血尿停颗粒对肾小球系膜细胞及细胞因子的影响

目的探讨中药血尿停颗粒治疗多种以系膜增生为主要病理改变的肾小球疾病的作用机理.方法利用小鼠肾小球系膜细胞(GMC)体外培养技术,采用血清药理学、药物与肝S9共育2种加药方式,观察细胞增殖及白细胞介素-6(IL-6)、内皮素(ET)和乳酸脱氢酶(LDH)含量的变化.结果2种加药方式均显示,血尿停颗粒具有抑制系膜细胞(MC)的增殖及IL-6、ET的产生的作用,细胞毒作用不明显.结论抑制MC增殖及抑制MC产生IL-6和ET可能是血尿停颗粒治疗多种以系膜增生为主要病理改变的肾小球疾病的作用机制之一.     

多球壳菌素对激活的大鼠肾小球系膜细胞增生的抑制作用

目的 探讨多球壳菌素（ISP-Ⅰ）对体外激活的大鼠肾小球系膜细胞（GMC）的调控作用。方法 分别采用MTT法及流式细胞术检测IL-1、IL-6对GMC的激活作用及ISP-Ⅰ对激活后GMC增生的抑制作用。结果 MTT法结果显示10U／ml IL-1及1000U／ml IL，6刺激GMC24、48h后，反映细胞增生程度的吸光度（A）值较对照组增高（P〈0．05）；激活的GMC在25～500μg／ml ISP-Ⅰ作用24、48h后的A值较对照组低（P〈0．05）。流式细胞术检测的结果与MTT法一致，即GMC被激活12、24、36h时的细胞增生率高于对照组（P〈0．05）；激活的GMC在100μg／ml ISP-Ⅰ作用下，细胞增生率低于对照组（P〈0．05）。结论 ISP-Ⅰ对激活后的GMC有明显抑制作用。     

滋肾清热活血方治疗大鼠系膜增生性肾炎的实验研究

观察滋肾清热活血方对系膜增生性肾炎（MsPGN）的疗效,并探讨其机制。采用SD大鼠系膜增生性肾小球肾炎模型,分正常对照组、模型对照组,治疗组对比研究。观察肾小球系膜区情况及各组大鼠肾小球培养上清中白细胞介素-1(IL-1)的活性等。结果：治疗组与模型对照组比较,肾小球系膜细胞（MC）的增生和系膜基质的积累明显受到抑制,系膜区致密电子物沉积显著减轻;肾小球培养上清中IL-1活性显著降低。提示：滋肾清热活血方能抑制MsPGN系膜区MC的增殖及基质的积累,其作用可能与抑制肾小球分泌的IL-1活性有关。     

芪蓟肾康颗粒总黄酮对大鼠肾小球系膜细胞外基质动态平衡的干预实验

目的 通过体外肾小球系膜细胞培养实验,明确芪蓟肾康颗粒总黄酮是否为组方的有效组分,探讨其作用机制.方法 运用血管紧张素Ⅱ诱导体外培养的肾小球系膜细胞,使细胞外基质增加,经芪蓟肾康颗粒总黄酮干预后,观察白细胞介素-6(IL-6)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、纤维粘连蛋白(FN)和Ⅳ型胶原(Col Ⅳ)的蛋白表达.结果 与Ang Ⅱ组比较芪蓟肾康颗粒总黄酮可降低IL-6、MCP-1的蛋白表达,FN和Ⅳ型胶原的含量也都分别降低(P＜0.01).结论 芪蓟肾康颗粒总黄酮可能是通过调节促炎症因子的表达,从而抑制细胞外基质过度积聚.     

中医药抑制系膜细胞增殖过程中对IL-6干预作用研究进展

系膜细胞（mesangial cell,MC）增殖是多种肾小球疾病发生、发展中的常见病理改变,且系膜细胞过度增殖是导致肾小球硬化、肾纤维化的核心病理环节。近年来很多研究表明,白介素-6（IL-6）在肾小球系膜细胞增殖过程中起着重要的作用。因此,抑制MC增殖与调控IL-6对MC的增殖具有重要的意义,但是单纯的通过拮抗IL-6干预MC增殖效果尚不理想,而中药能通过多成分、多途径、     

祛风通络方抑制NF-κB活化对脂多糖诱导的体外培养大鼠肾小球系膜细胞TGF-β1mRNA和IL-6mRNA表达的影响

目的 研究祛风通络方对脂多糖刺激大鼠肾小球系膜细胞表达炎性细胞因子TGF-β1、IL-6的影响及其作用机制.方法 采用体外培养大鼠系膜细胞和血清药理学方法,分为空白组,病理组,治疗组和阳性对照组.采用生物素核酸一蛋白结合凝胶迁移电泳分析法检测NF-KB的表达;RT-PCR检测TGF-β1mRNA和IL-6mRNA表达.结果 祛风通络方能够抑制脂多糖刺激肾小球系膜细胞中NF-KB活化,且在祛风通络方的作用下,TGF-β1mRNA和IL-6mRNA表达均呈不同程度减弱.结论 提示祛风通络方可能通过抑制NF-B活化,下调TGF-131mRNA和IL-6mRNA的表达达到减轻系膜细胞增殖,防止肾小球硬化的作用.这可能是祛风通络方治疗系膜增生性肾炎的机制之一.     

反义IL-6寡核苷酸对实验性系膜增生性肾炎IL-6、IL-6mRNA表达的影响

[目的]观察反义IL-6寡核苷酸经左肾动脉注入系膜增殖性肾小球肾炎SD大鼠后对肾小球系膜区IL-6 mRNA及蛋白水平的影响。[方法]30只SD大鼠接受葡萄球菌内毒素静脉注射、牛血清白蛋白隔日口服、完全弗氏佐剂及不完全弗氏佐剂皮下注射,并加做肝左叶切除术,制作系膜增生性肾小球肾炎动物模型。经FAM标记的反义寡核苷酸肾小球定位后,将IL-6反义、正义、及错义寡核苷酸由左肾动脉注入肾脏,并用右肾作对照,分别作常规组织病理,免疫组织化学及原位杂交检测。[结果]FAM标记的IL-6反义寡核苷酸经左肾动脉注入后1h,系膜区可检测到少量表达,6 h后肾系膜区表达明显增加。反义寡核苷酸治疗组的SD大鼠IL-6。IL-6 mRNA表达被显著抑制(P<0.01),但IL-6正义及错义寡核苷酸对IL-6、IL-6 mRNA表达无明显影响(P>0.05)。3组蛋白尿及病理改变均无显著差异(P>0.05)。[结论]脂质体介导的反义寡核苷酸(IL-6)能在肾小球表达。IL-6反义寡核苷酸治疗显著抑制系膜增生性肾炎SD大鼠IL-6、IL-6 mRNA表达,但IL-6正义、及错义寡核苷酸无此作用。     

西宁地区妊娠高血压疾病患者ET-1、IL-6水平测定及临床意义

目的:探讨西宁地区妊娠高血压疾病(Hypertensive Disorder Complicating Pregnancy,HD-CP)患者血中内皮素-1(ET-1)、白细胞介素6(IL-6)变化水平与妊娠高血压疾病发生、发展的关系。方法:选择2010年5月—2011年4月在我院住院的妊娠期高血压疾病(HDCP)患者45例,分为妊娠高血压组(GH)18例,轻度子痫前期组(MP)12例,重度子痫前期组(SP)13例,子痫组(EP)2例,同期正常妊娠健康妇女30例为对照组。采用酶联免疫吸附法检测血ET-1、IL-6浓度水平,将检测结果进行比较分析。结果:①妊娠高血压疾病组血ET-1为(75.26±19.82)pg/mL、IL-6为(194.4±64.51)pg/mL检测水平显著高于对照组[(61.8±11.50)pg/mL,(92.16±32.45)pg/mL],差异有显著的统计学意义(P<0.001);②血中ET-1、IL-6浓度水平随着妊娠高血压疾病病情加重逐渐升高。结论:妊娠高血压疾病患者ET-1、IL-6水平的检测,可以作为临床判断妊娠高血压疾病患者病情发展和预后的一项指标。     

血管紧张素-(1-7)和佛波醇酯拮抗血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠系膜细胞增殖及分泌

目的：探讨血管紧张素-(1-7)[Ang-(1-7)]及佛波醇酯(PMA)在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导大鼠肾小球系膜细胞(GMC)增殖和分泌反应中的作用。方法：在AngⅡ诱导培养的大鼠系膜细胞中，应用Ang-(1-7)及PMA，通过测定大鼠GMCDNA、蛋白质合成、细胞数目及Ⅲ型前胶原(PcⅢ)和透明质酸(HA)等指标，观察大鼠GMC增殖和分泌情况。结果：Ang-(1-7)及PMA均能抑制AngⅡ诱导培养的大鼠GMC的DNA及蛋白质合成，细胞数目的增多及PcⅢ和HA的分泌，Ang-(1-7)的抑制作用更明显。结论：Ang-(1-7)及PMA都能抑制AngⅡ诱导的大鼠GMC增殖和分泌，Ang-(1-7)的拮抗作用更明显。     

TSP-1 promotes glomerular mesangial cell proliferation and extracellular matrix secretion in Thy-1 nephritis rats

The proliferation of glomerular mesangial cells (GMC) and secretion of the extracellular matrix (ECM) in rat with Thy-1 nephritis (Thy-1N) resembling human mesangioproliferative glomerulonephritis have been explored for many years; however, the molecular mechanisms of GMC proliferation and ECM production remain unclear. Our previous studies have demonstrated that the thrombospondin-1 (TSP-1) gene was involved in mediating rat GMC proliferation and ECM synthesis induced by sublytic C5b-9 in vitro. In the pre...     

KLF4调控sublytic C5b-9诱导肾小球系膜细胞IL-23基因启动与表达的作用

目的： 研究转录因子KLF4调控sublytic C5b-9刺激肾小球系膜细胞(glomerular mesangial cell, GMC)诱导促炎因子IL-23生成的作用。 方法：构建KLF4的短发夹状小干扰RNA(shKLF4)及过表达(pIRES2-KLF4)质粒。将pIRES2-KLF4转染GMC或将shKLF4 转染GMC后再行sublytic C5b-9刺激,用qPCR、Western blot(WB)和ELISA法检查沉默或过表达KLF4基因后对GMC产生IL-23的影响。此外,构建IL-23基因近端启动子全长质粒,行荧光素酶报告基因实验测定沉默或过表达KLF4基因后对IL-23启动子活性的影响。结果：(1)Sublytic C5b-9刺激GMC后能明显提高IL-23的生成,而沉默KLF4基因后,由sublytic C5b-9诱导GMC产生的IL-23明显减少,但过表达KLF4后IL-23的水平则显著增加。(2)Sublytic C5b-9刺激GMC能显著上调IL-23的启动子活性,而沉默KLF4基因后由sublytic C5b-9诱导的IL-23启动子活性明显降低,但过表达KLF4后又能显著升高IL-23的启动子活性。结论：转录因子KLF4确能调控sublytic C5b-9刺激 GMC 诱导IL-23的基因启动与表达。     

大鼠野生型TRAF6基因和TRAF6 shRNA表达质粒的构建及鉴定

目的:构建大鼠野生型肿瘤坏死因子受体相关因子6(tumor necrosis factor receptor-associated factor 6,TRAF6)基因及其特异性短发卡状小干涉RNA(shRNA)真核表达质粒,并观察其在大鼠肾小球系膜细胞(GMC)中过表达和沉默TRAF6基因的情况?方法:用DNA重组技术将针对大鼠TRAF6基因的CDS区序列(加HA标签)和针对其不同位点所设计的3种shRNA序列分别克隆到pcDNA3.1及pGenesil-1/GFP真核表达质粒中?在酶切鉴定及序列测定正确后,用NeonTM电转仪,将上述质粒分别转染入培养的大鼠GMC中,然后用Western blot检查HA-TRAF6融合蛋白的表达情况,同时筛选最有效的TRAF6 shRNA?结果:限制性酶切及核酸序列分析确证,上述TRAF6基因过表达和shRNA表达质粒均构建成功?Western blot显示,构建的pcDNA3.1-HA-TRAF6质粒能在大鼠GMC中表达,且TRAF6 shRNA-1具有最佳的沉默效率?结论:本实验成功构建了大鼠野生型TRAF6真核表达质粒及其特异性的shRNA表达载体,这为今后进一步研究TRAF6基因的生物学功能提供了实验基础?     

大鼠野生型Egr-1基因及Egr-1 shRNA真核表达质粒的构建及鉴定

目的:构建大鼠野生型早期生长应答基因-1(early growth responsegene-1,Egr-1)及其特异性短发夹状小干涉RNA(shRNA)真核表达质粒,并观察Egr-1在大鼠肾小球系膜细胞(GMC)中过表达及沉默Egr-1基因的情况。方法:用DNA重组技术将针对大鼠Egr-1基因的CDS区序列和针对其不同位点所设计的3对shRNA序列分别克隆到真核表达质粒pcDNA3.1-myc-his-A和pGCsi.U6.neo.GFP中。经酶切分析及序列测定正确后,用GenEscortTMⅢ转染试剂将上述两种质粒分别转染至大鼠GMC中,随后进行Western blot检测Egr-1蛋白的表达及筛选最佳沉默效率的shRNA。结果:限制性内切酶酶切及核酸序列分析证明,两种重组质粒均构建正确。Westernblot分析表明,构建的pcDNA3.1/Egr-1质粒在大鼠GMC中能够表达;Egr-1shRNA-2具有最佳沉默效率。结论:成功构建了大鼠野生型Egr-1基因和其特异性的shRNA真核表达质粒,为进一步研究Egr-1基因的生物学功能提供了必要的实验工具。     

黄芪和雷公藤多甙对大鼠肾小球系膜细胞增殖及分泌IL-6影响的比较

[目的]观察比较黄芪和雷公藤多甙对’肾小球系膜细胞增殖及其分泌白细胞介素6(IL-6)水平的影响【方法】应用细胞培养技术进行肾小球系膜细胞培养,采用血清药理学方法,制备黄芪舍药血清、雷公藤多甙含药血清．并分为低、中、高3个剂量梯度(5％、10％、20％),观察含药血清对过度增殖状态下肾小球系膜细胞增殖和分泌IL-6的影响．应用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定系膜细胞增殖,酶标记免疫吸附分析法(ELISA)测定细胞IL-6含量。【结果】黄芪、雷公藤多甙含药血清各剂量组均可抑制大鼠肾小球系膜细胞的增殖,并能抑制肾小球系膜细胞产生IL-6,其抑制作用呈剂量效应关系,其中尤以雷公藤多甙高、中剂量组及黄芪高剂量组作用显著。【结论】在体外培养的肾小球系膜细胞处于过度增殖的状态下．黄芪能抑制肾小球系膜细胞增殖及分泌IL-6,其作用与雷公藤相仿,两药合用可减少雷公藤用量,可能具有增效减毒的作用。     

乙型肝炎病毒X基因转染大鼠系膜细胞对细胞增殖及IL-1β,IL-6表达的影响

目的 探讨乙型肝炎病毒(HBV)X基因表达的蛋白(HBx)对体外培养的大鼠系膜细胞表达白细胞介素(1L)-1β、IL-6及细胞增殖的影响.方法 将HBV X基因扩增,与PCI-neo载体连接,构成PCI-neo-X真核表达载体.采用脂质体法将PCI-neo-X转染给大鼠系膜细胞,Western blot测定HBx的表达;以半定量反转录PCR测定体外培养大鼠系膜细胞IL-1βmRNA、IL-6mRNA袁达;MTT法测定细胞增殖.结果 转染PCI-neo-X的系膜细胞,HBx在36和48 h表达明显.同时IL-1βmRNA、IL-6mRNA表达量较未转染和转染空载体者明显增高.细胞增殖在36和48 h最明显,与未转染和转染空载体组有显著差异.结论 HBx可诱导大鼠系膜细胞高表达IL-1βmRNA和IL-6mRNA,促进系膜细胞增殖.HBx对系膜细胞的增殖作用可能与IL-1β、IL-6的高表达有关.     

EGCG对高糖诱导的大鼠系膜细胞增殖及炎症因子调控的影响

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对高糖诱导的大鼠系膜细胞增殖及炎症因子（MCP-1和ICAM-1）分泌的影响。方法通过体外培养的大鼠系膜细胞进行研究。设立低糖对照组（NG）和高糖组（HG、E100、E200、E400,为分别含EGCG0、100、200、400μg·L^-1,分别培养12、24、48h。CCK细胞计数法检测不同浓度EGCG作用下大鼠系膜细胞的OD值,判断细胞增殖情况。采用ELISA方法检测培养细胞上清中MCP-1和ICAM-1蛋白浓度。结果EGCG能抑制高糖时系膜细胞的增殖活性,其抑制作用呈剂量和时间依赖的方式。系膜细胞处于高糖环境时,MCP-1和ICAM-1蛋白表达上调,低浓度的EGCG对MCP-1和ICAM-1蛋白的抑制效果不明显,高浓度的EGCG能明显抑制MCP-1和ICAM-1的分泌。结论在体外高糖条件下,大鼠系膜细胞在48h内以增殖为主,一定浓度的EGCG可抑制其增殖。EGCG可在蛋白水平抑制高糖刺激的大鼠系膜细胞MCP-1和ICAM-1的分泌。