双自杀基因重组腺病毒对胰腺癌细胞SW1990的体外杀伤作用

目的 研究腺病毒介导的血管内皮生长因子(VEGF)启动子驱动胞嘧啶脱氨酶(CD)/胸苷激酶(TK)融合基因系统(Ad-VEGFP-CDTK)对胰腺癌细胞SW1990增殖的影响.方法 重组腺病毒体外感染表达VEGF的SW1990细胞株,用空腺病毒做对照,观察其感染效率并以RT-PCR、Western blot方法检测转基因细胞CDTK的表达,MTF法观察该体系对SW1990细胞生长增殖的影响及其旁观者效应;电镜观察细胞的病变;流式细胞仪检测细胞周期的变化和DNA含量的变化;分光光度法检测细胞内caspase-3活性. 结果两种腺病毒对细胞株的感染率相似.RT-PCR和Western blot检测发现转染Ad-VEGFP-CDTK的细胞有目的基因和蛋白的表达.MTT法检测显示前药呈剂量依赖性抑制SW1990生长,且观察到该体系明显的旁观者效应.电镜下可见SW1990有凋亡改变.用流式细胞仪测定用药组出现典型的凋亡峰;细胞周期分析显示治疗后细胞G0-G1期比率增多,G2-M及S期细胞减少.随着前药浓度的升高转基因细胞内caspase-3活性逐渐升高.结论 VEGF启动子可调控双自杀基因体系抑制胰腺癌细胞SW1990增殖,并且诱导胰腺癌细胞凋亡.     

重组腺病毒介导的人内皮抑素基因在SW1990细胞中的表达

目的应用AdEasy载体系统构建含人内皮抑素（hEndostatin）的重组腺病毒载体，观察感染后hEndostatin在SWI1990中的表达和生物学活性。方法将hEndostatin克隆至穿梭质粒pShuttle-CMV，与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1共转染大肠杆菌BJ5183，获得腺病毒重组质粒，腺病毒重组质粒转染293细胞进行包装，获取hEndostatin重组腺病毒。同法构建重组腺病毒Ad-LaeZ，转染SW1990细胞，确定重组腺病毒的最适感染复数（MOI），hEndostatin重组腺病毒以最适MOI转染SW1990细胞，观察转染后1～7d hEndostatin的表达及生物学活性。结果成功构建了hEndostatin重组腺病毒，该腺病毒可高效介导hEndostatin在SW1990细胞中的表达，MOI=100为最适感染复数；转染后1～7d，上清中hEndostatin蛋白的浓度分别为（1．6±0．3）、（8．5±0．6）、（54．3±4．4）、（256．9±25．8）、（596．6±38．7）、（321．7±21．2）、（132．6±7．6）μg/L；表达产物具有生物学活性，显著抑制血管内皮细胞的增殖、迁移（P〈0．01）。结论重组腺病毒可介导hEndostatin基因在SW1990细胞中的有效表达。     

人端粒酶反转录酶启动子调控NK4基因靶向治疗结肠癌的实验研究

目的 构建人端粒酶反转录酶（HTERT）启动子调控的NK4基因重组腺病毒表达系统,探讨NK4基因对结肠癌生长、侵袭转移的抑制作用.方法 以Ad HTERTp-NK4重组腺病毒载体感染结肠癌细胞HTC116,分别以RT-PCR方法和Western blot检测细胞内NK4基因mRNA及蛋白表达量：MTT和体外侵袭实验观察NK4对结肠癌细胞增殖及侵袭转移能力的抑制作用.建立结肠癌裸鼠皮下移植瘤模型,观察重组腺病毒Ad HTERTp-NK4对裸鼠结肠癌移植瘤生长的影响.结果 Ad HTERTp-NK4重组腺病毒载体感染HCT116细胞后,HCT116细胞内NK4 mRNA及蛋白表达水平明显增高：Ad HTERTp-NK4重组腺病毒感染后,HCT116细胞生长抑制率和侵袭抑制率分别为47.14%和40.63%,与Ad HTERTp-GFP（空载体）组（2.75%和2.31%）比较,差异均有统计学意义（均P＜0.05）.局部注射Ad HTERTp-NK4重组腺病毒载体后,结肠癌裸鼠皮下移植瘤模型肿瘤生长受抑,抑瘤率为47.3%,与空载体组（4.6%）比较,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 HTERT启动子调控NK4基因靶向治疗系统可有效抑制结肠癌的增殖及侵袭转移,在结肠癌的基因治疗具有较好的应用前景.     

血管内皮生长因子受体启动子驱动双自杀基因联合survivin反义寡核苷酸对结直肠癌细胞及血管内皮细胞的特异性杀伤作用

目的探讨腺病毒介导血管内皮生长因子受体（KDR）启动子驱动的CDglyTK融合基因（AdKDR-CDsbrTK）体系联合survivin反义寡核苷酸（ASODN）对结直肠癌细胞（sw620）及血管内皮细胞（ECV304）的特异性杀伤作用。方法将质粒pAdEasy—KDR-CDglyTK在293细胞内包装、扩增产生重组腺病毒。体外感染表达KDR的SW620、ECV304细胞株,同时用survivin ASODN转染同一细胞株,观察腺病毒的感染效率和ASODN的转染情况。应用RT．PCR和Western印迹检测CDglyTK和survivin基因的表达．MTT法测定两者联合应用对细胞株的杀伤效应和旁观者效应。结果survivin ASODN可转染重组腺病毒感染的细胞,并且两者的转染及感染效率无明显变化。CDglyTK可在SW620、ECV304细胞株高效表达。survivin ASODN可明显降低survivin蛋白表达。各基因治疗组细胞存活率明显低于阴性对照组（P〈0．001）。survivinASODN与AdKDR—CDglyTK基因联用后。随着前药浓度的增加,细胞存活率迅速下降,两者联合作用与单一基因作用相比,差异具有统计学意义（P〈0．05）。但在GCV100μg／ml、5-FC 2000μg／ml时,联合基因治疗组细胞存活率略低于单用AdKDR-CDglyTK,两者间差异无统计学意义（P〉0．05）。Survivin ASODN和AdKDR—CDglyTK联合作用,在前药浓度较低时表现为协同效应,并具有更明显的旁观者效应。结论KDR启动子调控的AdKDR-cDglyTK体系和survivin ASODN基因联合,较单一基因具有更强的特异性杀伤结直肠癌细胞及血管内皮细胞的作用。     

转染人Endostatin基因对胰腺癌SW1990细胞增殖、凋亡及血管内皮生长因子表达的影响

目的观察转染人Endostatin（hEndostatin）基因对胰腺癌细胞株SW1990增殖、凋亡及血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响。方法携带hEndostatin基因的复制缺陷型重组腺病毒载体体外转染SW1990细胞，MTT法检测细胞增殖，流式细胞仪检测细胞凋亡，实时荧光定量PCR和ELISA分析检测hEndostatin和VEGF的表达。建立裸鼠胰腺癌模型，随机分为3组（n=8），瘤体内分别注射磷酸盐缓冲液（PBS组）、报告基因LacZ重组腺病毒（Ad—LacZ组）、hEndostatin重组腺病毒（Ad—bEnd组）100山，隔日1次，共4次。4周后免疫组织化学染色检测肿瘤组织中hEn．dostatin、VEGF、增殖性细胞核抗原（PCNA）的表达，TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡。结果体外转染hEndostatin基因不影响SW1990细胞的增殖和凋亡（P〉0．05），但下调VEGF的表达（P〈0．01），下调作用第5天最大，在mRNA和蛋白水平的抑制率分别为84．67％和81．41％。体内转染4周后，Ad．bend组VEGF、PCNA阳性表达率分别为（36．3±7．1）％、（38．2±3．9）％，显著低于Ad．LacZ组的（81．2±6．6）％、（93．2±4．9）％和PBS组的（78．4±6．2）％、（90．1±5．7）％（P〈0．01）；肿瘤细胞凋亡率为（31．2±5．4）％，显著高于Ad—LacZ组的（9．4±4．9）％和PBS组的（8．5±3．7）％（P〈0．01）。结论hEndostatin基因转染抑制SW1990细胞的体内增殖并促进凋亡；下调SW1990细胞内源性VEGF的表达可能是抗肿瘤的作用机制之一。     

腺病毒介导钠/碘泵基因靶向治疗胰腺癌

目的观察0．8kb的Mucin1黏蛋白（MUC1）启动子驱动人钠／碘同向转运体（hNIS）基因在胰腺癌细胞靶向表达，评估其吸收碘的能力及结合放射碘治疗胰腺癌的效果。方法采用双质粒脂质体共转染方法获得复制缺陷型腺病毒Ad／MUC1／hNIS。Ad／MUC1／hNIS体外感染细胞，通过免疫荧光染色方法及细胞。I的吸收试验检测hNIS在细胞的靶向表达及吸碘功能。构建鼠Capan-2胰腺癌模型，瘤内注射病毒后，结合^131I治疗，观察对移植瘤生长的抑制作用。结果hNIS仅在MUC1阳性的CAPAN-2和SW1990细胞的胞膜靶向表达，且有高的^125I吸收能力，分别较对照组提高20．5和13倍。Ad／MUC1／hNIS感染的肿瘤结合^131I治疗能抑制肿瘤生长，肿瘤体积减小到原来的83％。结论0．8kb的MUC1启动子能驱动hNIS基因在MUC1阳性的胰腺癌细胞靶向表达，结合^131I治疗后能抑制胰腺癌的生长。     

多药耐药相关基因及其蛋白在介导胰腺癌细胞原发性耐药中的作用及调控

目的 检测多药耐药相关基因（MDR1）及其蛋白（P-gP）在胰腺癌细胞株的表达,初步探讨胰腺癌发生先天性耐药的机理。方法 选择8株人胰腺癌细胞株,采用RT-PCR方法检测MDR1mRNA在胰腺癌细胞中的表达;通过免疫细胞化学方法检测P-gP的表达;以流式细胞仪检测胰腺癌细胞对罗丹明的外排情况,评价P-gP泵功能;最后通过P-gP抑制物维拉帕米与化疗药物联合应用,检测其对胰腺癌细胞的杀伤作用。结果 MDR1mRNA在胰腺癌细胞株SW1990中的表达最高,除PCT-2未检测到MDR1的表达外,其余6株细胞均有MDR1的微弱表达;免疫细胞化学染色结果证实P-gP在SW1990中的表达明显高于其他细胞株。57．9％±5．4％的SW1990细胞内有罗丹明蓄积,而在P-gP阴性对照细胞中,99．5％±3．3％的细胞内存在罗丹明的积聚,两者差异有统计学意义（P〈0．05）。P-gP抑制物维拉帕米与阿霉素或表阿霉素联合应用时可以部分逆转肿瘤细胞对化疗药物的耐药性。结论 MDR1及P-gP在人胰腺癌细胞中存在一定量的表达;维拉帕米联合阿霉素可以明显抑制P-gP阳性细胞的生长。     

重组腺病毒携带人血管抑素基因抑制胰腺癌血管生成的研究

目的研究重组腺病毒介导的人血管抑素基因(Ad-hAG)对胰腺癌血管生成的抑制作用。方法通过病毒重组技术将人血管抑素K5基因克隆人增殖缺陷型腺病毒基因组中,获得腺病毒滴度达5.5×10~(10)pfu/ml。转染人胰腺癌细胞,Western印迹和ELISA法检测人血管抑素基因的蛋白表达情况,并通过建立荷人胰腺癌的裸鼠动物模型(每组15例),微血管密度计数分析血管抑素对胰腺癌血管形成的影响。结果成功构建了携带血管抑素K5基因的腺病毒Ad-hAG;检测到重组腺病毒载体介导的血管抑素基因在胰腺癌细胞内高表达,微血管密度计数(MVD)治疗组为8.75±2.12,对照组MVD分别为20.52±1.25、18.52±1.36(t=6.165,P<0.05)。结论重组腺病毒介导的血管抑素基因在体内、外均获得高效表达,可明显抑制裸鼠胰腺癌血管形成和肿瘤生长。     

联合基因靶向治疗对乳腺癌细胞及血管内皮细胞的特异性杀伤作用

目的探讨腺病毒介导血管内皮生长因子受体（KDR）启动子驱动的双自杀基因（CDglyTK）联合survivin反义寡核苷酸（ASODN）对乳腺癌细胞（MCF-7）及血管内皮细胞（ECV304）的特异性杀伤作用。方法将质粒pAdEasy—KDR—CD0yTK在293细胞内包装、扩增后,体外感染表达KDR的MCF-7和ECV304细胞株,同步用survivinASODN转染已感染腺病毒的MCF-7和ECV304细胞株,观察腺病毒的感染效率和survivinASODN的转染情况,应用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）和Western blot免疫印迹法检测CDglyTK和survivin基因在转基因MCF-7和ECV304细胞中的表达,MTT法测定两者联合应用对细胞的杀伤效应和旁观者效应。结果SurvivinASODN可转染重组腺病毒感染的细胞,并且survivinASODN的转染率及重组腺病毒的感染率均不受影响,CDglyTK可在两种细胞中高表达,survivinASODN可明显降低survivin蛋白表达。单一survivinASODN基因转染MCF-7和ECV304细胞后,细胞存活率为56．4％±3．8％和55．9％±3．6％,与AdKDR—CDglyTK基因联用后,随着丙氧鸟苷（GCV）和5-氟胞嘧啶（5-FC）浓度的增加,细胞存活率迅速下降,两者联合作用与单一基因作用相比,差异有统计学意义（P〈0．05）。但在GCV100μg／ml、5．FC2000μg／ml时,联合基因治疗组细胞存活率略低于单用AdKDR—CDglyTK组,两者差异无统计学意义（P〉0．05）。SurvivinASODN和AdKDR—CDglyTK联合作用在GCV、5-FC浓度较低时表现为协同效应,并具有更明显的旁观者效应。结论KDR启动子调控的CDglyTK融合基因体系和survivinASODN基因联合应用对乳腺癌细胞及血管内皮细胞具有显著的特异性杀伤作用。     

应用基因芯片技术筛选胰腺癌多药耐药相关基因

目的应用基因芯片技术筛选胰腺导管腺癌（PDAC）获得性多药耐药（MDR）相关基因。方法通过含人类全基因组的寡聚核苷酸基因芯片（Affymetrix HG U133 2．0plus）筛查人胰腺癌细胞株SW1990与多药耐药细胞亚株SW1990／5-FU,SW1990／ADM和SW1990／GEM之间的表达基因差异,并进行生物信息学分析。结果与亲本株SW1990相比,3株耐药细胞亚株中表达均有差异的基因共有165条;其中上调表达基因43个,下调表达基因122个。差异表达基因的功能分类包括：抗氧化还原、细胞凋亡、细胞周期、信号转导、细胞黏附相关的基因等。聚类分析发现差异基因中的PRDX4簇、TNKS2簇及CCDC5簇可能与耐药发生密切相关。结论胰腺癌对化疗的多药耐药是复杂的多基因作用的结果。本试验初步建立了胰腺癌多药耐药发生相关的总体基因表达改变图谱,为胰腺癌多药耐药发生机制的研究提供了新的靶点。     

胰腺癌细胞株耐药与凋亡相关基因的改变

目的探讨凋亡相关基因的改变与胰腺癌细胞耐药的关系。方法利用含有18000条人类基因的cDNA基因芯片对人胰腺癌细胞株SW1990及其耐药细胞亚株SW1990/FU和SW1990/ADM间的差异表达基因进行筛选。结果人胰腺癌细胞株SW1990与耐药细胞亚株SW1990/FU和SW1990/ADM间的共同差异表达基因有170条,其中6条与细胞凋亡相关。结论凋亡相关基因hSiah2、TIA1、CDC2、PDCD2、MAPK6及MAP4K3可能参与了胰腺癌耐药过程的发生,可能成为新的胰腺癌耐药相关基因。     

KDR启动子驱动的双自杀基因对实体瘤细胞及血管内皮细胞的靶向杀伤作用

目的腺病毒介导KDR启动子驱动的CDglyTK融合基因(AdKDRCDglyTK)体系对实体肿瘤细胞及血管内皮细胞靶向杀伤作用。方法分别将KDR和CMV启动子融合基因腺病毒体外感染表达KDR的ECV304、MCF7、MGC803及SW620细胞株和不表达KDR的LS174T细胞株,并给予不同浓度的前药5FC和/或GCV,观察其对各细胞株的杀伤效应及其旁观者效应。结果两种腺病毒对各细胞的感染率随腺病毒滴度的递增而增加,当MOI为200时,各细胞株均达约100%感染;感染AdCMVCDglyTK的各组细胞和感染AdKDRCDglyTK的ECV304、MCF7、MGC803及SW620对前药具有较高的敏感性,且其敏感性差异无统计学意义(P均>0.05);与其他细胞相比,感染AdKDRCDglyTK的LS174T细胞对前药不敏感(P<0.01);且观察到该体系明显的旁观者效应。结论KDR基因启动子调控的CDglyTK融合基因体系可选择性杀伤实体肿瘤细胞及血管内皮细胞。     

经腺病毒介导释放单纯疱疹病毒胸苷激酶基因以杀伤胰腺癌细胞

应用经腺病毒介导释放的单纯疱疾病毒胸苷激酶（HSV－TK）基因作为胰腺癌基因洽疗的工具。选用人体胰腺癌细胞系B×PC－3、ASPC－1、HPAF和Panc－1，注入Balb／C裸鼠腹腔内制成胰腺癌模型。HSV－TK表达能致敏细胞至核着同类物ganciclovir（GCV），后者是抗病毒剂。选择性致敬可由病毒胸苷激酶基因使GCV一磷酸化作用而成。细胞激酶进一步将药物磷酸化形成三磷酸盐，结合至初生DNA，从而抑制DNA合成和最终导致细胞死亡。为了分析基因转移的效率，重组编码有已知基因的腺病毒媒介物。按Feng法感染重组腺病毒媒介物100菌斑形成单…     

腺病毒介导的p16基因转染对膀胱癌细胞生长影响的研究

目的　探讨复制缺陷型腺病毒介导的 p16基因转染对人膀胱癌细胞生长的影响。 　方法　将 p16重组腺病毒 (Ad p16 )感染p16蛋白表达阴性的人膀胱移行细胞癌T2 4细胞株 ,Ad LacZ、X gal染色法检测重组腺病毒的转染效率 ;Westernblot法检测 p16蛋白的表达 ;MTT法及流式细胞术评估Ad p16对T2 4细胞增殖的影响。　结果　在感染复数 (MOI)为 5 0时 ,重组腺病毒对T2 4细胞的转染率达 97% ;此Ad p16在T2 4细胞中可获高效表达 ;与转染Ad LacZ组及未转染组相比 ,转染Ad p16组T2 4细胞生长受到明显抑制 (P <0 .0 5 ) ,细胞周期分析表明生长抑制主要发生在G1 S节点。　结论　腺病毒载体可有效地将外源 p16基因导入T2 4细胞 ;p16基因重组腺病毒载体转染能抑制T2 4细胞的生长。     

重组腺病毒介导的野生型p53基因对结直肠癌细胞的放射治疗增敏作用

目的探讨野生型p53基因通过重组腺病毒转染至结直肠癌细胞后对放射治疗（放疗）的增敏作用。方法将含野生型p53基因的重组腺病毒转染SW480结直肠癌细胞后,采用4、6Gy对其进行放疗。并通过噻唑蓝比色法检测生长抑制率、末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记检测细胞凋亡水平、免疫组化检测增殖细胞核抗原的表达。结果经4、6Gy放疗后,转染野生型p53基因的SW480细胞生长受到了明显的抑制（P〈0．05）,凋亡率增加,增殖细胞核抗原比率下降。结论野生型p53基因可增加p53突变的结直肠癌细胞对放射治疗的敏感性。     

葡萄糖神经酰胺合成酶基因在人胰腺癌细胞SW1990及其耐药亚株中的表达和意义

目的探讨葡萄糖神经酰胺合成酶（glucosylceramide synthase,GCS）基因在人胰腺癌细胞SW1990及其耐药亚株中的表达和意义。方法体外培养人胰腺癌细胞SW1990和其耐药亚株SW1990／FU、SW1990／ADM、SW1990／GEM,以细胞活性测定（CCK-8法）检测耐药亚株的耐药指数,相对定量荧光实时PCR（RT—PCR）法检测GCS mRNA的表达,免疫印迹法检测GCS蛋白表达水平。结果与亲本株相比,SW1990／FU、SW1990／ADM、SW1990／GEM的耐药指数分别为339．7、11．9、56．6。RT—PCR和免疫印迹检测结果显示亲本株和耐药亚株均有GCS mRNA和蛋白的表达,GCS mRNA在3株耐药亚株中的表达均比亲本株有增高趋势,且SW1990／ADM、SW1990／GEM的GCS蛋白表达水平较亲本株升高,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论GCS基因在人胰腺癌细胞株SW1990和其3株耐药亚株中表达阳性,GCS蛋白在SW1990／ADM、SW1990／GEM中呈高表达,表明GCS可能参与胰腺癌耐药株细胞对ADM、GEM的耐药。     

小干扰RNA特异性沉默c-myc基因对人胰腺癌SW1990细胞生物学影响

目的 观察小干扰RNA(siRNA)沉默c-myc基因的表达对人胰腺癌细胞株SW1990细胞生物学影响.方法 用siRNA沉默胰腺癌SW1990细胞中c-myc基因,用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)及Western blot技术检测c-myc mRNA及蛋白的表达量;噻唑蓝(MTT)法检测siRNA沉默c-myc基因对SW1990细胞增殖的影响;膜联蛋白V/碘化丙锭(Annexin V/PI)双染流式细胞术检测沉默c-myc基因细胞凋亡水平;Transwell细胞迁移实验检测siRNA沉默c-myc基因对SW1990细胞迁移能力的影响.结果 靶向c-myc的特异性siRNA可以高效抑制人胰腺癌SW1990细胞c-myc基因表达,在mRNA水平(0.263±0.048)较转染对照质粒组(0.970±0.012)明显降低,c-myc蛋白质表达量及细胞增值率均较转染对照质粒组明显降低;转染后48 h c-myc siRNA组细胞凋亡率为(19.90±2.09)％,明显高于siRNA阴性对照组(4.93±0.25)％和空白对照组(4.40±0.34)％;Transwell实验结果示细胞穿膜数c-myc siRNA组[(34.3±1.2)个]较siRNA-NC组[(68.3±5.8)个]和空白组[(72.3±1.2)个]均明显降低.结论 c-myc siRNA能够显著抑制c-myc基因在人胰腺癌SW1990细胞中的表达,降低细胞的增殖和迁移能力,促进细胞的凋亡.     

耐药相关基因拓扑异构酶-Ⅱα在人胰腺癌细胞株中的表达

目的：探讨耐药相关基因拓扑异构酶－Ⅱα（TOPO－Ⅱα）在人胰腺癌细胞株中的表达。方法：通过逆转录－聚合酶链反应（RT－PCR）和Western-blot方法测定6株人胰腺癌细胞株（SW1990、Capan-2、AsPC-1、MiAPaCa-2、PANC－1、P3）中的TOPO－Ⅱα在基因和蛋白水平上的表达。结果：（1）TOPO－Ⅱα基因的表达以SW1990最高，PANC－1最低，与其他细胞株相比均具有显著性差异（P＜0．05）；（2）TOPO－Ⅱα蛋白的表达以SW1990、Capan-2较高，AsPC-1较低。SW1990，Capan-2与其余4株之间存在着显著性差异（P＜0．05），而SW1990与Capan-2之间无显著性差异（P＞0．05）；AsPC-1、MiAPaCa-2、PANC－1、P3之间均无显著性差异（P＞0．05）。结论：胰腺癌细胞对TOPO－Ⅱα抑制剂的低敏感性与TOPO－Ⅱα蛋白的低水平表达有关，TOPO－Ⅱα可能参与了胰腺癌对化疗的耐药。     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的抗胰腺癌细胞的作用

目的 ：探讨腺病毒介导的肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）基因对人胰腺癌株Panc-1细胞的抑制作用及其机制。方法 ：利用腺病毒载体Ad-TRAIL将人类TRAIL全长cDNA转染导入Panc-1细胞。分别利用RT-PCR和Western blot检测TRAIL在mRNA 水平及蛋白水平的表达。利用MTT法测定细胞增殖活性及TRAIL基因的旁观效应。利用流式细胞仪检测胰腺癌细胞的凋亡率，并用Western blot检测procaspase-8和procaspase-3蛋白的表达。结果 ：Panc-1细胞感染Ad-TRAIL腺病毒后，可稳定地高表达TRAIL。Ad-TRAIL能显著抑制Panc-1细胞的生长。高表达TRAIL的转染细胞能通过旁观效应导致未转染细胞的生长抑制。Ad-TRAIL实验组的凋亡率显著高于对照组（ P <0.01），且Ad-TRAIL能使procaspase-8和procaspase-3蛋白表达下降。结论 ：Ad-TRAIL对胰腺癌Panc-1细胞具有明显的抑制作用，其机制可能与促凋亡和旁观效应有关。     

AdKDR-CDglyTK融合基因系统治疗胰腺癌的实验研究

目的 观察腺病毒介导的KDR启动子驱动的CD/TK融合双自杀基因系统(以下简称为AdKDR-CDglyTK)对胰腺癌的治疗作用.方法 采用培养细胞移植法,将人胰腺癌细胞系Capan-2接种于裸鼠背部皮下,建立裸鼠人胰腺癌移植瘤模型.将20只裸鼠随机分为4组,每组5只.分组方法:Ⅰ组:注射重组腺病毒AdKDR-CDglyTK与前药5-FC与GCV;Ⅱ组:仅注射前药5-FC与GCV;Ⅲ组:仅注射重组腺病毒AdKDR-CDglyTKⅣ组:空白对照,不施加任何处理.重组腺病毒AdKDR-CDglyTK采用瘤体内多点注射,5-FC与GCV给药方法采用腹腔内注射的方法,观察各组小鼠的生存状况及肿瘤体积、瘤重、肿瘤生长抑制率、常规病理等指标;应用透射电镜观察细胞超微结构,用TUNEL法检测细胞凋亡率,比较观察各治疗组的治疗效果;并对各组的肿瘤组织行RTPCR的检测,以了解有无双自杀基因CDglyTK的表达.结果 第Ⅰ组裸鼠移植瘤的生长显著受到抑制,第Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组肿瘤生长情况无明显差别.第Ⅰ组肿瘤细胞凋亡指数为(34.20±4.60)%,较对照组显著增加(P=0.00).结论 AdKDR-CDglyTK联合前药5-FC及GCV对人胰腺癌Capan-2细胞具明显的抑制作用,并且诱导裸鼠体内人胰腺癌Capan-2细胞的凋亡.其可能的机制是通过下调凋亡抑制基因Bcl-2的表达.