穿心莲水提取物的抗Ⅰ型单纯疱疹病毒作用

目的观察穿心莲水提取物体外抗Ⅰ型单纯疱疹病毒(HSV-Ⅰ)的作用。方法以无环鸟苷(ACV)为阳性对照,将不同稀释浓度的穿心莲水提取物在兔肾细胞上进行治疗、预防及中和实验,通过观察细胞病变(CPE),观察穿心莲水提取物抗HSV-Ⅰ的作用效果。结果穿心莲水提取物半数毒性浓度(TC50)为2.50g/L,有效抑制浓度为0.63g/L,对Ⅰ型疱疹病毒的感染有抑制病毒生长和对病毒颗粒有直接杀伤作用。结论穿心莲水提取物体外有明显的抗Ⅰ型疱疹病毒的作用。     

扇贝糖胺聚糖对Ⅰ型单纯疱疹病毒的抑制作用

目的 研究扇贝裙边糖胺聚糖(SS-GAG)不同浓度及不同作用时间对Ⅰ型单纯疱疹病毒(HSV-Ⅰ)的抑制作用.方法 以HSV-Ⅰ SM44株感染非洲绿猴肾细胞(Vero细胞),观察病毒感染后的细胞变性反应(CPE),并检测不同浓度SS-GAG及不同作用时间对HSV-Ⅰ复制的抑制作用.结果 与病毒对照组相比,SS-GAG各浓度组(100、50、25 mg/L)能有效保护经HSV-Ⅰ感染的Vero细胞,使细胞活性增强(F=27.54,P<0.01);并减弱HSV-Ⅰ导致的病变效应,抑制病毒的复制,并且随着药物作用时间的延长,药物抗病毒效应逐渐增加, 最高达88.64%.结论 SS-GAG体外具有明显的抗HSV-1病毒作用.     

猪脾细胞干扰素在细胞中对疱疹病毒的抑制作用

目的:体外评价猪脾细胞干扰素抗疱疹病毒的活性,为疱疹病毒感染寻找新的治疗手段。方法:主要通过观察细胞病变效应(CPE)、噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞存活率和病毒抑制率来评价猪脾细胞干扰素体外对单纯疱疹病毒1型(HSV-1)和2型(HSV-2)的抑制作用。结果:猪脾细胞干扰素对HeLa细胞的半数毒性浓度(TC50)为535.3 IU/ml,对HSV-1和HSV-2的半数有效浓度(IC50)分别为24.6×103IU/L和25.9×103IU/L,治疗指数(TI)为21.8和20.7;其抗病毒效果与人白细胞干扰素及喷昔洛韦一致。结论:猪脾细胞干扰素具有很好的体外抗疱疹病毒作用。     

微量元素硒体外抗单纯疱疹病毒1型活性的初步研究

初步研究微量元素硒体外抗单纯疱疹病毒1型(HSV-1)的活性及可能的机制。方法以四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定硒化合物SeO2的最终作用的质量浓度和采用终点滴定法测定HSV-1的感染滴度,并通过观察细胞病变效应和细胞凋亡情况初步研究硒化合物SeO2体外抗HSV-1的活性。结果当SeO2药物质量浓度为0.382mg.L-1时,SeO2能明显地抑制病毒感染Vero细胞病变(CPE)以及促进细胞凋亡,其作用具有浓度依赖性;当SeO2药物质量浓度超过2.034mg.L-1时,细胞存活率下降。结论微量元素硒具有体外抗HSV-1的活性,且可通过抑制细胞病变和促进细胞凋亡而发挥作用。     

黄芪水煎液抗Ⅰ型单纯疱疹病毒的实验研究

目的 研究黄芪抗Ⅰ型单纯疱疹病毒(HSV-Ⅰ)的作用。方法 在人胚肺二倍体细胞系统中,采用对病毒所致细胞病变的抑制实验,观察黄芪水煎液抗HSV-I的药效。结果 黄芪水煎液的半数抑制浓度为0.98µg/ml,最小有效浓度为1.95µg/ml,治疗指数为128。结论 黄芪有较显著的抗HSV-Ⅰ作用,且对细胞毒性低。     

荔枝核提取物体外抗病毒活性及其机制研究

目的:研究荔枝核提取物(LSE)的体外抗病毒活性,并初步研究其抗病毒的作用机制.方法:采用细胞病变效应(CPE)减少法和MTY法检测LSE对柯萨奇B3病毒(Cox B3)、呼吸道合胞病毒(RSV)以及单纯疱疹病毒1型和2型(HSV-1和HSV-2)的体外抗病毒活性,并通过观察直接杀病毒作用、对宿主细胞的保护作用、抑制病毒吸附作用以及在病毒感染后不同时间加入实验,对LSE抑制HSV-1的作用机制进行探讨.结果:LSE有一定的细胞毒性,它不能抑制Cox B3在宿主细胞内的增殖,但对RSV、HSV-1和HSV-2表现出明显的浓度依赖性抗病毒活性,其IC<,50>值分别为32.3,27.9和20.4μg/mL.该提取物预培养Vero细胞后不能保护细胞免受HSV-1感染,但它对HSV-1有直接的灭活作用.LSE可影响HSV-1对Vero细胞的吸附,当浓度为31.3μg/mL时对病毒吸附的抑制率为51%.ISE对HSV-1在细胞内的增殖表现出很强的抑制活性.结论:LSE具有较强的体外抗RSV和HSV活性,它对HSV的抑制作用可能通过多种方式和途径实现.     

藏药甘青乌头生物碱抗单纯疱疹病毒Ⅱ型体内外作用

目的探讨藏药甘青乌头脂溶性生物碱（ALA）和水溶性生物碱（AWA）抗单纯疱疹病毒Ⅱ型（HSV-2）的作用和机制。方法四甲基偶氮唑蓝法测定细胞毒性,细胞病变作用法和蚀斑法测定甘青乌头生物碱体外抗HSV-2活性,以半数有效浓度和治疗指数为评价指标;荧光定量聚合酶链式反应法（FQ-PCR）和蚀斑法考察ALA和AWA体外抗HSV-2作用机制。用HSV-2建立小鼠脑炎模型,对AWA体内抗HSV-2的活性进行评价。结果 ALA和AWA对Vero细胞的半数中毒浓度分别为3.57和7.87mg/mL。ALA和AWA半数有效质量浓度分别为4.99和2.81 mg/mL,治疗指数分别为0.72和2.80。ALA和AWA均能直接灭活HSV-2,能够显著抑制HSV-2的感染性。ALA对吸附到非洲绿猴肾细胞的HSV-2没有抑制作用,能微弱抑制HSV-2大分子的增殖,对HSV-2 DNA的复制没有作用。AWA能够抑制HSV-2吸附,抑制HSV-2大分子的增殖,抑制HSV-2 DNA的合成,抑制倍数达10~2。AWA对小鼠的半数中毒质量浓度为0.28mg/kg。AWA延长了小鼠的平均存活时间,对小鼠的死亡显示出10%的保护率。结论 AWA抗HSV-2的活性大于ALA,ALA主要通过直接灭活HSV-2,AWA通过抑制HSV-2复制循环的各个环节起作用。     

GALV致融性糖蛋白转导肺腺癌细胞的抗肿瘤实验研究

目的 探讨特异性启动子控制下嗜肿瘤Ⅰ型单纯疱疹病毒(HSV-Ⅰ)载体介导的长臂猿白血病病毒致融性外膜糖蛋白(GALV.fus)基因转导肺腺癌细胞的抗肿瘤作用.方法 将重组HSV-Ⅰ载体质粒通过脂质体导入非洲绿猴肾细胞(Vero)中包装制备重组HSV-Ⅰ病毒,用来转染肺腺癌细胞(A549)和正常人胚胎成纤维细胞(HFL-Ⅰ GNHu 5)及裸鼠皮下肺癌转移模型,观察其体外及体内抗肿瘤作用及细胞毒性作用.统计学方法采用t检验.结果 成功包装重组HSV-Ⅰ病毒, BALB/c 裸鼠皮下接种A549细胞2周后均有肿瘤生长,成瘤率为100%.重组单纯疱疹病毒能特异性转染A549细胞,治疗组及对照组细胞存活率分别为20%及70%,病毒对A549细胞有明显的杀灭作用且对裸鼠皮下肺癌转移灶抑制明显.结论 GALV.fus基因对肺癌细胞有强效的抗肿瘤作用,为临床肺癌治疗探索出一种新型基因治疗方法.     

6-O-取代阿昔洛韦衍生物的合成及其抗病毒活性

目的:通过对阿昔洛韦分子中碱基的结构修饰,设计并合成6-O-取代阿昔洛韦衍生物,并初步测定它们的抗病毒活性.方法:以阿昔洛韦为先导化合物,合成一系列6-O-取代阿昔洛韦衍生物,并以阿昔洛韦为阳性对照对猴肾细胞Vero进行体外抗HSV-Ⅰ和HSV-Ⅱ病毒活性测定.结果:合成了6-O-取代阿昔洛韦衍生物10个,结构均经过元素分析或MS确认.部分目标化合物具有一定的体外抗HSV-Ⅰ和HSV-Ⅱ病毒活性(MIC分别为25、50 ng·L-1),但较阿昔洛韦(MIC为2 ng·L-1)作用弱.结论:所合成的目标化合物虽然可能在体内更易于吸收,但体外初步抗病毒活性实验结果表明作用较弱.     

中药连翘有效成分体外抗单纯疱疹病毒的实验研究

目的：研究中药连翘不同部位的有效成分抗单纯疱疹病毒的作用。方法：通过细胞培养和活细胞染色计数法(MTT),观察研究中药连翘6、7、8、9号部位的有效成分在Hep—2细胞上,抗单纯疱疹病毒Ⅰ型的作用。结果：连翘四个部位的有效成分均有不同程度的抑制病毒复制作用,其TD50分别为23．89、12．06、30．76、39．79μg/ml;ED50分别为8．63、2．65、3．50、8．90mg／ml;TI分别为2．76、4．55、8．79、4．47μg/ml。结论：中药连翘不同部位的有效成分均有抑制单纯疱疹在Hep-2细胞内的复制作用,抑制作用的大小与有效成分的部位有关。     

黄芪不同提取部分抗Ⅰ型和Ⅱ型单纯疱疹病毒的实验研究

本文报道8种黄芪提取部分即AⅠ、AⅢ,AⅣ、AⅦ、AⅧ、AⅨ、AⅩ在VeroE_6细胞中对Ⅰ型和Ⅱ型单纯疱疹病毒(HSV-1和HSV-2)的作用。细胞病变(CPE)抑制试验结果表明,AⅠ、AⅥ和AⅦ对HSV-1有抑制作用,AⅠ和AⅥ对HSV-2有抑制作用。AⅥ在体外不能直接灭活HSV-1,但能抑制已感染细胞的病毒复制。     

荔枝核黄酮类化合物对小鼠Ⅰ型单纯疱疹病毒性脑炎的作用及机制

目的 探讨荔枝核黄酮类化合物(FLCS)对体外抗Ⅰ型单纯疱疹病毒(HSV-1)的作用及其可能机制,进一步验证该药对小鼠病毒性脑炎的治疗效果,从而为HSV-1感染的治疗提供新的手段.方法 采用微量细胞培养法和MTT比色法观察FLCS对HSV-1感染细胞的保护作用,通过检测细胞病变效应(CPE)以及病毒抑制率确定该药体外抗病毒活性.进一步利用小鼠病毒性脑炎模型,设计治疗方案(FLCS 3个剂量组,疗程5 d),观察小鼠生存率、平均存活时间、组织中病毒滴度,评价FLCS对小鼠病毒性脑炎的治疗作用.结果 FLCS不仅对HSV-1有直接灭活作用,而且还可阻止HSV-1的生物合成,表现为各剂量组FLCS通过不同方式和病毒作用后,HSV-1感染细胞的PE则随药物浓度的增加而减少,病毒抑制率明显升高.FLCS对HSV-1直接灭活作用和抑制生物合成作用的细胞半数抑制有效浓度(IC50)分别为32.76μg/mL和12.72μg/mL,相应作用方式的治疗指数(TI)分别为7.3和18.8.但是FLCS不能阻止HSV-1吸附细胞,表现为各剂量组FLCS作用细胞后,HSV-1再感染细胞,均出现典型CPE.对于小鼠来说,其体征大多数都会从厌食、呆滞以及嗜睡等症状,逐渐转变为颤抖、抖毛、背弓、抽搐、打转、体重下降等神经系统感染症状,直至死亡,FLCS治疗组小鼠组织病变程度减轻.结论 FLCS虽不能阻止病毒吸附与穿入易感细胞,但能直接杀灭病毒以及抑制HSV-1的生物合成或(和)以后环节发挥其抗病毒作用.FLCS能降低HSV-1感染小鼠死亡率,延长平均生存期,加快组织中病毒的清除,缓解小鼠脑炎症状.     

荔枝核黄酮体外抗单纯疱疹病毒的作用

目的:探讨荔枝核黄酮类提取物(FLC)体外抗单纯疱疹病毒1型(HSV-1)的作用。方法:以阿昔洛韦为阳性药物对照,以不同剂量的荔枝核黄酮类提取物分别作用于HSV-1病毒复制周期的各个环节分成3个实验组,以病毒半数感染量(TCID50)、细胞病变效应(CPE)、MTT染色细胞存活率(MTT法)作为评价指标,判断的FLC抗病毒效果。结果:FLC对HEp-2细胞的半数细胞毒浓度(TC50)为239.25 mg/L,FLC对HSV-1病毒有直接杀伤作用和抗HSV-1生物合成作用,其直接杀伤HSV-1的半数有效浓度(IC50)为32.76 mg/L,治疗指数(TI)为7.30,抗HSV-1生物合成作用的半数有效浓度(IC50)为12.72 mg/L,治疗指数(TI)为18.81。结论:荔枝核黄酮类化合物在HEp-2细胞中对单纯疱疹病毒1型有明显抑制作用。     

白藜芦醇与黄芪总皂甙合用抗Ⅱ型人疱疹病毒药效分析

目的:为了探讨虎杖与黄芪组方抗HSV时,其有效成分白藜芦醇与总皂苷之间的相互作用对药效的影响.方法:以阿昔洛韦(ACv)为阳性对照,采用空斑减数实验,用中和作用原理对虎杖白藜芦醇与黄芪总皂甙合用抗HSV-2 333株的药效进行了分析.结果:在Hep-2细胞系统中,ACV对HSV-2 333株增殖抑制的ED50为10.85ug/ml.当白藜芦醇与总皂甙以1(Dm白藜芦醇/1(Dm)总皂甙的比例合用时,对HSV-2 333株直接杀灭、感染阻断、增殖抑制的ED50依次为0.41ug/ml,0.66ug/ml,0.86 ug/ml;合用指数(Combination Index,CI)均＜1.0,P＜0.0005,说明这一合用比药效最强,协同作用最明显.结论:ACV对HSV-2 333株增殖抑制的治疗指数(Treatment Index,TI)为100.1(Dm)白藜芦醇/1(Dm)总皂甙对HSV-2 333株直接杀灭、感染阻断、增殖抑制的TIs为248.3,154.2,118.4,为最佳合用比.     

EGFR反义cDNA联合p16β干预喉癌细胞信号转导的实验研究

目的 探讨表皮生长因子受体(EGFR)反义cDNA联合野生型p16β在体外对人喉癌Hep-2细胞信号转导的干预作用.方法 将已纯化的EGFR反义cDNA重组腺病毒和p16β在体外转染Hep-2喉癌细胞,采用MTT实验、流式细胞术(FCM)、免疫组化、Western blot等方法检测Hep-2细胞增殖抑制作用;进行细胞周期、DNA含量、细胞凋亡率的定量分析;检测重组腺病毒对Hep-2细胞EGFR蛋白表达的抑制和p16β蛋白过表达.结果 反义EGFR mRNA表达重组腺病毒能有效抑制Hep-2细胞的增殖活性;超过77.7%以上的被转染Hep-2细胞被阻滞在G0/G1期;转染细胞的凋亡率升高;同时出现EGFR蛋白表达的抑制和p16β蛋白的过表达.当p16β重组腺病毒和EGFR反义cDNA重组腺病毒联合转染Hep-2细胞后其抑制Hep-2细胞增殖活性、细胞周期阻滞、抑制细胞调亡作用明细增强.结论 p16β和EGFR反义cDNA能有效地干预人喉癌Hep-2细胞的信号转导机制,从而达到抑制Hep-2细胞增殖、诱导细胞凋亡的作用.     

大黄提取液体外抗单纯疱疹病毒Ⅱ型作用的实验研究

目的:研究大黄提取液在体外抗单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-Ⅱ)的作用。方法:用hela细胞做体外培养实验,以不同剂量的大黄提取液作用于病毒复制周期的各个阶段,以病毒半数感染量(TCID50)、细胞病变(CPE)、MTT染色细胞保护率(MTT法)作为评价指标,判断药效,对大黄提取液抗HSV-Ⅱ作用进行评价。结果:大黄提取液对hela细胞的增殖无明显作用,且对hela细胞毒性极低,对病毒有直接灭活作用;可干扰病毒向宿主细胞吸附,还可有效抑制病毒复制。结论:大黄提取液在体外对HSV-Ⅱ有显著的抑制和杀伤作用,并且有效抑制病毒复制。     

单纯疱疹病毒介导GALV致融性糖蛋白对人肺腺癌裸鼠移植瘤的抑制作用

目的 探讨Ⅰ型单纯疱疹病毒(HSV-Ⅰ)载体介导的长臂猿白血病病毒致融性外膜糖蛋白(GALV.fus)基因转导肺腺癌细胞的体内抗肿瘤作用及建立人肺腺癌皮下瘤裸鼠模型的最佳方案.方法 将重组HSV-Ⅰ载体质粒通过脂质体导入非洲绿猴肾细胞(Vero)中包装制备重组HSV-Ⅰ病毒,通过细胞悬液接种或组织块移植法构建人肺腺癌细胞(A549)裸鼠皮下移植瘤模型,将重组HSV-Ⅰ病毒注入裸鼠肺癌瘤体中观察其体内抗肿瘤作用.结果 成功包装重组HSV-Ⅰ病毒,病毒对肺癌细胞有明显的杀灭作用且对裸鼠皮下肺癌转移灶抑制明显.结论 细胞悬液接种和套管针组织块接种均为建立裸鼠荷瘤模型理想方法;GALV.fus基因对肺癌细胞有强效的抗肿瘤作用,明显抑制人肺腺癌裸鼠移植瘤的生长,为临床肺癌治疗探索出一种新型基因治疗方法.     

蛋清溶菌酶对人单纯疱疹病毒Ⅰ型抑制作用的实验研究

目的:观察蛋清溶菌酶(HEWL)对人单纯疱疹病毒Ⅰ型(hHSV-1)的抑制作用.方法:以HSV-1的敏感细胞BHK-21为实验细胞模型,以更昔洛韦为阳性对照药,以0.5-烷基磺酸钠(SDS)为阻断剂,采用细胞病变法(CPE)判定溶菌酶对hHSV-1的抑制效果.结果:HEWL对细胞的最大无毒浓度(TC0)和半数中毒浓度(TC50)均>1 000μg·mL-1,HEWL对hHSV-1抑制作用的最小有效浓度(MIC)为104.17 μg·mL-1,半数有效浓度(IC50)为46.88μg·mL-1,治疗指数(TI)为10.67.在平行对照试验中,更昔洛韦对BHK-21细胞的TC0和TC50均>500 μg·mL-1.更昔洛韦对hHSV-1抑制作用的MIC为7.81μg·mL-1,IC50为3.91 μg·mL-1,TI为64.0.5%SDS完全阻断了HEWL的抗病毒能力.结论:蛋清溶菌酶对HSV-1有较明显的抑制作用,作用强度与溶菌酶的浓度相关.     

贻贝黏蛋白体外抗单纯疱疹病毒-2型的作用

目的 探讨贻贝黏蛋白(MAP)体外抗单纯疱疹病毒-2型(HSV-2)的作用。方法 采用细胞病变效应(CPE)观察细胞形态结合MTT法检测MAP对Vero细胞形态的影响和毒性。通过CPE检测MAP对HSV-2的直接影响以及对病毒感染的抑制作用。结果 细胞毒性试验结果显示,MAP在125μg/ml及以下浓度对Vero细胞形态和活性无明显影响。MAP对HSV-2活性具有直接影响作用,其半数有效浓度(EC₅₀)为54.88μg/ml,与溶媒对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01)。MAP对HSV-2感染后引起的细胞病变效应亦有一定的抑制作用,其EC₅₀在125μg/ml以上,与溶媒对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01)。结论 MAP对HSV-2感染具有一定的抑制作用,提示其在抗HSV活性方面具有进一步研究的潜力。     

不同构型人α防御素-5多肽抗HSV-2感染的实验研究

目的探讨不同构型人α防御素-5(HD-5)多肽对单纯疱疹Ⅱ型病毒(HSV-2)感染的抑制作用,分析不同构型HD-5抗HSV-2活性的差异。方法 HSV-2病毒感染体外培养的绿猴肾细胞(Vero细胞),分别给予100μg/mL的HD-5/N、HD-5/Acm和HD-5/A肽处理,72h后观察细胞病变效应(CPE),并通过CCK-8法测定细胞保护率;建立HSV-2感染豚鼠生殖器实验动物模型,按照症状评分方法对不同构型HD-5多肽的体内抗HSV-2病毒感染作用进行分析。结果 HD-5/N与HD-5/Acm均能显著抑制HSV-2感染体外培养的Vero细胞(P<0.01),而HD-5/A的抗病毒作用不明显;阴道内给予HD-5/N多肽12.5μg.kg-1.d-1治疗8d能显著改善HSV-2感染豚鼠的生存状况,提高动物30d存活率(P<0.01),外阴感染症状评分显著降低(P<0.01),而HD-5/Acm治疗效果并不明显。结论天然结构HD-5多肽(HD-5/N)在体外或豚鼠阴道内应用均可发挥显著抗HSV-2感染的作用,二硫键缺失会显著影响HD-5多肽的体内抗病毒效果。