紫花牡荆素体外抑制人宫颈癌HeLa细胞增殖的研究

背景与目的:紫花牡荆素(Casticin)是一种从蔓荆子中提取的具有广泛药理活性的多甲基黄酮化合物.有研究表明Casticin能诱导多种肿瘤细胞凋亡,但其对人宫颈癌细胞的作用尚缺乏文献资料.本研究旨在探讨Casticin抑制体外培养人宫颈癌HeLa细胞增殖作用及其机制.方法:MTT法检测Casticin对人宫颈癌HeLa细胞活性的抑制作用;平皿集落形成法检测Casticin对HeLa细胞集落形成率的影响;流式细胞术(FCM)检测Casticin对HeLa细胞周期的影响;采用Western blot分析蛋白表达的变化.结果:Casticin对人宫颈癌HeLa细胞增殖活性有较强的抑制作用,呈剂量和时间依赖性,作用48 h的IC50值为2.82 μ g/mL;与对照组比较,细胞集落形成率明显下降(P＜0.05);Casticin作用48 h,以浓度依赖方式阻滞HeLa细胞于G2/M期,同时降低Cyclin B1蛋白表达,增高P21蛋白表达.结论:Casticin抑制HeLa细胞的增殖作用可能与其降低Cyclin B1蛋白表达、活化P21蛋白有关.     

紫花牡荆素抑制FOXM1诱导乳腺癌细胞凋亡的研究北大核心CSCD

背景与目的:紫花牡荆素分离自传统中草药蔓荆子,具有广泛的抗肿瘤活性。转录因子FOXM1在多种肿瘤中高表达,对肿瘤发生发展具有重要影响。本研究旨在探讨紫花牡荆素诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡及其作用机制是否涉及FOXM1。方法:碘化丙啶(Propidium iodide,PI)流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测经不同浓度紫花牡荆素处理的体外培养MDA-MB-231细胞的凋亡率。免疫酶联试验(ELISA)测定细胞组蛋白/DNA碎片水平。DNA琼脂糖凝胶电泳观察细胞凋亡梯形条带图谱。蛋白质印迹法(Western blot)分析细胞FOXM1和Survivin蛋白表达。结果:紫花牡荆素以浓度依赖的方式(0、0.1、0.5和1.0μmol/L)增加MDA-MB-231细胞凋亡率[(4.36±0.12)%、(6.37±0.28)%、(11.30±0.62)%和(34.50±0.85)%]和增高细胞组蛋白/DNA碎片水平。紫花牡荆素处理MDA-MB-231细胞基因DNA琼脂糖电泳图谱呈现典型凋亡"梯型条带",Western blot检测结果显示,紫花牡荆素以浓度依赖方式下调FOXM1和Survivin蛋白表达。结论:紫花牡荆素能有效诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞细胞凋亡,其作用机制涉及下调FOXM1和Survivin表达。     

紫花牡荆素诱导人肺癌Ａ５４９细胞凋亡及其机制的探讨

目的　探讨紫花牡荆素（ＣＡＳ）诱导人肺癌Ａ５４９细胞凋亡及其机制。方法　体外培养Ａ５４９细胞。ＭＴＴ法测定ＣＡＳ对Ａ５４９细胞的增殖抑制作用;ＡｎｎｅｘｉｎＶ／ＰＩ双染色分析细胞凋亡率;ＪＣ-１探针流式细胞术分析线粒体跨膜电位;Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ法分析线粒体细胞色素Ｃ的释放和Ｂａｘ蛋白的表达。结果　ＣＡＳ能抑制人肺癌Ａ５４９细胞增殖,呈浓度依赖性。ＡｎｎｅｘｉｎＶ／ＰＩ法检测结果显示１０μｍｏｌ／ＬＣＡＳ作用Ａ５４９细胞１２、２４和４８ｈ后,凋亡率分别为２２.３９％、３８.６６％和６４.８２％。ＪＣ-１探针流式细胞术分析表明,ＣＡＳ能降低Ａ５４９细胞线粒体跨膜电位;Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ显示ＣＡＳ能促进线粒体细胞色素Ｃ的释放和上调Ｂａｘ蛋白表达。结论　ＣＡＳ具有诱导Ａ５４９细胞凋亡的作用,其作用机制可能与降低细胞线粒体膜电位、增加细胞色素Ｃ释放和上调Ｂａｘ蛋白表达有关。     

紫花牡荆素通过抑制7次跨膜超蛋白家族成员4的表达抑制膀胱癌细胞增殖迁移和侵袭

目的探讨紫花牡荆素(CAS)对膀胱癌T24细胞增殖、迁移和侵袭的影响及作用机制。方法体外培养T24细胞, 分为对照组、5、10、20 μmol/L CAS组、si-NC组、si-TM7SF4组、CAS+pcDNA组和CAS+pcDNA-TM7SF4组, 采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测各组细胞的增殖抑制情况, Transwell法检测细胞迁移和侵袭的能力, Western blot法检测细胞中细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、p21、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9和7次跨膜超蛋白家族成员4(TM7SF4)蛋白的表达水平, 实时荧光定量PCR检测TM7SF4 mRNA的表达水平。结果 5、10、20 μmol/L CAS组T24细胞增殖抑制率分别为(17.68±1.41)%、(33.54±3.16)%和(61.44±5.50)%, 均高于对照组[(0.00±0.00)%, 均P<0.001]。5、10、20 μmol/L CAS组细胞迁移数分别为(72.83±5.66)个、(59.13±4.27)个和(41.25±3.22)个, 细胞侵袭数分别为(55.8...     

microRNA沉默SMYD3基因对乳腺癌细胞侵袭能力影响及其机制的探讨

目的:研究沉默SMYD3对人乳腺癌细胞MCF-7体外侵袭能力的影响及可能作用机制.方法:构建携带绿色荧光蛋白(GFP)的SMYD3-microRNA真核表达载体,脂质体法稳定转染乳腺癌MCF-7细胞.通过RT-PCR和蛋白质印迹法检测转染前后SMYD3 mRNA及蛋白的表达变化;Matrigel侵袭实验检测细胞体外侵袭能力;平板集落形成实验检测细胞转染前后增殖抑制率;RT-PCR检测转染前后细胞WNT10B mRNA表达的变化.结果:经测序证明所构建干扰序列正确插入pcDNA6.2-GW/EmGFPmiR真核表达载体,序列完整.两干扰组SMYD3 mRNA及蛋白表达水平显著受到抑制,P<0.05;阴性对照组SMYD3的表达与空白组相比几乎无变化,P>0.05.Matrigel侵袭实验结果显示,两干扰组穿膜细胞数分别为(7.53±2.00)和(9.13±2.50),与空白组(63.40±6.85)和阴性对照组(66.69±4.63)相比显著减少,P<0.05.平板克隆形成实验显示,两干扰组集落形成率分别为(16.5%)、(18.7%),与空白组(79.4%)相比显著减少,P<0.05;阴性对照组(76.6%)和空白组相比差异无统计学意义,P>0.05.结论: SMYD3的高表达可明显增强乳腺癌MCF-7细胞的侵袭性,引起细胞转移.这可能与其异常激活下游癌基因WNT10B表达、引起细胞上皮间质化有关.     

瘦素对人类乳腺癌细胞MCF-7增殖及凋亡的影响

 目的 观察不同浓度瘦素对人类乳腺癌细胞MCF-7增殖及凋亡的影响,探讨瘦素在乳腺癌发生及发展中的作用。方法 采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测不同浓度瘦素对体外培养的MCF-7细胞生长的增殖作用,流式细胞术分析细胞周期的分布, Annexin V-FITC／PI染色法检测细胞凋亡。结果 MTT比色法结果显示：不同浓度瘦素作用24、48、72 h能够促进MCF-7细胞增殖,浓度与时间不存在交互作用（F＝0.919,P＝0.523）,浓度及时间各自的主效应均差异有统计学意义（F＝12.699,P＝0.000; F＝647.881,P＝0.000）。多重比较结果显示：200　ng／ml及400　ng／ml瘦素组与对照组相比差异有统计学意义（P＝0.007;P＝0.000）,不同时间段之间均差异有统计学意义（P＝0.000）。流式细胞术分析显示100、400 ng／ml瘦素作用48 h后,G0／G1期细胞比例下降14.42 %（F＝10.464,P＝0.044）,S期比例分别上升7.57 %、22.19 %（F＝47.361,P＝0.005）,G2／M期变化差异无统计学意义（F＝1.77,P＝0.311）。未发现瘦素对MCF-7细胞早期凋亡的抑制作用。结论 瘦素能够促进乳腺癌细胞MCF-7的增殖并改变生长周期,但不会抑制凋亡,提示瘦素可能在乳腺癌的发展中发挥促进作用。     

MST1 基因对乳腺癌细胞MCF-7增殖与凋亡的影响

目的:探讨 MST1 ( mammalian sterile 20-like kinase 1)基因对人乳腺癌细胞MCF-7增殖与凋亡的影响.方法:构建含有标签蛋白FLAG的MST1质粒pCMV-FLAG-MST1;将构建好的pCMV-FLAG-MST1质粒在脂质体lipofectamine 2000的介导下转染MCF-7细胞,通过Western 印迹法分析MST1在MCF-7中的表达情况;分别在转染后12、24、36和48 h通过MTT法观察MST1对细胞增殖的影响;转染后36 h加入5-溴-2'脱氧尿嘧啶(bromodeoxy uridine,BrdU),通过其掺入比率显示MST1对细胞增殖的影响;转染后36 h加入顺铂,作用14 h后通过Annexin Ⅴ检测其对细胞凋亡的影响.结果:成功构建 pCMV-FLAG-MST1质粒;MTT及BrdU检测显示,转染pCMV-FLAG-MST1质粒后 MCF 7细胞增殖明显受到抑制;Annexin Ⅴ检测结果提示,高表达MST1后,细胞的凋亡率相对增高.结论:在乳腺癌细胞MCF 7中高表达MST1,不仅可以抑制细胞增殖,还可以促进细胞凋亡.     

EDN3基因抑制人乳腺癌细胞的迁移及侵袭北大核心CSCD

目的 :探讨内皮素3(endothelin 3,EDN3)基因对人乳腺癌细胞迁移及侵袭能力的影响。方法 :应用RT-PCR法检测EDN3及内皮素受体B(endothelin receptor B,EDNRB)m RNA在人乳腺癌细胞(BT549、MB231、MDA-MB468、MCF-7、SK-BR-3、T47D和BT474)中的表达以及EDN3 m RNA在正常乳腺组织中的表达情况。应用实时荧光定量PCR法检测EDN3 m RNA在人乳腺癌组织及对应的癌旁组织中的表达情况。构建表达EDN3基因的慢病毒重组载体p CDH-CMV-MCS-EF1-Puro-EDN3,病毒包装后将其感染乳腺癌BT549和MB231细胞,应用CCK-8法及Transwell小室法分别检测EDN3基因对乳腺癌细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响。结果 :EDN3 m RNA在人乳腺癌细胞中表达缺失,而在乳腺正常组织中可见表达。EDNRB mR NA在BT549、MB231、T47D和SK-BR-3细胞中表达。乳腺癌组织中EDN3 mR NA的表达水平低于对应的癌旁组织(P=0.000 6)。成功构建表达EDN3基因的重组慢病毒载体,并将其成功感染BT549和MB231细胞。EDN3表达对BT549和MB231细胞的增殖无显著影响(P值均>0.05),但能抑制其迁移和侵袭(P值均<0.01)。结论 :人乳腺癌中EDN3基因的表达显著下调。EDN3基因可抑制人乳腺癌细胞的迁移及侵袭。     

MSTI基因对乳腺癌细胞MCF-7增殖与凋亡的影响

目的：探讨MST1（mammalian sterile 20-like kinase1）基因对人乳腺癌细胞MCF-7增殖与凋亡的影响。方法：构建含有标签蛋白FLAG的MSTI质粒pCMV-FLAG-MST1；将构建好的pCMV-FLAG-MST1质粒在脂质体lipofectamine2000的介导下转染MCF-7细胞，通过Western印迹法分析MST1在MCF-7中的表达情况；分别在转染后12、24、36和48h通过MTF法观察MST1对细胞增殖的影响；转染后36h加入5-溴-2’脱氧尿嘧啶（bromodeoxy uridine，BrdU），通过其掺入比率显示MST1对细胞增殖的影响；转染后36h加入顺铂，作用14h后通过AnnexinV检测其对细胞凋亡的影响。结果：成功构建pCMV—FLAG-MST1质粒；MTT及BrdU检测显示，转染pCMV—FLAG-MST1质粒后MCF-7细胞增殖明显受到抑制；AnnexinV检测结果提示，高表达MST1后，细胞的凋亡率相对增高。结论：在乳腺癌细胞MCF-7中高表达MST1，不仅可以抑制细胞增殖，还可以促进细胞凋亡。     

线粒体融合素基因-2对人乳腺癌MCF-7细胞株增殖与化疗敏感性的影响

背景与目的:线粒体融合素基因-2(mitofusin-2 gene,mfn2)是作用于线粒体外膜的一种增殖抑制基因,mfn2过表达可抑制血管平滑肌细胞的增殖.本研究探讨外源性mfn2对人乳腺癌细胞MCF-7增殖以及化疗敏感性的影响.方法:将含有mfn2 cDNA的质粒在阳离子聚合物的介导下体外转染MCF-7细胞,Western blot法检测绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的表达,细胞计数及MTT法检测mfn2对MCF-7细胞增殖的影响,流式细胞术检测MCF-7细胞周期分布及喜树碱处理前后细胞凋亡的变化.结果:转染mfn2基因的MCF-7细胞可以稳定高表达GFP.MTT实验提示转染mfn2 cDNA后,MCF-7细胞增殖明显受到抑制,DNA直方图显示细胞停滞于S期,转染mfn2 cDNA组S期细胞比率为(42.7±1.3)%,高于转染空质粒组的(17.2 2.0)%和空白对照组的(19.6±1.7)%(P＜0.05).mfn2基因转染后诱导的细胞凋亡率从(3.6±0.6)%升高到(16.0±0.3)%;加入喜树碱4 h后转染mfn2基因的细胞凋亡率为(69.6 4.3)%,高于转染空质粒组的(31.0±1.8)%和空白对照组的(23.4 2.8)%(P＜0.05).结论:转染mfn2基因可以明显抑制MCF-7细胞的增殖,增强MCF-7细胞对喜树碱的敏感性.     

微小RNA与乳腺癌细胞的增殖和转移

 乳腺癌的发生是一个多因素参与的阶段性演进过程,微小RNA（miRNA）可通过调节肿瘤细胞的增殖、凋亡和迁移参与肿瘤发生、发展及远处浸润转移。miRNA影响乳腺癌细胞的增殖与转移机制研究将为乳腺癌的诊治提供新的思路。     

大黄素联合survivin短发夹RNA对人乳腺癌细胞株MCF-7增殖的影响

目的探讨大黄素与survivin短发夹RNA(shRNA)联合应用对人乳腺癌细胞株MCF-7增殖的影响。 方法先用MTT法检测不同浓度(0、10、20、40、80 μmol/L)大黄素对人乳腺癌细胞株MCF-7生长抑制的影响,为后续联合用药实验筛选出适宜浓度(40 μmol/L)的大黄素。然后,将人乳腺癌细胞株MCF-7分为以下5组：空白对照组,细胞未做任何处理;阴性对照组,即NC shRNA组,加入空载质粒;大黄素处理组,用40 μmol/L大黄素处理细胞;survivin shRNA处理组,转染survivin shRNA质粒;联合处理组,用40 μmol/L大黄素与survivin shRNA联合处理细胞。利用MTT法、流式细胞术分别检测各组细胞的增殖(用吸光度值表示)和凋亡能力,用real-time PCR及蛋白质印迹法(Western blot法)分别检测细胞中survivin的mRNA和蛋白表达。由于细胞增殖活性检测结果显示空白对照组与阴性对照组差别不显著,故流式细胞术中不再设置阴性对照组。多组细胞间凋亡率及survivin的mRNA和蛋白表达量比较采用单因素方差分析,吸光度值比较采用重复测量的方差分析,组间两两比较采用LSD法。 结果MTT法显示,不同浓度(0、10、20、40、80 μmol/L)大黄素作用24、48、72 h后,各组细胞间吸光度值比较,差异有统计学意义(F＝1 873.565, P<0.001),并且,40 μmol/L大黄素对细胞增殖的抑制率为(53.6±1.2)%(>50.0%),因此选择该浓度进行后续实验。用不同方法处理细胞24、48、72 h后,空白对照组、阴性对照组、大黄素处理组、survivin shRNA处理组及联合处理组细胞的吸光度值比较,差异有统计学意义(F＝1 686.953, P<0.001),不同时间点间细胞吸光度值的差异也有统计学意义(F＝288.790, P<0.001),分组与时间点存在交互作用(F＝67.916, P<0.001)。流式细胞检测结果显示：空白对照组、大黄素处理组、survivin shRNA处理组和联合处理组细胞凋亡率分别为(0.57±0.10)%、(5.96±0.56)%、(9.00±0.73)%和(18.33±0.98)%,4组比较,差异有统计学意义(F＝114.848, P<0.001);大黄素处理组细胞凋亡率明显高于空白对照组(P<0.001);联合处理组细胞凋亡率明显高于其他各组(P均<0.001)。real-time PCR结果显示：空白对照组、阴性对照组、大黄素处理组、survivin shRNA处理组和联合处理组的mRNA表达量分别为1.000±0.000、0.968±0.033、0.774±0.049、0.483±0.026和0.364±0.012,5组比较,差异也有统计学意义(F＝284.199, P<0.001),进一步两两比较发现,联合处理组survivin mRNA表达量低于大黄素处理组(P<0.001)和survivin shRNA处理组(P＝0.001)。Western blot结果显示：空白对照组、阴性对照组、大黄素处理组、survivin shRNA处理组和联合处理组的survivin蛋白表达量分别为1.000±0.000、0.987±0.031、0.696±0.050、0.534±0.065和0.312±0.039,5组比较,差异有统计学意义(F＝142.311, P<0.001),进一步两两比较显示,联合处理组survivin蛋白表达量明显低于大黄素处理组和survivin shRNA处理组(P均<0.001)。 结论大黄素与survivin shRNA两者联合应用可明显抑制人乳腺癌细胞株MCF-7的增殖。     

靶向survivin的siRNA抑制乳腺癌MCF-7细胞增殖并诱导其凋亡

目的 观察靶向survivin的siRNA对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响。方法构建靶向survivin的siRNA真核表达载体,采用Lipofectamine^TM2000转染乳腺癌细胞MCF-7,采用半定量RTPCR、免疫组化技术检测转染前后MCF-7细胞survivin基因表达的变化;采用MTT法检测对MCF-7细胞增殖的抑制作用;采用TUNEL法检测诱导MCF-7细胞凋亡的作用。结果靶向survivin的序列特异性siRNA可以高效抑制MCF-7细胞survivin基因的表达,在mRNA水平其表达抑制率为64．9％;在蛋白质水平其表达抑制率为79．7％;转染靶向survivin的siRNA真核表达载体可以显著抑制MCF-7细胞的增殖,细胞重新接种24、48h后,其增殖抑制率分别为31．6％和33．0％;转染后24h可以诱导12．9％的细胞凋亡。结论利用RNA干扰技术阻断survivin基因的表达可以显著抑制MCF-7细胞的增殖,并在一定程度上诱导其自发凋亡,靶向survivin的RNA干扰技术在乳腺癌的基因治疗中具有一定的价值。     

MAT1-siRNA体外转染抑制胰腺癌细胞增殖和侵袭能力的研究

目的:观察siRNA沉默MAT1基因对胰腺癌细胞增殖和侵袭能力的影响,探讨MAT1基因作为胰腺癌基因治疗标靶的可行性。方法:在脂质体介导下将MAT1基因序列特异性siRNA体外转染人胰腺癌BxPC-3细胞,采用RT-PCR和W estern印迹法分析MAT1基因的表达,锥虫蓝染色计数法和Boyden小室模型分别测定细胞的增殖和体外侵袭能力变化。结果:与对照各组相比,实验组BxPC-3细胞MAT1 mRNA和蛋白在一定时间内均表达下调,其中mRNA表达在24 h和48 h分别下调达55.2%和64.3%(P<0.01);细胞体外增殖和侵袭能力均明显受抑,差异具统计学显著性(P<0.01)。结论:针对MAT1基因的siRNA可抑制胰腺癌细胞的增殖和侵袭能力,MAT1可能是胰腺癌基因治疗的靶点。     

转染CD40L基因对结肠癌细胞增殖和侵袭的影响

目的:本研究通过将CD40L基因转染小鼠结肠癌colon26细胞,观察其对小鼠结肠癌细胞生物学特性的影响,以期探讨CD40L作为结肠癌基因治疗靶点的可行性.方法:经脂质体将CD40L基因转染小鼠结肠癌colon26细胞后,采用半定量RT-PCR法、Western印迹法和激光共聚焦显微镜检测CD40L mRNA及蛋白的表达情况,新型四氮唑盐MTS比色法检测CD40L基因转染对细胞生长的影响,FCM法检测其对细胞表面分子表达的影响,半定量RT-PCR法检测细胞中基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP-2)mRNA的表达情况,以及Transwell法检测细胞的侵袭能力变化.结果:RT-PCR检测结果显示,转染CD40L基因的小鼠结肠癌colon26细胞中CD40L mRNA的表达量为1.09±0.12,与转染空质粒细胞和未转染细胞相比,分别上调了59.21%和58.33%,差异有统计学意义(P＜0.05);而基因转染后colon26/CD40L细胞中MMP-2 mRNA水平降低.MTS法检测结果显示,colon26/CD40L细胞的生长速度与未转染细胞无明显变化.FCM法检测结果显示,colon26/CD40L细胞表面共刺激分子CD80和CD86水平升高.同时,Transwell实验结果显示,colon26/CD40L细胞侵袭能力下降(P＜0.05).结论:CD40L基因提高了结肠癌colon26细胞的免疫原性,降低了结肠癌细胞的侵袭能力,抑制了结肠癌细胞的恶性表型.     

缺氧能引起EMT的发生促进乳腺癌的侵袭和迁移

 目的　探讨缺氧对人类乳腺癌细胞MCF-7上皮-间质转化（ EMT）标志分子E-钙黏着素（E-cadherin）、波型蛋白（Vimentin）及侵袭迁移能力的影响,揭示缺氧引起乳腺癌侵袭转移的机制, 为临床治疗乳腺癌提供实验及理论依据。方法　采用Western blot检测低氧诱导因子-1α（HIF-1α）、E-cadherin、Vimentin的变化;四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测缺氧对人类乳腺癌细胞MCF-7黏附能力的影响;Transwell侵袭小室法检测缺氧对MCF-7细胞侵袭和迁移能力的影响。结果　随着缺氧时间的延长,人类乳腺癌细胞中E-cadherin表达明显降低（0.09±0.02）（t＝30.98,P＝0.0007）,Vimentin表达明显升高（0.69±0.04）（t＝915,P＝0.0000) ;缺氧72 h组MCF-7细胞黏附（81.23±0.74）（t＝82.05,P＝0.000）、侵袭（120±6） （t＝22.78,P＝0.0009）和迁移能力明显增强（190±6）（t＝23.49,P＝0.000）。结论　缺氧能下调E-cadherin、上调Vimentin而引起EMT的发生,促进MCF-7细胞黏附、侵袭和迁移。     

Pyk2基因对肝癌He p3 B细胞增殖、侵袭和迁移的影响

目的：探讨沉默富含脯氨酸的酪氨酸激酶2（Pyk2）基因对人肝癌Hep3 B细胞增殖、侵袭及迁移的影响。方法构建Pyk2基因RNA干扰（RNAi）载体,脂质体转染至肝癌Hep3B细胞,实验分3组,Pyk2 RNA干扰组（siRNA组）：转染携带Pyk2基因RNAi的质粒;阴性对照组：转染不携带Pyk2基因RNAi的空载质粒;空白对照组：未转染任何质粒。应用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）及Western blotting鉴定Pyk2基因和蛋白表达;采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）、Transwell侵袭和划痕实验分别检测细胞增殖、侵袭及迁移等生物学特性。结果 Pyk2基因干扰后肝癌 Hep3B 细胞 Pyk2 mRNA 的表达（0．16±0．03）较阴性对照组（0．74±0．13）和空白对照组（0．77±0．16）均明显下降,差异均有统计学意义（t＝51．46,P＝0．000;t＝53．21,P＝0．000）。Pyk2基因干扰后肝癌 Hep3B 细胞 Pyk2蛋白的表达（0．24±0．06）较阴性对照组（0．83±0．05）和空白对照组（0．91±0．06）均明显下降,差异均有统计学意义（t＝57．29,P＝0．000;t＝68．53,P＝0．000）。siRNA组48 h细胞增殖抑制率（26．17％±0．28％）较阴性对照组（9．28％±0．22％）和空白对照组（6．47％±0．31％）明显提高,差异均有统计学意义（t ＝31．45,P＝0．004;t＝34．64,P＝0．002）。siRNA组细胞的穿膜细胞数（32．5±8．5）／10 HP明显低于阴性对照组（98．4±12．3）／10 HP和空白对照组（112．6±11．3）／10 HP,差异有统计学意义（t＝95．64,P＝0．000;t＝105．17,P ＝0．000）。siRNA 组的划痕愈合率（28．17％±1．46％）显著低于阴性对照组（77．38％±2．24％）和空白对照组（79．41％±3．17％）,差异有统计学意义（t ＝85．86,P＝0．000;t ＝89．37,P＝0．000）。结论 Pyk2基因参与肝癌Hep3B细胞的增殖、侵袭及迁移,与肿瘤发展、侵袭、转移等密切相关,Pyk2有望成为肝癌诊断和治疗的分子靶标。     

RhoC表达与体外乳腺癌细胞系侵袭行为的相关性

目的研究RhoC在不同转移能力乳腺癌细胞系中的表达及其与乳腺癌侵袭行为的相关性。方法利用逆转录-聚合酶链反应、Western blot、细胞爬片免疫组织化学和免疫荧光组织化学染色检测乳腺癌低转移细胞系MCF-7和高转移细胞系MDA-MB-231中RhoC mRNA和蛋白表达水平。构建RhoC真核表达载体,并转染乳腺癌低转移细胞系MCF-7;利用Matrigel穿膜侵袭实验检测转染后细胞的体外侵袭能力,划痕修复实验检测运动迁移能力,组织化学染色检测微丝骨架结构的变化,并利用Western blot检测Akt磷酸化水平变化。结果RhoC在不同转移能力的乳腺癌细胞系中呈不同程度表达,在高转移细胞系MDA-MB-231中高表达,在低转移细胞系MCF-7中低表达,差异有统计学意义(P<0.01)。基因转染过表达RhoC后,乳腺癌细胞的体外侵袭能力明显增强,正义转染组穿膜细胞数(56.88±4.18)与其相应空载体组(23.77±3.64)、反义组(23.12±3.22)和未转染对照组(28.44±2.48)比较,明显增多(P<0.01);运动迁移能力明显增强,正义转染组24 h划痕修复率(58.28%±2.14%)明显高于转染空载体组(28.23%±2.62%)、反义组(22.36%±2.73%)和未转染对照组(30.18%±2.86%),差异有统计学意义(P<0.01);组织化学染色显示,正义转染组细胞内肌动蛋白多聚体减少,微丝骨架重构;此外,RhoC正义转染组细胞p-Akt水平升高。结论RhoC过表达促进乳腺癌细胞的体外侵袭能力,并与乳腺癌细胞系转移潜能正相关,有望成为阻断乳腺癌转移的新靶点。     

毛蕊异黄酮对人乳腺癌MCF-7细胞作用的体外研究

目的:观察毛蕊异黄酮在体外对雌激素受体阳性细胞人乳腺癌MCF-7细胞的作用及其机制。方法:用不同浓度毛蕊异黄酮作用MCF-7细胞,并设未处理阴性对照组及17-雌二醇(17-estradiol,E2)阳性对照组。MTT法测定细胞增殖抑制的情况,FCM检测细胞凋亡率影响,并通过RT-PCR和免疫细胞化学法分别测定细胞中Bcl-2、Bax的mRNA和蛋白水平变化。结果:低浓度的毛蕊异黄酮(2、4和8μmol/L)促进MCF-7细胞增殖,而高浓度毛蕊异黄酮(16和32μmol/L)抑制MCF-7细胞增殖,并且呈剂量依赖性。同时,低浓度的毛蕊异黄酮能减少MCF-7细胞凋亡率(P<0.05),并且显著降低Bax表达水平,增加Bcl-2表达水平(P<0.05)。结论:毛蕊异黄酮在低浓度时能促进MCF-7细胞增殖,减少细胞凋亡,其机制可能与毛蕊异黄酮的雌激素作用有关。