抑制细胞增殖,促进细胞凋亡.     

酒石酸锑钾对人胃癌细胞体外增殖和凋亡的影响

目的：通过观察酒石酸锑钾(PAT)在体外对人胃癌SGC-7901细胞增殖和凋亡的影响,探讨重金属锑剂对实体瘤的治疗作用,为PAT用于临床治疗胃癌提供实验依据及理论基础．方法：采用MTT法检测不同浓度PAT对人胃癌SGC-7901细胞的生长增殖的影响;应用流式细胞术和Hoechst33258染色后荧光显微镜检测细胞凋亡。结果：5,10,20,40μmol/L PAT能明显抑制胃癌细胞增殖,抑制作用呈时间和剂量依赖性．20,40μmol/L PAT作用72h细胞的生长抑制率分别是54．1％和66．6％;Hoechst 33258染色显示PAT作用后,细胞核出现明显的凋亡形态学改变;流式细胞仪检测到凋亡峰,凋亡率以40μmol/L作用48h最大,达35．2％．同时G2／M期细胞明显增多,以对照组的5．4％,增至24．6％。结论：PAT能抑制SGC-7901细胞增殖并诱导细胞凋亡。     

胃癌中血小板衍生生长因子受体和环氧合酶-2的表达及其与生物学行为的关系

目的探讨血小板衍生生长因子受体(PDGFR)与环氧合酶-2(COX-2)在胃癌中的表达及其在胃癌发生、发展中的作用。方法应用免疫组化法检测80例胃癌(胃癌组),40例慢性浅表性胃炎(对照组)PDG-FR、COX-2的表达情况,分析它们与胃癌临床病理指标的关系。结果胃癌组及对照组中PDGFR表达率分别为48.8%和2.5%,COX-2的表达率分别为53.8%、0%,差异有统计学意义(P0.01)。PDGFR、COX-2的表达与肿瘤大小、肿瘤分化程度无关,两者与肿瘤的浸润、转移有关。PDGFR与COX-2的表达呈正相关(r=0.756,P=0.0000),两者阳性表达程度与淋巴结及远处转移呈正相关。结论PDGFR、COX-2在胃癌的发生发展中可能具有相互协同作用,促进胃癌的浸润及转移。     

西咪替丁对人胃癌细胞SGC-7901生物学行为的影响

目的观察西咪替丁对人胃癌SGC-7901细胞的生长、凋亡、黏附及侵袭行为的影响。方法用四甲基偶氮唑盐（MTr）法检测不同浓度西咪替丁对胃癌SGC-7901细胞生长的影响;流式细胞术检测细胞周期和凋亡;用吖啶橙（AO）染色后荧光显微镜观察药物作用后细胞的形态变化;透射电镜观察用药后细胞超微结构的改变;以matrigel为对象,检测西咪替丁对胃癌细胞与细胞外基质黏附作用的影响;利用millicell小室检测西咪替丁对胃癌细胞侵袭人工基底膜能力的影响。结果在0．5～5mmol／L浓度内,西咪替丁对SGC-7901的生长具有显著的抑制作用,并呈时间和剂量依懒性;0．5～10mmol／L西咪替丁作用后,可观察到典型细胞凋亡形态学改变;流式细胞仪检测可见凋亡峰,G0／G1期细胞明显增多;0．0625～0．25mmol／L西咪替丁可抑制胃癌细胞和细胞外基质的黏附及对重组基底膜的侵袭。结论西咪替丁可改变细胞周期分布,诱导SGC-7901细胞凋亡,从而抑制细胞增殖。在无毒剂量下,可抑制SGC-7901细胞对细胞外基质的黏附与侵袭。     

环氧合酶-2抑制剂调控Stat5信号转导通路抑制结肠癌细胞增殖的分子机制

目的观察选择性环氧合酶-2（COX-2）抑制剂NS-398对结肠癌细胞系SW480中Stats与PPAR8信号转导通路的影响,以期初步阐明选择性COX-2抑制剂抗结直肠癌非COX-2依赖性的作用机制。方法应用RT—PCR检测结肠癌细胞系SW480中COX-2 mRNA表达水平,用选择性COX-2抑制剂NS-398处理结肠癌细胞系SW480,Western印迹检测Stats与PPAR8信号转导通路成员表达,四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测细胞增殖状态,流式细胞技术检测细胞周期与凋亡情况。结果结肠癌细胞系SW480中未检测到COX-2 mRNA表达,NS-398（75μmol／L）作用于SW480细胞72h后,G1期细胞比率由31．2％上升至40．6％,S期细胞比率由52．8％下降至41．2％,细胞增殖受抑制。Stats、PPAR8、细胞周期蛋白D1与Bcl—x1表达水平随NS-398作用时间延长而下降。结论选择性COX-2抑制剂NS-398可能通过非COX-2依赖途径影响结肠癌细胞的增殖。     

胃黏膜良恶性病变中增殖和凋亡的关系研究

目的 :探讨细胞凋亡和增殖在胃癌发生发展过程中的作用。方法 :对 115例胃癌及癌前病变患者和正常人采用原位末端标记法 (TUNEL)及免疫组化技术检测胃黏膜上皮细胞凋亡和增殖。结果 :正常人、浅表性胃炎、萎缩性胃炎伴肠上皮化生、不典型增生、胃癌患者的细胞凋亡指数分别为 (4 .6 2± 1.87) %、(10 .2 1± 2 .4 9) %、(2 4 .6 3± 35 .19) %、(19.32± 4 .0 7) %、(19.86± 4 .6 1) %。PCNA指数分别为 (3.9l± 1.0 4 ) %、(13.5 2± 4 .71) %、(2 0 ,2 2±4 .83) %、(39.81± 6 .35 ) %、(5 4 .77± 10 .8) %。胃黏膜癌变过程中 ,起初三个阶段细胞凋亡和PCNA同时增加 ,而至萎缩性胃炎伴肠化生 ,细胞凋亡指数显著减少 ,PCNA指数显著增加。结论 :在胃癌演变过程中细胞凋亡起重要作用 ,PCNA是反映胃癌细胞增殖活性的一项重要指标     

不同温郁金提取物抑制胃癌细胞SGC-7901增殖和诱导凋亡的实验研究

目的研究不同温郁金提取物对人胃癌细胞SGC-7901生长的抑制作用,及其抑瘤作用与凋亡之间的关系.方法制备温郁金水提物、石油醚提取物(醚提物)和乙醇提取物(醇提物),采用MTT法,测定3种提取物作用下的细胞增殖率.应用HE染色、电镜及流式细胞仪分析技术,观察温郁金作用下肿瘤细胞凋亡的形态学改变及凋亡率.结果温郁金水提物、醚提物和醇提物对胃癌细胞的生长有抑制作用,体外最大抑制率分别达到34.4%、49.4%和73.1%.细胞形态学检查见典型的凋亡改变.流式细胞仪测得典型的凋亡峰.结论温郁金水提物、醚提物和醇提物对人胃癌SGC-7901细胞生长有抑制作用,且醚提物和醇提物的抑瘤作用可能与诱导细胞凋亡有关.     

shRNA-FHIT对胃癌细胞株BGC-823增殖和凋亡的影响

目的  构建靶向抑制脆性组氨酸三联体（FHIT）基因的短发夹双链RNA（shRNA）真核表达质粒,观察FHIT抑制后对胃癌细胞株BGC-823增殖和凋亡的影响。方法  构建FHIT基因特异性的小RNA干扰质粒PGPU6/GFP/Neo-shRNA1、PGPU6/GFP/Neo-shRNA2,利用脂质体LipofactamineTM2000转染胃癌细胞BGC-823,实验分为未转染组、阴性对照组（转染PGPU6/GFP/Neo-shNC组）及PGPU6/GFP/Neo-shRNA1转染组和PGPU6/GFP/Neo-shRNA2转染组,G418筛选得到稳定表达株,Real-time PCR检测在mRNA水平干扰质粒对FHIT的抑制效应,MTT法、流式细胞术观察转染前后细胞生长特性的变化。结果  与阴性对照组相比,转染shRNA-FHIT重组质粒的BGC-823细胞FHITmRNA表达明显下降(P＜0.05)。与未转染组和阴性对照组相比,转染干扰质粒组细胞增殖活性增强,凋亡率减低、生长周期出现S期和G2/M期的比例上调（均P＜0.05）。结论  成功将重组shRNA-FHIT表达载体转染BGC-823细胞,并筛选出稳定低表达FHIT的细胞。shRNA-FHIT可以促进胃癌细胞增殖、降低凋亡率,并削弱G0/G1期阻滞,为进一步研究FHIT基因在肿瘤中的作用机制奠定了实验基础     

丙谷胺和NS-398协同诱导胃癌细胞凋亡的研究

目的:探讨胃泌素受体拮抗剂丙谷胺和特异性环氧化酶(COX)-2抑制剂NS-398对人胃腺癌细胞株MKN-45细胞凋亡的调控作用及其机制。方法:MKN-45细胞常规培养于含10%胎牛血清的RPMI1640培养液中,待细胞长至亚单层后加丙谷胺(5mmol/L)和(或)NS-398(0.01mmol/L),连续培养48h。采用流式细胞仪检测细胞凋亡率,RT-PCR法测定凋亡抑制基因bcl-2mRNA表达。结果:丙谷胺组、NS-398组和联合用药组的细胞凋亡率分别为(24.72±3.19)%、(26.69±3.35)%和(36.11±4.57)%,显著高于对照组(1.57±0.55)%(P<0.01),联合用药组的细胞凋亡率明显高于丙谷胺或NS-398单一用药组[(36.11±4.57)%vs(24.72±3.19)%和(26.69±3.35)%,P<0.05]。丙谷胺和NS-398显著下调bcl-2mRNA在MKN-45细胞的表达(P<0.05)。结论:丙谷胺、NS-398通过下调胃癌细胞bcl-2基因表达而诱导细胞凋亡,两者联合使用具有协同作用。     

胃泌素及丙谷胺对胃癌细胞株MKN45增殖及EGF表达的影响

目的:观察五肽胃泌素(PG)及其受体拮抗剂丙谷胺(PGL)对人胃癌细胞株MKN45增殖及表皮生长因子(EGF)表达的影响。方法:MTT法检测人胃癌细胞株MKN45增殖;放射免疫法(RIA)测定表皮生长因子(EGF)的表达。结果:PG(10-6mol/L)明显促进人胃癌细胞株MKN45增殖,24、48h的促细胞增殖率分别为11.24%、17.63%,丙谷胺(2.0～10.0mmol/L)能阻断这一促增殖作用,并可剂量依赖性地抑制胃癌细胞的生长,且随作用时间延长而增强。同时,在胃癌细胞株MKN45培养液中可检测到EGF,且随培养时间延长EGF含量增加;PG(10-6mol/L)可显著增加MKN45培养液中EGF的含量,丙谷胺(6.0mmol/L)不仅明显阻断PG诱导的EGF增加,并且能够减少胃癌细胞MKN45培养液EGF的含量。结论:五肽胃泌素能促进胃癌细胞株MKN45增殖及EGF表达,而其受体拮抗剂丙谷胺不仅能阻断这一的促进作用,并可抑制胃癌细胞株MKN45增殖及EGF的表达。提示PG的促胃癌细胞增殖作用可能与促进EGF表达有关。     

木黄酮靶向抑制MKN-45胃癌细胞Notch1蛋白表达及对增殖和凋亡的影响

目的:探讨木黄酮靶向抑制Notch1蛋白表达对人胃癌细胞MKN-45增殖和侵袭作用的影响及可能机制。方法:通过不同浓度木黄酮干预胃癌细胞MKN-45,以未干预细胞为正常对照组,Western blot法检测木黄酮抑制Notch1蛋白表达的效果,MTT法检测各组MKN-45细胞的增殖能力,荧光双标流式细胞术检测各组MKN-45细胞的凋亡状况,RT-PCR检测Bcl-2和BaxmRNA的表达水平。结果:木黄酮干预MKN-45胃癌细胞后能明显抑制Notch1蛋白表达,同时抑制MKN-45细胞增殖,促进MKN-45细胞凋亡。木黄酮干预明显上调细胞凋亡相关基因Bcl-2和Bax mRNA水平。结论:木黄酮干预可靶向抑制胃癌细胞MKN-45Notch1蛋白表达,抑制胃癌细胞MKN-45增殖并促进凋亡,可能与其上调细胞凋亡相关基因Bcl-2和Bax mRNA有关。     

雷公藤内酯醇抑制胰腺癌细胞增殖和诱导凋亡的研究

目的：探讨雷公藤内酯醇（TL）对胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响及其机制。方法：胰腺癌细胞SW1990与TL共同孵育,采用MTT法观察TL对胰腺癌细胞增殖的抑制作用,以流式细胞仪AnnexinⅤ/碘化丙啶（PI）双染法检测TL对SW1990细胞的凋亡的诱导作用和对细胞周期的干预作用。结果：TL抑制SW1990细胞增殖和促进细胞凋亡,呈现为浓度和时间依赖性,TL阻滞胰腺癌细胞周期于G0/G1期。结论：TL能抑制胰腺癌细胞增殖、诱导细胞凋亡及干预胰腺癌细胞周期,TL具有潜在的肿瘤治疗作用。