芍药苷调控环磷酸腺苷 /蛋白激酶 A/环磷酸腺苷反应元件结合蛋白通路对脑卒中大鼠的影响

目的探讨芍药苷调控环磷酸腺苷( cAMP)/蛋白激酶 A(PKA)/环磷酸腺苷反应元件结合蛋白( CREB)通路对脑卒中大鼠的影响。方法该研究起止时间为 2019年 12月至 2020年 12月。 40只 SD大鼠按随机数字表法分为假手术组、模型组、药苷组(灌胃 30 mg/kg芍药苷)、 H89组［腹腔注射 1 mg/kg H89(PKA抑制剂)］、芍药苷 +H89组(灌胃芍药苷后腹腔注射 H89)芍,除假手术组仅进行动脉分离,其余各组均构建缺血性脑卒中模型,模型构建成功后进行药物干预,持续给药 2周,模型组、假手术组以生理盐水代替。根据 Zea Longa评分法对各组大鼠进行神经功能缺损评分, Morris水迷宫测定大鼠记忆行为学能力,酶联免疫吸附测定( ELISA)试剂盒检测大鼠血清炎性因子水平,苏木精 -伊红( HE)染色观察大鼠脑组织病理学变化,蛋白质印迹法检测大鼠脑组织 cAMP/PKA/CREB通路相关蛋白表达。结果与假手术组相比,模型组脑组织受损严重,大鼠神经功能缺损评分、血清中炎性因子水平显著升高( P<0.05)记忆行为学能力、脑组织中 cAMP［( 0.31±0.05)比( 1.03±0.23)］、 PKA［( 0.30±     

海马注射脑源性神经营养因子对大鼠脑卒中后抑郁的作用及机制

目的观察海马内注射脑源性神经营养因子( BDNF)对大鼠脑卒中后抑郁的改善作用,并探究其对环磷酸腺苷 /环磷酸腺苷反应元件结合蛋白 /脑源性神经营养因子( cAMP/CREB/BDNF)信号通路的影响。方法 2022年 1―3月选择 SPF级 SD雄性大鼠 95只,采用随机数字表法选择 80只制备脑卒中后抑郁( PSD)模型,余 15只为假手术组。将 PSD造模成功的 64只大鼠采用随机数字表法分为 PSD组、无序干扰组、 BDNF干预组、激活剂组和抑制剂组。造模成功 2h后,给予无序干扰组和 BDNF组大鼠分别注射含无序干扰序列的慢病毒载体和含 BDNF的慢病毒载体,激活剂组和抑制剂组分别给予皮下注射 for skolin和 SQ22536,假手术组和 PSD组注射等量含 5%二甲基亚砜的生理盐水。采用糖水实验和敞箱实验评估大鼠抑郁情况,采用实时荧光定量逆转录 PCR(RT-qPCR)检测各组海马组织 BDNF相对表达水平,苏木精 -伊红( HE)染色观察海马组织病理学变化,测定各组大鼠海马组织去甲肾上腺素( NE)和 5-羟色胺( 5-HT)含量,蛋白质印迹法( Western blotting)检测海马区 cAMP、pCREB、BDNF蛋白表达水平。结果与假手术组比较, PSD组、无序干扰组、 BDNF组糖水消耗量［( 42.69±2.18)%、(42.84±2.29)%、(71.66±3.04)%比( 90.34±3.28)%］、方格穿行次数［(13.72±0.97)次、(13.98±0.75)次、(23.17±1.47)次比( 39.66±1.45)次］和竖起修饰次数［( 9.14±0.45)次、(9.52±0.53)次、(12.96±0.75)次比( 18.65±1.12)次］减少, BDNF相对表达量( 0.62±0.13、0.69±0.09、1.68±0.16比 2.62±0.32)降低,且 BDNF组高于 PSD组和无序干扰组( P<0.05); HE染色结果显示, PSD组和无序干扰组海马神经元细胞形态相似,数目减少,排列紊乱; BDNF组海马神经元细胞数目增加,排列基本紧密,形态基本规则;假手术组比较, PSD组、无序干扰组、 BDNF组 NE、5-HT水平降低,且 BDNF组高于 PSD组和无序干扰组( P<0.05)。与假手术组与比较, PSD组、无序干扰组、 BDNF组、抑制剂组和激活剂组 cAMP、pCREB、BDNF水平降低,且 BDNF组和激活剂组 >PSD组、无序干扰组和抑制剂组( P<0.05)。结论海马内注射 BDNF对大鼠 PSD症状、海马神经元病理均有改善作用,其作用机制可能与激活 cAMP/CREB/BDNF通路有关。     

五味子乙素对慢性应激抑郁大鼠海马BDNF/TrkB/CREB通路的影响

目的 研究五味子乙素对慢性应激抑郁大鼠海马脑源性神经营养因子（BDNF）/酪氨酸激酶B（TrkB）/环磷腺苷效应元件结合蛋白（CREB）信号通路的影响。方法 40只SD大鼠随机选择10只作为对照组,其余大鼠采用慢性不可预知温和应激（chronic unpredictable mild stress,CUMS）结合孤养制备抑郁症模型,造模结束后随机分为3组：模型组、盐酸氟西汀（3 mg·kg^-1）组、五味子乙素（5 mg·kg^-1）组,每天ig给药1次,连续8周。分别于造模前、造模后及给药后进行旷场、悬尾、强迫游泳行为学实验;通过苏木素-伊红（HE）染色观察大鼠海马形态学改变;免疫组织化学染色（IHC）法观察大鼠海马BDNF蛋白表达;实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测大鼠海马BDNF、TrkB、CREB mRNA相对表达量;Westernblotting检测大鼠海马BDNF、TrkB、CREB蛋白相对表达量。结果 与对照组比较,模型组大鼠旷场实验水平、垂直得分显著降低（P＜0.05）,悬尾不动时间和强迫游泳漂浮时间显著增加（P＜0.05）;HE染色结果显示海马神经元结构损伤,IHC结果显示海马BDNF表达明显降低;海马BDNF、TrkB、CREB mRNA及蛋白相对表达显著降低（P＜0.05）。与模型组比较,盐酸氟西汀及五味子乙素组大鼠水平、垂直得分显著增加（P＜0.05）,不动时间和漂浮时间显著减少（P＜0.05）;海马神经元结构明显复原,海马组织中BDNF染色明显增加;BDNF、TrkB、CREB mRNA和蛋白相对表达量显著增加（P＜0.05）。结论 五味子乙素可以改善慢性应激抑郁大鼠抑郁样行为、海马区神经元数量及形态,其机制可能与上调BDNF/TrkB/CREB信号通路有关。     

杨梅素调节cAMP/PKA/CREB信号通路对炎症性肠病大鼠免疫功能的影响

目的 探究杨梅素（Myr）调节环磷酸腺苷（cAMP）/蛋白激酶A（PKA）/环磷酸腺苷反应成分结合蛋白（CREB）信号通路对炎症性肠病（IBD）大鼠免疫功能的影响。方法 建立IBD大鼠模型,实验分为Control组、Model组、杨梅素低、中、高剂量（Myr-L、Myr-M、Myr-H,28、56、112mg/kg/d Myr）组和杨梅素高剂量+PKA抑制剂H89（Myr-H+H89,112mg/kg/d Myr+7mg/kg/d H89）组。对大鼠疾病活动指数（DAI）进行评分;测定免疫功能指标及结肠长度;试剂盒测定血清中IL-6、IL-17A、TNF-α、cAMP水平;HE染色观察结肠组织病理变化;流式细胞术测定Treg细胞比例;免疫组化检测结肠组织中MPO表达;Western blot测定cAMP/PKA/CREB信号通路相关蛋白。结果 与Control组相比,Model组结肠组织细胞排列紊乱、有大量炎性细胞浸润,出现严重溃疡现象,大量细胞坏死,粘膜水肿和结肠壁增厚,DAI评分、IL-6、TNF-α和IL-17A水平、脾脏系数、胸腺系数、MPO光密度值显著增加（P<0.05）,结肠长度、Treg细胞比例、cAMP浓度、p-PKA/PKA和p-CREB/CREB水平显著降低（P<0.05）。与Model组相比,Myr-L、Myr-M和Myr-H组结肠组织细胞排列较整齐、粘膜水肿和结肠壁增厚减轻,炎性细胞浸润、细胞坏死及溃疡现象减少,DAI评分、IL-6、TNF-α和IL-17A水平、脾脏系数、胸腺系数、MPO光密度值逐渐降低（P<0.05）,结肠长度、Treg细胞比例、cAMP浓度、p-PKA/PKA和p-CREB/CREB水平逐渐增加（P<0.05）。与Myr-H组相比,Myr-H+H89组结肠组织病理变化加重,DAI评分、IL-6、TNF-α和IL-17A水平、脾脏系数、胸腺系数、MPO光密度值显著增加（P<0.05）,结肠长度、Treg细胞比例、cAMP浓度、p-PKA/PKA和p-CREB/CREB水平显著降低（P<0.05）。结论 杨梅素可能通过激活cAMP/PKA/CREB信号通路抑制机体炎症水平,调节免疫功能,对IBD大鼠发挥保护作用。     

Antidepressant effect of helicid in chronic unpredictable mild stress model in rats

Helicid (4-formylphenyl-β-D-allopyranoside) is a bioactive constituent of Helicid nilgirica Bedd that has been used in Chinese traditional herbal medicine to treat headache, insomnia, and depression. However, the underlying mechanisms of these effects are unclear. We have now investigated the effect of helicid on depression-related behaviors in rats exposed to chronic unpredictable mild stress (CUMS) and have also explored possible underlying mechanisms that involve neurotrophin expression. After 6 weeks isolation, body weight and sucrose preference were significantly reduced in rats with CUMS-induced depression compared with controls. The CUMS rats also showed significant inhibition of locomotory parameters in open field tests (involving behavioral assays). Helicid significantly regulated levels of corticosterone (CORT), inflammatory cytokines and 5-hydroxytryptamine (5-HT). Helicid also reversed CUMS-induced decreases of 5-HT1A receptor expression and promoted brain derived neurotrophic factor (BDNF) expression in the hippocampus The significant reversal of depressive-like behaviors by helicid is similar to that achieved by fluoxetine. The antidepressive effects are likely attributable to the promotion of hippocampal neurotrophin expression through activation of the serotonergic system. Helicid thus has potential for treating depressive disorders.     

Repeated stress prevents cocaine-induced activation of BDNF signaling in rat prefrontal cortex

In this report we provide evidence that repeated stress prevents cocaine-induced activation of BDNF expression and signaling in rat prefrontal cortex. A single injection of cocaine up-regulates BDNF expression in sham (i.e. unstressed) rats but not in repeatedly stressed rats. Similarly, the expression as well as trafficking of the high affinity BDNF receptor trkB promoted by the psychostimulant is impaired in chronically-stressed rats challenged with cocaine.Moreover, among the different intracellular signaling pathways that can be activated by the neurotrophin, i.e. ERK1/2-, Akt- and PLCγ-pathway, we found that cocaine is able to selectively activate the ERK1/2 pathway in sham animals, but not in rats exposed to repeated stress. Notably, such changes take place in chronically-stressed animals although they still retain the ability to increase neuronal activity as measured by the enhancement of Arc gene expression.In summary, we have demonstrated that stress globally interferes with BDNF-mediated signaling responses to cocaine challenge, providing key insights into the molecular basis of stress-cocaine interaction and indicating the critical role of the prefrontal cortex in mediating such interaction.     

miR-134调控CREB/BDNF通路参与脑卒中后抑郁的作用机制研究#br#

摘要：目的　探讨微小RNA（miR）-134调节环腺苷酸应答元件结合蛋白（CREB）/脑源性神经营养因子（BDNF）通路参与脑卒中后抑郁（PSD）的作用机制。方法　32只SD大鼠按照随机数字表法分为假手术组、模型组、antagomir NC组、miR-134 antagomir组,每组8只;除假手术组外,其余各组行大脑中动脉阻塞（MCAO）术,然后采用慢性不可预见温和应激（CUMS）诱导建立PSD模型,假手术组除不插入线栓外其他操作相同。MCAO术后CUMS前antagomir NC组、miR-134 antagomir组分别于大脑双侧海马区注射5 μL antagomir NC、miR-134 antagomir（1 μmol/L）,5 d注射1次,连续5次。假手术组、模型组注射等体积生理盐水。CUMS应激前,应激第7、14、21天对大鼠称体质量,动物敞箱实验评价大鼠运动行为改变、蔗糖偏爱实验评价大鼠快感缺乏行为改变。实验结束后处死大鼠,分离海马CA1区,实时荧光定量PCR（qPCR）检测miR-134、CREB、BDNF mRNA表达,免疫组化染色检测CREB、BDNF蛋白表达情况。双荧光素酶报告基因实验鉴定CREB与miR-134的靶向关系。结果　与假手术组相比,模型组大鼠体质量、水平和垂直活动得分、糖水饮用比例降低（P＜0.05）;与模型组、antagomir NC组相比,miR-134 antagomir组大鼠体质量、水平和垂直活动得分、糖水饮用比例升高（P＜0.05）,随着应激时间的延长,该效应逐渐明显。与假手术组相比,模型组海马CA1区miR-134水平升高（P＜0.05）,CREB、BDNF mRNA表达和阳性细胞数减少（P＜0.05）;与模型组、antagomir NC组相比,miR-134 antagomir组海马CA1区miR-134水平降低（P＜0.05）,CREB、BDNF mRNA表达和阳性细胞数增多（P＜0.05）。与miR-134 mimic NC+CREB-WT相比,miR-134 mimic+CREB-WT共转染细胞荧光素酶相对活性下降（P＜0.05）,证明CREB序列上存在miR-134特异结合位点。结论　降低miR-134可促进CREB/BDNF通路蛋白的表达,进而改善抑郁状态,实现对PSD大鼠的保护。     

人参次苷H滴丸对慢性温和不可预见性应激大鼠的抗抑郁作用

目的探讨人参次苷H滴丸对慢性温和不可预见性应激结合孤养方法建立抑郁模型大鼠的抗抑郁作用及其作用机制。方法 96只大鼠随机分为对照组、模型组、氟西汀组和人参次苷H滴丸28、56、112 mg/kg组,每组16只。除对照组外各组分别孤养并接受5周慢性温和不可预见性应激刺激造模。同时氟西汀(10 mg/kg)组、人参次苷H滴丸28、56、112mg/kg组ig给药,对照组、模型组ig相应体积(10 mL/kg)纯水。对大鼠体质量变化、糖水消耗比、敞箱实验行为学评分进行比较,对血浆皮质酮(CORT)、皮层、海马区神经营养因子(BDNF)、5-羟色胺(5-HT)、多巴胺(DA)、去甲肾上腺素(NE)水平变化进行检测。尼氏染色后观察海马CA1、CA3区神经元数目和形态。结果与模型组比较,人参次苷H滴丸56、112 mg/kg组体质量显著升高(P0.05),人参次苷H滴丸28、56、112 mg/kg组糖水消耗比显著升高(P0.01);敞箱实验中人参次苷H滴丸56 mg/kg组大鼠水平运动得分显著提高(P0.05),56、112 mg/kg组垂直运动得分显著提高(P0.05、0.01);人参次苷H滴丸28、56、112 mg/kg组大鼠血浆CORT水平均有所降低,但差异并无统计学意义;人参次苷H滴丸56 mg/kg组皮层、海马BDNF水平显著升高(P0.05),人参次苷H滴丸56、112 mg/kg组大鼠皮层、海马5-HT水平显著升高(P0.05、0.01);人参次苷H滴丸28、56 mg/kg组大鼠皮层、海马DA水平显著升高(P0.05、0.01);人参次苷H滴丸28、56、112 mg/kg组大鼠皮层、海马NE水平升高十分显著(P0.01)。人参次苷H滴丸28、56、112 mg/kg组海马CA1、CA3区锥体细胞形态较为规则,排列较为松散,锥体细胞数量相对增多。结论人参次苷H滴丸具有抗抑郁作用,其作用机制可能是通过改善抑郁大鼠肾上腺轴功能亢进症状,提高模型大鼠皮层与海马5-HT、DA、NE水平,上调BDNF表达,以及抑制海马CA1、CA3区神经元锥体细胞的凋亡。     

复方抗焦虑胶囊对急性应激大鼠的抗焦虑作用及对大鼠脑内ERK/CREB信号通路和BDNF表达的影响

目的研究复方抗焦虑胶囊对急性应激大鼠的药效及其对大鼠脑皮层及海马ERK/CREB信号通路、脑源性神经营养因子(BDNF)的影响。方法采用高架十字迷宫实验,观察了复方抗焦虑胶囊低、中、高剂量(0.75、1.5、3 g·kg~(-1))给药7d对急性应激大鼠行为的影响,采用Western blot免疫印迹法研究复方抗焦虑胶囊对ERK/CREB信号通路的影响,对急性应激大鼠脑皮层及海马BDNF表达的影响。结果高架十字迷宫实验显示,复方抗焦虑胶囊高剂量组可明显增加大鼠进入开臂时间的百分数(OT%)(P<0.05)和进入开臂次数的百分数(OE%)(P<0.05)。Western blot实验显示,复方抗焦虑胶囊中剂量组明显减少了海马中p-ERK1/2的表达(P<0.05);高剂量组明显减少了大鼠皮层和海马中p-ERK1/2和p-CREB的表达(P<0.05)。高剂量组明显增加了大鼠皮层及海马中BDNF的表达水平(P<0.05,P<0.01)。结论复方抗焦虑胶囊在高架十字迷宫模型中具有抗焦虑作用,且其抗焦虑机制可能与影响ERK/CREB信号通路,增加BDNF表达有关系。     

咖啡酸对慢性应激大鼠的抗抑郁作用

目的探讨咖啡酸对慢性应激大鼠的抗抑郁作用。方法采用各种慢性不可预见轻微刺激建立大鼠抑郁模型。21 d后,ig给予大鼠咖啡酸10,30和50 mg.kg-1,连续21 d。通过旷场实验检测中央格停留时间、水平活动和垂直活动情况,通过强迫游泳实验检测大鼠静止不动行为百分比(PI);检测海马超氧化物歧化酶(SOD)活性与丙二醛(MDA)含量。结果与正常对照组相比,模型组大鼠在旷场实验中央格停留时间增长,水平活动和垂直活动减少,强迫游泳静止不动状态增加,SOD活性显著降低,MDA含量显著升高(P<0.01)。与模型组相比,咖啡酸10～50 mg.kg-1组能够显著缩短停留时间(P<0.05)、增加垂直活动(P<0.01),但对水平活动无明显影响。模型组PI为(79.69±15.84)%,咖啡酸10～50 mg.kg-1组PI显著降低,分别为(16.00±2.11)%,(10.33±2.92)%和(7.33±2.63)%。与正常对照组相比,模型组SOD酶活性显著降低,MDA含量显著增加(P<0.01),与模型组相比,咖啡酸10～50 mg.kg-1能够显著增加SOD酶活性,分别为模型组的1.50,2.46和2.59倍(r=0.915,P<0.01);MDA含量显著降低,分别为模型组的18.64%,11.37%和6.35%(P<0.01),且呈剂量依赖性(r=0.982,P<0.01)。咖啡酸与舍曲林5 mg.kg-1的作用相似。结论咖啡酸对慢性应激大鼠有一定的抗抑郁作用。     

HPLC-MS/MS法同时测定柴胡疏肝散水提物中12种主要成分的含量

目的：建立高效液相色谱-串联质谱测定柴胡疏肝散水提物冻干粉中柴胡皂苷（A、B₁、C、D）、橙皮苷、柚皮苷、甘草苷、芍药苷、没食子酸、阿魏酸、槲皮素和异甘草素含量的方法。方法：采用Welch Ultimate XB-C₁₈色谱柱（2.1 mm×100 mm,5 μm）;流动相组成为A相：乙腈,B相：0.1%甲酸-水;以0.3 mL·min^-1的流速进行梯度洗脱,进样量为10 μL;采用电喷雾离子源（ESI）,负离子模式,以多反应监测方式（MRM）进行定量分析。结果：柴胡疏肝散水提物中的12种成分在检测范围内与峰面积之间的线性关系良好。测定结果表明,每克柴胡疏肝散水提物冻干粉中含：柴胡皂苷A 6.712 mg,柴胡皂苷B₁ 5.810 mg,柴胡皂苷C 16.700 mg,柴胡皂苷D 0.034 mg,橙皮苷101.600 mg,柚皮苷172.000 mg,甘草苷3.300 mg,芍药苷50.483 mg,没食子酸1.870 mg,阿魏酸4.945 mg,异甘草素0.032 mg,槲皮素0.051 mg。结论：本方法灵敏度高,简便可靠,可用于柴胡疏肝散水提物冻干粉中12种主要成分的定量分析,并为建立柴胡疏肝散的质量标准提供方法学基础。